龙眼胚性愈伤组织ACC合成酶基因(DL-ACS1)的克隆及表达分析 被引量：2

1

作者 李惠华 赖钟雄 +1 位作者 苏明华 林玉玲 《热带作物学报》 CSCD 2011年第5期854-860,共7页

以龙眼(Dimocarpus longan Lour.)胚性愈伤组织为材料,采用同源克隆和RACE方法分离得到龙眼胚性愈伤组织乙烯合成限速酶DL-ACS1(1-aminocyclopropane-1-carboxylate synthase)基因的cDNA全长序列(GenBank,FJ617537),共1 817 bp,包含了5&... 以龙眼(Dimocarpus longan Lour.)胚性愈伤组织为材料,采用同源克隆和RACE方法分离得到龙眼胚性愈伤组织乙烯合成限速酶DL-ACS1(1-aminocyclopropane-1-carboxylate synthase)基因的cDNA全长序列(GenBank,FJ617537),共1 817 bp,包含了5'非编码区(73 bp),开放阅读框(1 437 bp),3'非编码区(307 bp)。该cDNA开放阅读框的氨基酸序列(含478个氨基酸)与其它植物ACS具有77%～63%同源性,属于ACC Synthase家族。实时荧光定量PCR分析表明,该基因在龙眼体细胞胚胎(以下简称龙眼体胚)各阶段的表达量存在较大的时期差异,其中,球形胚(Stage 5)的表达量最高,鱼雷形胚(Stage 7)的表达量最低。 展开更多

关键词 龙眼 胚性愈伤组织 acc合成酶基因 基因克隆 实时荧光定量PCR

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ACC合成酶基因技术在培育延熟保鲜果品上的应用 被引量：3

2

作者 何业华 官春云 +1 位作者 林良斌 熊兴华 《经济林研究》 2000年第4期26-28,共3页

关键词 acc合成酶基因技术 果品 延熟保鲜 贮藏

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番茄1-氨基环丙烷羧酸ACC合成酶基因的克隆及其反义基因表达载体的构建 被引量：1

3

作者 李小娟 邵寒霜 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1999年第1期34-37,共4页

从成熟番茄果实中分离mRNA，以Oligo（dT）为引物在AMV逆转录酶作用下合成ACC2cDNA第一链，以cDNA为模板通过PCR扩增ACC2基因，获得1.45kb的扩增片段，将此片段克隆到BS质粒的EcoRV位点上，对插入片段两端进行部分序列分析，随后，将此... 从成熟番茄果实中分离mRNA，以Oligo（dT）为引物在AMV逆转录酶作用下合成ACC2cDNA第一链，以cDNA为模板通过PCR扩增ACC2基因，获得1.45kb的扩增片段，将此片段克隆到BS质粒的EcoRV位点上，对插入片段两端进行部分序列分析，随后，将此片段以反方向插入双元载体pBI151的35S启动子和NOS终止子之间，通过三条交配法将携带反义ACC2基因的中间表达载体pBA7转入根癌农杆菌LBA4404，得到了完整的Ti质粒表达载体系统。 展开更多

关键词 acc合成酶基因 PCR 反义基因

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桃基因组ACC合成酶基因的分离及其生物信息学分析

4

作者 邹爱兰 陈崇顺 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2005年第3期82-85,共4页

根据桃(PrunuspersicaL.Batch)品种Hakuho中与成熟相关的ACC合成酶基因cDNA序列,设计了两对特异引物,从新白花水蜜桃基因组DNA中,利用PCR方法扩增得到两个片段,经过拼接获得了ACC合成酶基因的完整序列(GenBankaccession:AY994054),并对... 根据桃(PrunuspersicaL.Batch)品种Hakuho中与成熟相关的ACC合成酶基因cDNA序列,设计了两对特异引物,从新白花水蜜桃基因组DNA中,利用PCR方法扩增得到两个片段,经过拼接获得了ACC合成酶基因的完整序列(GenBankaccession:AY994054),并对其进行了生物信息学分析。该序列全长2496bp,包括4个外显子和3个内含子,4个外显子共长1479bp。桃ACC合成酶基因编码区与蔷薇科梅(Prunusmume)和梨(Pyrus communis)的同源性分别为98%和84%,除终止密码子外,编码492个氨基酸,其中有SLSKDMGLPGLR共12个氨基酸残基的保守区,被认为是ACC合成酶的活性中心,位于274至285氨基酸残基处。推测其酶蛋白分子量为55kDa,pI为8.26。 展开更多

关键词 桃 基因组 acc合成酶基因 分离 生物信息学

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根癌农杆菌介导反义ACC合成酶基因对枣树的转化 被引量：19

5

作者 何业华 熊兴华 +4 位作者 林顺权 吴会桃 林良斌 何钢 陈建华 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期33-36,共4页

以枣树鲜食品种鸡蛋枣为材料,通过根癌农杆菌介导ACC合成酶反义基因转化,得到了转基因植株.预培养1d的枣树幼嫩茎段经根癌农杆菌感染后共培养3d,转移至分化选择培养基MS(1/2NO3)+0.15mg/LNAA+1.75mg/LZT+10mg/LKm+500mg/LCarb上诱导产... 以枣树鲜食品种鸡蛋枣为材料,通过根癌农杆菌介导ACC合成酶反义基因转化,得到了转基因植株.预培养1d的枣树幼嫩茎段经根癌农杆菌感染后共培养3d,转移至分化选择培养基MS(1/2NO3)+0.15mg/LNAA+1.75mg/LZT+10mg/LKm+500mg/LCarb上诱导产生不定芽,将抗Km不定芽先后在15mg/LKm的生长、增殖和生根培养基上继续选择,诱导成完整植株.经PCR检测从抗Km植株中选择到7株阳性植株,进一步经Southern杂交证实有6株外源基因已整合到了枣树基因组中.Real timePCR定量检测表明,ACC合成酶反义基因在5株转基因植株中得到表达. 展开更多

关键词 枣树 acc合成酶反义基因 转化

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牡丹ACC合成酶ACS1基因的克隆与原核表达 被引量：1

6

作者 张超 张玉环 +1 位作者 贾培义 董丽 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期97-100,共4页

从牡丹‘洛阳红’(Paeonia suffruticosa‘Luo Yang Hong’)花瓣中提取总RNA,根据GenBank上牡丹ACC合成酶基因PsACS的序列设计引物,通过RT-PCR获得牡丹PsACS1基因序列,包含一个1 479 bp的开放阅读框,编码492个氨基酸。将PsACS1基因cDNA... 从牡丹‘洛阳红’(Paeonia suffruticosa‘Luo Yang Hong’)花瓣中提取总RNA,根据GenBank上牡丹ACC合成酶基因PsACS的序列设计引物,通过RT-PCR获得牡丹PsACS1基因序列,包含一个1 479 bp的开放阅读框,编码492个氨基酸。将PsACS1基因cDNA片段与pET28a(+)构建原核表达载体pET-ACS1,转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)。0.4 mmol/LIPTG诱导3 h后,在预期的蛋白分子量55 kD处出现1条表达加强的蛋白条带。为进一步目的蛋白的纯化和鉴定提供试验基础。 展开更多

关键词 牡丹 acc合成酶基因 克隆 原核表达

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次郎柿ACC合成酶的转基因工艺研究 被引量：4

7

作者 申晓鸿 马俊莲 +2 位作者 张子德 唐霞 张丽 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期29-32,共4页

为获得抗软化的转基因柿果,初步建立了次郎柿转基因工艺。预培养时间为4 d;菌液OD600值为0.5,侵染时间10 min;共培养时间3 d;壮观霉素适宜浓度为30 mg/L。在此条件下,获得了次郎柿ACC合成酶的RNA干扰基因转基因苗。经PCR检测,得到8个转... 为获得抗软化的转基因柿果,初步建立了次郎柿转基因工艺。预培养时间为4 d;菌液OD600值为0.5,侵染时间10 min;共培养时间3 d;壮观霉素适宜浓度为30 mg/L。在此条件下,获得了次郎柿ACC合成酶的RNA干扰基因转基因苗。经PCR检测,得到8个转基因植株。 展开更多

关键词 次郎柿 acc合成酶基因(ACS) 转基因

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薄皮甜瓜果实ACC合成酶cDNA克隆及反义表达载体的构建 被引量：4

8

作者 郭庆勋 秦智伟 +1 位作者 丁国华 李景鹏 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第1期22-27,共6页

从成熟的薄皮甜瓜(Cucumis melo cv.Qitian I)果肉组织中分离总RNA,经RT-PCR扩增得到0.7 kb的cDNA片段,将其克隆到质粒载体pGEM-T Easy。测序表明,该基因为777 bp,编码258个氨基酸,与Gen-Bank中甜瓜1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶(1-aminocy... 从成熟的薄皮甜瓜(Cucumis melo cv.Qitian I)果肉组织中分离总RNA,经RT-PCR扩增得到0.7 kb的cDNA片段,将其克隆到质粒载体pGEM-T Easy。测序表明,该基因为777 bp,编码258个氨基酸,与Gen-Bank中甜瓜1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylate synthase,ACS)基因比对,核苷酸同源性为99%,氨基酸同源性为98%。克隆片段经双酶切消化,反向插入到植物表达载体pCAM2301的E8启动子和NOS终止子之间,构建成E8调控下ACS基因反义表达载体。通过冻融法将携带反义cDNA的植物表达载体质粒转入根癌农杆菌LBA4404,得到了完整的Ti质粒表达载体系统。 展开更多

关键词 薄皮甜瓜 acc合成酶基因 反义基因 反义表达载体

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果实特异启动子调控薄皮甜瓜ACC合成酶cDNA反义表达载体的构建 被引量：1

9

作者 郭庆勋 秦智伟 李景鹏 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期411-414,共4页

应用反义RNA技术抑制甜瓜成熟过程中内源乙烯的合成,从而培育耐贮运品种是解决甜瓜延熟保鲜难题的可行新方法。根据GenBank中甜瓜、黄瓜ACC合成酶基因氨基酸保守序列设计引物,从成熟的薄皮甜瓜(齐甜1号)果肉组织中提取总RNA,经RT-PCR扩... 应用反义RNA技术抑制甜瓜成熟过程中内源乙烯的合成,从而培育耐贮运品种是解决甜瓜延熟保鲜难题的可行新方法。根据GenBank中甜瓜、黄瓜ACC合成酶基因氨基酸保守序列设计引物,从成熟的薄皮甜瓜(齐甜1号)果肉组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增得到约0.7kb的ACC合成酶cDNA片段,将其克隆到质粒载体pGEM-TEasy中,测序表明,该基因为777bp,编码258个氨基酸;从番茄(东农706)叶片组织中提取总DNA,经PCR扩增得到约2.2kb的E8基因片段,将其克隆到质粒载体pGEM-TEasy中,测序表明,该基因为2192bp;以pCAM2301为起始植物表达载体,pCAM-GT为中间载体,成功构建了果实特异启动子(E8)调控薄皮甜瓜ACC合成酶cDNA反义表达载体,采用冻融法将其转入根癌农杆菌LBA4404,得到了完整的Ti质粒表达载体系统。 展开更多

关键词 薄皮甜瓜 反义acc合成酶基因 特异启动子 植物表达载体

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牡丹ACS基因克隆及序列分析 被引量：3

10

作者 高水平 魏春梅 +3 位作者 刘改秀 王丽娜 孔祥生 范丙友 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第3期100-102,106,共4页

ACC合成酶(ACS)是乙烯生物合成的关键酶。为了明确牡丹ACC合成酶基因的结构,基于报道的牡丹ACScDNA(DQ337250)序列,设计一对特异性PCR扩增引物,以洛阳红牡丹(Paeonia suffuticosa Andr.)新鲜叶片总DNA为模板,用高保真DNA聚合酶KOD-Plus... ACC合成酶(ACS)是乙烯生物合成的关键酶。为了明确牡丹ACC合成酶基因的结构,基于报道的牡丹ACScDNA(DQ337250)序列,设计一对特异性PCR扩增引物,以洛阳红牡丹(Paeonia suffuticosa Andr.)新鲜叶片总DNA为模板,用高保真DNA聚合酶KOD-Plus成功地扩增出长度约为2 200bp的PCR产物;用pMD18-T载体对PCR产物进行了克隆,测序结果表明,牡丹ACS基因序列全长2 251bp,含4个外显子和3个内含子,剪接位点均为保守的5′供位GU与3′受位AG模式,4个外显子分别居于1-174、267-398、483-643、1 240-2 251bp;序列已提交至GenBank数据库,其登录号为FJ769773;牡丹ACS蛋白由492个氨基酸组成,与苹果、枇杷、西洋梨、天竺葵等ACS的相似性达74%～76%;生物信息学分析预测牡丹ACS蛋白的分子量为54.9kD,等电点为6.8,是一个定位于细胞质的不稳定的非分泌亲水蛋白。 展开更多

关键词 牡丹 acc合成酶基因 基因序列 克隆 生物信息学分析

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农杆菌介导蝴蝶兰的遗传转化研究 被引量：7

11

作者 崔波 蒋素华 +3 位作者 牛苏燕 袁秀云 马杰 叶永忠 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期642-645,650,共5页

采用根癌农杆菌介导法,将ACC合成酶反义基因导入蝴蝶兰原球茎中,比较不同PPT筛选压力、Mer浓度和侵染时间等对蝴蝶兰转化的影响,优化蝴蝶兰的遗传转化体系.结果表明,在OD600值为0.2～0.3的农杆菌菌液中侵染120 min后,放入含有20 mg.L-1... 采用根癌农杆菌介导法,将ACC合成酶反义基因导入蝴蝶兰原球茎中,比较不同PPT筛选压力、Mer浓度和侵染时间等对蝴蝶兰转化的影响,优化蝴蝶兰的遗传转化体系.结果表明,在OD600值为0.2～0.3的农杆菌菌液中侵染120 min后,放入含有20 mg.L-1Mer和2.0 mg.L-1PPT的筛选培养基中的原球茎,遗传转化效率最高. 展开更多

关键词 蝴蝶兰 acc合成酶基因 遗传转化

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根癌农杆菌介导的磨盘柿遗传转化体系的优化 被引量：2

12

作者 尹虹 宋春丽 +2 位作者 马俊莲 张子德 唐霞 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第2期56-59,共4页

以磨盘柿叶片为外植体,通过农杆菌介导法,建立了ACC合成酶基因(ACS)遗传转化体系。研究了预培养时间、农杆菌菌液浓度、侵染时间、共培养时间和乙酰丁香酮(AS)浓度等因素对基因转化的影响。结果表明:适宜的预培养时间为2 d;用OD600值为... 以磨盘柿叶片为外植体,通过农杆菌介导法,建立了ACC合成酶基因(ACS)遗传转化体系。研究了预培养时间、农杆菌菌液浓度、侵染时间、共培养时间和乙酰丁香酮(AS)浓度等因素对基因转化的影响。结果表明:适宜的预培养时间为2 d;用OD600值为1.0的菌液侵染15 min、共培养3 d,AS浓度200μmol/L有利于提高转化频率。经PCR分子检测,初步确定ACC合成酶基因已转入磨盘柿组培苗中。 展开更多

关键词 磨盘柿 根癌农杆菌 acc合成酶基因(ACS) 遗传转化

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美国农业部批准DNAP的遗传改良番茄 被引量：1

13

作者 朱遐 《生物技术通报》 CAS CSCD 1995年第6期20-21,共2页

DNA Plant Technology Corporation（DNAP）已接到美国农业部（USDA）的通知,从1995年1月17日起,DNAP的遗传工程晚熟番茄不再受到限制。因在此之前DNAP受到美国食品与药物管理局（FDA）的检查,所以USDA的这项决定完全取消了对DNAP的限制... DNA Plant Technology Corporation（DNAP）已接到美国农业部（USDA）的通知,从1995年1月17日起,DNAP的遗传工程晚熟番茄不再受到限制。因在此之前DNAP受到美国食品与药物管理局（FDA）的检查,所以USDA的这项决定完全取消了对DNAP的限制,使其从现在起可以在全美自由培育,运输和销售其遗传工程番茄。DNAP计划从3月份开始,以Fresh World Farms Endless Summer^TM为商标试销其番茄。 DNAP首席执行官Robert Sereabetz高兴地说:“我们非常高兴地获悉对我们首种遗传工程产品的限制已经解除。”“我们正在平稳地推进3月份的试销活动。 展开更多

关键词 遗传改良 美国农业部 番茄 DNAP 遗传工程 美国食品与药物管理局 货架寿命 acc合成酶基因 工程改良 首席执行官

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首例rDNA花卉今夏在澳大利亚露面

14

作者 王颖 《生物技术通报》 CAS CSCD 1995年第5期12-12,共1页

Florigene Australia公司计划市场考查一种重组麝香石竹花,这种花比非转基因品种维持的时间长1倍。FlorigeneB.V(Rijnsburg,The Netherlands)的Theo Aanhane说,这是第一种上市的重组花卉。 Florigene Australia,前身是Calgene Pacific公... Florigene Australia公司计划市场考查一种重组麝香石竹花,这种花比非转基因品种维持的时间长1倍。FlorigeneB.V(Rijnsburg,The Netherlands)的Theo Aanhane说,这是第一种上市的重组花卉。 Florigene Australia,前身是Calgene Pacific公司,所采用的技术类似于Calgene Ine(Davis,CA)和DNA Plant Technology Corp.(DNAp)用于延长重组番茄货架期的技术。通过抑制乙烯的生成,番茄的成熟被推迟了,Florigene也是用这种方法防止石竹凋残。Aanhane说。 展开更多

关键词 澳大利亚 花卉 麝香石竹 acc合成酶基因 乙烯生成 化学处理剂 货架期 非转基因 品种比较 公司计划

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