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卵形鲳鲹抗缪勒氏管激素amh基因的克隆、表征及原核表达
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作者 张智浩 王露皓 +2 位作者 赵文栋 刘金相 茅云翔 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第3期155-168,共14页
为探究卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)amh基因的序列特征、组织表达模式和功能作用,本研究从卵形鲳鲹基因组和转录组中获得amh基因的序列并进行了PCR克隆和验证。研究结果显示,卵形鲳鲹amh基因存在三种长度的可变剪切,分别被命名为amh-L... 为探究卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)amh基因的序列特征、组织表达模式和功能作用,本研究从卵形鲳鲹基因组和转录组中获得amh基因的序列并进行了PCR克隆和验证。研究结果显示,卵形鲳鲹amh基因存在三种长度的可变剪切,分别被命名为amh-L、amh-S和amh-C。其中:amh-L和amh-S均具有完整的开放阅读框,编码含有AMH-N结构域和TGF-β结构域的蛋白质;而amh-C由于内含子的保留,导致其阅读框发生了移码并提前终止,无法编码完整的蛋白质。通过系统发育分析发现,卵形鲳鲹的抗缪勒氏管激素(Anti-Müllerian hormone,AMH)与黄条鰤的AMH相似性最高,它们与其他硬骨鱼的AMH聚为一支,与哺乳类等四足动物的AMH明显分开。在组织表达模式方面,本研究发现:在成体卵形鲳鲹体细胞组织中,amh在脑中表达较高,而在其他组织中表达较低,且雌、雄间无明显差异,在性腺中具有明显的性别二态性:精巢中的表达amh显著高于卵巢,随着性腺的发育和成熟,amh基因的表达量逐渐降低;原位杂交结果显示,amh主要表达在早期精巢的支持细胞中,在卵巢中主要分布在早期卵母细胞的细胞质中;利用原核表达系统获得的AMH-L和AMH-S重组蛋白均以包涵体的形式存在于菌体中,纯化后经蛋白免疫印迹(Western blot)检测验证为正确蛋白。本研究为进一步探讨卵形鲳鲹性别分化和性腺发育的分子机制提供基础资料。 展开更多
关键词 卵形鲳鲹 amh基因 剪切体 性别分化 原核表达
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绵羊AMH基因的克隆、序列分析与原核表达 被引量:4
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作者 蒋香菊 吴阳升 +6 位作者 林嘉鹏 汪立芹 张利 古丽米热.阿不都热依木 杨楠 刘莉 黄俊成 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期1386-1392,共7页
旨在克隆绵羊抗苗勒管激素基因(oAMH)的全长编码区序列,并对其序列进行分析。以绵羊的卵泡颗粒细胞全RNA逆转录得到的cDNA为模板,参照牛的AMH cDNA序列设计兼并引物,对oAMH基因的全长编码区进行T载体克隆并测序,并对其进行生物信息学分... 旨在克隆绵羊抗苗勒管激素基因(oAMH)的全长编码区序列,并对其序列进行分析。以绵羊的卵泡颗粒细胞全RNA逆转录得到的cDNA为模板,参照牛的AMH cDNA序列设计兼并引物,对oAMH基因的全长编码区进行T载体克隆并测序,并对其进行生物信息学分析。根据预测的编码区氨基末端260氨基酸对应的序列设计表达引物,构建原核表达载体pET15b-oamh260,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。序列分析结果表明,获得的绵羊AMH基因序列全长1 797 bp(GenBank登录号:KC986978),完整开放阅读框为1 728 bp,共编码575个氨基酸,氨基末端24个氨基酸为信号肽序列,羧基末端区域TGFβ家族保守区,全序列与牛AMH的同源性为95.80%。SDS-PAGE结果显示,IPTG诱导表达的融合蛋白大小为30 000,与预期蛋白质大小一致。Western blot检测结果显示,该蛋白质为His融合蛋白。以上结果表明该试验成功克隆了绵羊AMH基因的完整编码区序列,构建了原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 绵羊 amh基因 序列分析 原核表达
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红耳龟Amh基因在温度依赖型性别决定中的功能 被引量:1
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作者 陈佳文 孙伟 +5 位作者 金琳 惠航博 雷建东 胡佳暄 王宗吉 葛楚天 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1858-1868,共11页
为研究Amh基因在TSD(Temperature-dependent sex determination,温度依赖型性别决定)中的功能,文章以红耳龟Trachemys scripta为TSD动物模型,分析了Amh在胚胎性腺中的精细表达特征和细胞定位;通过基因功能缺失和获得研究手段,验证了Amh... 为研究Amh基因在TSD(Temperature-dependent sex determination,温度依赖型性别决定)中的功能,文章以红耳龟Trachemys scripta为TSD动物模型,分析了Amh在胚胎性腺中的精细表达特征和细胞定位;通过基因功能缺失和获得研究手段,验证了Amh在TSD中的具体功能。表达分析结果显示,Amh基因在性腺分化启动前的第15期便已呈现产雄温度(Male-producing temperature,MPT)性腺高表达;AMH蛋白主要定位在MPT性腺sertoli前体细胞上,而在各个发育时期的FPT(Female-producing temperature,产雌温度)性腺中仅检测到极其微弱的Amh mRNA和蛋白表达信号。RNA干扰实验显示,敲低Amh后的MPT性腺出现了雄性向雌性完全性逆转,雄性分化因子Sox9明显下调,雌性分化因子Foxl2和Cyp19a1显著上调;相反地,异位表达Amh后的FPT性腺则转向睾丸方向分化,Foxl2和Cyp19a1表达被抑制,Sox9表达上升。上述研究表明,Amh是启动红耳龟早期睾丸分化必需且充分的关键因子,处于TSD雄性分化分子通路上游。 展开更多
关键词 amh基因 温度依赖型性别决定 性腺分化 性逆转 红耳龟
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大黄鱼gsdf和amh基因的克隆及表达分析 被引量:10
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作者 林爱强 谢仰杰 +3 位作者 徐双斌 叶坤 龚诗琦 王志勇 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1-13,共13页
该研究克隆了大黄鱼(Larimichthys crocea)gsdf(gonadal soma derived factor)和amh(anti-Müllerian hormone)基因的开放阅读框序列并对它们的表达进行分析。大黄鱼gsdf基因c DNA序列开放阅读框长为618 bp,可编码205个氨基酸,含有... 该研究克隆了大黄鱼(Larimichthys crocea)gsdf(gonadal soma derived factor)和amh(anti-Müllerian hormone)基因的开放阅读框序列并对它们的表达进行分析。大黄鱼gsdf基因c DNA序列开放阅读框长为618 bp,可编码205个氨基酸,含有信号肽和TGF-β结构域。系统进化分析显示,大黄鱼Gsdf与其他鱼类Gsdf聚为一枝,而与TGF-β超家族其他成员分开。Amh基因c DNA序列开放阅读框为1 563 bp,可编码520个氨基酸,含有信号肽、AMH-N区域和TGF-β保守结构域。系统进化分析显示,大黄鱼Amh与舌齿鲈(Dicentrarchus labrax)Amh进化关系最近。荧光定量PCR表达分析显示,gsdf和amh基因主要在大黄鱼性腺表达,在精巢中的表达量显著高于卵巢(P<0.05),2个基因都在性腺分化前开始表达,在雄鱼精巢中表达量呈现先升高后下降的趋势,在卵巢的表达量很低。此外,相比于正常雌鱼,gsdf和amh基因在伪雄鱼(遗传性雌鱼)性腺中的表达量显著上调。这些结果表明,gsdf和amh基因在大黄鱼性腺分化过程中起到重要的作用。 展开更多
关键词 大黄鱼 gsdf基因 amh基因 基因表达 性腺分化 荧光定量PCR
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贵州黑山羊AMH、CYP19A1基因多态性及其与产羔数的关联分析
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作者 杨蓉 周迪 +9 位作者 王珍梅 田兴舟 陈祥 吕艳丽 吴雨 敖叶 郭振刚 赵德鹏 黄清赟 张悻 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期4785-4795,共11页
【目的】分析贵州黑山羊抗缪勒氏管激素(AMH)、芳香化酶P450(CYP19A1)基因多态性,筛选出对山羊产羔数有显著影响的单核苷酸多态性(SNP)位点。【方法】以贵州黑山羊为研究对象,利用PCR产物直接测序,对AMH、CYP19A1基因全部外显子进SNP位... 【目的】分析贵州黑山羊抗缪勒氏管激素(AMH)、芳香化酶P450(CYP19A1)基因多态性,筛选出对山羊产羔数有显著影响的单核苷酸多态性(SNP)位点。【方法】以贵州黑山羊为研究对象,利用PCR产物直接测序,对AMH、CYP19A1基因全部外显子进SNP位点筛选,运用在线软件预测AMH、CYP19A1蛋白的二级结构、三级结构以及信号肽,并进行SNP位点与产羔数的关联分析。【结果】在贵州黑山羊AMH基因第5外显子处发现1个SNP位点:g.2612 A>G;在CYP19A 1基因第5外显子处发现1个SNP位点:g.37836 T>C;在CYP19A1基因第10外显子处发现2个SNPs位点:g.48986 C>T和g.49046 A>G。二级结构、三级结构预测发现,AMH、CYP19A1蛋白突变后二级结构稳定性降低,其中无规则卷曲占比最高,具有更高的复杂性,且AMH、CYP19A1蛋白不存在信号肽。χ^(2)检验结果显示,4个SNPs位点基因座均偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),均属于中度多态(0.25<PIC<0.5)。关联分析结果表明,AMH基因g.2612 A>G位点GG基因型贵州黑山羊产羔数极显著或显著高于AG和AA基因型(P<0.01;P<0.05);CYP19A1基因g.49046 A>G位点GG基因型贵州黑山羊产羔数显著高于AA和AG基因型(P<0.05);其他2个SNPs位点不同基因型间产羔数无显著差异(P>0.05)。【结论】AMH、CYP19A1基因g.2612 A>G、g.49046 A>G位点与贵州黑山羊产羔数具有显著相关,可作为山羊产羔性状的分子标记。试验结果为研究贵州黑山羊多胎性状提供了理论依据。 展开更多
关键词 贵州黑山羊 amh基因 CYP19A1基因 多态性 产羔数
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牙鲆amhr2基因的分子特征及组织表达 被引量:1
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作者 张发扬 李坤 +4 位作者 汪惟超 张丹丹 付晓娜 刘翠 张俊玲 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期509-519,共11页
为探讨牙鲆AMH受体AMHR2的分子特征及其在性腺发育中的作用,采用分子克隆和生物信息学方法克隆鉴定了牙鲆amhr2基因,通过半定量PCR和实时荧光定量PCR以及化学原位杂交技术测定了amhr2基因在牙鲆不同组织中的表达谱。试验结果显示:通过... 为探讨牙鲆AMH受体AMHR2的分子特征及其在性腺发育中的作用,采用分子克隆和生物信息学方法克隆鉴定了牙鲆amhr2基因,通过半定量PCR和实时荧光定量PCR以及化学原位杂交技术测定了amhr2基因在牙鲆不同组织中的表达谱。试验结果显示:通过克隆验证拼接得到的牙鲆amhr2 cDNA序列其开放阅读框长为1536 bp,编码511个氨基酸;牙鲆AMHR2蛋白的近N-端含有长度为19个氨基酸(1~19位氨基酸)的信号肽结构,氨基酸序列对比发现其与狭鳞庸鲽的相似度最高,为89.96%;进化树分析得出,AMHR2牙鲆在进化上与狭鳞庸鲽、大菱鲆的亲缘关系最近,进化地位相一致,说明牙鲆amhr2基因与其他物种具有一定的保守性;定量结果显示,amhr2基因主要在牙鲆卵巢与精巢中表达,且在卵巢中的表达水平显著高于精巢;原位杂交结果表明,amhr2基因主要在牙鲆支持细胞、精巢初级精母细胞以及次级精母细胞中表达,并在卵巢间质细胞、Ⅱ~Ⅴ期卵母细胞以及卵泡膜中表达。牙鲆AMHR2氨基酸序列与狭鳞庸鲽亲缘关系最近,amhr2基因主要在性腺组织中表达,且在牙鲆精巢和卵巢的生殖细胞和体细胞中均有表达,可能在牙鲆的性腺发育中有重要的调控作用。 展开更多
关键词 牙鲆 amhr2基因 amh基因 性腺发育
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性别决定基因SRY的研究进展 被引量:3
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作者 徐营 杨利国 +1 位作者 郭爱珍 杨俊杰 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第1期30-32,37,共4页
SRY基因是哺乳动物性别决定过程中的主宰基因 ,其表达产物SRY蛋白是一种DNA结合蛋白 ,该蛋白含有一个HMG盒 ,能够以序列特异性结合到DNA双螺旋链的一侧 ,起到转录因子的作用 ,调节或协同下游基因如SOX9、AMH等基因的表达 ,使胚胎发育向... SRY基因是哺乳动物性别决定过程中的主宰基因 ,其表达产物SRY蛋白是一种DNA结合蛋白 ,该蛋白含有一个HMG盒 ,能够以序列特异性结合到DNA双螺旋链的一侧 ,起到转录因子的作用 ,调节或协同下游基因如SOX9、AMH等基因的表达 ,使胚胎发育向雄性方向发展。 展开更多
关键词 SRY基因 HMG盒 SOX9基因 amh基因 性别决定基因 研究进展
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玻璃化深低温保存小鼠卵巢组织的研究 被引量:2
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作者 王艳 韩颖 +5 位作者 王捷熙 刘安 权国波 刘敏霞 杨超 扈文博 《制冷学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期28-32,共5页
对小鼠卵巢组织进行玻璃化深低温保存的初步研究,探索合适的玻璃化保护剂及保存方法。取3周龄小鼠卵巢组织,采用不同保护剂进行玻璃化深低温保存,-196℃液氮保存一周后复温,进行组织切片HE染色观察,筛选合适的玻璃化保护剂;对保存后的... 对小鼠卵巢组织进行玻璃化深低温保存的初步研究,探索合适的玻璃化保护剂及保存方法。取3周龄小鼠卵巢组织,采用不同保护剂进行玻璃化深低温保存,-196℃液氮保存一周后复温,进行组织切片HE染色观察,筛选合适的玻璃化保护剂;对保存后的小鼠卵巢组织进行自体移植体内培养2周后,取出卵巢组织进行形态学观察及基因表达研究,采用RT-PCR方法检测到了在原始卵泡向初级卵泡发育过程中特异表达的AMH基因及在各个阶段的卵泡中均表达的KL基因。结果表明采用高浓度渗透性保护剂(二甲基亚砜、乙酰胺、丙二醇)的玻璃化保护液对小鼠卵巢组织保存效果较好,说明采用玻璃化技术保存卵巢组织的方法可行,并可采用检测基因表达的方法验证深低温保存卵巢组织的效果。 展开更多
关键词 细胞生物学 小鼠卵巢 玻璃化 amh基因 KL基因
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