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A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体制备与竞争ELISA方法的建立
1
作者
何启杰
农作荣
+7 位作者
王豪
牛晨霞
莫勇芳
欧阳康
陈樱
黄伟坚
黄稳妃
韦祖樟
《动物医学进展》
北大核心
2025年第2期23-29,共7页
依据A型塞内卡病毒(SVA)结构蛋白VP2基因序列构建原核表达质粒pET-30a-VP2,经转化和诱导,表达出VP2重组蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,采集血清获得VP2的多克隆抗体。用间接ELISA方法测定血清中VP2抗体效价,并用Western blot与IFA验证其...
依据A型塞内卡病毒(SVA)结构蛋白VP2基因序列构建原核表达质粒pET-30a-VP2,经转化和诱导,表达出VP2重组蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,采集血清获得VP2的多克隆抗体。用间接ELISA方法测定血清中VP2抗体效价,并用Western blot与IFA验证其特异性。随后建立竞争ELISA方法,并对实验室收集的2016-2019年广西11个地区64个规模猪场592份猪血清进行SVA抗体检测。结果显示,诱导表达出的重组VP2蛋白主要以可溶性形式表达,血清中VP2抗体效价大于1∶64000,且制备的VP2抗体能特异结合SVA感染细胞中的VP2蛋白。竞争ELISA检测结果显示广西地区猪场SVA血清阳性率高达76.6%,血清样品阳性率高达55.9%,研究结果为SVA的检测和研究奠定了基础。
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关键词
a型塞内卡
VP2蛋白
原核表达
多克隆抗体
竞争ELISA
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职称材料
A型塞内卡病毒VP1蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
被引量：
4
2
作者
农作荣
王豪
+8 位作者
牛晨霞
全东群
曾悦
任同伟
王玉旭
陈樱
欧阳康
黄伟坚
韦祖樟
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2022年第1期120-126,共7页
A型塞内卡病毒(SVA)是一种新发传染病病原。研究旨在对SVA的衣壳蛋白VP1进行原核表达,并制备其多克隆抗体。以SVA广西分离株SVA-GX01(GenBank登录号:MK039162)RNA为模版,通过RT-PCR扩增结构蛋白VP1基因,构建重组质粒pET-32a-VP1并转化...
A型塞内卡病毒(SVA)是一种新发传染病病原。研究旨在对SVA的衣壳蛋白VP1进行原核表达,并制备其多克隆抗体。以SVA广西分离株SVA-GX01(GenBank登录号:MK039162)RNA为模版,通过RT-PCR扩增结构蛋白VP1基因,构建重组质粒pET-32a-VP1并转化表达菌株大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。在非变性条件下,将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。纯化的多克隆抗体进行间接ELISA测定效价,同时进行Western blot与间接免疫荧光分析。结果表明,重组蛋白pET-32a-VP1在大肠杆菌BL21(DE3)以可溶性与包涵体两种形式表达,分子量约为49 kDa。纯化后多克隆抗体效价高达1∶64000。Western blot与间接免疫荧光(IFA)分析显示,多克隆抗体能跟SVA抗原特异性结合。重组SVA-VP1蛋白及其多克隆抗体的成功制备为猪塞内卡病毒血清学检测方法的建立提供了良好的生物材料。
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关键词
a型塞内卡
结构蛋白
VP1
原核表达
多克隆抗体
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职称材料
题名
A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体制备与竞争ELISA方法的建立
1
作者
何启杰
农作荣
王豪
牛晨霞
莫勇芳
欧阳康
陈樱
黄伟坚
黄稳妃
韦祖樟
机构
广西大学动物科学技术学院
广西壮族自治区兽用生物制品工程研究中心
广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室
广西高校动物疫病预防与控制重点实验室
广西农业职业技术大学动物科学技术系
出处
《动物医学进展》
北大核心
2025年第2期23-29,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31972666)
来宾市科学研究与技术开发计划项目(来科攻220823,来科产220826)。
文摘
依据A型塞内卡病毒(SVA)结构蛋白VP2基因序列构建原核表达质粒pET-30a-VP2,经转化和诱导,表达出VP2重组蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,采集血清获得VP2的多克隆抗体。用间接ELISA方法测定血清中VP2抗体效价,并用Western blot与IFA验证其特异性。随后建立竞争ELISA方法,并对实验室收集的2016-2019年广西11个地区64个规模猪场592份猪血清进行SVA抗体检测。结果显示,诱导表达出的重组VP2蛋白主要以可溶性形式表达,血清中VP2抗体效价大于1∶64000,且制备的VP2抗体能特异结合SVA感染细胞中的VP2蛋白。竞争ELISA检测结果显示广西地区猪场SVA血清阳性率高达76.6%,血清样品阳性率高达55.9%,研究结果为SVA的检测和研究奠定了基础。
关键词
a型塞内卡
VP2蛋白
原核表达
多克隆抗体
竞争ELISA
Keywords
Senecavirus A
VP2 protein
Prokaryotic expression
Polyclonal antibody
competitive ELISA
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
A型塞内卡病毒VP1蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
被引量：
4
2
作者
农作荣
王豪
牛晨霞
全东群
曾悦
任同伟
王玉旭
陈樱
欧阳康
黄伟坚
韦祖樟
机构
广西大学动物科学技术学院动物传染病与分子免疫学实验室
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2022年第1期120-126,共7页
基金
国家自然科学基金(31972666)。
文摘
A型塞内卡病毒(SVA)是一种新发传染病病原。研究旨在对SVA的衣壳蛋白VP1进行原核表达,并制备其多克隆抗体。以SVA广西分离株SVA-GX01(GenBank登录号:MK039162)RNA为模版,通过RT-PCR扩增结构蛋白VP1基因,构建重组质粒pET-32a-VP1并转化表达菌株大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。在非变性条件下,将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。纯化的多克隆抗体进行间接ELISA测定效价,同时进行Western blot与间接免疫荧光分析。结果表明,重组蛋白pET-32a-VP1在大肠杆菌BL21(DE3)以可溶性与包涵体两种形式表达,分子量约为49 kDa。纯化后多克隆抗体效价高达1∶64000。Western blot与间接免疫荧光(IFA)分析显示,多克隆抗体能跟SVA抗原特异性结合。重组SVA-VP1蛋白及其多克隆抗体的成功制备为猪塞内卡病毒血清学检测方法的建立提供了良好的生物材料。
关键词
a型塞内卡
结构蛋白
VP1
原核表达
多克隆抗体
Keywords
Senecavirus A(SVA)
capsid protein
VP1
prokaryotic expression
polyclonal antibody
分类号
S659.6 [农业科学—果树学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体制备与竞争ELISA方法的建立
何启杰
农作荣
王豪
牛晨霞
莫勇芳
欧阳康
陈樱
黄伟坚
黄稳妃
韦祖樟
《动物医学进展》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
A型塞内卡病毒VP1蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
农作荣
王豪
牛晨霞
全东群
曾悦
任同伟
王玉旭
陈樱
欧阳康
黄伟坚
韦祖樟
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2022
4
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