蛋白质巯基亚硝基化对RSC-364细胞cAMP反应元件结合蛋白活性的影响 被引量：2

1

作者 张晓静 丛斌 +6 位作者 刘威 李淑瑾 马春玲 倪志宇 付丽红 张国忠 左敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期896-900,共5页

目的:观察RSC-364细胞外源性亚硝基化对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)活性的影响。方法:提取RSC-364细胞总蛋白,与100μmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)、100μmol/L NO供体亚硝基化谷胱甘肽(GSNO)、10mmol/L亚硝基化抑制剂二硫苏糖醇(DTT)及溶... 目的:观察RSC-364细胞外源性亚硝基化对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)活性的影响。方法:提取RSC-364细胞总蛋白,与100μmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)、100μmol/L NO供体亚硝基化谷胱甘肽(GSNO)、10mmol/L亚硝基化抑制剂二硫苏糖醇(DTT)及溶剂单独或联合应用孵育15min完成外源性亚硝基化,采用生物素转化法与Western blotting技术检测亚硝基化蛋白表达水平;分别用溶剂或重组大鼠白细胞介素-1β(rIL-1β)10μg/L孵育RSC-364细胞1h,提取细胞核蛋白,经外源性亚硝基化后用电泳迁移率改变分析(elec-trophoresis mobility shift assay,EMSA)观察亚硝基化作用对CREB活性的影响。结果:RSC-364细胞总蛋白经GS-NO孵育后亚硝基化蛋白表达水平明显增高,而应用DTT可抑制亚硝基化水平;GSNO与RSC-364细胞核蛋白孵育后,明显抑制了rIL-1β诱导的CREB活性(P<0.01),GSNO的作用可被DTT所逆转(P<0.01)。结论:NO可通过亚硝基化作用抑制RSC-364细胞CREB活性。 展开更多

关键词 蛋白质巯基亚硝基化 一氧化氮 Camp反应元件结合蛋白 RSC-364细胞 关节炎 类风湿

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环磷酸腺苷反应元件结合蛋白靶基因Staufen在小鼠海马的原位杂交定位

2

作者 李国政 郭晶晶 彭从斌 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期66-70,76,共6页

目的:依据环磷酸腺苷反应元件结合蛋白靶基因STAUFEN蛋白序列寻找与人类亲缘关系较近的动物模型,并在动物模型的脑组织上进行Staufen1mRNA的定性和定位。方法:查找相关动物的STAUFEN蛋白序列,构建生物进化树,寻找合适的动物模型。采用... 目的:依据环磷酸腺苷反应元件结合蛋白靶基因STAUFEN蛋白序列寻找与人类亲缘关系较近的动物模型,并在动物模型的脑组织上进行Staufen1mRNA的定性和定位。方法:查找相关动物的STAUFEN蛋白序列,构建生物进化树,寻找合适的动物模型。采用反转录PCR扩增Staufen1片断,接入载体制作亚克隆,转化细菌后筛选、扩增、抽提,然后测序鉴定。体外转录Staufen1基因mRNA探针,将其和脑组织冰冻切片原位杂交、显色。结果:生物进化树提示,小鼠与人的Staufen1的蛋白序列相似性达99.7%;原位杂交结果显示,小鼠海马CA1、CA2、CA3和DG区存在Staufen1 mRNA的表达。结论:小鼠是研究Staufen1基因在海马转录的合适动物模型。 展开更多

关键词 Camp反应元件结合蛋白质 基因 蛋白质类 海马 代谢 原位杂交 转录因子 逆转录聚合酶链反应 小鼠

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细胞因子诱导的蛋白质巯基亚硝基化对大鼠成纤维细胞样滑膜细胞中CREB蛋白的DNA结合活性的影响

3

作者 张晓静 丛斌 +5 位作者 张凤华 李淑瑾 马春玲 付丽红 倪志宇 于峰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1255-1260,共6页

目的:观察重组白细胞介素-1β(rIL-1β)和重组干扰素-γ(rIFN-γ)联合诱导的亚硝基化反应对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的DNA结合活性的影响。方法:(1)分别用细胞因子(rIL-1β和rIFN-γ的混合物)、诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(AG)... 目的:观察重组白细胞介素-1β(rIL-1β)和重组干扰素-γ(rIFN-γ)联合诱导的亚硝基化反应对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的DNA结合活性的影响。方法:(1)分别用细胞因子(rIL-1β和rIFN-γ的混合物)、诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(AG)及溶剂单独或联合孵育大鼠滑膜细胞12h,收集培养液上清进行一氧化氮(NO)含量测定;并提取各组总蛋白,其中细胞因子组的蛋白与巯基氧化修饰还原剂二硫苏糖醇(DTT)反应15min,采用生物素转化法与免疫印迹技术检测各组蛋白质的亚硝基化修饰水平。(2)分别用rIL-1β、rIL-1β和rIFN-γ的混合物、AG及溶剂单独或联合孵育滑膜细胞12h,提取各组核蛋白,其中rIL-1β+rIFN-γ组核蛋白与DTT反应15min,采用电泳迁移率改变分析技术观察各组CREB的DNA结合活性。结果:(1)细胞经rIL-1β和rIFN-γ孵育后,NO生成增多(P<0.01),蛋白质的亚硝基化修饰水平升高,而AG降低了NO的水平(P<0.01)并抑制了亚硝基化反应,DTT与总蛋白直接作用也可抑制亚硝基化反应。(2)rIL-1β和rIFN-γ共孵育明显抑制rIL-1β单独诱导的CREB的DNA结合活性(P<0.01),而AG抑制了rIL-1β和rIFN-γ的作用,DTT与核蛋白直接反应也可逆转细胞因子共孵育的作用,使CREB的DNA结合活性增高(P<0.01)。结论:IL-1β和IFN-γ共同孵育滑膜细胞可诱导细胞适度产生NO,使细胞内蛋白质的亚硝基化修饰水平升高,导致CREB发生可逆性巯基氧化修饰,抑制其DNA结合活性。 展开更多

关键词 巯基亚硝基化 Camp反应元件结合蛋白质 一氧化氮 白细胞介素1 干扰素-Γ 滑膜细胞

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糖尿病大鼠脑组织环磷酸腺苷反应元件结合蛋白及β-淀粉样蛋白的表达及意义 被引量：1

4

作者 蔡志友 晏宁 +3 位作者 晏勇 黄良国 李洁颖 王凤英 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期684-689,共6页

目的:分析糖尿病大鼠认知行为学改变与脑组织β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP responseelement binding protein,CREB)及磷酸化CREB(phosphorylated CREB,pCREB)表达变化的相关性,为探讨糖尿... 目的:分析糖尿病大鼠认知行为学改变与脑组织β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP responseelement binding protein,CREB)及磷酸化CREB(phosphorylated CREB,pCREB)表达变化的相关性,为探讨糖尿病糖代谢异常在阿尔茨海默病发病中的作用机制奠定基础。方法:腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱发糖尿病大鼠动物模型,随机分为4周模型组(M4组)、6周模型组(M6组)、8周模型组(M8组),以同批未制模大鼠作为正常对照(N组)。穿梭箱实验、Morris水迷宫实验检测认知行为学改变,刚果红染色检测大鼠脑内淀粉样物质沉着,Western印迹法、酶联免疫吸附法和RT-PCR检测大鼠脑组织CREB与pCREB的表达,酶联免疫吸附法检测脑组织Aβ表达。结果:行为学检测显示模型组大鼠有显著的认知功能障碍,模型组与正常对照组比较有明显差异(P<0.01);模型组Aβ表达明显增高(P<0.01),模型组CREB与pCREB表达明显降低(P<0.01),而3个模型组比较无统计学差异;Aβ表达水平与CREB、pCREB表达水平负相关,Aβ与学习、记忆损伤正相关,CREB、pCREB与学习、记忆损伤负相关。结论:糖尿病糖代谢异常可能通过下调脑组织CREB、pCREB表达及增强Aβ表达诱发脑损伤,导致认知行为改变。 展开更多

关键词 糖尿病 阿尔茨海默病 Β-淀粉样蛋白 环amp反应性DNA结合蛋白质

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环腺苷酸应答元件结合蛋白在老年小鼠术后认知功能障碍发病机制中的作用 被引量：3

5

作者 张永一 李栋 +6 位作者 陈琦 王维 赵维星 王沛齐 徐志鹏 曹江北 张宏 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 2017年第7期755-758,共4页

目的探讨环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB)与脑源性神经营养因子(BDNF)通路在老年小鼠术后认知功能障碍发病机制中的作用。方法 72只老年C57BL/6小鼠随机分为4组:对照组、异氟醚组、手术组和异氟醚+手术组,每组18只,分别施以假手术、1.8... 目的探讨环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB)与脑源性神经营养因子(BDNF)通路在老年小鼠术后认知功能障碍发病机制中的作用。方法 72只老年C57BL/6小鼠随机分为4组:对照组、异氟醚组、手术组和异氟醚+手术组,每组18只,分别施以假手术、1.8%异氟醚吸入1.5h、局麻腹部手术和1.8%异氟醚吸入1.5h+局麻腹部手术。术后行条件恐惧行为学实验评估各组小鼠认知功能,并分别于术后第1、3、7天行Western blot实验检测各组小鼠海马组织CREB、Ser133位点磷酸化CREB(p-CREB)以及BDNF的表达情况。结果与其他3组比较,手术组小鼠术后第3天场景测试和声音测试凝滞时间百分比降低,术后第1、7天场景测试凝滞时间百分比降低,且小鼠术后第1、3天海马p-CREB/CREB比值降低,术后第3、7天BDNF表达减少(P<0.05,P<0.01)。结论腹部手术可致老年小鼠术后早期认知功能损害,异氟醚吸入全麻下行腹部手术有一定认知保护作用,CREB/BDNF通路受到抑制是老年小鼠术后认知功能障碍发病机制之一。 展开更多

关键词 Camp反应元件结合蛋白质 脑源性神经营养因子 认知障碍 异氟醚 突触

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微波辐射对大鼠睾丸组织pCREB、CREM及CBP蛋白表达的影响 被引量：7

6

作者 陈浩宇 王水明 +6 位作者 彭瑞云 董霁 左红艳 王丽峰 高亚兵 徐新萍 苏镇涛 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期379-382,共4页

目的探讨微波辐射对睾丸组织磷酸化环磷酸腺苷(cAMP)-反应元件结合蛋白(pCREB)、cAMP反应元件调节因子(CREM)及CREB结合蛋白(CBP)表达的影响及其意义。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=5)和辐射组(n=25)。辐射组接受30mW/cm2... 目的探讨微波辐射对睾丸组织磷酸化环磷酸腺苷(cAMP)-反应元件结合蛋白(pCREB)、cAMP反应元件调节因子(CREM)及CREB结合蛋白(CBP)表达的影响及其意义。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=5)和辐射组(n=25)。辐射组接受30mW/cm2微波辐射5min,分别于辐射后6h,1、3、7、14d处死5只大鼠。对照组不接受辐射,于1d时活杀。采用免疫组织化学及Western blotting检测睾丸组织pCREB、CREM及CBP蛋白表达的变化。结果 pCREB、CREM和CBP均主要表达于睾丸生精小管精子细胞核。微波辐射后6h^14d(pCREB在1d时除外),pCREB和CBP蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01),辐射后6h^7d CREM表达亦明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论 pCREB、CREM及CBP表达下调在微波辐射致生精细胞损伤中可能发挥重要作用。 展开更多

关键词 微波 辐射损伤 实验性 Camp反应元件结合蛋白质 camp应答元件调节器 CREB结合蛋白质 睾丸 大鼠

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补阳还五汤对血管性痴呆大鼠海马cAMP-PKA-CREB信号通路的影响 被引量：17

7

作者 张泓波 高维娟 +2 位作者 钱涛 唐敬龙 李君 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期718-721,共4页

目的:观察补阳还五汤对血管性痴呆大鼠海马组织环磷酸腺苷(cAMP)-蛋白激酶A(PKA)-cREB反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法:将大鼠随机分为补阳还五汤组、尼莫地平组、模型组、假手术组。用改良Pulsinelli's四血管阻断法建... 目的:观察补阳还五汤对血管性痴呆大鼠海马组织环磷酸腺苷(cAMP)-蛋白激酶A(PKA)-cREB反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法:将大鼠随机分为补阳还五汤组、尼莫地平组、模型组、假手术组。用改良Pulsinelli's四血管阻断法建立血管性痴呆大鼠模型,分别给予相应的药物,连续30d。利用放射免疫分析法检测海马组织cAMP含量,Western blotting法检测PKA催化亚基(PKAc)蛋白表达,电泳迁移率改变分析法检测CREB的DNA结合活性。结果:与假手术组比较,模型组大鼠海马组织cAMP含量、PKAc蛋白表达和CREB的DNA结合活性均降低(P<0.01);与模型组比较,补阳还五汤组和尼莫地平组cAMP含量、PKAc蛋白表达和CREB的DNA结合活性均升高(P<0.01)。结论:补阳还五汤可增加血管性痴呆大鼠海马cAMP含量、PKAc蛋白表达和CREB的DNA结合活性,增强cAMP-PKA-CREB信号通路的作用。 展开更多

关键词 补阳还五汤 痴呆 血管性 Camp 蛋白激酶A Camp反应元件结合蛋白质

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CREB_1蛋白在大鼠急、慢性吗啡依赖和戒断中的表达变化 被引量：1

8

作者 傅强 王新华 +1 位作者 张宏 郝怡鑫 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期887-889,共3页

目的研究急、慢性吗啡依赖和戒断对大鼠脑组织cAMP反应元件结合蛋白(CREB1)的表达调节作用。方法雄性SD大鼠36只,随机分为急性对照组、急性吗啡依赖组、急性吗啡戒断组、慢性对照组、慢性吗啡依赖组、慢性吗啡戒断组,每组6只。采用免疫... 目的研究急、慢性吗啡依赖和戒断对大鼠脑组织cAMP反应元件结合蛋白(CREB1)的表达调节作用。方法雄性SD大鼠36只,随机分为急性对照组、急性吗啡依赖组、急性吗啡戒断组、慢性对照组、慢性吗啡依赖组、慢性吗啡戒断组,每组6只。采用免疫组化方法测定不同脑区和核团CREB1蛋白表达水平。结果急性吗啡依赖和戒断抑制蓝斑CREB1蛋白表达。慢性吗啡依赖和戒断增加皮质、海马、蓝斑等脑区核团CREB1蛋白的表达,但是在慢性吗啡依赖和戒断时,伏隔核CREB1蛋白表达下降。结论急、慢性吗啡依赖和戒断时CREB1在大鼠皮质、海马、下丘脑、蓝斑、伏隔核等脑区的表达存在差异,可能与介导阿片类药物依赖信号转道通路的反应性不同有关。 展开更多

关键词 吗啡依赖DNA结合蛋白质 环amp反应性 海马 伏隔核 蓝斑 免疫组织化学

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核心蛋白聚糖对高糖诱导心肌细胞丝裂原活化蛋白激酶信号通路及纤维化的影响 被引量：2

9

作者 赵茂宇 付静 +1 位作者 熊秋璨 钟灵 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2023年第7期751-755,共5页

目的探讨核心蛋白聚糖(DCN)对高糖诱导的心肌细胞H9c2转化生长因子β(TGF-β)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)通路及纤维化的影响。方法将心肌细胞H9c2随机分为5组:正常对照组(使用含5.6mmol/L葡萄... 目的探讨核心蛋白聚糖(DCN)对高糖诱导的心肌细胞H9c2转化生长因子β(TGF-β)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)通路及纤维化的影响。方法将心肌细胞H9c2随机分为5组:正常对照组(使用含5.6mmol/L葡萄糖的无血清培养液培养)、高糖组(使用含33mmol/L葡萄糖的无血清培养液培养)、DCN低浓度组(使用含33mmol/L葡萄糖和0.25μg/mlDCN的无血清培养液培养)、DCN中浓度组(使用含33mmol/L葡萄糖和1.25μg/mlDCN的无血清培养液培养)、DCN高浓度组(用含33mmol/L葡萄糖和2.5μg/mlDCN的无血清培养液培养),MTT法检测心肌细胞H9c2存活率;平板克隆实验检测各组H9c2细胞克隆形成数;流式细胞术检测H9c2细胞周期;划痕实验检测各组H9c2细胞迁移能力;Westernblot法检测H9c2细胞结缔组织生长因子(CTGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、纤维连接蛋白(FN)、TGF-β、p38MAPK表达水平以及CREB磷酸化水平。结果高糖组细胞存活率、克隆形成数、S期、G_(2)/M期、MMP-9表达水平显著低于正常对照组,G_(0)/G_(1)期、划痕愈合率、CTGF、FN、TGF-β、p38MAPK及磷酸化CREB表达水平显著高于正常对照组(P<0.05);与高糖组比较,DCN低、中、高浓度组细胞存活率[(90.77±1.13)%、(95.35±2.05)%、(98.70±2.30)%vs(73.23±1.09)%]、克隆形成数[(75.39±8.24)个、(92.28±9.94)个、(112.22±12.42)个vs(54.57±6.19)个]依次上升(P<0.05);高糖组G_(0)/G_(1)期、划痕愈合率、CTGF、FN、TGF-β、p38MAPK及磷酸化CREB水平显著高于DCN低、中、高浓度组,S期、G_(2)/M期、MMP-9表达水平显著低于DCN低、中、高浓度组(P<0.05)。结论DCN能够促进高糖诱导下H9c2细胞增殖,抑制迁移和心肌纤维化,可能与通过阻滞TGF-β/p38MAPK/CREB通路有关。 展开更多

关键词 蛋白聚糖类 肌细胞 心脏 P38丝裂原活化蛋白激酶类 Camp反应元件结合蛋白质 MAP激酶信号系统

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开心散对小鼠抑郁样行为及海马中脑源性神经营养因子的影响 被引量：14

10

作者 刘明月 董宪喆 +3 位作者 张岗强 辛海量 刘屏 胡园 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1319-1323,共5页

目的观察开心散对悬尾模型小鼠行为学、脑内单胺类递质及海马中脑源性神经营养因子(BDNF)水平的影响,探究开心散的抗抑郁效果与海马中BDNF含量的相关性。方法采用小鼠悬尾实验,观察不同剂量开心散对小鼠不动时间的影响;HPLC法测定脑内... 目的观察开心散对悬尾模型小鼠行为学、脑内单胺类递质及海马中脑源性神经营养因子(BDNF)水平的影响,探究开心散的抗抑郁效果与海马中BDNF含量的相关性。方法采用小鼠悬尾实验,观察不同剂量开心散对小鼠不动时间的影响;HPLC法测定脑内去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)的含量;蛋白质印迹法检测小鼠海马中cAMP反应元件结合蛋白(CREB)、p-CREB、BDNF的表达;RT-PCR检测海马中BDNF mRNA的表达,Pearson相关性检验确定开心散的抗抑郁作用与海马中BDNF蛋白和mRNA水平的相关性。结果开心散可缩短悬尾小鼠不动时间(P<0.05),可增加小鼠脑内单胺类递质(DA、5-HT)和海马中CREB、p-CREB、BDNF的含量(P<0.05),其抗抑郁作用与海马中BDNF水平呈良好相关性(蛋白质:r=-0.694,P<0.01;mRNA:r=-0.547,P<0.01)。结论开心散对小鼠的抗抑郁作用与海马BDNF水平呈正相关性,提示开心散可能通过增加海马中BDNF表达发挥抗抑郁作用。 展开更多

关键词 开心散 抗抑郁药 海马 Camp反应元件结合蛋白质 脑源性神经营养因子

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miR-380调控羊驼黑色素细胞MAPK/ERK信号通路 被引量：1

11

作者 杜斌 刘学贤 +4 位作者 姬凯元 杨姗姗 刘博 张俊珍 范瑞文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期876-883,共8页

miR-380是不同羊驼毛色中差异表达的基因之一,但是否与黑色素生成有关未见报道。为了丰富调控黑色素生成的机制,挖掘黑色素生成路径中所涉及到的更多新的基因并揭示miR-380在黑色素细胞中的功能,本实验通过生物信息学方法预测出MAPK信... miR-380是不同羊驼毛色中差异表达的基因之一,但是否与黑色素生成有关未见报道。为了丰富调控黑色素生成的机制,挖掘黑色素生成路径中所涉及到的更多新的基因并揭示miR-380在黑色素细胞中的功能,本实验通过生物信息学方法预测出MAPK信号通路的成员MAP3K6是miR-380的靶基因之一。在293T细胞中共转染miR-380和MAP3K6后,与对照组相比双荧光报告酶活性下降(28.92±25.63)%(P<0.01),下降趋势明显,说明MAP3K6可能是miR-380的靶基因之一;在羊驼黑色素细胞中转染miR-380后,MAP3K6、MEK1、ERK1/2、CREB和MITF在转录水平的表达量与NC组相比具有显著下降趋势,其中CREB下降趋势尤为显著(64.20±54.30)%(P<0.01),Western印迹检测MAP3K6、p-MEK1、p-ERK1/2、CREB和MITF在蛋白质水平的表达与NC组相比下降趋势明显且p-MEK1和CREB基因下降极为显著,分别为(29.09±10.68)%(P<0.001)和(47.12±6.70)%(P<0.001),抑制组则反之。通过Masson-Fontana黑色素颗粒染色法检测miR-380抑制黑色素细胞产生黑色素颗粒,用紫外分光度法检测真黑素(eumelanin,EM)和褐黑素(pheomelanin,PM),含量结果提示EM与PM含量分别下降为(38.63±2.00)%(P<0.01),(54.10±5.73)%(P<0.001)且PM含量下降极为显著。综上所述miR-380通过靶向抑制MAP3K6等基因的表达,从而对MAPK/ERK信号通路起调控作用,最终影响黑色素生成生物学功能,此研究对哺乳动物毛色形成机制和防止皮肤受紫外辐射有重要意义。 展开更多

关键词 miR-380 丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶6 丝裂原活化蛋白激酶 胞外信号调节激酶1/2 c amp反应元件结合蛋白质 小眼畸形转录因子 黑色素细胞

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促红细胞生成素上调海马pCREB表达和改善脑缺血小鼠认知功能 被引量：8

12

作者 陈远寿 潘贵书 +3 位作者 秦伟 罗孝美 禹静 张弛 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期722-726,共5页

目的:探讨促红细胞生成素(EPO)对小鼠脑缺血所致的认知功能障碍和海马神经元损伤的保护作用及机制。方法:C57BL/6绿色荧光蛋白转基因小鼠随机分为假手术(sham)组、脑缺血/再灌注(I/R)组和EPO治疗组;采用双侧颈总动脉阻断(2-VO)方法复制... 目的:探讨促红细胞生成素(EPO)对小鼠脑缺血所致的认知功能障碍和海马神经元损伤的保护作用及机制。方法:C57BL/6绿色荧光蛋白转基因小鼠随机分为假手术(sham)组、脑缺血/再灌注(I/R)组和EPO治疗组;采用双侧颈总动脉阻断(2-VO)方法复制小鼠全脑缺血模型,跳台实验测试小鼠学习记忆能力,Nissl染色检测海马神经元存活情况,Western blotting检测磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)表达水平,激光共聚焦显微镜和Neurolucida软件分析检测海马CA1区神经元形态及树突棘的变化。结果:脑缺血导致小鼠学习记忆能力下降,海马CA1区神经元迟发性死亡和树突棘丢失;EPO治疗能显著提高脑缺血小鼠的学习记忆能力,减少脑缺血所致的海马CA1区神经元死亡和树突棘的丢失,显著上调海马CA1区神经元pCREB蛋白的表达。结论:EPO可能通过上调pCREB的表达来保护神经元损伤、防止神经元树突棘的丢失,进而改善脑缺血小鼠的认知功能。 展开更多

关键词 脑缺血 红细胞生成素 Camp反应元件结合蛋白质 树突棘 学习 记忆

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慢性间歇低氧对幼鼠认知及相关脑区CREB的影响 被引量：7

13

作者 蔡晓红 张存雪 +6 位作者 周永海 倪丽艳 龚永生 张焕改 李美丽 宣妙燕 俞晨艺 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期895-900,共6页

目的:观察慢性间歇低氧(CIH)对幼鼠认知的影响并探讨其潜在的机制。方法:取八臂迷宫训练成功的SPF级健康雄性SD幼鼠40只,随机分为:间歇低氧2周(2IH)、4周组(4IH),对照2周(2C)、4周组(4C),建立IH幼鼠模型,低氧结束后进行八臂迷宫测试,观... 目的:观察慢性间歇低氧(CIH)对幼鼠认知的影响并探讨其潜在的机制。方法:取八臂迷宫训练成功的SPF级健康雄性SD幼鼠40只,随机分为:间歇低氧2周(2IH)、4周组(4IH),对照2周(2C)、4周组(4C),建立IH幼鼠模型,低氧结束后进行八臂迷宫测试,观察海马和前额叶皮层超微结构变化及cAMP反应元件结合蛋白(CREB)mRNA和磷酸化CREB蛋白的表达。结果:4组幼鼠的记忆错误次数比较均有显著差别(均P<0.05);IH各组海马及前额叶皮层神经元均出现早期凋亡和变性,尤以4IH组最为明显,对照组则基本正常;与相应对照组相比,2IH、4IH组幼鼠海马和前额叶皮层CREB mRNA和p-CREB蛋白的表达水平显著降低(均P<0.05),且以4IH组最低(均P<0.01),差异显著,两对照组之间无显著差异(P>0.05)。结论:慢性间歇低氧诱导海马和前额叶皮层神经元超微结构改变,还下调CREB的基因转录和抑制CREB蛋白磷酸化,抑制记忆相关蛋白的合成,这可能是引起学习记忆能力下降的重要机制之一。 展开更多

关键词 慢性间歇低氧 认知 Camp反应元件结合蛋白质 神经元

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磷酸二酯酶4抑制剂咯利普兰逆转慢性束缚应激诱导的大鼠抑郁和焦虑样行为 被引量：10

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作者 张俊芳 张忠敏 +5 位作者 赵鑫 刘爱明 郭洁洁 沈璐艳 王钦文 王闯 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1729-1739,共11页

目的:探讨磷酸二酯酶4(PDE4)特异性抑制剂咯利普兰(rolipram)对抗慢性应激诱导的抑郁和焦虑样行为的分子机制。方法:(1)将40只SD大鼠分为4组(每组10只):空白对照组、模型组、阳性对照药氯化锂(LiCl)组及rolipram组,并进行应激前旷场实... 目的:探讨磷酸二酯酶4(PDE4)特异性抑制剂咯利普兰(rolipram)对抗慢性应激诱导的抑郁和焦虑样行为的分子机制。方法:(1)将40只SD大鼠分为4组(每组10只):空白对照组、模型组、阳性对照药氯化锂(LiCl)组及rolipram组,并进行应激前旷场实验。给予慢性束缚应激21 d后,分别进行强迫游泳、高架十字迷宫及应激后旷场实验。最后一次行为学实验结束后立即处死动物并取双侧海马组织,免疫印迹法检测海马内磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)、磷酸化丝氨酸残基21糖原合成酶激酶3α(p-Ser21-GSK3α)、磷酸化丝氨酸残基9糖原合成酶激酶3β(p-Ser9-GSK3β)、磷酸化酪氨酸残基279糖原合成酶激酶3α(p-Tyr279-GSK3α)、磷酸化酪氨酸残基216糖原合成酶激酶3β(p-Tyr216-GSK3β)、总糖原合成酶激酶3α(total GSK3α)及总糖原合成酶激酶3β(total GSK3β)的表达。(2)30只SD大鼠平均分为6组,双侧海马CA1区手术埋管并恢复7 d后进行慢性应激处理21 d,并在每次应激前微量注射蛋白激酶A(PKA)的拮抗剂H89,并腹腔注射LiCl和rolipram。双侧海马用于检测PDE4D、p-CREB和p-Ser9-GSK3β的表达。结果:(1)应激前各组动物自主活动能力无显著差异,应激14 d及21 d后应激组与空白对照组相比体重显著下降,LiCl及rolipram均显著逆转了应激对体重的下调作用。应激显著增加了强迫游泳实验中动物的不动时间,减少了攀爬时间和高架十字迷宫实验中进入开臂的次数及时间,表现出抑郁和焦虑样行为,而LiCl及rolipram均显著逆转了慢性束缚应激诱导的上述行为障碍。免疫印迹结果显示rolipram可显著逆转应激对p-CREB、BDNF、p-Ser21-GSK3α和p-Ser9-GSK3β表达的下调作用,而LiCl仅显著上调p-Ser21-GSK3α及p-Ser9-GSK3β的表达。各组p-Tyr279-GSK3α、p-Tyr216-GSK3β、total GSK3α及total GSK3β的表达无显著差异。(2)慢性应激诱导了大鼠海马内PDE4D表达的上调,PKA、p-CREB及p-Ser9-GSK3β的下调。Rolipram显著逆转了上述效应,且H89显著阻断了Rolipram的药物效应。结论:Rolipram抗抑郁及抗焦虑作用不仅通过CREB/BDNF信号通路,而且还有GSK3抑制性丝氨酸残基磷酸化信号通路的参与,且CREB介导的信号转导通路对GSK3抑制性丝氨酸残基磷酸化信号通路发挥重要调节作用。 展开更多

关键词 抑郁症 焦虑 磷酸二酯酶4 咯利普兰 Camp反应元件结合蛋白质 糖原合成酶激酶3

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p38 MAPK信号途径在高糖诱导的大鼠肾系膜细胞中激活的意义 被引量：13

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作者 王丽晖 吴广礼 +2 位作者 张丽霞 黄旭东 李赛 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期196-199,共4页

目的探讨高糖状态下肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号途径与其下游因子cAMP反应元件结合蛋白1(CREB1)、转化生长因子β1(TGF-β1)及细胞外基质表达的关系。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予低糖和/或甘露醇... 目的探讨高糖状态下肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号途径与其下游因子cAMP反应元件结合蛋白1(CREB1)、转化生长因子β1(TGF-β1)及细胞外基质表达的关系。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予低糖和/或甘露醇、高糖和/或SB203580(p38 MAPK特异性抑制剂)干预。采用免疫细胞化学法观察p38 MAPK蛋白的表达情况;Western blotting检测p38 MAPK和CREB1及其磷酸化蛋白(p-p38 MAPK、p-CREB1)的表达;RT-PCR检测TGF-β1和FN mRNA的表达;放免法测定细胞上清液中层黏连接蛋白(LN)和Ⅳ型胶原的含量。结果与低糖组、低糖+甘露醇组相比,高糖刺激可使p38 MAPK蛋白发生核转移,p-p38 MAPK、p-CREB1表达明显上调,TGF-β1和FN mRNA的表达增强,LN和Ⅳ型胶原含量增加。SB203580能明显抑制p38 MAPK蛋白的核转移,降低p38 MAPK和CREB1的磷酸化,并抑制TGF-β1和FN mRNA表达,使LN和Ⅳ型胶原的分泌减少。结论高糖状态激活p38 MAPK信号途径参与了高糖诱导的肾小球系膜细胞TGF-β的表达和细胞外基质的分泌。 展开更多

关键词 P38丝裂原活化蛋白激酶类 Camp反应元件结合蛋白质 肾小球系膜细胞 转化生长因子β_1

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三种复方对慢性应激模型大鼠海马CREB、BDNF基因表达的影响 被引量：9

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作者 于琦 金光亮 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期591-594,共4页

目的:探讨慢性应激肝郁模型大鼠海马CREB、BDNF基因表达及疏肝、疏肝健脾与健脾3种方剂的效应。方法:SD雄性大鼠40只,用随机区组设计的方法分为对照组、模型组、四逆散组、逍遥散组和四君子汤组,多种应激处理共21d后,测定1%蔗糖水摄取... 目的:探讨慢性应激肝郁模型大鼠海马CREB、BDNF基因表达及疏肝、疏肝健脾与健脾3种方剂的效应。方法:SD雄性大鼠40只,用随机区组设计的方法分为对照组、模型组、四逆散组、逍遥散组和四君子汤组,多种应激处理共21d后,测定1%蔗糖水摄取率和强迫游泳中累计不动时间,用RT-PCR的方法检测海马CREB和BDNF mRNA表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠1%蔗糖水摄取率明显降低,强迫游泳中累计不动时间明显延长,海马CREB、BDNF mRNA表达明显降低;与模型组比较,四逆散组、逍遥散组的1%蔗糖水摄取率明显升高,强迫游泳中累计不动时间明显缩短,CREB、BDNF mRNA表达均明显升高;四君子汤组各行为学指标及BDNF表达与模型组相比没有差异,仅CREB表达升高。结论:慢性应激肝郁模型大鼠海马CREB、BDNF的mRNA表达降低,具有疏肝作用的方剂四逆散和逍遥散可以对抗这种降低,而健脾方剂四君子汤无明显效应。 展开更多

关键词 应激 中草药 Camp反应元件结合蛋白质 脑源性神经营养因子

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MicroRNAs与可卡因成瘾关系的研究进展 被引量：2

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作者 王芬芬 沈杰 张吉翔 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期181-185,共5页

可卡因进入体内会导致海马、前额叶皮层、中脑腹侧被盖区及伏隔核等学习记忆相关脑区的多巴胺、谷氨酸、5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）等神经递质释放的异常变化,通过作用于相应的受体引发一系列分子事件：包括激活细胞内信号... 可卡因进入体内会导致海马、前额叶皮层、中脑腹侧被盖区及伏隔核等学习记忆相关脑区的多巴胺、谷氨酸、5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）等神经递质释放的异常变化,通过作用于相应的受体引发一系列分子事件：包括激活细胞内信号转导通路,改变神经营养因子、转录因子、即刻早期基因或染色体的结构等,并最终引起突触的可塑性, 展开更多

关键词 微小RNAS 可卡因成瘾 Camp反应元件结合蛋白质

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阿魏酸对脂多糖损伤的PC12细胞和大鼠海马神经元细胞的保护作用 被引量：13

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作者 黄浩 马增春 +1 位作者 王宇光 高月 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期330-337,共8页

目的探讨阿魏酸（FA）对脂多糖（LPS）诱导的PC12细胞和大鼠海马神经元损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法体外实验：FA 2.5～40μmol·L-1与PC12细胞预处理12 h,加入LPS 0.15 g·L-1继续培养8 h,采用CCK-8法检测细... 目的探讨阿魏酸（FA）对脂多糖（LPS）诱导的PC12细胞和大鼠海马神经元损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法体外实验：FA 2.5～40μmol·L-1与PC12细胞预处理12 h,加入LPS 0.15 g·L-1继续培养8 h,采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的释放;激光共聚焦显微镜检测细胞骨架蛋白F肌动蛋白的表达。体内实验：FA25,50和100 mg·kg-1ip给予SD大鼠,每天1次,连续35 d。给药第29天时ip给予LPS 0.2 mg·kg-1,每天1次,连续7d,运用免疫组织化学法观察大鼠海马神经元磷酸二酯酶4B（PDE4B）蛋白表达的变化;Western蛋白质印迹法检测cAMP反应元件结合蛋白（CREB）和磷酸化CREB（p-CREB）表达。结果体内实验：与LPS组细胞比较,FA 10,20和40μmol·L-1预处理组细胞活力明显升高（P〈0.05）,炎性因子TNF-α和IL-1β的释放显著减少（P〈0.05）,细胞骨架蛋白F肌动蛋白的分布和结构明显改善。体内实验：HE染色结果显示,预先给予FA 50和100 mg·kg-1可以减轻LPS诱导的大鼠海马神经元损伤;免疫组织化学实验结果显示,FA 50和100 mg·kg-1能够显著降低LPS诱导的大鼠海马神经元PDE4B蛋白表达水平的升高（P〈0.05）;Western蛋白印迹实验结果表明,FA 50和100 mg·kg-1可逆转LPS对CREB和p-CREB蛋白表达的抑制作用（P〈0.05）。结论 FA对LPS诱导的PC12细胞和大鼠海马神经元细胞损伤有保护作用,FA抗神经炎症的作用可能与抑制PDE4表达、激活c AMP/CREB信号通路相关。 展开更多

关键词 阿魏酸 磷酸二酯酶4B 脂多糖 c amp反应元件结合蛋白

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CGRP对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB和p-CREB的上调作用 被引量：6

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作者 张正洪 肖红菊 +2 位作者 席刚明 曲鹏 方秀斌 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期28-31,共4页

目的:探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响。方法:用线栓法阻塞大鼠右大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学、Western blotting和图像分析方法检... 目的:探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响。方法:用线栓法阻塞大鼠右大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学、Western blotting和图像分析方法检测大鼠手术侧顶叶皮质CREB和p-CREB表达。结果:缺血再灌注组大鼠顶叶皮质CREB表达少于假手术组,CGRP组大鼠顶叶皮质CREB表达多于缺血再灌注组(P<0.05)。假手术组右侧顶叶皮质p-CREB表达很少,缺血再灌注组顶叶皮质p-CREB表达多于假手术组,CGRP组p-CREB表达多于缺血再灌注组(P<0.05)。结论:CGRP上调局灶性脑缺血再灌注大鼠右侧顶叶皮质CREB和p-CREB的表达,CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的。 展开更多

关键词 脑缺血 降钙素基因相关肽 c—amp反应元件结合蛋白 大鼠 顶叶

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ERK/CREB信号通路在异菝葜皂苷元促进Aβ损伤SH-SY5Y细胞BDNF表达中的作用 被引量：4

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作者 张瑞 夏志明 +3 位作者 孙小余 李加梅 张永芳 胡雅儿 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期642-647,共6页

目的探讨细胞外信号调节激酶/c AMP反应元件结合蛋白(ERK/CREB)信号通路在异菝葜皂苷元(SMI)促进β-淀粉样肽(Aβ)损伤SH-SY5Y细胞脑源性神经营养因子(BDNF)表达中的作用及其机制。方法建立Aβ损伤SH-SY5Y细胞模型,采用RT-PCR法检测BDNF... 目的探讨细胞外信号调节激酶/c AMP反应元件结合蛋白(ERK/CREB)信号通路在异菝葜皂苷元(SMI)促进β-淀粉样肽(Aβ)损伤SH-SY5Y细胞脑源性神经营养因子(BDNF)表达中的作用及其机制。方法建立Aβ损伤SH-SY5Y细胞模型,采用RT-PCR法检测BDNF m RNA的表达,用Western blotting的方法检测p CREB和p ERK的变化,最后通过阻断实验确认ERK/CREB信号通路在SMI促进BDNF m RNA表达中的作用。结果 SMI能促进Aβ损伤SH-SY5Y细胞BDNF m RNA的表达(P=0.000),并能上调信号分子CREB和ERK1/2的磷酸化水平(P=0.001,P=0.000)。用RNA干扰的方法阻断CREB的表达后,SMI促进BDNF m RNA表达的作用完全消失;用U0126阻断ERK1/2磷酸化后,SMI促进p CREB水平升高的作用完全消失。结论 SMI通过ERK/CREB通路促进Aβ损伤SH-SY5Y细胞BDNF m RNA的表达。 展开更多

关键词 异菝葜皂苷元 阿尔茨海默症 脑源性神经营养因子 c amp反应元件结合蛋白 细胞外信号调节激酶1/2

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