环境、病原、免疫因子三要素与池塘养殖对虾AHPND发生的关联性 被引量：6

1

作者 于永翔 王印庚 +7 位作者 蔡欣欣 张正 廖梅杰 李彬 荣小军 朱洪洋 唐苗苗 王春元 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期1-10,共10页

为研究虾急性肝胰腺坏死病(Acute Hepatopancreas Necrosis Disease,AHPND)的发生与环境、病原和虾体免疫间的相互关系,文章对池塘养殖凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)AHPND发生及其环境、病原、虾体免疫因子进行持续性跟踪监测。结... 为研究虾急性肝胰腺坏死病(Acute Hepatopancreas Necrosis Disease,AHPND)的发生与环境、病原和虾体免疫间的相互关系,文章对池塘养殖凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)AHPND发生及其环境、病原、虾体免疫因子进行持续性跟踪监测。结果表明,试验点的气温、水温、溶解氧(DO)、pH、盐度、氨氮(NH4-N)和亚硝态氮(NO2-N)波动范围为21-29℃、24.8-31℃、1.4-8.32 mg/L、8-8.91、34-50、0.01-0.26 mg/L和0.005-0.212 mg/L;水体可培养细菌和弧菌数量变化范围为3×10^(3)-2.4×10^(5)和2×10^(2)-1.8×104 CFU/mL,虾体肝胰腺内可培养细菌和弧菌数量变化范围为9.8×10^(4)-8.8×10^(6)和3.9×10^(3)-3.61×10^(6)CFU/g;16S rDNA鉴定结果显示,在可培养优势菌株中,弧菌检出数量达到135株,占全部鉴定菌株的61.6%,其中主要弧菌种类有欧文氏弧菌(Vibrio owensii)、坎贝氏弧菌(V.campbellii)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)和哈维氏弧菌(V.harveyi);虾体中ACP、AKP、SOD、LZM和PO等免疫酶活的变化范围分别为7.5-75、1-8.5、2.4-11.07、1.3-43和6.23-28 U/mg。结合AHPND发生前后各理化因子变化的相关性分析表明,水温、虾体肝胰腺内可培养细菌和弧菌数量、DO、LZM和PO可作为池塘养殖模式下对虾警示AHPND的指示因子。相关研究结果为指导池塘养殖凡纳滨对虾健康养殖及AHPND临床防控提供数据支撑和科学依据。 展开更多

关键词 ahpnd 环境因子 可培养细菌 免疫因子 预警因子 凡纳滨对虾

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地榆醇提物对对虾致病菌VPAHPND生长影响及最适内参基因的筛选 被引量：2

2

作者 杨泽禹 廖梅杰 +4 位作者 王印庚 张正 韦信贤 李彬 荣小军 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2020年第2期150-158,共9页

为筛选适用于研究地榆(Sanguisorba officinalis L.)对对虾急性肝胰腺坏死病致病株副溶血弧菌(Acute hepatopancreatic necrosis disease caused by Vibrio parahaemolyticus,VPAHPND)抑制机理的内参基因,本文探究了地榆醇提物胁迫下VPA... 为筛选适用于研究地榆(Sanguisorba officinalis L.)对对虾急性肝胰腺坏死病致病株副溶血弧菌(Acute hepatopancreatic necrosis disease caused by Vibrio parahaemolyticus,VPAHPND)抑制机理的内参基因,本文探究了地榆醇提物胁迫下VPAHPND生长的变化,并利用qRT-PCR技术探究了该条件下VPAHPND中6种常见内参基因(rec A、pvs A、pvu A、gapdh、16S rRNA和rpo S)的表达情况,利用GeNorm、Norm Finder、Best Keeper、Delta CT以及Ref Finder这5种方法对其表达稳定性进行了评估和筛选。结果显示,地榆醇提物能抑制VPAHPND的生长,且抑制效果与浓度呈正相关。在不同浓度地榆醇提物处理条件下,这6种内参基因扩增产物特异性良好,其中,Ct值变化差异最小的为16S rRNA(CV=3.88),变化差异最显著的为pvs A(CV=12.53)。5种方法对6种内参基因稳定性排序略有差异,其中,GeNorm给出的稳定性排序为rpo S=16S rRNA>gapdh>rec A>pvu A>pvs A;Norm Finder结果为gapdh>rpo S>pvu A>16S rRNA>rec A>pvs A;Best Keeper结果为16S rRNA>rpo S>gapdh>rec A>pvu A>pvs A;Delta Ct结果为gapdh>rpo S>pvu A>16S rRNA>rec A>pvs A;Ref Finder综合排名结果为rpo S>gapdh>16S rRNA>pvu A>pvs A>rec A。本研究根据配对变异系数结果,最终推荐同时使用rpo S和gapdh作为该条件下内参基因。本研究为以地榆为核心药物的AHPND防控技术的建立和从基因表达角度研究地榆对VPAHPND的作用机理提供了基础。 展开更多

关键词 急性肝胰腺坏死病(ahpnd) 副溶血弧菌 地榆 内参基因 QRT-PCR

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广东沿海地区凡纳滨对虾EHP、VPAHPND和SHIV感染情况调查与分析 被引量：19

3

作者 孙卫芳 黄小帅 +3 位作者 胡晓娟 文国樑 曹煜成 张建设 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期2343-2349,共7页

【目的】掌握广东沿海对虾主养区虾肝肠胞虫(EHP)、急性肝胰腺坏死病致病性副溶血弧菌(VPAHPND)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)3种病原的流行趋势及特点,为广东省对虾养殖业的病害防控提供参考依据。【方法】建立针对EHP、VPAHPND和SHIV的PC... 【目的】掌握广东沿海对虾主养区虾肝肠胞虫(EHP)、急性肝胰腺坏死病致病性副溶血弧菌(VPAHPND)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)3种病原的流行趋势及特点,为广东省对虾养殖业的病害防控提供参考依据。【方法】建立针对EHP、VPAHPND和SHIV的PCR检测方法,在广东茂名和汕尾两地区采集凡纳滨对虾样品检测EHP、VPAHPND和SHIV 3种病原,并针对生长缓慢或个体规格差异明显的部分养殖凡纳滨对虾进行病原感染情况调查。【结果】广东茂名地区凡纳滨对虾幼虾的EHP、VPAHPND和SHIV携带率分别为20.24%、2.38%和9.52%,汕尾地区凡纳滨对虾幼虾的EHP、VPAHPND和SHIV携带率分别为26.98%、4.76%和42.86%。根据养殖模式划分,土塘养殖凡纳滨对虾幼虾以携带EHP为主,携带率高达40.48%;高位池养殖凡纳滨对虾幼虾主要感染SHIV,携带率为29.27%;工厂化池塘中,凡纳滨对虾幼虾的EHP和SHIV携带率较高,分别为21.88%和23.44%。池塘水、水源水、虾苗及丰年虫等养殖要素均能检出病原,其中池塘水和水源水中EHP和SHIV的检出率较高。对个体规格差异明显的患病凡纳滨对虾群体进行检测,结果发现大、小规格样品的EHP感染率分别为30.00%和80.00%;在表现生长缓慢的患病凡纳滨对虾群体中,大、小规格幼虾样品的EHP携带率分别为95.00%和100.00%。【结论】广东沿海地区养殖凡纳滨对虾的EHP和SHIV携带率较高、流行趋势明显,而VPAHPND检出率较低、流行趋势不明显。养殖水体是EHP、VPAHPND和SHIV的重要传播媒介,生物饵料也是养殖过程中病原传播的源头。因此,在实际生产中应根据养殖凡纳滨对虾的病原流行特点,尤其针对EHP和SHIV高携带率的现象,从病原、宿主和环境三方面同时着手进行防控,采取综合防控措施减少病害发生。 展开更多

关键词 凡纳滨对虾 虾肝肠胞虫(EHP) ahpnd致病性副溶血弧菌(VPahpnd) 虹彩病毒(SHIV) 携带率

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VP_(AHPND)拮抗菌筛选鉴定及其活性物质的初步研究 被引量：4

4

作者 冯艳琴 沈辉 +3 位作者 王兴强 蒋葛 乔毅 李吉云 《水产学杂志》 CAS 北大核心 2022年第2期35-41,共7页

以致急性肝胰腺坏死病的副溶血性弧菌(VP_(AHPND)急性肝胰腺坏死病)为靶标菌,用LB、2216E和高氏一号三种培养基分离细菌,通过滤纸片法自江苏沿海海域沉积物及海洋生物分离的152株细菌中筛选出一株对VP_(AHPND)具有显著抑制作用的拮抗菌... 以致急性肝胰腺坏死病的副溶血性弧菌(VP_(AHPND)急性肝胰腺坏死病)为靶标菌,用LB、2216E和高氏一号三种培养基分离细菌,通过滤纸片法自江苏沿海海域沉积物及海洋生物分离的152株细菌中筛选出一株对VP_(AHPND)具有显著抑制作用的拮抗菌H36。通过菌体形态观察、生理生化特征及16S rDNA和gyrB序列分析,发现菌株H36与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)聚为一支,且形态特征、培养特征和生理生化特征也与枯草芽孢杆菌相符。H36对5株不同来源的VP_(AHPND)的抑菌圈直径达13.25~24.15 mm,具有良好的拮抗效果,并初步判断其活性物质为胞外产物,包含蛋白类物质。结果表明,该菌株具有开发成为副溶血性弧菌(VP_(AHPND))生物防治菌株的潜在价值。 展开更多

关键词 副溶血性弧菌 VP_(ahpnd) 拮抗菌 枯草芽孢杆菌 拮抗效果

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一株铜绿假单胞菌的分离鉴定及其对VP_(AHPND)拮抗效果的评价 被引量：1

5

作者 刘学实 蒋葛 +9 位作者 沈辉 乔毅 成婕 曹晓慧 窦雅斌 温梦莹 万夕和 王李宝 黎慧 史文军 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2023年第1期73-79,87,共8页

近年来,急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)造成了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖业巨大的经济损失,其病原为一类含有致病基因PirAB的弧菌(Vibrio),主要为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP_... 近年来,急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)造成了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖业巨大的经济损失,其病原为一类含有致病基因PirAB的弧菌(Vibrio),主要为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP_(AHPND)).本研究以VP_(AHPND)为受试菌株,从江苏海域捕获的黄姑鱼(Nibea albiflora)体内分离筛选对VP_(AHPND)具有抑制作用的拮抗菌株.通过形态学、生理生化及分子生物学方法进行鉴定,研究了其拮抗效果、拮抗活性物质,并对生物安全性和被动保护效果进行评估.结果表明,分离筛选出1株具有良好拮抗效果的菌株JSHY97,经鉴定该菌株为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa).该菌株对3株具有不同分型的VP_(AHPND)均具有良好的拮抗效果,其抑菌圈直径达19.25 mm~21.80 mm,初步判断其活性物质来源于胞外产物.口服JSHY97的凡纳滨对虾的7 d保护率也达到80%,拮抗组的凡纳滨对虾体内的毒力基因PirA拷贝数显著低于对照组(P<0.05).安全性实验表明JSHY97对斑马鱼(Brachydanio reriovar)和凡纳滨对虾无毒力.由此表明,本研究得到的铜绿假单胞菌菌株JSHY97对VP_(AHPND)具有较好的抑制作用,为AHPND的防治提供了新的菌株资源. 展开更多

关键词 VP_(ahpnd) 凡纳滨对虾 拮抗菌 铜绿假单胞菌

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凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死病(AHPND)病原分离鉴定及其致病性分析 被引量：26

6

作者 贾丹 史成银 +7 位作者 黄倢 张庆利 万晓媛 许华 刘冉阳 王海波 郭程程 谢国驷 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2018年第3期103-111,共9页

本研究从患急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺中分离到一株优势菌,编号为20160303005-1,通过16S rRNA和分子伴侣蛋白groEL基因序列分析,并结合生理生化特征,... 本研究从患急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺中分离到一株优势菌,编号为20160303005-1,通过16S rRNA和分子伴侣蛋白groEL基因序列分析,并结合生理生化特征,将该细菌鉴定为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus),其血清型为O1:KUT(K untypeable)。基因分析结果显示,该菌株携带可引起对虾AHPND的相关毒力蛋白基因pirA^(VP)和pirB^(VP),但不携带副溶血弧菌临床菌株毒力基因:耐热直接溶血毒素(Thenmostable direct hemolysin,tdh)和相对耐热直接溶血毒素(TDH-related hemolysin,trh)基因。菌株对凡纳滨对虾具有较强的致病性,浸泡感染的半数致死剂量(LD_(50))为7.96×10~3 CFU/ml。对虾急性感染后,6 h肝胰腺颜色变浅,肠胃变空;9 h肝胰腺呈浅白色,萎缩变小。9 h死亡数过半,24 h全部死亡。组织病理学分析显示,感染后对虾肝胰腺小管崩塌,上皮细胞严重脱落,呈现出典型的AHPND病理症状。药敏实验结果显示,该菌对庆大霉素、环丙沙星和头孢他啶等16种药物敏感,对阿莫西林、替卡西林和头孢噻吩等5种药物表现为耐药。上述研究可为该病原的流行病学及药物防控研究提供基本数据。 展开更多

关键词 凡纳滨对虾 急性肝胰腺坏死病 副溶血弧菌 细菌鉴定

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VPAHPND毒力蛋白PirAB的原核表达与纯化

7

作者 范贤平 张晟 +6 位作者 蒋葛 曹晓慧 乔毅 成婕 徐军田 胡闯显 沈辉 《广西科学》 CAS 北大核心 2022年第6期1103-1110,共8页

急性肝胰腺坏死病(Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease, AHPND)是一种新型对虾病害,其病原为一类携带编码二元毒素蛋白PirAB的弧菌(VPAHPND),可感染对虾且致死率高。本研究利用GenBank公布的pirAB全基因序列设计特异性引物,通过PC... 急性肝胰腺坏死病(Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease, AHPND)是一种新型对虾病害,其病原为一类携带编码二元毒素蛋白PirAB的弧菌(VPAHPND),可感染对虾且致死率高。本研究利用GenBank公布的pirAB全基因序列设计特异性引物,通过PCR获得目的基因pirA、pirB、pirAB并克隆至表达载体pET 21b(+)中,构建BL21-pET21b-pirA、BL21-pET21b-pirB、BL21-pET21b-pirAB原核表达体系;通过对诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间进行优化,分析重组蛋白的最佳表达条件;采用Ni磁珠对重组蛋白进行纯化,并以Western-blot方法分析其抗原性。结果表明,PirA、PirB、PirAB的重组蛋白分子质量分别约为17 kDa、50 kDa和(50+17) kDa,与预期大小一致。重组蛋白的最佳诱导条件:IPTG浓度0.01 mmol/L,PirA和PirAB 30℃诱导24 h、PirB 30℃诱导4 h,蛋白均呈现可溶性表达;纯化后的重组蛋白具有较好的反应原性,可为下一步的抗体制备和AHPND致病机理研究提供充足的实验材料。 展开更多

关键词 ahpnd pirAB基因 毒力蛋白 副溶血弧菌 原核表达

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基于Deep Forest算法的对虾急性肝胰腺坏死病(AHPND)预警数学模型构建 被引量：1

8

作者 王印庚 于永翔 +5 位作者 蔡欣欣 张正 王春元 廖梅杰 朱洪洋 李昊 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2024年第3期171-181,共11页

为预报池塘养殖凡纳对虾(Penaeus vannamei)急性肝胰腺坏死病(AHPND)的发生,自2020年开始,笔者对凡纳对虾养殖区开展了连续监测工作,包括与疾病发生相关的环境理化因子、微生物因子、虾体自身健康状况等18个候选预警因子指标,通过数据... 为预报池塘养殖凡纳对虾(Penaeus vannamei)急性肝胰腺坏死病(AHPND)的发生,自2020年开始,笔者对凡纳对虾养殖区开展了连续监测工作,包括与疾病发生相关的环境理化因子、微生物因子、虾体自身健康状况等18个候选预警因子指标,通过数据标准化处理后分析病原、宿主与环境之间的相关性,对候选预警因子进行筛选,基于Python语言编程结合Deep Forest、Light GBM、XGBoost算法进行数据建模和预测性能评判,仿真环境为Python2.7,以预警因子指标作为输入样本(即警兆),以对虾是否发病指标作为输出结果(即警情),根据输入样本和输出结果各自建立输入数据矩阵和目标数据矩阵,利用原始数据矩阵对输入样本进行初始化,结合函数方程进行拟合,拟合的源代码能利用已知环境、病原及对虾免疫指标数据对目标警情进行预测。最终建立了基于Deep Forest算法的虾体(肝胰腺内)细菌总数、虾体弧菌(Vibrio)占比、水体细菌总数和盐度的4维向量预警预报模型,准确率达89.00%。本研究将人工智能算法应用到对虾AHPND发生的预测预报,相关研究结果为对虾AHPND疾病预警预报建立了预警数学模型,并为对虾健康养殖和疾病防控提供了技术支撑和有力保障。 展开更多

关键词 对虾 急性肝胰腺坏死病 预警数学模型 Deep Forest算法 PYTHON语言

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急性肝胰腺坏死病(AHPND)诊断方法的研究进展 被引量：2

9

作者 彭张明 蒲桂川 《科学养鱼》 2019年第4期41-43,共3页

急性肝胰腺坏死病(acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)是近年来出现的一种新型疾病,它已导致亚洲和南美许多国家的对虾大面积死亡。该病最初被称为早期死亡综合征(early mortality syndrome,EMS)和急性肝胰腺坏死综合征(ac... 急性肝胰腺坏死病(acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)是近年来出现的一种新型疾病,它已导致亚洲和南美许多国家的对虾大面积死亡。该病最初被称为早期死亡综合征(early mortality syndrome,EMS)和急性肝胰腺坏死综合征(acute hepatopancreatic necrosis syndrome,AHPNS),后来正式改名为AHPND(FAO,2013)。 展开更多

关键词 肝胰腺 ahpnd 坏死病 诊断方法 PCR 对虾养殖

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凡纳滨对虾感染致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(Vp_(AHPND))的定量分析 被引量：14

10

作者 陈蒙蒙 董宣 +3 位作者 邱亮 万晓媛 谢国驷 黄倢 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2018年第4期93-100,共8页

对虾急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)是由致AHPND副溶血弧菌(AHPND-causing Vibrio parahaemolyticus,VpAHPND)携带的pVA1-like质粒所表达的PirA^(Vp)和PirB^(Vp)毒力蛋白对对虾肝胰腺的急性毒性所致... 对虾急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)是由致AHPND副溶血弧菌(AHPND-causing Vibrio parahaemolyticus,VpAHPND)携带的pVA1-like质粒所表达的PirA^(Vp)和PirB^(Vp)毒力蛋白对对虾肝胰腺的急性毒性所致。本研究用2.19×10~5 CFU/ml VpAHPND分离株20130629002S01对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)进行浸泡感染,于感染后2~9 d采集对虾的肝胰腺、鳃、肠道、肌肉组织,采用实时荧光定量PCR方法,检测各组织中的pir AVp拷贝数。结果显示,感染后凡纳滨对虾各组织均能检测到pirA^(Vp),其中,肝胰腺在感染后第4天达到峰值,为8.71×10~4 copies/mg,而鳃、肌肉、肠道分别在第3、4、5天达到峰值,分别为9.08×10~3、2.59×10~4、5.76×10~4 copies/mg。早期感染鳃组织中先出现Vp_(AHPND)的富集,在高死亡发生期,Vp_(AHPND)数量在肝胰腺和肠道出现高峰,在死亡数量逐渐下降的后期,各组织的Vp_(AHPND)均快速下降,肠道、肝胰腺和肌肉中的Vp_(AHPND)水平趋于接近。对虾肝胰腺组织病理切片显示,同一时间有临床症状的病虾和濒死对虾相比,濒死对虾表现出更严重的AHPND病理特征,且二者的组织病理特征均随着感染时间的延长变得更为严重,但检测到的Vp_(AHPND)数量呈下降趋势。研究表明,在Vp_(AHPND)感染过程中,组织中的pirA^(Vp)基因数量不能代表对虾的发病程度,发病程度及组织病理严重的AHPND样品中Vp_(AHPND)的数量不一定处于高水平状态。 展开更多

关键词 致急性肝胰腺坏死病 副溶血弧菌 浸浴感染 凡纳滨对虾 qPCR 时间进程

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凡纳对虾不同品系生长和急性肝胰腺坏死病抗性遗传参数估计 被引量：1

11

作者 黄桂仙 李旭鹏 +16 位作者 田吉腾 栾生 孔杰 曹宝祥 刘宁 罗坤 谭建 曹家旺 代平 陈宝龙 强光峰 刘绵宇 刘杨 王宏杰 刘学会 隋娟 孟宪红 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2024年第6期133-143,共11页

为开展凡纳对虾(Penaeus vannamei)生长和急性肝胰腺坏死病(acute hepatopancreatic necrosis disease, AHPND)抗性复合选育,本研究以自主选育的凡纳对虾高抗和快大品系为研究对象进行生长和AHPND抗性测试。实验家系共计70个(高抗家系40... 为开展凡纳对虾(Penaeus vannamei)生长和急性肝胰腺坏死病(acute hepatopancreatic necrosis disease, AHPND)抗性复合选育,本研究以自主选育的凡纳对虾高抗和快大品系为研究对象进行生长和AHPND抗性测试。实验家系共计70个(高抗家系40个,快大家系30个),实验个体共计1 760尾(高抗个体800尾,快大个体960尾)。2个品系分2批次进行VpAHPND定量口饲感染。批次内实验个体达半数死亡后停止投喂毒饵。利用个体动物模型和父母本阈值模型评估2个品系3个性状(体重、感染VpAHPND后个体存活时间、家系半致死存活率)的遗传力;利用两性状动物模型评估3个性状两两之间的遗传相关。结果显示,高抗系体重遗传力估计值为0.599±0.120,为高遗传力水平;个体存活时间遗传力估计值为0.240±0.072,为中等遗传力水平;家系半致死存活率遗传力估计值为0.173±0.051,为低等遗传力水平。快大系体重、个体存活时间和家系半致死存活率的遗传力估计值分别为0.266±0.082、0.374±0.096、0.257±0.048,均为中等遗传力水平。经Z-score检验,2个品系各性状遗传力估计值与0差异均达到极显著水平(P<0.01)。2个品系内的体重与AHPND抗性性状(个体存活时间、家系半致死存活率)遗传相关均表现为低度正相关(0.061~0.235),且与0差异不显著(P>0.05);2个品系内的个体存活时间与家系半致死存活率遗传相关分别为0.997±0.129、0.967±0.044,为高度正相关。结果表明,在实际选育过程中,可将生长和AHPND抗性作为选育指标纳入综合选择指数进行选种制种;为简化抗性测试过程,可将家系半致死存活率作为选育群体的AHPND抗性指标。本研究为开展凡纳对虾生长和AHPND抗性优良品种的选育提供了参考。 展开更多

关键词 凡纳对虾 生长 ahpnd抗性 遗传力 遗传相关

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欧文氏弧菌毒力蛋白PirAB的原核表达与纯化 被引量：1

12

作者 张萌萌 潘迎捷 王永杰 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期65-69,共5页

对虾肝胰腺坏死病的爆发造成了对虾养殖产业的严重亏损。从上海地区凡纳滨对虾中分离出1株欧文氏弧菌(Vibrio owensii SH-14),该菌株可导致凡纳滨对虾死亡,且死虾出现对虾肝胰腺坏死病的典型症状。经PCR扩增欧文氏弧菌毒力蛋白PirA与Pir... 对虾肝胰腺坏死病的爆发造成了对虾养殖产业的严重亏损。从上海地区凡纳滨对虾中分离出1株欧文氏弧菌(Vibrio owensii SH-14),该菌株可导致凡纳滨对虾死亡,且死虾出现对虾肝胰腺坏死病的典型症状。经PCR扩增欧文氏弧菌毒力蛋白PirA与PirB对应基因序列,并将其连接到表达质粒pET-21b(pirA)和pGEX-4t-1(pirB)。通过优化诱导表达和亲和层析纯化条件,最终获得大量高纯度的目的蛋白。经冷冻干燥保存为后期抗体合成以及进一步毒力效应研究提供参考。 展开更多

关键词 凡纳滨对虾 毒力蛋白 ahpnd pirAB基因 欧文氏弧菌 原核表达

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斑节对虾(非洲群体)肠道中哈维氏弧菌拮抗菌的筛选、鉴定及生理特性分析 被引量：2

13

作者 刘吉丹 樊英 +5 位作者 刘洪军 唐学玺 王晓璐 王友红 叶海斌 盖春蕾 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1876-1887,共12页

基于斑节对虾(非洲群体)(Penaeus monodon)肠道菌的生理生化特性,为解决斑节对虾急性肝胰腺坏死综合征(AHPND)提供新思路,文章分离纯化健康斑节对虾肠道中的优势菌株;以致病性哈维氏弧菌为指示菌,用牛津杯法从纯化菌株中筛选拮抗菌;通... 基于斑节对虾(非洲群体)(Penaeus monodon)肠道菌的生理生化特性,为解决斑节对虾急性肝胰腺坏死综合征(AHPND)提供新思路,文章分离纯化健康斑节对虾肠道中的优势菌株;以致病性哈维氏弧菌为指示菌,用牛津杯法从纯化菌株中筛选拮抗菌;通过生理生化特征、Biolog系统鉴定及16S rDNA技术综合方法对菌株进行鉴定;通过药敏实验,评价拮抗菌株的安全性;绘制高敏拮抗菌株的生长曲线,得出其生长特性;通过测定其产酶活性,形成对其益生机制的初步推断。从斑节对虾肠道中共分离得到14株的优势土著菌,分别标记为P.m-1、P.m-2……P.m-14,经过拮抗实验得到了3株拮抗菌(P.m-1、P.m-9和P.m-13)。经鉴定P.m-1、P.m-9和P.m-13分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)。药敏实验结果表明,3株拮抗菌均不属于耐药菌,P.m-1对药物高度敏感。生长特征实验表明:P.m-1在2h进入对数期,10h达到生长高峰,菌体密度可达1.14×10^(9)cfu/mL,表现出了强劲的生命力。经过蛋白酶活性测定,P.m-1具有较强的产酶能力。优势菌P.m-1具有成为益生菌的潜力,后续将作为功能性饲料添加剂或水质调节剂进行应用,为AHPND进行生物防治提供新思路。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 益生菌 哈维氏弧菌 拮抗作用 急性肝胰腺坏死综合征(ahpnd) 斑节对虾(非洲群体)

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副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)中溶源噬菌体与其宿主菌致病力的相关性 被引量：8

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作者 王娜 王海亮 +5 位作者 白楠 黄倢 谢达祥 谢起浪 於俊琦 万夕和 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2016年第2期105-110,共6页

急性肝胰腺坏死病(Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease,AHPND)是由副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)引起的对虾病害,本研究从患AHPND的凡纳滨对虾样品中分离得到5株副溶血弧菌,采用致AHPND的副溶血弧菌(VPAHPND)的相关质粒的... 急性肝胰腺坏死病(Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease,AHPND)是由副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)引起的对虾病害,本研究从患AHPND的凡纳滨对虾样品中分离得到5株副溶血弧菌,采用致AHPND的副溶血弧菌(VPAHPND)的相关质粒的引物AP2进行PCR检测,表明这5株菌中均存在AHPND相关质粒。利用丝裂霉素C进行溶源性噬菌体筛选和噬菌体诱导发现,其中2株副溶血弧菌(20130629002S01和20130726001S01)可能存在溶源性噬菌体感染;从经0.5μg/ml丝裂霉素C诱导的20130629002S01和20130726001S01中分别分离得到两种噬菌体phage1和phage2。透射电镜观测显示,phage1为有尾噬菌体,phage2为球形噬菌体。将上述5株副溶血弧菌进行卤虫无节幼体人工感染实验,结果显示,它们对卤虫无节幼体均有致病力,且各分离株的毒力表现出显著性差异;20130629002S01和20130726001S01两株带有溶源性噬菌体的副溶血弧菌的致病力显著低于无噬菌体的副溶血弧菌(20130721001S02)。本研究结果表明,5株VPAHPND分离株都含有AHPND相关的质粒,表现出显著的毒力差异,可能携带不同的溶源噬菌体,也可能不携带溶源噬菌体,溶源噬菌体与副溶血弧菌各分离株的毒力并无必然相关性。 展开更多

关键词 副溶血弧菌 溶源噬菌体 急性肝胰腺坏死病

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致病性副溶血弧菌VP0630株的分离鉴定及其对凡纳滨对虾免疫酶活力的影响 被引量：1

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作者 李春艳 白晓慧 +6 位作者 刘义 张振国 张丽 刘克明 郝爽 罗璋 尤宏争 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期502-508,共7页

为分析天津地区养殖凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei暴发性死亡的原因,采用生理生化法、16S rRNA基因序列分析及AP4套式PCR方法对从患病凡纳滨对虾(体长5~6 cm)肝胰腺中分离得到的优势菌VP0630进行了病原菌分离鉴定和致病性研究,采用注... 为分析天津地区养殖凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei暴发性死亡的原因,采用生理生化法、16S rRNA基因序列分析及AP4套式PCR方法对从患病凡纳滨对虾(体长5~6 cm)肝胰腺中分离得到的优势菌VP0630进行了病原菌分离鉴定和致病性研究,采用注射感染法对凡纳滨对虾进行攻毒试验,试验设对照组和感染组,每组设3个平行,每个平行各30尾对虾,感染组每尾虾注射3×10^7 CFU/mL的副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus 25μL,分别于注射后3、6、9、12、24、48、72、96 h时,检测凡纳滨对虾体内免疫酶活力的变化情况。结果表明:经鉴定,优势菌株VP0630属于致病性副溶血弧菌,理化特性鉴定概率为99%,pir毒力基因检测呈阳性;注射感染试验显示,对虾96 h时的累积死亡率达78.37%;酶活力检测显示,对照组对虾血清和肝胰腺中溶菌酶(LYS)、酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)和总抗氧化能力(T-AOC)6种酶活力在0~96 h时无显著性变化(P>0.05),而感染组对虾6种酶活力均呈现先升高后降低趋势,血清和肝胰腺中6种酶活力均在6~12 h时显著升高(P<0.05),大部分酶活力在72~96 h时降低至对照组水平,仅个别酶活力显著低于对照组(P<0.05)。研究表明,副溶血弧菌VP0630株具有较强的致病性,对凡纳滨对虾免疫防御系统有较强的破坏作用。 展开更多

关键词 凡纳滨对虾 副溶血弧菌 急性肝胰腺坏死病 免疫酶活力

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上海主养区凡纳滨对虾8种流行病病原监测及分析 被引量：1

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作者 张小明 安伟 张明辉 《水产科技情报》 2023年第4期235-240,共6页

为进一步掌握上海地区养殖凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)病原的流行趋势及特点,定期对上海主养区的凡纳滨对虾开展了8种流行病病原监测及分析工作。51份样品的分子检测和细菌分离鉴定结果显示,有4种病原检测出阳性,其中虹彩病毒1(DI... 为进一步掌握上海地区养殖凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)病原的流行趋势及特点,定期对上海主养区的凡纳滨对虾开展了8种流行病病原监测及分析工作。51份样品的分子检测和细菌分离鉴定结果显示,有4种病原检测出阳性,其中虹彩病毒1(DIV1)阳性检出率为29.41%,传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)为3.92%,致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(Vp_(AHPND))为1.96%,副溶血弧菌(Vp)为19.61%;而白斑综合征病毒(WSSV)、桃拉综合征病毒(TSV)、偷死野田村病毒(CMNV)、虾肝肠胞虫(EHP)等4种病原未检出。408项病原检测结果中,4种病原的阳性总样本数量为28份,总体阳性率为6.86%。结果表明,上海地区养殖凡纳滨对虾的病原携带率处于较低水平,DIV1、副溶血弧菌(Vp)是携带的主要病原。在实际生产中应根据病原流行特点,从苗种选购、养殖过程管理、药物选用等方面进行综合防控,减少病害发生。 展开更多

关键词 凡纳滨对虾 十足目虹彩病毒1(DIV1) 致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(Vp_(ahpnd)) 副溶血弧菌(Vp) 传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV) 虾肝肠胞虫(EHP)

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对虾肝胰腺坏死病副溶血弧菌双重微流控荧光定量PCR快速检测技术的建立与应用 被引量：4

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作者 李昊 张铭洋 +4 位作者 于永翔 王印庚 张正 马翠萍 陈夫山 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2023年第3期235-244,共10页

急性肝胰腺坏死病(AHPND)是对虾养殖过程中最常见、最严重的疾病,给对虾养殖造成重大经济损失。AHPND病原种类多、基因型复杂,现有的针对不同病原的检测技术目标导向较弱、检测成本高、时间消耗长,对虾健康养殖亟待开发AHPND的精准快速... 急性肝胰腺坏死病(AHPND)是对虾养殖过程中最常见、最严重的疾病,给对虾养殖造成重大经济损失。AHPND病原种类多、基因型复杂,现有的针对不同病原的检测技术目标导向较弱、检测成本高、时间消耗长,对虾健康养殖亟待开发AHPND的精准快速诊断技术。本研究针对AHPND病原体携带编码一种二元毒素pirA和pirB大型质粒的遗传共性,基于pirA和pirB基因设计特异性引物并建立微流控荧光定量PCR检测方法。该方法对致病基因pirA和pirB特异性强、灵敏度高,最低检测限分别为5.43×10^(0)和4.31×10^(1)copies/μL,样品平均检测时间为26min左右。为进一步评估该方法在实际应用中的准确性,以含有pirA和pirB毒性质粒的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)进行人工感染实验。结果表明,感染后的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)鳃丝、肝胰腺、肠道和肌肉等组织随时间的推迟均能检测到pirA和pirB;从感染2h的结果来看,pirB比pirA检出率更高。此外,致病因子pirA和pirB比toxR的检出率更高,更适合对AHPND致病原的检测。本研究建立的微流控荧光定量PCR检测的方法具有快速、灵敏、高通量、污染少、现场检测、一体化集成等优点。该技术不仅适用于实验室,更符合养殖基层的现场快速检测需求,为及早认知疾病发生风险和病害精准防控提供了新的技术手段与理论支撑。 展开更多

关键词 急性肝胰腺坏死病 副溶血弧菌 pirA pirB 微流控芯片 现场检测

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对虾急性肝胰腺坏死综合征不同检测方法结果分析 被引量：5

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作者 郭书林 尤颖哲 +7 位作者 陈何东 王艺红 陈信忠 丁亦男 龚艳清 杨俊萍 陈长乐 陈炳颖 《中国动物检疫》 CAS 2020年第1期87-90,共4页

急性肝胰腺坏死综合征(acute hepatopancreas necrosis disease,AHPND)是一种危害大、新出现的对虾疫病。目前认为该病由一种副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)引起。本试验通过生化鉴定、血清学分型、MALDI-TOF-MS鉴定以及文... 急性肝胰腺坏死综合征(acute hepatopancreas necrosis disease,AHPND)是一种危害大、新出现的对虾疫病。目前认为该病由一种副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)引起。本试验通过生化鉴定、血清学分型、MALDI-TOF-MS鉴定以及文献建立的PCR方法,在福建省南美白对虾养殖场,对分离于AHPND病虾肝胰腺的VP进行了检测。通过VITEK-2鉴定出81株VP分离株。从中选取9株分别进行MALDI-TOF-MS鉴定、PCR检测和血清学分型,发现这9株分离菌株均与MALDI-TOF-MS数据库中的VP匹配。其中:4株PCR检测为阳性,被鉴定为AHPND VP,其血清型包括O1:KUT和O1:K68;另5株PCR检测为阴性,血清型包括O1:KUT、O3:K6和O1:K68。试验表明:AHPND VP分离株存在不同血清型,可通过MALDI-TOF-MS进行菌种鉴定;MALDI-TOF-MS与PCR结合使用,可以准确、快速鉴定AHPND VP,这有利于开展AHPND的病原学分析、流行病学调查以及诊断和监测。 展开更多

关键词 急性肝胰腺坏死综合症 副溶血性弧菌 MALDI-TOF-MS PCR 血清型 鉴定

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福建省南美白对虾幼体急性肝胰腺坏死病病原分离与PCR检测 被引量：4

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作者 郭书林 陈信忠 +5 位作者 尤颖哲 陈何东 王艺红 丁亦男 龚艳清 杨俊萍 《中国动物检疫》 CAS 2019年第6期96-99,共4页

急性肝胰腺坏死病(AHPND)是一种近年新发现的南美白对虾疫病,其病原为一种特异的副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus,VP)。本试验根据文献建立的PCR方法,对福建省9家规模化南美白对虾养殖场进行了AHPND检测,分析不同样本处理方式对检... 急性肝胰腺坏死病(AHPND)是一种近年新发现的南美白对虾疫病,其病原为一种特异的副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus,VP)。本试验根据文献建立的PCR方法,对福建省9家规模化南美白对虾养殖场进行了AHPND检测,分析不同样本处理方式对检测结果的影响。从90份样本的27份中分离鉴定出81株VP,表明该地养殖场幼虾具有较高的VP感染风险;经PCR检测,在23份样本中,检出阳性菌株72株,其中16份样本的所有受检VP均为特异性菌株,6份样本的部分受检VP为特异性菌株,1份样本的所有受检VP均非特异性菌株,表明患病幼虾存在不同基因型VP同时感染情况;以肝胰腺DNA进行PCR检测,在90份样本中检出8份阳性,而以肝胰腺增菌液进行PCR检测,在90份样本中检出25份阳性,表明直接以肝胰腺DNA进行PCR检测的灵敏性较低。本研究为AHPND检测提供了技术支持。 展开更多

关键词 急性肝胰腺坏死病 副溶血性弧菌 PCR 检测

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进口南美白对虾亲虾急性肝胰腺坏死病的检测分析 被引量：4

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作者 张娜 王津津 +3 位作者 谢艳辉 于力 李家侨 刘莹 《中国动物检疫》 CAS 2016年第7期90-94,共5页

急性肝胰腺坏死病(AHPND)是一种新发疫病,对对虾养殖业损失巨大。其病原是携带毒素质粒基因的副溶血弧菌,但具体致病机制仍不清楚。本研究利用国外报道的毒素质粒基因特异性引物,对一批进境南美白对虾亲虾进行了AHPND检测。因其PCR的扩... 急性肝胰腺坏死病(AHPND)是一种新发疫病,对对虾养殖业损失巨大。其病原是携带毒素质粒基因的副溶血弧菌,但具体致病机制仍不清楚。本研究利用国外报道的毒素质粒基因特异性引物,对一批进境南美白对虾亲虾进行了AHPND检测。因其PCR的扩增结果与国外所报道的基因片段一致,初步认定为AHPND阳性。本文对此次检测的结果和过程进行了分析,为我国AHPND的检测提供了分析数据。 展开更多

关键词 急性肝胰腺坏死 早期死亡综合症 毒素质粒 PCR扩增

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