目的:通过网络药理学结合体内外实验探讨黄芩素(baicalein,Bai)对抗胰腺癌的作用机制及靶点。方法:通过多数据筛选Bai治疗胰腺癌的潜在靶点;利用STRING构建蛋白相互作用网络,并使用Cytoscape筛选核心靶点;同时进行GO(Gene Ontology)和KE...目的:通过网络药理学结合体内外实验探讨黄芩素(baicalein,Bai)对抗胰腺癌的作用机制及靶点。方法:通过多数据筛选Bai治疗胰腺癌的潜在靶点;利用STRING构建蛋白相互作用网络,并使用Cytoscape筛选核心靶点;同时进行GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析,探讨这些靶点的生物学功能。人胰腺癌细胞系Aspc-1和Bxpc-3经Bai处理后,用MTT法检测细胞活力;集落形成实验评估细胞群体依赖性增殖;流式细胞技术分析细胞凋亡和周期;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;异种移植瘤模型评价胰腺癌肿瘤增殖;免疫组化实验检测小鼠肿瘤组织中AKT蛋白表达;Western blot分析AKT、β-catenin、N-cadherin和转录因子Slug蛋白表达水平。结果:通过网络药理学筛选,得到108个Bai与胰腺癌交集的靶点,其中核心靶点共有7个,分别是原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src、热休克蛋白90α家族A类成员1(heat shock protein 90 alpha family class A member 1,HSP90AA1)、雌激素受体1(estrogen receptor 1,ESR1)、肿瘤蛋白p53(tumor protein p53,TP53)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、AKT1和丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated pro⁃tein kinase 3,MAPK3)。GO主要富集于氧化应激反应、蛋白磷酸化和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性等生物过程。KEGG主要富集PI3K/AKT、MAPK和Ras信号通路。MTT及集落形成实验显示,Bai呈剂量依赖性抑制Aspc-1和Bxpc-3细胞活力(72 h的IC50分别为73.6μmol/L和83.4μmol/L)并减少细胞集落形成(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术证实,Bai能诱导Aspc-1和Bxpc-3细胞凋亡(P<0.01),阻滞细胞至G0/G1期(P<0.05或P<0.01)。Transwell实验结果表明Bai抑制Aspc-1和Bxpc-3细胞迁移和侵袭(P<0.05或P<0.01)。异种移植瘤实验证实,Bai抑制由Aspc-1细胞诱导产生肿瘤的增殖作用(P<0.01)。此外,免疫组化实验显示,肿瘤组织中AKT的表达水平显著降低(P<0.01)。Western blot实验表明,Bai显著降低Aspc-1和Bxpc-3细胞中AKT、β-catenin、N-cadherin和Slug表达水平(P<0.01)。结论:Bai抑制胰腺癌增殖、迁移及侵袭,与AKT、β-catenin、N-cadherin和Slug蛋白水平降低有关。展开更多
文摘目的:通过网络药理学结合体内外实验探讨黄芩素(baicalein,Bai)对抗胰腺癌的作用机制及靶点。方法:通过多数据筛选Bai治疗胰腺癌的潜在靶点;利用STRING构建蛋白相互作用网络,并使用Cytoscape筛选核心靶点;同时进行GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析,探讨这些靶点的生物学功能。人胰腺癌细胞系Aspc-1和Bxpc-3经Bai处理后,用MTT法检测细胞活力;集落形成实验评估细胞群体依赖性增殖;流式细胞技术分析细胞凋亡和周期;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;异种移植瘤模型评价胰腺癌肿瘤增殖;免疫组化实验检测小鼠肿瘤组织中AKT蛋白表达;Western blot分析AKT、β-catenin、N-cadherin和转录因子Slug蛋白表达水平。结果:通过网络药理学筛选,得到108个Bai与胰腺癌交集的靶点,其中核心靶点共有7个,分别是原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src、热休克蛋白90α家族A类成员1(heat shock protein 90 alpha family class A member 1,HSP90AA1)、雌激素受体1(estrogen receptor 1,ESR1)、肿瘤蛋白p53(tumor protein p53,TP53)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、AKT1和丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated pro⁃tein kinase 3,MAPK3)。GO主要富集于氧化应激反应、蛋白磷酸化和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性等生物过程。KEGG主要富集PI3K/AKT、MAPK和Ras信号通路。MTT及集落形成实验显示,Bai呈剂量依赖性抑制Aspc-1和Bxpc-3细胞活力(72 h的IC50分别为73.6μmol/L和83.4μmol/L)并减少细胞集落形成(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术证实,Bai能诱导Aspc-1和Bxpc-3细胞凋亡(P<0.01),阻滞细胞至G0/G1期(P<0.05或P<0.01)。Transwell实验结果表明Bai抑制Aspc-1和Bxpc-3细胞迁移和侵袭(P<0.05或P<0.01)。异种移植瘤实验证实,Bai抑制由Aspc-1细胞诱导产生肿瘤的增殖作用(P<0.01)。此外,免疫组化实验显示,肿瘤组织中AKT的表达水平显著降低(P<0.01)。Western blot实验表明,Bai显著降低Aspc-1和Bxpc-3细胞中AKT、β-catenin、N-cadherin和Slug表达水平(P<0.01)。结论:Bai抑制胰腺癌增殖、迁移及侵袭,与AKT、β-catenin、N-cadherin和Slug蛋白水平降低有关。
