一株塞内卡病毒A型的分离鉴定及演化分析

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作者 王淑娟 王东方 +6 位作者 马震原 赵雪丽 刘影 杨海波 柴茂 王翠 闫若潜 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期3041-3046,共6页

河南某免疫过口蹄疫疫苗的猪场出现水泡样疫病,疑似感染A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)。本研究旨在分离鉴定该病毒,并进行遗传演化分析。将RT-PCR和FQ-PCR检测为核酸阳性的样品接种BHK-21细胞,并进行传代培养。通过间接免疫荧光试... 河南某免疫过口蹄疫疫苗的猪场出现水泡样疫病,疑似感染A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)。本研究旨在分离鉴定该病毒,并进行遗传演化分析。将RT-PCR和FQ-PCR检测为核酸阳性的样品接种BHK-21细胞,并进行传代培养。通过间接免疫荧光试验、电镜观察、病毒全基因组序列测定等对该毒株进行鉴定,并进行演化分析。结果表明,该毒株为SVA,将其命名为HeNXX/swine/2017;电镜观察发现该病毒粒子呈典型的二十面体,直径30 nm左右;该毒株可在BHK-21细胞上高效增殖,病毒滴度最高为10^(9.5) TCID_(50)·mL^(-1);基因组全长7288 bp(不含PolyA),与美国毒株同源性最高。本研究成功分离到一株SVA,为相关疾病的进一步研究提供基础。 展开更多

关键词 a型塞内卡病毒 分离 鉴定 演化分析

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A型塞内卡病毒蛋白功能和抗宿主先天免疫的研究进展

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作者 石蒙蒙 张英硕 +4 位作者 杨寒 孙亚威 陈陆 李永涛 于林洋 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第5期79-88,共10页

A型塞内卡病毒(SVA)能够感染不同年龄段的猪,表现为典型的水疱性疾病,尤其在新生仔猪中引起高死亡率。SVA蛋白通过与宿主蛋白相互作用,不仅能够促进病毒的免疫逃逸,还能操控细胞程序性死亡,从而在病毒复制过程中发挥重要作用。SVA蛋白... A型塞内卡病毒(SVA)能够感染不同年龄段的猪,表现为典型的水疱性疾病,尤其在新生仔猪中引起高死亡率。SVA蛋白通过与宿主蛋白相互作用,不仅能够促进病毒的免疫逃逸,还能操控细胞程序性死亡,从而在病毒复制过程中发挥重要作用。SVA蛋白实现免疫逃逸的主要途径包括:(1)利用含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)途径降解干扰素产生途径的关键受体和接头蛋白,拮抗干扰素产生;(2)直接靶向切割干扰素上下游信号通路和核因子κB(NF-κB)信号通路的相关蛋白,抑制干扰素刺激基因(ISGs)和炎症因子的转录表达,拮抗宿主的抗病毒免疫;(3)通过阻断应激颗粒(SG)产生,利用宿主的转录翻译机制,促进自身复制。已有多项研究证实,SVA的多个蛋白可以调节宿主细胞程序性死亡过程,并且通过自噬途径降解宿主抗病毒因子,进而促进自身复制。本文系统综述了SVA的基因组结构、蛋白功能、逃逸宿主先天免疫的多种途径和诱导细胞程序性死亡的多种机制,为进一步探究SVA的感染机制和宿主的抗病毒免疫途径提供理论支撑。 展开更多

关键词 a型塞内卡病毒 先天免疫 细胞程序性死亡 免疫逃逸

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A型塞内卡病毒SVA/CH-GX01-2020株全基因组特征分析

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作者 王睿敏 施开创 +4 位作者 冯淑萍 尹彦文 龙凤 陆文俊 屈素洁 《南方农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第11期3453-3462,共10页

【目的】通过对A型塞内卡病毒(SVA)广西分离株全基因组特征进行深入分析,了解其病原特征和分子流行病学特点,为有效防止疫情暴发和流行提供理论依据。【方法】对2020年采集自广西的病料进行病毒分离,通过RTPCR检测和间接免疫荧光试验(I... 【目的】通过对A型塞内卡病毒(SVA)广西分离株全基因组特征进行深入分析,了解其病原特征和分子流行病学特点,为有效防止疫情暴发和流行提供理论依据。【方法】对2020年采集自广西的病料进行病毒分离,通过RTPCR检测和间接免疫荧光试验(IFA)进行鉴定。对SVA分离株全基因组进行分段扩增和测序后,采用Lasergene 7.1拼接序列,使用MegAlign将SVA分离株全基因组序列与国内外不同年份的55株SVA代表毒株进行比对,利用MEGA11.0构建系统发育进化树。【结果】经鉴定分离到1株SVA,命名为SVA/CH-GX01-2020株。SVA/CH-GX01-2020株基因组全长为7250 bp,开放阅读框(ORF)编码2181个氨基酸残基。与国内外不同年份的55株SVA代表毒株进行比对,结果显示,SVA/CH-GX01-2020株与国内外SVA分离株全基因组的核苷酸序列及其推导氨基酸序列的相似性分别为93.3%~98.7%和97.3%~99.6%,其中,与美国经典毒株SVV-001和ATCC PTA-5343全基因组相似性较低。遗传进化分析发现,SVA/CH-GX01-2020株与美国经典毒株SVV-001和ATCC PTA-5343亲缘关系较远,与大多数中国分离株聚在同一分支,亲缘关系较近,与广西分离株SVA/GX/CH/2018亲缘关系非常近。进行氨基酸序列比对分析发现,与美国经典毒株SVV-001、中国首株分离株CH-01-2015、广西分离株SVA/GX/CH/2018相比,SVA/CH-GX01-2020株氨基酸突变位点主要集中在非结构蛋白3D区域,在结构蛋白VP4和非结构蛋白2A区域相对保守。【结论】SVA/CH-GX01-2020株具有其独特的遗传变异特点,不同地域的SVA毒株亲缘关系远近程度不同,临床流行毒株具有遗传多样性,应加强疫情监测和流行病学调查。 展开更多

关键词 a型塞内卡病毒 病毒分离 系统发育进化树 基因组特征 遗传变异

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猪塞内卡病毒(SVA)和O型口蹄疫病毒双重荧光RT-PCR检测方法中阳性参考品的制备

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作者 陈信全 张展 +2 位作者 周伟光 张峥嵘 黄慧贤 《广东畜牧兽医科技》 2024年第5期56-60,69,共6页

为制备猪塞内卡病毒(SVA)和O型口蹄疫病毒(FMDV-O)阳性质控品,根据选择的目的基因片段,设计阳性参考品序列,通过基因拼接技术和装甲RNA技术,制备含有口蹄疫O型病毒和塞内卡病毒目的基因的装甲RNA病毒样颗粒,用来作为塞内卡病毒(SVA)和O... 为制备猪塞内卡病毒(SVA)和O型口蹄疫病毒(FMDV-O)阳性质控品,根据选择的目的基因片段,设计阳性参考品序列,通过基因拼接技术和装甲RNA技术,制备含有口蹄疫O型病毒和塞内卡病毒目的基因的装甲RNA病毒样颗粒,用来作为塞内卡病毒(SVA)和O型口蹄疫病毒(FMDV-O)的阳性参考品。结果表明,该阳性质控品无生物传染性,可以真实模拟病毒粒子结构,耐受DNaseI及RNaseA,稳定性高,在-70℃保存18个月,荧光RT-PCR检测结果均无显著差异。本试验制备的含有猪O型口蹄疫病毒和塞内卡病毒目的基因的装甲RNA病毒样颗粒,可以作为SVA和FMDV-O双重荧光RT-PCR检测方法中进行质量控制的阳性参考品。 展开更多

关键词 猪塞内卡病毒 O型口蹄疫病毒 MS2噬菌体 装甲RNA技术 阳性参考品

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猪塞内卡病毒荧光素酶免疫吸附试验方法的建立

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作者 王宇欣 王永富 +3 位作者 青易 王宗洪 漆启文 朱玲 《西南农业学报》 北大核心 2025年第8期1749-1756,共8页

【目的】为提升猪塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)抗体检测效率,满足规模化养殖场血清学监测需求,建立一种灵敏、快速、特异且适于大规模应用的荧光素酶免疫吸附试验(LISA)方法。【方法】基于哺乳动物表达系统,构建并表达SVA VP1与海肾... 【目的】为提升猪塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)抗体检测效率,满足规模化养殖场血清学监测需求,建立一种灵敏、快速、特异且适于大规模应用的荧光素酶免疫吸附试验(LISA)方法。【方法】基于哺乳动物表达系统,构建并表达SVA VP1与海肾荧光素酶(Rluc)融合蛋白VP1-Rluc,获得可溶性抗原。以该融合蛋白为核心抗原,建立LISA检测体系,并系统优化包被浓度、血清稀释度、封闭条件及孵育时间等参数。进一步评估其特异性、灵敏度、重复性及与商品化ELISA方法的一致性。【结果】Western blot和IFA结果证实VP1-Rluc蛋白成功表达,具有良好抗原性。建立的LISA方法检测限达1∶6400,变异系数均小于10%,无交叉反应。ROC曲线分析确定阳性判定临界值为P/N=1.908,相对特异性和灵敏度分别为96.2%和95.7%。在554份临床样本检测中,与商品化ELISA一致性良好(Kappa=0.958)。该方法操作简便、成本低,且在早期感染样本中亦显示出良好性能。【结论】本研究建立的基于VP1-Rluc融合蛋白的LISA方法具有灵敏、特异、稳定及经济等优势,适用于SVA大规模血清监测,具备良好的推广应用前景。 展开更多

关键词 a型塞内卡病毒 VP1蛋白 原核表达 LISA

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天然产物库中体外颉颃A型塞内卡病毒化合物的筛选及作用途径研究 被引量：3

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作者 王西彤 沙洲 +9 位作者 迟田英 崔进 郑辉 陈峰 曹振山 张慧 戈胜强 魏荣 尼博 黄保续 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3155-3165,共11页

【目的】寻找对A型塞内卡病毒(SVA)具有抑制活性的天然产物,并深入研究其颉颃途径。【方法】将天然产物浓度统一稀释至10μmol/L,与荧光素酶重组塞内卡病毒(rSVA-NLuc)相结合,在天然产物小分子库中筛选出具有荧光素酶抑制活性的化合物,... 【目的】寻找对A型塞内卡病毒(SVA)具有抑制活性的天然产物,并深入研究其颉颃途径。【方法】将天然产物浓度统一稀释至10μmol/L,与荧光素酶重组塞内卡病毒(rSVA-NLuc)相结合,在天然产物小分子库中筛选出具有荧光素酶抑制活性的化合物,采用实时荧光定量RT-PCR方法验证其活性,通过乳酸脱氢酶(LDH)法进行细胞毒性试验确定最大无毒浓度,结合病毒滴度测定、实时荧光定量RT-PCR、Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)等技术,在病毒感染周期的不同阶段,对其颉颃SVA的效果及途径进行研究。【结果】通过初筛,从136种天然产物中筛选出莫能霉素钠盐、孕酮、叶下珠次素、4-羟基德里辛和2-甲基雌酮5种能体外颉颃SVA的化合物。进一步通过实时荧光定量RT-PCR复核验证和细胞毒性检测,筛选出一种能体外颉颃SVA的天然产物——孕酮。与空白对照组相比,其在体外可导致SVA mRNA表达水平极显著下降(P<0.01),最大无毒浓度达50μmol/L。进一步研究表明,孕酮能在感染后8、12、24、36 h持续抑制SVA增殖,与对照组相比,在感染后24和36 h病毒滴度显著下降(P<0.05)。与对照组相比,不同浓度(10、20和50μmol/L)孕酮在吸附阶段导致SVA吸附水平极显著下降(P<0.01);在复制阶段使SVA VP3水平显著下降且使病毒滴度极显著下降(P<0.01);在释放阶段使释放胞外的病毒比例极显著下降(P<0.01);但对其他途径无显著影响。说明孕酮能在体外抑制SVA吸附、复制和释放,但对其入胞、组装途径无明显作用。【结论】本研究从天然产物小分子库中筛选出一种具有低细胞毒性且对SVA具有较强颉颃作用的天然产物——孕酮。该产物对SVA吸附、复制和释放阶段具有抑制作用,从而颉颃SVA的感染。本研究为促进抗SVA药物的开发和研究SVA的感染偏好性提供了科学参考。 展开更多

关键词 孕酮 a型塞内卡病毒(sva) 天然产物 颉颃途径

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A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体的制备及间接ELISA检测方法的建立 被引量：3

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作者 任建乐 林铱婷 +9 位作者 姬康 谭姗姗 陈新新 晋怡 王颖 牛胜 梁立滨 李俊平 赵宇军 田文霞 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期678-688,共11页

[目的]制备A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)VP2蛋白多克隆抗体,建立检测SVA抗体的间接ELISA方法,以期为SVA致病机制及诊断提供研究基础。[方法]利用同源重组技术将VP2基因克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-VP2,... [目的]制备A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)VP2蛋白多克隆抗体,建立检测SVA抗体的间接ELISA方法,以期为SVA致病机制及诊断提供研究基础。[方法]利用同源重组技术将VP2基因克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-VP2,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达,表达产物经纯化后皮下多点注射新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting和中和试验鉴定多克隆抗体的特异性、反应性和中和活性。以VP2为抗原包被酶标板,通过矩阵优化、临界值确定、特异性鉴定及敏感性和重复性分析建立检测SVA抗体的间接ELISA方法。采集50份临床血清样品,分别用间接ELISA与IFA方法进行检测,分析间接ELISA方法的符合率。[结果]重组VP2蛋白以包涵体形式表达,大小为40 ku。制备的多克隆抗体能与重组VP2蛋白和SVA特异性结合,与其他病毒无交叉反应,且具有较高的中和活性。经对间接ELISA条件的优化,确定VP2包被浓度为4μg/mL,阳性血清稀释浓度为1∶250,封闭液为5%脱脂乳+5%BSA,血清样品和二抗孵育时间均为90 min, TMB底物反应时间为10 min,临界值为0.182。建立的间接ELISA方法与常见的猪病毒阳性血清不反应,与IFA符合率达94.0%。[结论]原核表达系统表达的VP2蛋白具有良好的免疫原性,制备的多克隆抗体能与SVA和VP2发生特异性反应。建立的间接ELISA方法特异性高,与IFA符合率高,适用于临床SVA抗体检测和疫苗效力评价。 展开更多

关键词 a型塞内卡病毒(sva) VP2蛋白 原核表达 多克隆抗体 间接ELISA

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羊栖菜多糖抗A型塞内卡病毒感染PK-15细胞活性和机制探究 被引量：2

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作者 张诗悦 张亮 +6 位作者 张伟 陈九 杨少华 高星熠 闫滨 李宝国 杨宏军 《山东农业科学》 北大核心 2024年第4期151-158,共8页

研究羊栖菜多糖抗A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)感染PK-15细胞的活性及机制。首先采用水提法提取羊栖菜粗多糖,然后用不同孔径超滤膜将粗多糖分为不同分子量段;通过荧光定量PCR测定不同分子量粗多糖抗SVA活性,采用水提醇沉法将抗SV... 研究羊栖菜多糖抗A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)感染PK-15细胞的活性及机制。首先采用水提法提取羊栖菜粗多糖,然后用不同孔径超滤膜将粗多糖分为不同分子量段;通过荧光定量PCR测定不同分子量粗多糖抗SVA活性,采用水提醇沉法将抗SVA活性最高分子量段的粗多糖进行纯化并测定其细胞毒性及抗SVA活性;通过在SVA感染周期不同阶段给药研究纯化多糖的抗SVA机制。结果表明,分子量越大的粗多糖抗SVA活性越强;多糖浓度和SVA浓度均与抗SVA活性呈现量效关系,纯化后的多糖对SVA(MOI=0.1)感染PK-15细胞的治疗指数为412,1 mg/mL的多糖对SVA(MOI=10-1~104)感染PK-15细胞病毒载量的抑制率在90%~99.999%之间;不同给药时间试验结果表明,多糖能在SVA吸附或穿入细胞以及病毒复制过程发挥抗病毒作用,其中抑制SVA吸附或穿入的活性最强。本研究分离纯化得到的羊栖菜多糖有很强的抗SVA活性,可为后续抗SVA药物的研发提供参考。 展开更多

关键词 羊栖菜多糖 a型塞内卡病毒 提取 纯化 抗病毒

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A型塞内卡病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：2

9

作者 周函蓉 苏世博 +8 位作者 孙明霞 蒙靓 杨巍 史鑫琪 李鑫 安同庆 蔡雪辉 王海伟 孟凡丹 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1034-1042,共9页

为建立一种快速检测A型塞内卡病毒(SVA)的方法,本研究利用氯化铯密度梯度离心法纯化的SVA粒子免疫BALB/c小鼠3次,采用杂交瘤技术制备SVA单克隆抗体(MAb)。结果显示,共获得7株能够稳定分泌SVA MAb的杂交瘤细胞株。采用过碘酸钠法将其中5... 为建立一种快速检测A型塞内卡病毒(SVA)的方法,本研究利用氯化铯密度梯度离心法纯化的SVA粒子免疫BALB/c小鼠3次,采用杂交瘤技术制备SVA单克隆抗体(MAb)。结果显示,共获得7株能够稳定分泌SVA MAb的杂交瘤细胞株。采用过碘酸钠法将其中5株MAb标记HRP(MAb-HRP),并采用ELISA法检测标记效果。将7株MAb与5株MAb-HRP两两组合进行抗体配对试验。结果显示,5株MAb均标记上HRP,且其中各稀释度标记的MAb 2C8-HRP的反应性均最强;当MAb 2G7作为捕获抗体,MAb 2C8-HRP作为检测抗体时,P/N值最大,表明这两种MAb的配对效果最好。在此基础上,通过优化各反应条件初步建立检测SVA的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。利用建立的DAS-ELISA方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、O型和A型口蹄疫病毒和SVA,结果显示,该方法仅能检测SVA,其他常见的猪源病毒均为阴性结果,表明该方法特异性强。利用本研究建立的DAS-ELISA方法分别检测系列稀释的SVA上清液(1~1:80000,对应的病毒滴度分别为107.5TCID50/mL~1.25×10^(2.5)TCID_(50)/mL)和2倍倍比稀释的SVA猪阳性猪血清(1:2~1:256),同时采用猪塞内卡病毒抗原(SVA-Ag)ELISA试剂盒分别检测上述SVA上清液和SVA猪阳性血清,评估本研究建立DAS-ELISA方法的敏感性。结果显示SVA稀释40000倍后,其OD450nm值仍大于临界值0.115,即该方法对SVA上清液的检测限为2.5×10^(2.5)TCID_(50)/mL,且1:64倍稀释的SVA猪阳性血清样品仍为阳性;(SVA-Ag)ELISA结果显示,该方法检测的SVA最大稀释度为1:20000,即对SVA上清液的检测限为5×10^(2.5)TCID_(50)/mL,且仅能检测到稀释至32倍的SVA猪阳性血清,均低于本实验建立的DAS-ELISA方法,表明该方法敏感性高。对4份SVA猪阳性血清和1份SVA猪阴性血清采用DAS-ELISA方法进行批内和批间重复性试验,结果显示批间和批内重复性试验的变异系数均在10%以下,重复性较好。对采集的205份疑似SVA感染的猪扁桃体组织、鼻咽拭子及血清样品分别采用DAS-ELISA及RT-PCR方法检测。DAS-ELISA的检测结果显示,36份样品为阳性,169份样品为阴性;RT-PCR检测结果显示,50份样品为阳性,155份样品为阴性。经计算两种方法的阳性符合率为72%(36/50),总符合率为93%(191/205)。以上结果表明,本研究建立的DAS-ELISA适用于大规模多种临床样品的检测,为SVA的检测及流行病学调查提供技术支撑。 展开更多

关键词 a型塞内卡病毒 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA方法

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A型塞内卡病毒序列元件与蛋白功能研究进展 被引量：4

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作者 南福龙 孟海蓝 +3 位作者 李紫薇 沙洲 尼博 刘拂晓 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第2期89-95,共7页

A型塞内卡病毒(SVA)是一种引起猪水疱性疾病的新发病毒。该病毒是小RNA病毒科、塞内卡病毒属的唯一成员。SVA基因组为单股、正链、不分节段的线性RNA,其中间为较长的编码区,共编码4种结构蛋白和8种非结构蛋白;两端分别为5′和3′非编码... A型塞内卡病毒(SVA)是一种引起猪水疱性疾病的新发病毒。该病毒是小RNA病毒科、塞内卡病毒属的唯一成员。SVA基因组为单股、正链、不分节段的线性RNA,其中间为较长的编码区,共编码4种结构蛋白和8种非结构蛋白;两端分别为5′和3′非编码区,在病毒复制、启动蛋白表达以及影响病毒毒力等过程中起到了重要的作用。SVA的结构蛋白为VP1、VP2、VP3和VP4,主要参与病毒衣壳的形成;非结构蛋白则与病毒复制和免疫逃逸密切相关。作为一种新发病原体,关于SVA分子机制的研究尚未深入。本文系统地总结了SVA基因组结构和功能的研究进展,为SVA的深入研究,尤其是抗病毒制剂的研制提供参考依据。 展开更多

关键词 a型塞内卡病毒 基因 蛋白 结构 功能

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A型塞内卡病毒VP1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：1

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作者 秦文珍 李挺 +11 位作者 赵欣 董苏洁 翟焕杰 叶晨倩 叶曼青 童武 郑浩 于海 单同领 童光志 兰道亮 孔宁 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期195-200,共6页

A型塞内卡病毒(SVA)是一种新兴的猪病原体,可引起母猪水泡样病变和仔猪急性死亡。本研究将SVA的VP1基因分别克隆到原核表达载体pCold-I和pCold-TF,并将测序正确的重组质粒VP1-pCold-I、VP1-pCold-TF转化BL21(DE3)大肠杆菌中,诱导表达重... A型塞内卡病毒(SVA)是一种新兴的猪病原体,可引起母猪水泡样病变和仔猪急性死亡。本研究将SVA的VP1基因分别克隆到原核表达载体pCold-I和pCold-TF,并将测序正确的重组质粒VP1-pCold-I、VP1-pCold-TF转化BL21(DE3)大肠杆菌中,诱导表达重组蛋白。结果显示:VP1-pCold-I表达的目的蛋白在沉淀(包涵体)中,VP1-pCold-TF表达的蛋白为可溶性蛋白。分别纯化上述表达的蛋白,并免疫BALB/c小鼠,经四次免疫后得到多克隆抗体。经Western blot和间接免疫荧光(IFA)鉴定,制备的多克隆抗体具有良好的Western blot效价和IFA效价,为相关基础研究和应用研究提供了工具。 展开更多

关键词 a型塞内卡病毒 VP1 原核表达 多克隆抗体

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A型塞内卡病毒VP3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：1

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作者 林铱婷 姬康 +8 位作者 谭姗姗 晋怡 宋若琪 马瑞一 王颖 牛胜 赵宇军 田文霞 任建乐 《中国动物检疫》 CAS 2024年第4期96-102,共7页

为制备A型塞内卡病毒(SVA)VP3蛋白多克隆抗体,采用同源重组技术将SVA VP3基因连接至原核表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒pET-SVA-VP3。将重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),以1 mmol/L的IPTG进行诱导表达并纯化表达产物... 为制备A型塞内卡病毒(SVA)VP3蛋白多克隆抗体,采用同源重组技术将SVA VP3基因连接至原核表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒pET-SVA-VP3。将重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),以1 mmol/L的IPTG进行诱导表达并纯化表达产物,随后将纯化的VP3重组蛋白皮下多点注射新西兰白兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA、间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot分别对抗体效价、反应性和特异性进行鉴定。结果显示:重组VP3蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约36 kDa;制备的VP3蛋白多克隆抗体能与VP3重组蛋白和SVA发生特异性反应,其ELISA效价达1:10000以上,Western blot和IFA效价达1:5000。综上,本研究成功制备了SVA VP3多克隆抗体,其具有较高的效价和特异性,可为后续SVA致病机制及检测方法等研究奠定基础。 展开更多

关键词 a型塞内卡病毒 VP3蛋白 原核表达 多克隆抗体 效价 特异性

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A型塞内卡病毒3D蛋白原核表达及多克隆抗体制备 被引量：1

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作者 程群 孙大格 +5 位作者 翟雪滢 杨心雨 叶晨倩 叶曼青 孔宁 单同领 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期191-195,共5页

A型塞内卡病毒(SVA)是一种无囊膜的单股正链小RNA病毒,是塞内卡病毒属的唯一成员,其感染后可引起仔猪的急性死亡和母猪水泡样病变。SVA编码的非结构蛋白3D在病毒增殖及拮抗宿主天然免疫反应中发挥着重要的作用。本研究旨在原核表达SVA 3... A型塞内卡病毒(SVA)是一种无囊膜的单股正链小RNA病毒,是塞内卡病毒属的唯一成员,其感染后可引起仔猪的急性死亡和母猪水泡样病变。SVA编码的非结构蛋白3D在病毒增殖及拮抗宿主天然免疫反应中发挥着重要的作用。本研究旨在原核表达SVA 3D蛋白,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。以SVA RNA为模板,通过RT-PCR试验扩增3D基因,并将3D基因克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ中,构建重组质粒3D-pCold-Ⅰ。将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达3D蛋白,纯化该重组蛋白后免疫BALB/c小鼠制备SVA 3D蛋白的多克隆抗体。结果显示,原核表达的SVA 3D蛋白是一种可溶性蛋白,其分子质量约为55 kDa。经Western blot和IFA试验鉴定,制备的SVA 3D多克隆抗体具有良好的反应性,本研究为SVA的基础研究和应用研究提供了工具。 展开更多

关键词 a型塞内卡病毒 3D蛋白 原核表达 多克隆抗体

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A型塞内卡病毒进化机制及其对疫苗与抗病毒药物研发的影响

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作者 李倩 刘枢清 +1 位作者 朱丽杰 王迁迁 《中国动物检疫》 CAS 2024年第12期68-74,共7页

塞内卡病毒病是由A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)引起的一种主要感染猪的病毒性传染病。SVA作为一种跨境传播的动物疫病病毒,自首次发现以来已对全球范围内多个国家的养猪业造成了显著影响。SVA在猪群中的广泛流行及其独特的复制机... 塞内卡病毒病是由A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)引起的一种主要感染猪的病毒性传染病。SVA作为一种跨境传播的动物疫病病毒,自首次发现以来已对全球范围内多个国家的养猪业造成了显著影响。SVA在猪群中的广泛流行及其独特的复制机制、不同毒株基因间的频繁重组变异,导致其具有显著的遗传多样性。这种高度的遗传变异特性使得SVA能够快速适应宿主的免疫压力和其他环境变化,从而对疫苗和抗病毒药物研发带来了新的挑战。本文探讨了影响SVA进化的关键因素,包括密码子使用偏好、正向选择、负向选择、内部核糖体进入位点(IRES)区域变异以及基因组RNA重组,分析了低保真度RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)对疫苗研发的具体影响,并系统总结了现有抗病毒药物的研发进展,旨在为制定该病更加精准有效的预防措施和治疗方案提供坚实的理论基础,以应对SVA持续传播威胁,保障猪群健康,促进养猪业稳定发展。 展开更多

关键词 a型塞内卡病毒 猪 进化机制:疫苗研发 抗病毒药物

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甲磺酸瑞波西汀体外颉颃塞内卡病毒的研究 被引量：1

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作者 巩有权 周晓翠 +7 位作者 郑辉 陈峰 曹振山 沙洲 张慧 崔进 武瑞 尼博 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期268-277,共10页

【目的】从含有127种化合物的FDA批准上市药物库中筛选具有颉颃A型塞内卡病毒(SenecavirusA,SV A)活性的化合物并研究其作用途径。【方法】利用荧光素酶重组塞内卡病毒(rSVA-NLuc)结合荧光素酶高通量筛选技术,建立抗SVA化合物体外筛选... 【目的】从含有127种化合物的FDA批准上市药物库中筛选具有颉颃A型塞内卡病毒(SenecavirusA,SV A)活性的化合物并研究其作用途径。【方法】利用荧光素酶重组塞内卡病毒(rSVA-NLuc)结合荧光素酶高通量筛选技术,建立抗SVA化合物体外筛选平台。从FDA批准上市药物库中筛选浓度为10μmol/L时具有抑制荧光素酶活性效应的化合物,并进一步利用实时荧光定量RT-PCR验证其抑制活性,通过反映乳酸脱氢酶(LDH)释放水平的细胞毒性试验进而确定其最大无毒浓度。针对病毒感染周期的吸附、入胞、复制和组装释放等4个主要过程,采用不同的细胞处理方法和实时荧光定量RT-PCR、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)、蛋白免疫印迹(Western blotting)和病毒滴度测定(TCID_(50))等技术进行化合物分子额顽机制研究。【结果】从包含127种分子的FDA获批上市药物库中筛选出8种候选抗SVA活性分子,通过实时荧光定量RT-PCR及细胞毒性检测,鉴定出1种安全、有效的化合物——甲磺酸瑞波西汀。在病毒感染细胞36h内甲磺酸瑞波西汀可使SVA VP3蛋白表达量和病毒滴度均极显著下降(P<0.01)。甲磺酸瑞波西汀处理金黄仓鼠肾细胞(BSR-T7/5)可减少SVA的吸附和入胞;实时荧光定量RT-PCR也显示甲磺酸瑞波西汀能抑制SVA的组装阶段,但它对SVA的复制和释放阶段没有影响。【结论】本试验从FDA批准上市药物库中筛选出了1种细胞毒性较低且颉SVA效果优异的化合物一—甲磺酸瑞波西汀,该化合物通过抑制SVA的吸附、入胞和组装阶段来对抗SVA感染。本研究为抗SVA药物的进一步研发提供重要参考。 展开更多

关键词 a型塞内卡病毒(sva) FDA药物库 高通量筛选

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A型塞内卡病毒VP2蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备 被引量：19

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作者 张永宁 张舟 +4 位作者 诸明欣 梅琳 王彩霞 吴绍强 林祥梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第1期256-263,共8页

本研究旨在表达A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的衣壳蛋白VP2,并制备其多克隆抗体。以SVA GD01/2017分离株RNA为模板,RT-PCR扩增VP2基因序列,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET-30a-SVA-VP2。经测序鉴定后,将重组质... 本研究旨在表达A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的衣壳蛋白VP2,并制备其多克隆抗体。以SVA GD01/2017分离株RNA为模板,RT-PCR扩增VP2基因序列,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET-30a-SVA-VP2。经测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。在非变性条件下,利用Ni-NTA琼脂糖树脂从菌体裂解液上清中纯化重组SVA VP2蛋白,并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用Protein A Sepharose CL-4B树脂从兔血清中亲和层析纯化多克隆抗体,并对其进行间接免疫荧光分析。结果显示,重组SVA VP2蛋白以可溶性和包涵体两种形式在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞内进行表达,分子质量约为47ku;制备的兔抗VP2蛋白多克隆抗体效价高达1∶64 000,该多克隆抗体仅识别SVA,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、脑心肌炎病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒等常见猪病原无交叉反应,表明制备的多克隆抗体具有良好的特异性。重组SVA VP2蛋白及其多克隆抗体的成功制备为猪塞内卡病毒病血清学检测方法的建立提供了良好的生物材料。 展开更多

关键词 a型塞内卡病毒 衣壳蛋白 原核表达 多克隆抗体

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表达O型口蹄疫病毒VP1蛋白的重组塞内卡病毒的构建与鉴定 被引量：4

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作者 黄凯 王豪 +7 位作者 牛晨霞 农作荣 莫勇芳 刘文波 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2023年第1期1-7,共7页

A型塞内卡病毒(SVA)是近年来新流行的一种传染性病原,与口蹄疫病毒(FMDV)具有相似的基因组结构,所致临床症状也十分相似。为了研发一种新型的基因工程活载体疫苗,用于预防塞内卡病毒感染和口蹄疫,以SVA全长感染性克隆pSVA-GX01为基础,在... A型塞内卡病毒(SVA)是近年来新流行的一种传染性病原,与口蹄疫病毒(FMDV)具有相似的基因组结构,所致临床症状也十分相似。为了研发一种新型的基因工程活载体疫苗,用于预防塞内卡病毒感染和口蹄疫,以SVA全长感染性克隆pSVA-GX01为基础,在SVA 2A与2B基因之间插入O型FMDV的VP1基因,经双酶切及测序鉴定,成功获得了重组质粒pSVA-FMDV-VP1-O。将重组质粒转染BHK-21细胞,拯救获得重组病毒rSVA-FMDV-VP1-O,间接免疫荧光试验鉴定显示,该重组病毒可在细胞中表达O型FMDV的VP1蛋白。对该重组病毒进行体外生长增殖特性以及遗传稳定性分析表明,重组毒株和亲本毒株在BHK-21细胞上具有相似的增殖特性,插入的FMDV VP1基因可在细胞传代过程中稳定存在6代。研究结果为开发以塞内卡病毒为载体构建表达口蹄疫病毒VP1蛋白的重组基因工程活载体疫苗提供了参考。 展开更多

关键词 a型塞内卡病毒 口蹄疫病毒 VP1蛋白 重组病毒

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A型猪塞内卡病毒流行病学、致病性、诊断研究进展 被引量：1

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作者 刘存 刘畅 +4 位作者 刘琪 王静 李秀博 崔尚金 梁琳 《养猪》 2020年第1期102-104,共3页

为了进一步了解A型猪塞内卡病毒的特征,通过查阅并总结A型猪塞内卡病毒文献,对A型猪塞内卡病毒流行病学、致病性、诊断方法等方面进行综述,以期提高人们对A型猪塞内卡病毒的认识和防控意识。

关键词 a型塞内卡病毒 新发 小RNA病毒 猪特发性水疱病

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A型塞内卡病毒病原学、流行病学和诊断研究进展 被引量：9

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作者 刘存 刘畅 +4 位作者 刘琪 王静 李秀博 崔尚金 梁琳 《猪业科学》 2018年第1期104-108,共5页

为了进一步了解A型塞内卡病毒的特征,通过查阅与A型塞内卡病毒相关的文献,对A型塞内卡病毒流行病学、致病性、诊断方法等方面进行综述,以期提高人们对A型塞内卡病毒的认识及防控意识。

关键词 a型塞内卡病毒 新发 小RNA病毒 猪特发性水疱病

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抗A型塞内卡病毒天然产物筛选及颉颃作用机制研究 被引量：3

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作者 蒙英雯 李月华 +6 位作者 沙洲 李晨钰 巩有权 董雅琴 魏荣 邹丰才 尼博 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期734-744,共11页

【目的】从天然产物库中筛选具有颉颃A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)活性的天然产物并研究其颉颃作用机制。【方法】利用荧光素酶重组塞内卡病毒(rSVA-NLuc)与BHK-21细胞,结合荧光素酶高通量筛选技术,建立抗SVA药物体外筛选平台。从... 【目的】从天然产物库中筛选具有颉颃A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)活性的天然产物并研究其颉颃作用机制。【方法】利用荧光素酶重组塞内卡病毒(rSVA-NLuc)与BHK-21细胞,结合荧光素酶高通量筛选技术,建立抗SVA药物体外筛选平台。从天然产物库中筛选浓度为10μmol/L时具有抑制荧光素酶活性效应的天然产物,并进一步利用实时荧光定量RT-PCR验证其抑制活性,通过细胞毒性试验确定其最大无毒浓度。选择病毒感染周期的吸附、入胞、复制、组装释放4个主要过程,利用实时荧光定量RT-PCR、50%组织细胞感染量(TCID 50)测定等进行天然产物分子颉颃机制研究。【结果】从包含560种天然产物的分子库中筛选出16种候选抗SVA活性分子,通过实时荧光定量RT-PCR及细胞毒性检测,鉴定出4种安全、有效的天然产物,分别为20S-原人参三醇((20S)-protopanaxatriol)、蕈青霉素(paxilline)、方胆碱(fangchinoline)、竹红菌乙素(hypocrellin B)。作用机制研究显示,20S-原人参三醇能抑制SVA感染过程中的吸附、复制阶段;蕈青霉素在SVA的吸附、入胞、复制、组装释放阶段即整个病毒感染周期均发挥抑制作用;方胆碱能抑制SVA的入胞、复制;竹红菌乙素能抑制SVA的吸附、入胞、复制及组装释放阶段。【结论】本试验从天然产物库中筛选出了4种具有抗SVA活性的天然产物,这些化合物抗病毒效果良好,且作用机制各有不同。本研究为抗SVA药物的进一步研发提供重要参考。 展开更多

关键词 a型塞内卡病毒(sva) 天然产物 高通量筛选 颉颃机制

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