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A型肉毒杆菌神经毒素重链干预大鼠脊髓损伤后蛋白表达的初步研究 被引量：2
1
作者 兰婧 王红 +2 位作者 白娟 王亚芳 李夏青 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2125-2132,共8页
目的:初步观察大鼠脊髓损伤模型基础上局部注射小剂量A型肉毒杆菌神经毒素重链(BoNT/A HC)后对局部蛋白表达谱的影响,为探讨BoNT/A HC干预在体神经损伤后相关蛋白表达及其干预神经再生机制提供实验基础。方法:复制大鼠单侧腰段脊髓损伤... 目的:初步观察大鼠脊髓损伤模型基础上局部注射小剂量A型肉毒杆菌神经毒素重链(BoNT/A HC)后对局部蛋白表达谱的影响,为探讨BoNT/A HC干预在体神经损伤后相关蛋白表达及其干预神经再生机制提供实验基础。方法:复制大鼠单侧腰段脊髓损伤模型;采用SDS-PAGE及双向电泳观察不同剂量BoNT/A HC(2μg、4μg、6μg和8μg)对脊髓损伤后局部(包括损伤部位及其近头端部分脊髓组织)蛋白表达谱的干预作用。结果:大鼠单侧腰段脊髓损伤2 d时局部脊髓组织结构明显破坏崩解,损伤波及左侧脊髓灰质及白质;脊髓损伤局部SDS-PAGE及考马斯亮蓝染色显示,于损伤同时局部一次性注射不同剂量BoNT/A HC后,某些蛋白表达与单纯损伤组相比明显不同,而与正常组基本一致;双向电泳结果进一步显示,损伤局部注射6μg BoNT/A HC后2 d和20 d时,在不同等电点及不同蛋白分子量水平上,有10余种蛋白表达与单纯损伤组明显不同,呈向正常转化的趋势。结论:大鼠脊髓损伤局部注射BoNT/A HC一定时间可影响损伤局部蛋白表达谱的变化,这种变化呈现由损伤造成的蛋白表达变化被转向正常的趋势。 展开更多
关键词 脊髓损伤 a型肉毒杆菌神经毒素重链 神经损伤 神经再生
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血清型A肉毒杆菌神经毒素重链对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用 被引量：6
2
作者 高美玲 王红 +2 位作者 张彩云 兰婧 李夏青 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2221-2227,共7页
目的:观察血清型A肉毒杆菌神经毒素重链(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain,Bo NT/A HC)对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用并探讨与其相关的细胞内信号机制。方法:采用体外细胞培养技术,在培养液中加入不同浓度的Bo NT/A H... 目的:观察血清型A肉毒杆菌神经毒素重链(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain,Bo NT/A HC)对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用并探讨与其相关的细胞内信号机制。方法:采用体外细胞培养技术,在培养液中加入不同浓度的Bo NT/A HC(0.01 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L和10 nmol/L)进行干预,于24 h、48 h和72 h时收集细胞进行免疫荧光染色,再计算细胞突起长度及有突起细胞的百分比;在此基础上,选择最有效的Bo NT/A HC浓度作为处理剂量加入细胞培养液,于Bo NT/A HC作用后不同时点收集全细胞蛋白,采用Western blot检测p-ERK1/2及p-Akt的蛋白水平。结果:当Bo NT/A HC浓度为0.1 nmol/L、1 nmol/L和10 nmol/L时,细胞突起的长度及有突起细胞的百分比与对照组相比皆明显增加,差异显著(P<0.05),其中1 nmol/L效果最显著。在细胞培养液内加入1 nmol/L Bo NT/A HC后,p-ERK1/2的蛋白水平呈增加趋势,其中Bo NT/A HC作用60 min后,p-ERK1/2的增加与对照组相比差异显著(P<0.05);与p-ERK1/2变化趋势类似,细胞培养液内加入1 nmol/L的Bo NT/A HC后,p-Akt的蛋白水平也呈增加趋势,其中Bo NT/A HC作用15 min和60 min时,p-Akt增加显著(P<0.05)。结论:一定剂量的Bo NT/A HC可以促进神经细胞突起再生和生长;Bo NT/A HC对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用机制可能通过激活与神经再生相关的信号蛋白ERK1/2和Akt的磷酸化而实现。 展开更多
关键词 血清型A肉毒杆菌神经毒素重链 Neuro-2a细胞株 神经突起再生 细胞外信号调节激酶 蛋白激酶B
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多重聚合酶链式反应检测C、D型肉毒神经毒素基因 被引量：6
3
作者 王兴民 孟筱琦 王成怀 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第1期14-16,共3页
目的为了建立检测Ｃ、Ｄ型肉毒神经素基因的ＰＣＲ方法。方法用人工合成的两对寡核苷酸引物于同一反应管中扩增Ｃ、Ｄ型肉毒素基因的一段ＤＮＡ片断，建立了用于Ｃ、Ｄ型肉毒神经毒素基因检测的多重ＰＣＲ方法。用多重聚合酶链式反应对... 目的为了建立检测Ｃ、Ｄ型肉毒神经素基因的ＰＣＲ方法。方法用人工合成的两对寡核苷酸引物于同一反应管中扩增Ｃ、Ｄ型肉毒素基因的一段ＤＮＡ片断，建立了用于Ｃ、Ｄ型肉毒神经毒素基因检测的多重ＰＣＲ方法。用多重聚合酶链式反应对梭状芽胞杆菌属的１０种２６株菌进行了鉴定，并对其特异性及灵敏度进行了检查。结果当样本中同时含有Ｃ、Ｄ型的模板ＤＮＡ时用该ＰＣＲ系统可同时扩增出Ｃ、Ｄ型的目的片段，分别为９９９ｂｐ和４０４ｂｐ，其它各型肉毒酸梭菌及其它梭菌均为阴性，灵敏度较Ｃ、Ｄ型分别扩增偏低，Ｃ型为４５０ｐｇ，Ｄ型为１０ｐｇ。结论该ＰＣＲ系统可用于Ｃ、Ｄ型肉毒梭菌的鉴定。 展开更多
关键词 肉毒神经毒素 基因检测 C型 D型 聚合酶链反应
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A型肉毒毒素重链对大鼠脊髓损伤局部颈上神经节蛋白10的表达及神经突起再生的影响 被引量：4
4
作者 王亚芳 高扬 +4 位作者 李志强 刘雅 赵明伟 袁海霞 李夏青 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1142-1148,1155,共8页
目的:探讨人工重组A型肉毒毒素重链(BoNT/A重链)对大鼠脊髓损伤局部颈上神经节蛋白10(SCG10)表达、神经突起再生以及损伤侧后肢感觉及运动功能的影响,为阐明BoNT/A重链促神经突起生长的作用提供实验依据。方法:大鼠单侧腰段脊髓横断损... 目的:探讨人工重组A型肉毒毒素重链(BoNT/A重链)对大鼠脊髓损伤局部颈上神经节蛋白10(SCG10)表达、神经突起再生以及损伤侧后肢感觉及运动功能的影响,为阐明BoNT/A重链促神经突起生长的作用提供实验依据。方法:大鼠单侧腰段脊髓横断损伤模型基础上局部及鞘内给予BoNT/A重链;于用药后不同时间提取局部蛋白进行双向电泳,并根据双向电泳提示的蛋白点群变化的分子量和等电点,选取SCG10为目标蛋白行Western Blot检测及神经突起测定;通过抓力和热痛敏实验测试损伤侧后肢的运动和感觉功能情况。结果:(1)BoNT/A重链可干预脊髓损伤后局部蛋白谱的变化,MW位于18—25kDa、等电点在5—7范围的蛋白点可以作为蛋白点群变化的代表之一;(2)作为分子量位于18—25kDa/等电点在5—7的蛋白成分之一的SCG10在单纯损伤时较正常对照组其表达有所增高,给予BoNT/A重链后, SCG10的表达显著增强(P<0.05);(3)免疫荧光结果显示:单纯损伤时SCG10的阳性表达主要分布于损伤周边细胞的胞体,应用BoNT/A重链后,SCG10阳性分布于胞浆和细胞突起且以损伤近头端的周边区域较为显著;(4)突起测定结果显示:BoNT/A重链可促进脊髓损伤周边神经细胞突起增长,包括突起数目增多及含有突起的神经细胞百分比增多(P<0.05);(5)给予BoNT/A重链后,损伤侧后肢肌力明显优于单纯损伤组(P<0.05),但感觉功能未见明显改善。结论:脊髓损伤局部给予BoNT/A重链可促进生长相关蛋白SCG10的表达并促进损伤周边神经细胞突起生长,改善肌肉抓力。BoNT/A重链有助于脊髓损伤后的再生修复。 展开更多
关键词 肉毒毒素 a型肉毒毒素重链 脊髓损伤 颈上神经节蛋白10 神经突起 神经再生
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A型肉毒杆菌毒素膀胱注射治疗儿童神经源性膀胱逼尿肌过度活动的效果评价 被引量：4
5
作者 刘嘉林 刘颖 +6 位作者 汤梁峰 毕允力 沈剑 王安乐 周燕华 万嫣敏 王翔 《临床小儿外科杂志》 CAS CSCD 2022年第8期752-757,共6页
目的评价经膀胱镜A型肉毒杆菌毒素膀胱注射治疗儿童神经源性膀胱逼尿肌过度活动的临床效果。方法收集2020年4月至2021年6月在复旦大学附属儿科医院行A型肉毒杆菌毒素膀胱注射治疗的神经源性膀胱患儿临床资料,进行自身前后对照分析。患... 目的评价经膀胱镜A型肉毒杆菌毒素膀胱注射治疗儿童神经源性膀胱逼尿肌过度活动的临床效果。方法收集2020年4月至2021年6月在复旦大学附属儿科医院行A型肉毒杆菌毒素膀胱注射治疗的神经源性膀胱患儿临床资料,进行自身前后对照分析。患儿在注射治疗前均已接受清洁间歇导尿、持续性预防性抗生素及抗胆碱药物治疗,但效果不理想。分别比较注射前及注射后1个月、3个月、6个月的清洁间歇导尿最大单次导尿量及发热性尿路感染发生率的变化;比较注射前、注射后3个月充盈期膀胱壁厚度以及膀胱最大灌注量、膀胱安全容量、膀胱顺应性变化;观察注射治疗后并发症情况。结果共11例患儿纳入研究,其中男1例,女10例。注射治疗时年龄(80.36±43.35)个月,体重(21.86±7.47)kg。注射前导尿频率为(5.86±1.60)次/天,单次最大导尿量为(152.73±58.10)mL,发热性尿路感染发生率为100%,膀胱壁厚度为(4.41±1.95)mm,尿动力检查膀胱最大灌注量(158.44±57.26)mL,膀胱安全容量(139.78±66.09)mL,膀胱顺应性(4.37±2.16)mL/cmH 2O。注射后1个月、3个月、6个月的导尿频率分别为(6.18±2.31)次/天(P=0.652)、(5.91±2.38)次/天(P=0.948)、(5.68±1.91)次/天(P=0.736)。注射后1个月、3个月、6个月最大单次导尿量分别增加至(206.82±72.05)mL(P=0.004)、(227.28±94.67)mL(P=0.003)、(185.46±75.38)mL(P=0.024)。发热性尿路感染发生率注射后1个月、3个月均为9%(P<0.001),注射后6个月为27%(P=0.001)。注射后3个月膀胱壁厚度(2.75±0.84)mm,较术前显著改善(P=0.004);尿动力检查膀胱最大灌注量(225.44±94.03)mL(P=0.041)、膀胱安全容量(216.11±106.44)mL(P=0.049)、膀胱顺应性(9.43±5.74)mL/cmH 2O(P=0.023),均较术前明显改善。随访周期内11例均未观察到与注射治疗相关的并发症。结论经膀胱镜A型肉毒杆菌毒素膀胱注射对增加神经源性膀胱患儿膀胱功能性容量、降低膀胱压力、防治尿路感染有一定作用,可为对口服抗胆碱药物不耐受的患儿提供潜在选择。 展开更多
关键词 膀胱 神经原性/药物疗法 膀胱 神经原性/外科学 肉毒杆菌毒素类 a型 治疗结果 儿童基金项目:复旦大学附属儿科医院专病队列项目(2020ZBDL11)神经源性膀胱专病队列
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丙烯酰胺抑制大鼠肌注A型肉毒毒素后的神经芽生
6
作者 蔡华英 胡兴越 蒋红 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期125-130,共6页
目的观察丙烯酰胺是否能抑制肉毒毒素肌注后的神经芽生,以延长其治疗肌肉过强活动疾病的疗效。方法SD大鼠随机分为肉正常对照组、丙烯酰胺组、肉毒毒素组和毒毒素+丙烯酰胺组。每只大鼠右肢腓肠肌分别肌肉注射A型肉毒毒素5U或生理盐水1... 目的观察丙烯酰胺是否能抑制肉毒毒素肌注后的神经芽生,以延长其治疗肌肉过强活动疾病的疗效。方法SD大鼠随机分为肉正常对照组、丙烯酰胺组、肉毒毒素组和毒毒素+丙烯酰胺组。每只大鼠右肢腓肠肌分别肌肉注射A型肉毒毒素5U或生理盐水1次(0.2mL),肌注后d3,6,9,12,15,18及21分别ip3%丙烯酰胺或生理盐水,每次0.1mL。肌肉注射肉毒毒素后1,2,3,4,6,8,10及12周的8个时间点评定大鼠右后肢肌力,观察单纤维肌电图和形态学计数神经纤维。结果肉毒毒素组右后肢肌力下降,单纤维肌电图纤维密度测定和病理形态神经纤维计数结果均显示A型肉毒毒素肌肉注射后神经芽生现象;单纤维肌电图动作电位平均连续差结果提示出现神经肌肉接头传导异常,12周可基本恢复正常。加用丙烯酰胺可延缓芽生高峰的时间和抑制芽生程度,并延缓神经肌肉接头功能的恢复。结论应用丙烯酰胺可抑制A型肉毒毒素局部注射后神经芽生,延迟肌力恢复。 展开更多
关键词 肉毒杆菌毒素 a型 丙烯酰胺 神经芽生 肌电描记术 神经纤维 神经肌肉接头
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A型肉毒素复合低剂量加巴喷丁对切口痛大鼠脊髓背角神经激肽-1受体内化的影响 被引量：1
7
作者 利雪阳 王云 +3 位作者 孙雨晴 马丹旭 吴安石 岳云 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第3期331-335,共5页
目的评价A型肉毒素复合低剂量加巴喷丁对切口痛大鼠行为学及脊髓背角神经激肽-1(neurokinin-1,NK-1)受体内化的影响。方法雄性SD大鼠,体质量280~300 g,6~8周龄。采用数字表法随机分为5组(n=9):对照组(Control组)、切口痛—盐水组(Saline... 目的评价A型肉毒素复合低剂量加巴喷丁对切口痛大鼠行为学及脊髓背角神经激肽-1(neurokinin-1,NK-1)受体内化的影响。方法雄性SD大鼠,体质量280~300 g,6~8周龄。采用数字表法随机分为5组(n=9):对照组(Control组)、切口痛—盐水组(Saline组)、切口痛—加巴喷丁组(GBP组)、切口痛—毒素组(Bo NT/A组)、切口痛—毒素复合加巴喷丁组(G+B组)。Bo NT/A组和G+B组于造模前1 d鞘内注射Bo NT/A 0.5U,GBP组和G+B组于造模前30 min鞘内注射GBP 50 mg。切口痛模型制备后3 h,每组各随机抽取6只进行累计疼痛评分(cumulative pain scores,CPS)和机械缩足阈值(paw withdrawal threshold,PWT)的测量;每组各抽取3只,通过免疫荧光技术测定NK-1受体内化情况。结果与Control组比较,切口后3 h Saline组、GBP组、Bo NT/A组和G+B组右后足CPS升高、PWT降低、脊髓背角NK-1受体内化神经元数目上调(P<0.05);与Saline组比较,Bo NT/A组和G+B组CPS降低、PWT升高、脊髓背角NK-1受体内化神经元数目下调(P<0.05),GBP组差异无统计学意义(P>0.05);与Bo NT/A组比较,G+B组CPS降低、PWT升高、脊髓背角NK-1受体内化神经元数目下调(P<0.05)。结论单独应用低剂量GBP对大鼠切口痛无效,Bo NT/A复合低剂量GBP治疗切口痛大鼠的术后疼痛有明显的协同作用,疗效优于单独应用Bo NT/A,其镇痛机制可能与抑制切口痛大鼠脊髓背角NK-1受体内化有关。 展开更多
关键词 a型肉毒杆菌毒素 加巴喷丁 疼痛 神经激肽1受体 脊髓
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一种检测A型肉毒毒素的高灵敏度酶联免疫吸附法 被引量：3
8
作者 刘志佳 李永明 +6 位作者 宋朝君 李娜 卢卫嘉 孙元杰 毛晓燕 杨琨 金伯泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期546-548,共3页
目的:建立检测A型肉毒毒素的酶联免疫吸附法。方法:利用重组A型肉毒毒素重链羧基端片段作为免疫原和B淋巴细胞杂交瘤技术,获得了56株高亲和力的抗A型肉毒毒素单克隆抗体(mAb),建立了检测A型肉毒毒素的双mAb夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。... 目的:建立检测A型肉毒毒素的酶联免疫吸附法。方法:利用重组A型肉毒毒素重链羧基端片段作为免疫原和B淋巴细胞杂交瘤技术,获得了56株高亲和力的抗A型肉毒毒素单克隆抗体(mAb),建立了检测A型肉毒毒素的双mAb夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。结果:该方法理论检测下限达到了8.34 pg/mL,检测天然A型肉毒毒素制剂时其实际检测下限可达0.78 LD50/mL,与其他型别的肉毒毒素均未见交叉反应。通过测定基质中的回收率,发现基质中的相关的蛋白对检测具有较大的影响。结论:该方法具有灵敏度高,特异性好,使用方便等优点,具有较高的的实用价值。 展开更多
关键词 a型肉毒毒素 酶联免疫吸附法 重组a型肉毒毒素重链羧基端片段 单克隆抗体
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