烟草AFLP分析体系的建立与优化 被引量：17

1

作者 杨友才 周清明 尹晗琪 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 2005年第3期23-28,共6页

以10份烟草种质资源为试材,对AFLP分析过程中包括DNA的提取质量和浓度、MseⅠ/EcoRⅠ以及T4DNA连接酶的浓度、反应时间和反应温度、以及其反应体系的组成等影响因素进行了研究。建立了一种适于烟草AFLP银染技术的优化体系。该体系中各... 以10份烟草种质资源为试材,对AFLP分析过程中包括DNA的提取质量和浓度、MseⅠ/EcoRⅠ以及T4DNA连接酶的浓度、反应时间和反应温度、以及其反应体系的组成等影响因素进行了研究。建立了一种适于烟草AFLP银染技术的优化体系。该体系中各优化因素为模板DNA的用量为400ng,酶切体系中MseⅠ和EcoRⅠ各加入4U,T4DNA连接酶加入2.8U,采用酶切与连接在同一体系中一步完成,其酶切连接温度为37℃,反应时间为7h。并对预扩增、选择性扩增和银染的效果进行了检测,以引物E-ACT/M-CAC构建了烟草种质资源的AFLP指纹图谱,该图谱扩增带多,多态性强,且质量好。 展开更多

关键词 烟草 aflp 分析体系 建立与优化

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燕麦AFLP反应体系的建立与优化 被引量：11

2

作者 刘欢 赵桂琴 +1 位作者 耿小丽 刘翠茹 《草业科学》 CAS CSCD 2008年第2期84-89,共6页

在利用扩增片断长度多态性(AFLP)技术研究燕麦Avena sativa遗传多样性过程中,从引物筛选、酶切连接、扩增条件、检测方法等几个方面进行优化,建立燕麦AFLP最适反应体系为:800 ng/μL DNA用10U EcoRⅠ和4 U MseⅠ在37℃7 h,65℃4 h温浴... 在利用扩增片断长度多态性(AFLP)技术研究燕麦Avena sativa遗传多样性过程中,从引物筛选、酶切连接、扩增条件、检测方法等几个方面进行优化,建立燕麦AFLP最适反应体系为:800 ng/μL DNA用10U EcoRⅠ和4 U MseⅠ在37℃7 h,65℃4 h温浴双酶切;16℃下连接过夜;预扩增取连接产物1μL,10μmol/L预扩引物各0.6μL,10×buffer 2μL,dNTPS 2μL,ddH2O补平至20μL;取5μL稀释20倍后的预扩增产物,50 ng/μL EcoRⅠ、MseⅠ选扩引物各0.8μL,总体系20μL进行选择性扩增。在此优化体系下,可以得到重复性好、稳定且多态性高的燕麦AFLP条带。 展开更多

关键词 燕麦 aflp反应体系 优化

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泡桐AFLP反应体系的建立及引物筛选 被引量：8

3

作者 曹喜兵 何佳 +1 位作者 翟晓巧 范国强 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期145-150,共6页

以豫杂一号泡桐为材料,通过对影响AFLP技术体系的各主要因素的研究,建立了适于泡桐AFLP分析的技术体系.结果表明最佳酶切体系(20μL)为500 ng模板DNA,3 U的PstI和M seI,在37℃下双酶切3 h;20μL最佳连接体系中为酶切产物15μL,0.25μmol... 以豫杂一号泡桐为材料,通过对影响AFLP技术体系的各主要因素的研究,建立了适于泡桐AFLP分析的技术体系.结果表明最佳酶切体系(20μL)为500 ng模板DNA,3 U的PstI和M seI,在37℃下双酶切3 h;20μL最佳连接体系中为酶切产物15μL,0.25μmol.L-1PstI接头,2.5μmol.L-1M seI接头,1μL 10×T4 Buff-er,2 U T4连接酶,22℃连接18 h;20μL最佳预扩反应体系中5μL稀释10倍的连接产物,100μmol.L-1dNTP,2 U Taq酶,250μmol.L-1PstI和M seI引物(P+AGT/M+AGT),2μL 10×PCR Buffer.20μL最佳选择性扩增反应体系中5μL稀释20倍预扩增产物,100μmol.L-1dNTP,2 U Taq酶,350μmol.L-1PstI和M seI引物(P+AGT/M+AGT),2μL 10×PCR Buffer.最后,筛选出了97对适宜于泡桐AFLP分析的引物. 展开更多

关键词 泡桐 aflp 反应体系 引物筛选

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卷丹百合AFLP反应体系的建立与优化 被引量：5

4

作者 雷家军 于海涛 +1 位作者 王志刚 周俐宏 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期122-127,F0003,共7页

以卷丹百合(Lilium lancifolium Thunb.)为试材,改良CTAB法提取DNA,通过对优化酶切、连接、预扩增、选择性扩增等试验条件筛选,初步建立适合卷丹百合的AFLP反应体系。结果表明,改良CTAB法提取的卷丹百合基因组DNA符合AFLP分析要求;最佳... 以卷丹百合(Lilium lancifolium Thunb.)为试材,改良CTAB法提取DNA,通过对优化酶切、连接、预扩增、选择性扩增等试验条件筛选,初步建立适合卷丹百合的AFLP反应体系。结果表明,改良CTAB法提取的卷丹百合基因组DNA符合AFLP分析要求;最佳酶切时间为37℃酶切8 h;16℃连接过夜;预扩增产物稀释30倍为宜。利用该体系筛选出12对能获得稳定、清晰扩增图谱的引物组合,为卷丹百合遗传图谱构建及分子辅助育种奠定基础。 展开更多

关键词 卷丹百合 aflp 反应体系 优化

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哲罗鱼AFLP技术体系建立的研究 被引量：5

5

作者 佟广香 包玉龙 +1 位作者 匡友谊 尹家胜 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期405-410,共6页

以哲罗鱼为材料提取DNA,采用两组限制性内切酶组合酶切基因组,并对酶量、酶切时间、扩增时稀释倍数及镁离子的浓度进行优化,结果表明200 ngDNA用4 U的EcoRI和PstI在37℃酶切4 h后,再分别用4 U的Tru9I和TaqI在65℃酶切4 h后用3 U的T4连... 以哲罗鱼为材料提取DNA,采用两组限制性内切酶组合酶切基因组,并对酶量、酶切时间、扩增时稀释倍数及镁离子的浓度进行优化,结果表明200 ngDNA用4 U的EcoRI和PstI在37℃酶切4 h后,再分别用4 U的Tru9I和TaqI在65℃酶切4 h后用3 U的T4连接酶连接3 h,进行预扩增,预扩增产物稀释100倍后选择扩增效果最佳,得到了清晰稳定的扩增图谱;并对两组酶切组合的扩增结果进行了比较,结果显示EcoRI、Tru9I酶切组合扩增的条带数要多于PstI、TaqI酶切组合扩增的条带数,但后者的多态性要高于前者。本研究为采用该技术对哲罗鱼基因组的研究提供了参考。 展开更多

关键词 哲罗鱼 aflp 反应体系

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黄瓜AFLP反应体系的优化 被引量：3

6

作者 张素勤 顾兴芳 +2 位作者 张圣平 王晓武 邹志荣 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2008年第3期271-273,共3页

对影响AFLP(Amplified fragment length polymorphism)扩增的关键因素进行了摸索,以期获得清晰稳定的黄瓜AFLP反应体系。结果发现,最佳的预扩增体系为:20反应体系中包含0.5 UTaqDNA poly-merase、2.0μL dNTP(2 mmol/L)、1.2μL 25 mmol... 对影响AFLP(Amplified fragment length polymorphism)扩增的关键因素进行了摸索,以期获得清晰稳定的黄瓜AFLP反应体系。结果发现,最佳的预扩增体系为:20反应体系中包含0.5 UTaqDNA poly-merase、2.0μL dNTP(2 mmol/L)、1.2μL 25 mmol/L Mg2+、0.6μL 50 ng/μL每种引物、1×PCR Buffer和4μL模板DNA;最优的选择性扩增体系为20μL反应体系中含有1.0 UTaqDNA polymerase、2.0μL dNTP(2 mmol/L)、1.0μL 25 mmol/L Mg2+、1.0μL 50 ng/μL每种引物、3.0μL稀释40倍的预扩增产物和1×PCR Buffer。体系优化后,扩增产物稳定,条带十分清晰,无背景干扰。 展开更多

关键词 黄瓜 aflp 反应体系 优化

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蜡梅AFLP分子标记技术体系的建立 被引量：11

7

作者 赵冰 张启翔 《武汉植物学研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期93-97,共5页

利用简易CTAB法、改良的CTAB法和SDS法提取蜡梅[Chimonanthus praecox(L.)Link]成熟叶和嫩叶的基因组,并进行了检测比较。结果显示,改良的CTAB法更适合蜡梅基因组DNA的提取,蜡梅叶片的年龄并不影响蜡梅基因组DNA的提取;同时利用AFLP分... 利用简易CTAB法、改良的CTAB法和SDS法提取蜡梅[Chimonanthus praecox(L.)Link]成熟叶和嫩叶的基因组,并进行了检测比较。结果显示,改良的CTAB法更适合蜡梅基因组DNA的提取,蜡梅叶片的年龄并不影响蜡梅基因组DNA的提取;同时利用AFLP分子标记技术,采用MseI-EcoR I酶切组合,从168对引物中筛选出10对带型分布均匀、多态性高且分辨能力强的引物,分别为:M23E46、M24E46、M25E46、M23E47、M24E47、M41E47、M41E94、M64E94、M64E66和M24E75,并确定了适用于蜡梅AFLP反应的最佳酶切连接、预扩和选扩体系,从而为今后利用AFLP分子标记技术研究蜡梅的品种分类和野生居群的遗传多样性分析打下坚实的基础。 展开更多

关键词 蜡梅[Chimonanthus praecox(L.)Link]品种 DNA提取 aflp反应体系

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克氏原螯虾AFLP反应体系的建立 被引量：3

8

作者 杨帆 姚琪 +3 位作者 刁英 郑兴飞 胡中立 舒新亚 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第11期2804-2807,共4页

以克氏原螯虾DNA为材料,对AFLP分析中的基因组酶切时间、选择性扩增中预扩增产物稀释倍数、Mg2+浓度等3个因素进行了比较。结果表明,基因组用EcoRⅠ和MseⅠ双酶切5 h,选择性扩增的PCR反应体系中Mg2+1.5 mmol/L是进行克氏原螯虾AFLP分析... 以克氏原螯虾DNA为材料,对AFLP分析中的基因组酶切时间、选择性扩增中预扩增产物稀释倍数、Mg2+浓度等3个因素进行了比较。结果表明,基因组用EcoRⅠ和MseⅠ双酶切5 h,选择性扩增的PCR反应体系中Mg2+1.5 mmol/L是进行克氏原螯虾AFLP分析的最佳反应条件,能够得到丰富稳定的带纹。而预扩增产物稀释倍数对选择性扩增没有明显影响。该体系的构建为AFLP技术在克氏原螯虾相关研究中的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 克氏原螯虾(Procambarus clarkii) aflp 反应体系

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卵形鲳鲹遗传多样性研究中AFLP技术优化及引物筛选 被引量：2

9

作者 彭敏 陈晓汉 +3 位作者 蒋伟明 陈秀荔 杨春玲 李咏梅 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期1152-1156,共5页

以卵形鲳鲹为材料,采用醋酸铵法提取高质量的基因组DNA,通过对双酶切?连接?电泳、染色等因素进行优化,建立了适用于卵形鲳鲹的AFLP反应体系。同时以卵形鲳鲹野生群体和养殖群体为材料,采用新建立AFLP反应体系从256对引物组合中筛选出10... 以卵形鲳鲹为材料,采用醋酸铵法提取高质量的基因组DNA,通过对双酶切?连接?电泳、染色等因素进行优化,建立了适用于卵形鲳鲹的AFLP反应体系。同时以卵形鲳鲹野生群体和养殖群体为材料,采用新建立AFLP反应体系从256对引物组合中筛选出10对多态性高的AFLP引物组合,获得了清晰的指纹图谱,证明建立的AFLP优化体系可用于卵形鲳鲹的AFLP分析。 展开更多

关键词 卵形鲳鲹 aflp 反应体系 优化

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黄瓜基因组DNA提取及AFLP体系优化研究 被引量：5

10

作者 宋晓飞 李晓丽 +1 位作者 冯志红 闫立英 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第29期14035-14037,共3页

[目的]提取黄瓜基因组DNA,并对AFLP体系进行优化。[方法]以黄瓜嫩叶为材料,利用改进的CTAB法提取高质量的黄瓜叶片总DNA,通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件建立适合黄瓜的AFLP银染体系,得到清晰的黄瓜AFLP指纹图谱。[结果... [目的]提取黄瓜基因组DNA,并对AFLP体系进行优化。[方法]以黄瓜嫩叶为材料,利用改进的CTAB法提取高质量的黄瓜叶片总DNA,通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件建立适合黄瓜的AFLP银染体系,得到清晰的黄瓜AFLP指纹图谱。[结果]DNA模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应,改良的CTAB提取法可用于黄瓜AFLP分析,形成清晰的AFLP指纹。优化的酶切连接体系为:以37℃酶切连接12 h为宜,酶切连接的基因组DNA用量为200ng,预扩增时Taq酶用量为0.5U/20μl体系,预扩增产物稀释40倍作为选择性扩增的模板。在此优化的体系下引物E41M47扩增出清晰的条带。[结论]为黄瓜品种的分子标记和黄瓜品种间亲缘关系等研究奠定了基础。 展开更多

关键词 黄瓜 DNA提取 aflp反应体系

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大菱鲆AFLP分析体系的建立 被引量：12

11

作者 季士治 王伟继 +1 位作者 雷霁霖 孔杰 《海洋水产研究》 CSCD 北大核心 2007年第1期6-12,共7页

本研究构建了大菱鲆扩增片段长度多态性(AFLP)分析体系,对DNA提取、双酶切反应、连接反应、预扩增反应、选择性扩增反应和银染等步骤进行了分析。结果表明,用EcoRI/MseI双酶切、核心序列加3个选择性碱基的选择性扩增引物、1∶6(w∶w)的E... 本研究构建了大菱鲆扩增片段长度多态性(AFLP)分析体系,对DNA提取、双酶切反应、连接反应、预扩增反应、选择性扩增反应和银染等步骤进行了分析。结果表明,用EcoRI/MseI双酶切、核心序列加3个选择性碱基的选择性扩增引物、1∶6(w∶w)的EcoRI端与MseI端选择性扩增引物比和20μl选择性扩增体积,可得到十分稳定的结果。所得产物经电泳和银染后可获得条带清晰、背景干扰小的图像。该体系的构建为AFLP技术在大菱鲆相关研究中的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 aflp 大菱鲆 反应体系

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药用植物草珊瑚AFLP反应体系的建立 被引量：3

12

作者 唐美琼 姚绍嫦 +2 位作者 李林轩 蓝祖栽 凌征柱 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第17期3879-3881,共3页

从草珊瑚(Sarcandra glabra)的幼嫩叶片中提取基因组DNA,建立草珊瑚AFLP反应体系,对AFLP反应体系中模板DNA的浓度、基因组DNA的双酶切时间、预扩增产物的稀释倍数和引物组合的筛选等关键因素进行摸索。优化的草珊瑚AFLP反应体系为模板DN... 从草珊瑚(Sarcandra glabra)的幼嫩叶片中提取基因组DNA,建立草珊瑚AFLP反应体系,对AFLP反应体系中模板DNA的浓度、基因组DNA的双酶切时间、预扩增产物的稀释倍数和引物组合的筛选等关键因素进行摸索。优化的草珊瑚AFLP反应体系为模板DNA的用量20 ng/μL、酶切反应时间4 h、预扩增产物稀释15倍,初步筛选出8对较为适合草珊瑚AFLP分析的引物组合。 展开更多

关键词 草珊瑚(Sarcandra glabra) aflp反应体系 建立

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cDNA-AFLP比较当归早薹基因转录差异反应体系的建立 被引量：9

13

作者 于光 段金廒 +1 位作者 宋秉生 何子清 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期134-137,共4页

建立了利用cDNA-AFLP技术对当归早薹相关的差异表达基因进行筛选的方法,优化了影响cDNA-AFLP试验结果的关键因子,包括选择性扩增模板量、酶离子浓度、dNTP浓度。结果表明,以1μL稀释10倍的预扩增产物作为模板、1.5 mmol/LMgCl2、0.6 mmo... 建立了利用cDNA-AFLP技术对当归早薹相关的差异表达基因进行筛选的方法,优化了影响cDNA-AFLP试验结果的关键因子,包括选择性扩增模板量、酶离子浓度、dNTP浓度。结果表明,以1μL稀释10倍的预扩增产物作为模板、1.5 mmol/LMgCl2、0.6 mmol/L dNTP,进行的选择性扩增反应获得DNA片段分子量范围较广,在100-1 000 bp长度范围中均有扩增片段,是较为理想的选择性扩增的结果。聚丙烯酰胺凝胶电泳验证了试验结果,在优化条件下利用部分引物组合可以较好地比较早薹当归在基因转录水平发生的差异。 展开更多

关键词 当归 早薹 CDNA-aflp 反应体系 表达差异

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桑天牛遗传多样性研究中AFLP反应体系的建立 被引量：2

14

作者 马向超 张爽 +3 位作者 黄大庄 张静洁 王圣杰 夏明瑞 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1022-1027,共6页

建立适合的AFLP反应体系研究桑树主要害虫桑天牛(Apriona germari)的遗传多样性,有助于从分子水平分析桑天牛不同地理种群的遗传多样性以及开辟害虫防治新途径。对提取的桑天牛成虫基因组DNA预扩增中的Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、Ta... 建立适合的AFLP反应体系研究桑树主要害虫桑天牛(Apriona germari)的遗传多样性,有助于从分子水平分析桑天牛不同地理种群的遗传多样性以及开辟害虫防治新途径。对提取的桑天牛成虫基因组DNA预扩增中的Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶的用量以及选择性扩增中的预扩增产物稀释倍数、dNTP浓度、引物浓度、Mg2+浓度和Taq酶的用量等进行单因素试验,优化反应体系。确定预扩增反应体系中的Mg2+终浓度为1.50mmol/L,dNTP终浓度为0.15mmol/L,引物浓度为10.0×10-7mol/L,Taq酶用量为1.00U;确定选择性扩增反应体系中的预扩增产物稀释倍数为40倍,dNTP终浓度为0.15mmol/L,引物浓度为5.00×10-7mol/L,Mg2+终浓度为1.50mmol/L,Taq酶用量为1.00U。用优化后的反应体系扩增得到了条带清晰的桑天牛AFLP图谱。 展开更多

关键词 桑天牛 遗传多样性 扩增片段长度多态性 反应体系

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枸杞属AFLP分析体系优化与建立 被引量：2

15

作者 戴国礼 曹有龙 +2 位作者 安巍 赵建华 周军 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期166-171,共6页

以枸杞属种质资源为试材，对AFLP分析过程中包括DNA的提取质量和浓度、Mse I／EcoR I以及T4DNA连接酶的浓度、反应时间等影响因素进行了研究。建立了一种适于枸杞AFLP银染技术的优化体系。该体系中各优化因素为：模板DNA的用量为300-40... 以枸杞属种质资源为试材，对AFLP分析过程中包括DNA的提取质量和浓度、Mse I／EcoR I以及T4DNA连接酶的浓度、反应时间等影响因素进行了研究。建立了一种适于枸杞AFLP银染技术的优化体系。该体系中各优化因素为：模板DNA的用量为300-400ng，酶切体系中Mse I和EcoR I各加入3U，T4 DNA连接酶加入2．0U，采用酶切与连接在同一体系中一步完成，其酶切温度为37℃，反应时间为5h。与22℃连接过夜。并对预扩增、选择性扩增和银染的效果进行了检测，以引物M＋CAC／E＋AGG构建了枸杞种质资源的AFLP指纹图谱，该图谱扩增带多，多态性强，且质量好。 展开更多

关键词 枸杞属 aflp 反应体系 aflp的优化与建立

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4种扇贝AFLP分析体系的建立 被引量：2

16

作者 周贺 秦艳杰 +1 位作者 周伯文 李霞 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S1期56-58,共3页

构建了4种扇贝扩增片段长度多态性(AFLP)的分析体系,对DNA提取、双酶切反应、连接反应、预扩增反应、选择性扩增反应和银染等条件进行了优化。结果表明:用EcoRⅠ/MseⅠ双酶切,核心序列加3个选择性碱基的选择性扩增引物,E32-M49和E32-M6... 构建了4种扇贝扩增片段长度多态性(AFLP)的分析体系,对DNA提取、双酶切反应、连接反应、预扩增反应、选择性扩增反应和银染等条件进行了优化。结果表明:用EcoRⅠ/MseⅠ双酶切,核心序列加3个选择性碱基的选择性扩增引物,E32-M49和E32-M62两个引物组合,以及20μL选择性扩增体积,可得到十分稳定的结果。所得产物经电泳和银染后可获得条带清晰、背景干扰小的图像。该体系的构建为AFLP技术在扇贝相关研究中的应用提供了依据。 展开更多

关键词 扇贝 aflp 反应体系

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企鹅珍珠贝AFLP反应体系建立的研究 被引量：1

17

作者 彭敏 陈晓汉 +3 位作者 陈秀荔 蒋伟明 黎铭 李咏梅 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第1期340-346,共7页

为了将AFLP技术应用到企鹅珍珠贝相关研究中,以企鹅珍珠贝为材料,采用SDS-CTAB改进法DNA提取高质量的基因组DNA,通过对AFLP双酶切体系?连接体系?预扩增体系及选择性扩增体系中关键因素进行优化,建立了适用于企鹅珍珠贝的AFLP反应体系。... 为了将AFLP技术应用到企鹅珍珠贝相关研究中,以企鹅珍珠贝为材料,采用SDS-CTAB改进法DNA提取高质量的基因组DNA,通过对AFLP双酶切体系?连接体系?预扩增体系及选择性扩增体系中关键因素进行优化,建立了适用于企鹅珍珠贝的AFLP反应体系。同时以3个企鹅珍珠贝地理群体为材料,采用新建立AFLP反应体系从256对引物组合中筛选出10对多态性高的AFLP引物组合,说明建立的优化体系可用于企鹅珍珠贝的AFLP分析。 展开更多

关键词 企鹅珍珠贝 aflp 反应体系 条件优化

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八角属植物AFLP体系的建立与优化 被引量：1

18

作者 潘晓芳 孙雪阳 +3 位作者 黄寿先 周传明 陈翠湖 闭冬玲 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期86-88,共3页

以八角属部分树种和八角品种共56个样品为试验材料,利用AFLP分子标记技术进行遗传多样性分析。采用改良的CTAB法提取总DNA,通过对酶切-连接反应、预扩增和选择性扩增反应过程中的关键因素进行优化,建立了适合八角属植物的AFLP分子标记... 以八角属部分树种和八角品种共56个样品为试验材料,利用AFLP分子标记技术进行遗传多样性分析。采用改良的CTAB法提取总DNA,通过对酶切-连接反应、预扩增和选择性扩增反应过程中的关键因素进行优化,建立了适合八角属植物的AFLP分子标记体系。该体系应用于八角AFLP研究,能够得到高质量的总DNA和清晰的遗传标记图谱,研究结果为八角种质资源分子生物学研究提供技术支撑。 展开更多

关键词 八角属 分子标记 aflp 反应体系

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桉树AFLP标记反应体系的建立 被引量：2

19

作者 张照远 项东云 +2 位作者 唐庆兰 邓紫宇 陈健波 《桉树科技》 2013年第1期20-24,共5页

为获得桉树种质鉴定、辅助育种所需稳定的分子标记,本研究以生产中常用的24个桉树无性系基因组DNA为材料,对AFLP的反应体系和参数进行优化,发现高纯度的模板最低用量为100 ng;EcoRⅠ、MseⅠ用量不低于0.5 U;酶切连接时间需要大于4 h,但... 为获得桉树种质鉴定、辅助育种所需稳定的分子标记,本研究以生产中常用的24个桉树无性系基因组DNA为材料,对AFLP的反应体系和参数进行优化,发现高纯度的模板最低用量为100 ng;EcoRⅠ、MseⅠ用量不低于0.5 U;酶切连接时间需要大于4 h,但不多于14 h。预扩增获得50～700 bp产物;该产物稀释5倍后用于选择性扩增。聚丙烯酰胺胶电泳检测温度以20℃为佳。 展开更多

关键词 桉树 aflp 体系优化

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栓皮栎AFLP反应体系的建立 被引量：1

20

作者 杨阳 张存旭 +1 位作者 郝丽丽 张文辉 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期66-69,92,共5页

以栓皮栎叶片为材料,研究了AFLP反应体系中酶切-连接反应的方法与时间、预扩增反应和选择性扩增反应等几个关键因素。建立一套适于栓皮栎基因组的AFLP反应体系:基因组DNA的提取宜采用改良的CTAB法;酶切-连接反应体系采用一步法,其中DNA... 以栓皮栎叶片为材料,研究了AFLP反应体系中酶切-连接反应的方法与时间、预扩增反应和选择性扩增反应等几个关键因素。建立一套适于栓皮栎基因组的AFLP反应体系:基因组DNA的提取宜采用改良的CTAB法;酶切-连接反应体系采用一步法,其中DNA模板用量为200ng,酶切-连接反应4h;酶切-连接产物用于预扩增反应的最佳稀释倍数为20倍;预扩增产物不需要进行稀释直接用作选择性扩增反应。对各环节的效果检测与引物筛选验证表明该体系适合栓皮栎的AFLP分析。 展开更多

关键词 栓皮栎 aflp 反应体系

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