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山黧豆AAE超家族基因鉴定及LsAAE3的酶活检测
被引量：
1
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作者
贾海燕
张颖
+3 位作者
陈红
刘嘉怡
焦成瑾
徐全乐
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第3期443-450,共8页
【目的】三七素(β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸,β-ODAP)是山黧豆、三七等物种中的神经活性物质,其生物合成与草酰辅酶A密切相关。研究基于全基因组鉴定山黧豆草酰辅酶A合成酶的编码基因,为β-ODAP生物合成的调控研究奠定基础。【方法】...
【目的】三七素(β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸,β-ODAP)是山黧豆、三七等物种中的神经活性物质,其生物合成与草酰辅酶A密切相关。研究基于全基因组鉴定山黧豆草酰辅酶A合成酶的编码基因,为β-ODAP生物合成的调控研究奠定基础。【方法】用AMP结合结构域隐马尔科夫模型在山黧豆基因组中鉴定酰基激活酶超家族(acyl-activating enzyme superfamily,AAE)基因,在此基础上,克隆山黧豆草酰辅酶A合成酶基因LsAAE3,用多序列比对、原核表达及酶活检测等方法分析LsAAE3基因功能。【结果】山黧豆中至少存在22条AAE家族基因;系统发育分析表明:LsAAE3与拟南芥AtAAE3等聚为一支,隶属于酰基辅酶A合成酶家族。基因克隆及序列分析表明:LsAAE3基因cDNA全长为1566 bp;LsAAE3和AtAAE3的保守结构域类似,均含有AMP结合位点、CoA结合位点及AAE保守结构域。SDS-PAGE检测表明所获融合蛋白条带单一,大小在56 kD左右;用His标签抗体进行Western blot分析发现,诱导后和纯化的融合蛋白均能检测到特征条带,说明所获融合蛋白为LsAAE3。体外酶活检测表明:LsAAE3具有草酰辅酶A合成酶活性,其活性发挥依赖于ATP、Mg^(2+)。【结论】研究在全基因组水平鉴定山黧豆AAE超家族基因,并验证了LsAAE3具有草酰辅酶A合成酶活性,为进一步分析山黧豆LsAAE3在β-ODAP生物合成过程中的功能奠定基础。
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关键词
山黧豆
三七素
aae超家族
草酰辅酶A合成酶
酶活测定
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职称材料
题名
山黧豆AAE超家族基因鉴定及LsAAE3的酶活检测
被引量：
1
1
作者
贾海燕
张颖
陈红
刘嘉怡
焦成瑾
徐全乐
机构
陇东学院生命科学与技术学院
西北农林科技大学生命科学学院
天水师范学院生物工程与技术学院
甘肃省功能基因组与分子诊断重点实验室
出处
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第3期443-450,共8页
基金
陕西省自然科学基金项目(2023-JC-YB-152)
细胞活动与逆境适应教育部重点实验室开放基金项目(lzujbky-2021-kb05)
+1 种基金
甘肃高等学校科学研究项目(2021A-124)
陇东学院青年科技创新基金项目(XYZK2304)。
文摘
【目的】三七素(β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸,β-ODAP)是山黧豆、三七等物种中的神经活性物质,其生物合成与草酰辅酶A密切相关。研究基于全基因组鉴定山黧豆草酰辅酶A合成酶的编码基因,为β-ODAP生物合成的调控研究奠定基础。【方法】用AMP结合结构域隐马尔科夫模型在山黧豆基因组中鉴定酰基激活酶超家族(acyl-activating enzyme superfamily,AAE)基因,在此基础上,克隆山黧豆草酰辅酶A合成酶基因LsAAE3,用多序列比对、原核表达及酶活检测等方法分析LsAAE3基因功能。【结果】山黧豆中至少存在22条AAE家族基因;系统发育分析表明:LsAAE3与拟南芥AtAAE3等聚为一支,隶属于酰基辅酶A合成酶家族。基因克隆及序列分析表明:LsAAE3基因cDNA全长为1566 bp;LsAAE3和AtAAE3的保守结构域类似,均含有AMP结合位点、CoA结合位点及AAE保守结构域。SDS-PAGE检测表明所获融合蛋白条带单一,大小在56 kD左右;用His标签抗体进行Western blot分析发现,诱导后和纯化的融合蛋白均能检测到特征条带,说明所获融合蛋白为LsAAE3。体外酶活检测表明:LsAAE3具有草酰辅酶A合成酶活性,其活性发挥依赖于ATP、Mg^(2+)。【结论】研究在全基因组水平鉴定山黧豆AAE超家族基因,并验证了LsAAE3具有草酰辅酶A合成酶活性,为进一步分析山黧豆LsAAE3在β-ODAP生物合成过程中的功能奠定基础。
关键词
山黧豆
三七素
aae超家族
草酰辅酶A合成酶
酶活测定
Keywords
Lathyrus sativus
dencicine
aae
superfamily
oxalyl-CoA synthase
enzyme activity detection
分类号
Q946.5 [生物学—植物学]
S529 [农业科学—作物学]
S542 [农业科学—作物学]
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出处
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被引量
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1
山黧豆AAE超家族基因鉴定及LsAAE3的酶活检测
贾海燕
张颖
陈红
刘嘉怡
焦成瑾
徐全乐
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
1
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