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pEGFP-hTERT载体的构建及其在牛A型精原细胞中的表达
被引量：
1
1
作者
毕聪明
张仕强
+2 位作者
彭树英
吕宁
张涌
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2007年第8期6-10,共5页
为了构建端粒酶逆转录酶表达载体,用带有绿色荧光蛋白报告基因的载体pEGFP-C1和带有hTERT cDNA的载体pCL-Neo-hTERT,通过基因重组构建新的载体pEGFP-hTERT,转化后筛选阳性克隆进行酶切鉴定;pEGFP-hTERT载体通过脂质体介导法转染纯化后的...
为了构建端粒酶逆转录酶表达载体,用带有绿色荧光蛋白报告基因的载体pEGFP-C1和带有hTERT cDNA的载体pCL-Neo-hTERT,通过基因重组构建新的载体pEGFP-hTERT,转化后筛选阳性克隆进行酶切鉴定;pEGFP-hTERT载体通过脂质体介导法转染纯化后的牛A型精原细胞,观察绿色荧光表达,G418筛选阳性克隆。结果表明,pEGFP-hTERT载体与预设计的一致;pEGFP-hTERT载体转染牛A型精原细胞后,经筛选获得了1个表达绿色荧光蛋白的阳性细胞克隆。由此可见,hTERT表达载体得到了成功构建,并在牛A型精原细胞中实现了表达。
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关键词
a型精原细胞
基因重组
HTERT
牛
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职称材料
EGFR和Ca^(2+)在外源性EGF刺激大鼠A型精原细胞增殖中的作用
被引量：
1
2
作者
余荣娇
张凯
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2013年第6期601-603,共3页
目的探究表皮生长因子受体(EGFR)和Ca2+在表皮生长因子(EGF)引起的大鼠A型精原细胞增殖中的作用。方法选用9 d龄的SD大鼠,使用Percoll不连续密度梯度分离纯化精原干细胞;实验一:将细胞分为对照组、AG1478组、EGF组和EGF+AG1478组,观察E...
目的探究表皮生长因子受体(EGFR)和Ca2+在表皮生长因子(EGF)引起的大鼠A型精原细胞增殖中的作用。方法选用9 d龄的SD大鼠,使用Percoll不连续密度梯度分离纯化精原干细胞;实验一:将细胞分为对照组、AG1478组、EGF组和EGF+AG1478组,观察EGFR在EGF促A型精原细胞增殖中的作用;实验二:将细胞分为对照组、Ca2+鳌合剂(BAPTA)组、EGF组、EGF+BAPTA组,观察细胞内游离Ca2+在EGF促A型精原细胞增殖中的作用;实验三:将细胞分为对照组、EGF组和EGF+AG1478组,采用Fura-2/AM负载法检测细胞内游离的Ca2+浓度。结果外源性的EGF明显促进了A型精原细胞的增殖;AG1478和BAPTA明显减弱了EGF对细胞的促增殖作用。结论 EGF通过与EGFR特异性结合提高胞内Ca2+浓度对A型精原细胞增殖起促进作用。
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关键词
表皮生长因子受体
CA2+
a型精原细胞
表皮生长因子
大鼠
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职称材料
体内A型精原细胞介导转MxA基因小鼠的制备
3
作者
鞠辉明
白立景
+5 位作者
王怡
彭大新
张伟
胡艳欣
刘宗平
李奎
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第9期1102-1108,共7页
本研究旨在探讨内源性A型精原干细胞介导法制备转抗黏液病毒基因A(Myxovirus resistance gene,MxA)基因小鼠的可行性。将pcDNA-MxA质粒和新型转染试剂ExGen500混悬后分5点注射至7日龄的ICR公鼠两侧睾丸组织内,睾丸内基因注射(testis gen...
本研究旨在探讨内源性A型精原干细胞介导法制备转抗黏液病毒基因A(Myxovirus resistance gene,MxA)基因小鼠的可行性。将pcDNA-MxA质粒和新型转染试剂ExGen500混悬后分5点注射至7日龄的ICR公鼠两侧睾丸组织内,睾丸内基因注射(testis gene transfer,TGT)鼠在性成熟后的不同阶段(6、12及24周龄)与正常母鼠交配,检测后代外源基因整合及表达情况,选取表达MxA基因的小鼠进行H5N1亚型禽流感病毒攻毒试验,观察小鼠的健康状况并观察肺及气管的组织病变情况。结果表明,TGT鼠和正常母鼠交配后能稳定产生转基因后代小鼠,2只TGT鼠在6、12及24周龄交配后代整合率分别为11.11%(2/18)、11.76%(2/17)、11.54%(3/26)及13.64%(3/22)、13.33%(2/15)、11.76%(2/17)。2只TGT鼠后代外源基因平均整合率分别为11.47%及12.91%,之间差异不显著(P>0.05)。RT-PCR检测表明,MxA基因整合小鼠中有21.43%(3/22)测到MxA的表达;所制备的MxA表达鼠H5N1亚型禽流感病毒攻毒后全身症状、肺及气管病变程度明显比正常鼠轻。试验结果表明体内精原干细胞介导的转基因方法是一种可行的、具有很大应用前景的转基因方法,制备的转MxA基因小鼠对H5N1亚型禽流感病毒具有一定的抵抗力。
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关键词
a型精
原
干
细胞
转基因
MXA
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职称材料
题名
pEGFP-hTERT载体的构建及其在牛A型精原细胞中的表达
被引量：
1
1
作者
毕聪明
张仕强
彭树英
吕宁
张涌
机构
西北农林科技大学生物工程研究所
出处
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2007年第8期6-10,共5页
基金
国家"863"计划项目(2004AA213072)
文摘
为了构建端粒酶逆转录酶表达载体,用带有绿色荧光蛋白报告基因的载体pEGFP-C1和带有hTERT cDNA的载体pCL-Neo-hTERT,通过基因重组构建新的载体pEGFP-hTERT,转化后筛选阳性克隆进行酶切鉴定;pEGFP-hTERT载体通过脂质体介导法转染纯化后的牛A型精原细胞,观察绿色荧光表达,G418筛选阳性克隆。结果表明,pEGFP-hTERT载体与预设计的一致;pEGFP-hTERT载体转染牛A型精原细胞后,经筛选获得了1个表达绿色荧光蛋白的阳性细胞克隆。由此可见,hTERT表达载体得到了成功构建,并在牛A型精原细胞中实现了表达。
关键词
a型精原细胞
基因重组
HTERT
牛
Keywords
type A spermatogonia
gene recombination
hTERT
bovine
分类号
Q813.11 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
EGFR和Ca^(2+)在外源性EGF刺激大鼠A型精原细胞增殖中的作用
被引量：
1
2
作者
余荣娇
张凯
机构
安徽中医学院组胚生物学教研室
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2013年第6期601-603,共3页
基金
安徽省自然科学基金(编号:10040606Q37)
文摘
目的探究表皮生长因子受体(EGFR)和Ca2+在表皮生长因子(EGF)引起的大鼠A型精原细胞增殖中的作用。方法选用9 d龄的SD大鼠,使用Percoll不连续密度梯度分离纯化精原干细胞;实验一:将细胞分为对照组、AG1478组、EGF组和EGF+AG1478组,观察EGFR在EGF促A型精原细胞增殖中的作用;实验二:将细胞分为对照组、Ca2+鳌合剂(BAPTA)组、EGF组、EGF+BAPTA组,观察细胞内游离Ca2+在EGF促A型精原细胞增殖中的作用;实验三:将细胞分为对照组、EGF组和EGF+AG1478组,采用Fura-2/AM负载法检测细胞内游离的Ca2+浓度。结果外源性的EGF明显促进了A型精原细胞的增殖;AG1478和BAPTA明显减弱了EGF对细胞的促增殖作用。结论 EGF通过与EGFR特异性结合提高胞内Ca2+浓度对A型精原细胞增殖起促进作用。
关键词
表皮生长因子受体
CA2+
a型精原细胞
表皮生长因子
大鼠
Keywords
EGFR
Ca^2＋
type A spematogonial cell
EGF
rat
分类号
R321.1 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
在线阅读
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职称材料
题名
体内A型精原细胞介导转MxA基因小鼠的制备
3
作者
鞠辉明
白立景
王怡
彭大新
张伟
胡艳欣
刘宗平
李奎
机构
扬州大学兽医学院
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室
中国农业大学动物医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第9期1102-1108,共7页
基金
国家转基因新品种培育重大专项(2008ZX08010-004-06)
国家863计划(2008AA10Z143)
+1 种基金
国家自然科学基金资助项目(30830080
30500359)
文摘
本研究旨在探讨内源性A型精原干细胞介导法制备转抗黏液病毒基因A(Myxovirus resistance gene,MxA)基因小鼠的可行性。将pcDNA-MxA质粒和新型转染试剂ExGen500混悬后分5点注射至7日龄的ICR公鼠两侧睾丸组织内,睾丸内基因注射(testis gene transfer,TGT)鼠在性成熟后的不同阶段(6、12及24周龄)与正常母鼠交配,检测后代外源基因整合及表达情况,选取表达MxA基因的小鼠进行H5N1亚型禽流感病毒攻毒试验,观察小鼠的健康状况并观察肺及气管的组织病变情况。结果表明,TGT鼠和正常母鼠交配后能稳定产生转基因后代小鼠,2只TGT鼠在6、12及24周龄交配后代整合率分别为11.11%(2/18)、11.76%(2/17)、11.54%(3/26)及13.64%(3/22)、13.33%(2/15)、11.76%(2/17)。2只TGT鼠后代外源基因平均整合率分别为11.47%及12.91%,之间差异不显著(P>0.05)。RT-PCR检测表明,MxA基因整合小鼠中有21.43%(3/22)测到MxA的表达;所制备的MxA表达鼠H5N1亚型禽流感病毒攻毒后全身症状、肺及气管病变程度明显比正常鼠轻。试验结果表明体内精原干细胞介导的转基因方法是一种可行的、具有很大应用前景的转基因方法,制备的转MxA基因小鼠对H5N1亚型禽流感病毒具有一定的抵抗力。
关键词
a型精
原
干
细胞
转基因
MXA
Keywords
Type-A spermatogonia
transgene
MxA
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q953.5 [生物学—动物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
pEGFP-hTERT载体的构建及其在牛A型精原细胞中的表达
毕聪明
张仕强
彭树英
吕宁
张涌
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2007
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
EGFR和Ca^(2+)在外源性EGF刺激大鼠A型精原细胞增殖中的作用
余荣娇
张凯
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2013
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
体内A型精原细胞介导转MxA基因小鼠的制备
鞠辉明
白立景
王怡
彭大新
张伟
胡艳欣
刘宗平
李奎
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
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