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AAT基因转化杂交构树叶片组培筛选研究
被引量：
4
1
作者
谢晓阳
魏磊
+6 位作者
王伟
景炳年
陈谭星
颜慧萍
曹力凡
常霞
高正龙
《西部林业科学》
CAS
北大核心
2021年第1期27-34,共8页
为了提高杂交构树的组培效率,以蒺藜苜蓿为研究对象,进行生物信息分析,克隆蒺藜苜蓿目的基因AAT,构建表达载体,通过农杆菌转化方法将目的载体转入杂交构树组培叶片中,优化组培相关体系配比,抗生素筛选配比,RT-PCR和定量PCR检验重组植株...
为了提高杂交构树的组培效率,以蒺藜苜蓿为研究对象,进行生物信息分析,克隆蒺藜苜蓿目的基因AAT,构建表达载体,通过农杆菌转化方法将目的载体转入杂交构树组培叶片中,优化组培相关体系配比,抗生素筛选配比,RT-PCR和定量PCR检验重组植株。结果表明:最佳灭菌体系为75%乙醇消毒20 s,0.3%HgCl 2消毒15 min,污染率低,成活率高;最佳愈伤期激素配比为6-BA 2.5 mg/L、NAA 0.2 mg/L,最佳壮苗期激素配比为6-BA 1.5 mg/L、NAA 0.2 mg/L。最佳筛选抗生素配比为噻孢霉素(Cef)300 mg/L、潮霉素(Hyg)7.5 mg/L;通过RT-PCR验证试验结果,并通过定量PCR测定AAT基因表达含量,重组植株与野生型相比提高2.5倍。试验首次建立了重组载体遗传转化杂交构树,对叶片组培及筛选方法具有重要意义。
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关键词
杂交构树
载体构建
组织培养
aat基因
遗传转化
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职称材料
薰衣草醇酰基转移酶基因(AAT)的克隆和表达分析
2
作者
廖燕
尹松松
+4 位作者
龚林涛
闫博文
孙明辉
苏秀娟
王爱凡
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2024年第4期599-606,共8页
醇酰基转移酶(AAT)可以催化乙酰辅酶A与萜烯醇类物质的结合,生成各类乙酸酯类化合物。为探明薰衣草AAT基因在酯类化合物合成中的调控作用,本研究以薰衣草品系杂花叶片为供试材料,利用反转录PCR技术克隆薰衣草AAT基因的cDNA序列,该cDNA...
醇酰基转移酶(AAT)可以催化乙酰辅酶A与萜烯醇类物质的结合,生成各类乙酸酯类化合物。为探明薰衣草AAT基因在酯类化合物合成中的调控作用,本研究以薰衣草品系杂花叶片为供试材料,利用反转录PCR技术克隆薰衣草AAT基因的cDNA序列,该cDNA序列长度为1344 bp,其编码蛋白质由447个氨基酸组成,是非跨膜亲水性蛋白质,属于PLN02481超级家族;薰衣草AAT与黄色猴面花EgAAT亲缘关系最近,相似度为60.87%。AAT基因在苞叶中的表达量最低,在花瓣中的表达量最高;在花冠不同发育时期,该基因在盛开期表达量到达峰值。构建原核表达载体pET-28a-AAT,筛选了重组蛋白在大肠杆菌Transetta(DE3)中的最适诱导表达条件,诱导后获得的重组蛋白质相对分子质量为5.026×10^(4),重组蛋白以包涵体形式存在,具有将芳樟醇催化合成乙酸芳樟酯的生物活性。本研究结果为进一步验证薰衣草AAT基因在酯类化合物合成过程中的功能提供了基础。
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关键词
薰衣草
醇酰基转移酶
基因
(
aat
)
克隆
表达模式
酶活性鉴定
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职称材料
题名
AAT基因转化杂交构树叶片组培筛选研究
被引量：
4
1
作者
谢晓阳
魏磊
王伟
景炳年
陈谭星
颜慧萍
曹力凡
常霞
高正龙
机构
河南省生物技术开发中心河南省科学院天然产物重点实验室
河南省高新技术实业有限公司
出处
《西部林业科学》
CAS
北大核心
2021年第1期27-34,共8页
基金
河南省科学院重大科研项目聚焦专项(190114002)。
文摘
为了提高杂交构树的组培效率,以蒺藜苜蓿为研究对象,进行生物信息分析,克隆蒺藜苜蓿目的基因AAT,构建表达载体,通过农杆菌转化方法将目的载体转入杂交构树组培叶片中,优化组培相关体系配比,抗生素筛选配比,RT-PCR和定量PCR检验重组植株。结果表明:最佳灭菌体系为75%乙醇消毒20 s,0.3%HgCl 2消毒15 min,污染率低,成活率高;最佳愈伤期激素配比为6-BA 2.5 mg/L、NAA 0.2 mg/L,最佳壮苗期激素配比为6-BA 1.5 mg/L、NAA 0.2 mg/L。最佳筛选抗生素配比为噻孢霉素(Cef)300 mg/L、潮霉素(Hyg)7.5 mg/L;通过RT-PCR验证试验结果,并通过定量PCR测定AAT基因表达含量,重组植株与野生型相比提高2.5倍。试验首次建立了重组载体遗传转化杂交构树,对叶片组培及筛选方法具有重要意义。
关键词
杂交构树
载体构建
组织培养
aat基因
遗传转化
Keywords
Hybrid Broussonetia papyrifera
vector construction
tissue culture
aat
gene
genetic transformation
分类号
S722.3 [农业科学—林木遗传育种]
S792 [农业科学—林木遗传育种]
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职称材料
题名
薰衣草醇酰基转移酶基因(AAT)的克隆和表达分析
2
作者
廖燕
尹松松
龚林涛
闫博文
孙明辉
苏秀娟
王爱凡
机构
新疆农业大学农学院
新疆农业大学薰衣草研究所/新疆作物遗传改良与种质创新重点实验室
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2024年第4期599-606,共8页
基金
新疆维吾尔自治区重大科技专项(2022B02036-1)
国家自然科学基金地区科学基金项目(31760429)
+2 种基金
新疆维吾尔自治区科学技术厅“天山青年计划”优秀青年科技人才培养项目(2020Q016)
国家级大学生创新训练计划项目(201810758003)
作物学重点学科发展基金项目(XNCDKY2021015)。
文摘
醇酰基转移酶(AAT)可以催化乙酰辅酶A与萜烯醇类物质的结合,生成各类乙酸酯类化合物。为探明薰衣草AAT基因在酯类化合物合成中的调控作用,本研究以薰衣草品系杂花叶片为供试材料,利用反转录PCR技术克隆薰衣草AAT基因的cDNA序列,该cDNA序列长度为1344 bp,其编码蛋白质由447个氨基酸组成,是非跨膜亲水性蛋白质,属于PLN02481超级家族;薰衣草AAT与黄色猴面花EgAAT亲缘关系最近,相似度为60.87%。AAT基因在苞叶中的表达量最低,在花瓣中的表达量最高;在花冠不同发育时期,该基因在盛开期表达量到达峰值。构建原核表达载体pET-28a-AAT,筛选了重组蛋白在大肠杆菌Transetta(DE3)中的最适诱导表达条件,诱导后获得的重组蛋白质相对分子质量为5.026×10^(4),重组蛋白以包涵体形式存在,具有将芳樟醇催化合成乙酸芳樟酯的生物活性。本研究结果为进一步验证薰衣草AAT基因在酯类化合物合成过程中的功能提供了基础。
关键词
薰衣草
醇酰基转移酶
基因
(
aat
)
克隆
表达模式
酶活性鉴定
Keywords
lavender
alcohol acyltransferase gene(
aat
)
cloning
expression pattern
enzyme activity identification
分类号
S184 [农业科学—农业基础科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
AAT基因转化杂交构树叶片组培筛选研究
谢晓阳
魏磊
王伟
景炳年
陈谭星
颜慧萍
曹力凡
常霞
高正龙
《西部林业科学》
CAS
北大核心
2021
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
薰衣草醇酰基转移酶基因(AAT)的克隆和表达分析
廖燕
尹松松
龚林涛
闫博文
孙明辉
苏秀娟
王爱凡
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2024
0
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职称材料
已选择
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