目的探讨ABI家族成员3结合蛋白(ABI family member 3-binding protein,ABI3BP)在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导内皮祖细胞功能障碍中的作用及机制。方法为探讨ABI3BP在AngⅡ诱导内皮祖细胞功能障碍中的作用,将细胞分为4组,sh-N...目的探讨ABI家族成员3结合蛋白(ABI family member 3-binding protein,ABI3BP)在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导内皮祖细胞功能障碍中的作用及机制。方法为探讨ABI3BP在AngⅡ诱导内皮祖细胞功能障碍中的作用,将细胞分为4组,sh-NC组[转染阴性对照短发夹RNA(LV-scramble-shRNA)+磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)]、sh-ABI3BP组[转染ABI3BP shRNA(LV-ABI3BP-shRNA)+PBS]、sh-NC+AngⅡ组(LV-scramble-shRNA+AngⅡ)和sh-ABI3BP+AngⅡ组(LV-ABI3BP-shRNA+AngⅡ)。采用Transwell实验检测细胞迁移能力,黏附实验检测细胞黏附能力,Matrigel检测细胞成管能力,原位末端标记法检测细胞凋亡。Western blot检测整合素β1-黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)-P53信号通路变化情况。结果与sh-NC组比较,sh-NC+AngⅡ组迁移细胞数量、黏附细胞数量、小管形成数量显著降低,细胞凋亡率、整合素β1、磷酸化FAK(p-FAK)/FAK及P53蛋白表达显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。与sh-NC+AngⅡ组比较,sh-ABI3BP+AngⅡ组迁移细胞数量[(88.67±8.33)个vs(62.33±7.37)个]、黏附细胞数量[(104.33±6.03)个vs(68.33±10.05)个]、小管形成数量[(36.33±3.21)个vs(19.33±3.06)个]显著增高,细胞凋亡率、整合素β1、p-FAK/FAK及P53蛋白表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论AngⅡ可上调ABI3BP表达,敲低ABI3BP基因表达可改善AngⅡ诱导的内皮祖细胞功能障碍,其机制可能与抑制整合素β1-FAK-P53信号通路有关。展开更多
文摘密码子偏性是影响外源基因表达的重要因素,也是反映基因家族进化的关键线索之一。兰科植物是植物保护中的“旗舰”类群,且多数物种具有药用和观赏价值,但种子不易萌发,而ABI3(abscisic acid insensitive 3)基因是ABA信号转导的中心调控因子,是调控植物种子萌发的关键因子。因此,深入研究兰科ABI3基因密码子偏性,可为解析该基因功能、优化密码子组成奠定基础。本研究以拟南芥ABI3基因为探针,从公共数据库(NCBI)筛选出45条兰科植物ABI3基因,通过CodonW、SPSS、MEGA等生物信息学程序对其进行密码子使用模式和偏好性分析。相关参数分析结果表明,该基因的ENC(effective number of codon)值范围分布为40.84~58.46,其中大于52的占82.2%,CAI(codon adaptation index)平均值为0.203,远小于1,表明ABI3基因的密码子偏性相对较弱;中性绘图分析显示,GC12与GC3的回归曲线的斜率为0.6103,R2=0.7928,P<0.05,有极高的相关性,这暗示着碱基组成对密码子偏性具有重要的影响;ENC-plot分析中,所有基因ENC值都低于期望值,但相差不大,说明兰科ABI3基因密码子主要受碱基突变的影响,同时也受选择压力等其他因素影响。奇偶偏好性分析显示,大多数基因分布在平面图的右侧区域,密码子第3位A/T(U)的使用频率高于G/C。通过RSCU和ΔRSCU分析确定了26个最优密码子,其中以A/T(U)结尾的密码子有14个,以T(U)结尾的密码子有10个,说明兰科植物ABI3基因相对偏好使用A/U结尾的密码子,尤其偏好使用T(U)结尾的密码子,这与大多数单子叶植物密码子使用偏好不同。本研究可为兰科植物ABI3基因的系统发育、功能解析、提高ABI3基因表达效率提供理论基础,同时可为促进植物密码子生物学研究及外源基因改良提供参考。
