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1株羊源D型产气荚膜梭菌的分离鉴定及耐药性分析
1
作者 李娜 刘重阳 +4 位作者 张靖靖 玛丽雅其其格 珠娜 陆斌 海鹰 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1352-1359,共8页
【目的】D型产气荚膜梭菌是一种革兰阳性厌氧菌,可引起山羊、绵羊和牛等动物发生肠毒血症,对反刍动物的健康造成巨大的影响。本研究旨在了解内蒙古乌审旗地区D型产气荚膜梭菌耐药情况,为该地区由D型产气荚膜梭菌引起的疾病的治疗提供科... 【目的】D型产气荚膜梭菌是一种革兰阳性厌氧菌,可引起山羊、绵羊和牛等动物发生肠毒血症,对反刍动物的健康造成巨大的影响。本研究旨在了解内蒙古乌审旗地区D型产气荚膜梭菌耐药情况,为该地区由D型产气荚膜梭菌引起的疾病的治疗提供科学依据。【方法】通过培养特性及革兰染色镜检对分离菌进行初步鉴定,通过16S rRNA基因序列比对和毒素基因PCR扩增对可疑菌株进一步鉴定,并采用K-B纸片法进行药敏试验,PCR检测分离菌耐药基因。【结果】分离菌在TSC培养基中长出黑色的圆形菌落,革兰染色镜检可见菌体粗短,成单个或双个排列的革兰阳性直杆菌,形态学及镜检结果符合产气荚膜梭菌特点。16S rRNA基因序列比对结果显示,分离菌与NCBI数据库中已公布的产气荚膜梭菌16S rRNA基因序列相似性均>99%,鉴定该菌株为产气荚膜梭菌。毒素基因PCR检测扩增出cpa和etx基因,表明该菌株为D型产气荚膜梭菌。药敏试验结果显示,分离菌对头孢曲松、头孢呋新、庆大霉素等16种抗菌药耐药。耐药基因检测结果显示,分离菌检出bla CTX-M、bla SHV、qnrA和aac(6′)-Ⅰb-cr 4种耐药基因,未检出bla TEM和qnrS 2种耐药基因。【结论】本试验成功从绵羊体内分离出1株D型产气荚膜梭菌,该菌株存在多重耐药,该研究结果为D型产气荚膜梭菌感染绵羊的诊断、流行病学调查和治疗提供了参考依据。 展开更多
关键词 绵羊 D型产气荚膜梭菌 分离鉴定 耐药性
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产气荚膜梭菌Alpha毒素突变体的表达及单克隆抗体制备
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作者 韩凤烨 刘莹 +7 位作者 潘晨帆 张乾义 陈小云 朱真 印春生 温永俊 王凤雪 杜吉革 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第1期442-450,共9页
[目的]获得产气荚膜梭菌Alpha毒素(Clostridium perfringens alpha-toxin, CPA)的重组突变体,评价其毒力和抗原性,进而制备针对CPA的单克隆抗体,并评价单克隆抗体特性。[方法]通过人工合成含6个氨基酸突变(第56和130位的天冬氨酸突变为... [目的]获得产气荚膜梭菌Alpha毒素(Clostridium perfringens alpha-toxin, CPA)的重组突变体,评价其毒力和抗原性,进而制备针对CPA的单克隆抗体,并评价单克隆抗体特性。[方法]通过人工合成含6个氨基酸突变(第56和130位的天冬氨酸突变为甘氨酸、第275、307和331位的酪氨酸突变为苯丙氨酸、第336位的天冬氨酸突变为天冬酰胺)的CPA基因片段,并将其克隆至pET-30a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达与纯化,获得重组蛋白rCPA_(m6),并检测其毒力与免疫原性。将rCPA_(m6)作为包被抗原建立CPA抗体的间接ELISA检测方法,并用灭活的天然CPA作为免疫原按照常规方法免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,对其功能进行鉴定。[结果]重组蛋白rCPA_(m6)在大肠杆菌BL21(DE3)感受态中能够以可溶性和包涵体两种形式表达。毒力测定结果显示,100μg/只rCPA_(m6)攻毒后,小鼠全部存活。免疫原性分析结果显示,1×最小致死量(MLD)的天然CPA攻毒后,对照组小鼠全部死亡,10和20μg/只rCPA_(m6)免疫组小鼠存活率为100%。利用rCPA_(m6)成功建立了CPA抗体的间接ELISA检测方法,并筛选获得4株分泌抗CPA的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为6E3、6B8、10A11、13D10,且4种细胞上清抗体效价均≥1∶3 200,其中单克隆抗体6B8细胞上清能中和天然CPA,且能与rCPA_(m6)发生反应。[结论]试验成功获得具有良好的安全性和免疫原性的重组蛋白rCPA_(m6),制备的CPA单克隆抗体6B8具有一定的中和活性及较高的特异性和敏感性。研究结果为CPA亚单位疫苗的研制提供了候选抗原,同时为CPA中毒症的治疗以及抗原/抗体检测方法的建立提供了物质基础。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌Alpha毒素(CPA) 突变体 原核表达 单克隆抗体
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产气荚膜梭菌致死性毒素致病机制和检测技术研究现状
3
作者 王虹迪 余聪 傅思武 《中国动物检疫》 2025年第2期66-72,共7页
产气荚膜梭菌是一种重要的人兽共患病病原体,其产生的4种主要毒素(α、β、ε、ι)均具有较强的细胞毒性,宿主一旦感染该菌,病情进展迅速,死亡风险高,因此其毒素的致病机制及检测方法研究对于该病的早期诊断和及时干预具有重要意义。α... 产气荚膜梭菌是一种重要的人兽共患病病原体,其产生的4种主要毒素(α、β、ε、ι)均具有较强的细胞毒性,宿主一旦感染该菌,病情进展迅速,死亡风险高,因此其毒素的致病机制及检测方法研究对于该病的早期诊断和及时干预具有重要意义。α毒素在气性坏疽的发生发展中起重要作用,β毒素可引起幼畜出血性坏死性肠炎,ε毒素毒力最强,与动物肠毒血症密切相关,ι毒素是该菌主要致死毒素中唯一的二元毒素,可引起动物坏死性肠炎、肠毒血症及人食物中毒。近期,基于ELISA和PCR技术衍生出大量产气荚膜梭菌致死性毒素检测技术,包括间接ELISA、双抗夹心ELISA、多重PCR、荧光定量PCR、微滴式数字PCR、环介导等温扩增等。这些检测技术各具特点,可根据具体需求、样品类型和检测目标进行选择。本文对产气荚膜梭菌4种主要毒素的致病机制和检测技术研究现状进行阐述,以期为“禁抗”后制定科学的产气荚膜梭菌感染防治措施提供依据。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 毒素 人兽共患病 致病机制 检测技术
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一起由产气荚膜梭菌引起的食源性疾病事件的调查分析
4
作者 杨爱青 徐一凡 +1 位作者 武玉平 汪洋 《食品安全导刊》 2025年第8期33-37,共5页
目的:对一起饭店产气荚膜梭菌导致的食源性疾病暴发疫情进行流行病学调查,明确该起事件的暴露因素与感染来源,为该类事件的预防和控制提供有效措施。方法:对病例进行流行病学分析,对当日当餐次在该饭店进食的病例和未发病进餐者进行详... 目的:对一起饭店产气荚膜梭菌导致的食源性疾病暴发疫情进行流行病学调查,明确该起事件的暴露因素与感染来源,为该类事件的预防和控制提供有效措施。方法:对病例进行流行病学分析,对当日当餐次在该饭店进食的病例和未发病进餐者进行详细的调查并做队列研究,比较两者之间差异,查找危险因素。结果:累计报告病例21个,罹患率为40.4%;9个采集肛拭子的患者中有5个为产气荚膜梭菌阳性,阳性检出率为55.6%。可疑暴露食品为牛肉拼盘(RR=6.4,95%CI=1.7~24.5)。结论:该事件为牛肉拼盘中产气荚膜梭菌导致的食源性疾病事件。可能危险因素为牛肉制品酱制成熟后在室温下长时间缓慢冷却及运输过程中无冷藏条件,进食前未彻底加热。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 食源性疾病 流行病学调查
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野生动物园动物产气荚膜梭菌携带状况调查
5
作者 徐昀眺 郑九蓁 +5 位作者 李自盼 卞泓凯 潘新语 丁香 王海燕 刘文博 《动物医学进展》 北大核心 2025年第5期139-144,共6页
为了解不同野生动物群中产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的携带情况、生物学特性及耐药情况,收集了江苏省某野生动物园内57种不同动物粪便样本进行厌氧培养、纯化和染色镜检进行初步鉴定、传代纯化,生化鉴定及16S rRNA基因序列... 为了解不同野生动物群中产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的携带情况、生物学特性及耐药情况,收集了江苏省某野生动物园内57种不同动物粪便样本进行厌氧培养、纯化和染色镜检进行初步鉴定、传代纯化,生化鉴定及16S rRNA基因序列比对鉴定菌株;对分离的产气荚膜梭菌进行毒素型检测及耐药性分析。结果表明,分离到23株产气荚膜梭菌,均为A型。95.7%菌株对氨苄青霉素钠、美罗培南、万古霉素、替加环素、利奈唑胺敏感,其中由德保矮马(Debao pony)粪便中分离得到的产气荚膜梭菌对所试的8种抗菌药物均耐药。研究结果为今后野生动物中该病防控提供了一定参考。 展开更多
关键词 野生动物 产气荚膜梭菌 毒素基因 耐药性
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江西地区野猪菌群多样性分析及其携带产气荚膜梭菌的分离鉴定
6
作者 谭娟娟 杨贝莹 +4 位作者 武前悦 花慧颖 曹华斌 严珲 张锦华 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1876-1886,共11页
旨在探究野猪呼吸道、肠道及粪便中的菌群组成和携带产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)的相关情况。采集江西地区27头野猪呼吸道、肠道及粪便样品,采用细菌16S rRNA基因测序技术分析野猪不同生理部位的菌群组成和差异,分析野猪... 旨在探究野猪呼吸道、肠道及粪便中的菌群组成和携带产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)的相关情况。采集江西地区27头野猪呼吸道、肠道及粪便样品,采用细菌16S rRNA基因测序技术分析野猪不同生理部位的菌群组成和差异,分析野猪源Cp基因型及毒素基因cpa、cpb、cpb2、etx、itx、cpe和netb的携带情况,并分离纯化肠道与粪便样品中的产气荚膜梭菌,对分离株进行全基因组测序分析。菌群分析结果显示:三组的优势菌门都为厚壁菌门、变形菌门、拟杆菌门和放线菌门,其中肠道和粪便中厚壁菌门的占比最高,呼吸道中变形菌门的占比最高。差异性分析发现三组中5个菌属存在极显著差异,其余10个菌属存在显著差异;从野猪粪便样品中分离到了三株Cp,经PCR毒素基因分型检测和全基因组测序分析确认为A型,并且无β2毒素基因;27份样品中Cp的携带率为81.48%(22/27),在这22份阳性样品中,β2毒素基因的检出率为9份,占40.91%(9/22)。其它毒素基因未检测到,综合各分型毒素检测结果,阳性样品中存在的Cp均为A型。综上,本研究基于菌群分析,了解了野猪不同生理部位的菌群组成,以及Cp在野猪中的携带情况,为预防、检测野猪源的相关疾病提供了理论参考。 展开更多
关键词 野猪 菌群分析 产气荚膜梭菌
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不同宿主来源产气荚膜梭菌生物被膜形成前后药物敏感性分析
7
作者 吴莹 邵长军 刘文华 《动物医学进展》 北大核心 2025年第1期38-42,共5页
为了检测5株不同宿主来源产气荚膜梭菌形成生物被膜能力及其对抗菌药物的敏感性差异,首先用纸片扩散法药敏试验测定5株不同来源的产气荚膜梭菌对7种抗菌药物的敏感性;筛选高敏药物测定各菌株的最小抑菌浓度(MIC);利用结晶紫染色法检测... 为了检测5株不同宿主来源产气荚膜梭菌形成生物被膜能力及其对抗菌药物的敏感性差异,首先用纸片扩散法药敏试验测定5株不同来源的产气荚膜梭菌对7种抗菌药物的敏感性;筛选高敏药物测定各菌株的最小抑菌浓度(MIC);利用结晶紫染色法检测不同来源产气荚膜梭菌生物被膜形成能力和高敏药物对生物被膜的抑制和清除能力。药敏结果显示,5株不同宿主来源产气荚膜梭菌均对氨苄西林高度敏感,对其余6种抗菌药物有不同程度耐药;氨苄西林对不同菌株的MIC值在0.031~2.000μg/mL之间;所有菌株均能生成生物被膜,但生物被膜生成能力有差异;不同菌株在各自4、2、1 MIC下生物被膜的生成受到不同程度抑制,而亚抑菌浓度的氨苄西林能刺激生物被膜的生成,氨苄西林对已经生成的生物被膜不能完全清除。结果表明,不同来源产气荚膜梭菌形成生物被膜前后对药物敏感性不同,可为产气荚膜梭菌的临床用药选择及使用剂量提供一定的参考依据。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 生物被膜 最小抑菌浓度 耐药性
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山东省一起羊产气荚膜梭菌病的流行病学调查
8
作者 郑孟加 陈峰 +8 位作者 李玉杰 孙培培 张娜 曹振山 刘砚涵 孙圣福 陈静 王幼明 兰邹然 《中国动物检疫》 2025年第1期18-22,共5页
羊产气荚膜梭菌病是由产气荚膜梭菌引起的急性中毒性传染病,发病突然、病程急促、死亡率高,对养羊业危害极大。2023年9月26日,山东省东营市某养殖场育肥羊发生大量无症状急性死亡情况,死后羊只出现腹胀现象。调查发现,此次疫情发病羊94... 羊产气荚膜梭菌病是由产气荚膜梭菌引起的急性中毒性传染病,发病突然、病程急促、死亡率高,对养羊业危害极大。2023年9月26日,山东省东营市某养殖场育肥羊发生大量无症状急性死亡情况,死后羊只出现腹胀现象。调查发现,此次疫情发病羊94只,全部死亡,袭击率为4.68%(94/2010),病死率为100%(94/94)。综合现场调查、剖检变化、实验室检测结果和药物治疗效果,推断该场羊急性死亡的原因是过快增加饲料中精料比例,加之气温降低、饲养人员更换,羊群自身免疫力下降,导致产气荚膜梭菌大量增殖,引发产气荚膜梭菌病,疫情扩散风险较小。通过降低饲料中精料比例、实施药物治疗、提高饲养管理水平等,病情得到有效控制。该起疫情提示,日常应加强场内人员饲养管理及生物安全知识培训,规范日常工作程序及要求。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 暴发调查 羊 饲料
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牛源产气荚膜梭菌分离鉴定和耐药性分析
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作者 辛禾妍 刘彩英 +5 位作者 尚远昊 孟娜 石文立 刘新艳 贾方芳 李勤凡 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期35-39,共5页
为了解陕西省某牛场健康牛和腹泻牛产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的携带情况及毒素分型,探究其致病性和耐药性,对采集的63份奶牛粪便样品进行产气荚膜梭菌的分离鉴定、毒素分型试验、小鼠致病性试验、半数致死量测定和药敏试... 为了解陕西省某牛场健康牛和腹泻牛产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的携带情况及毒素分型,探究其致病性和耐药性,对采集的63份奶牛粪便样品进行产气荚膜梭菌的分离鉴定、毒素分型试验、小鼠致病性试验、半数致死量测定和药敏试验。结果显示,腹泻牛粪便样品中产气荚膜梭菌分离率为65.22%,健康牛粪便样品中分离率为30%,共分离得到27株产气荚膜梭菌,经鉴定均为A型。部分菌株16S rRNA遗传进化树分析发现11-2和希腊水牛源菌株(JX311438.1)具有较近的亲源性,11-5、11-1、Y-27和Y-28菌株与巴基斯坦水牛源菌株(OR905705.1)属于同一支。随机选取1株产气荚膜梭菌,腹腔注射小鼠的LD_(50)为9.75×10^(7)CFU/mL,感染小鼠出现不同程度病变,以肺和肠道出血为主。27株产气荚膜梭菌对庆大霉素、复方新诺明耐药率高,分别为92.5%和88.9%,对头孢曲松敏感。综上所述,腹泻牛粪便样品中产气荚膜梭菌的分离率高于健康牛粪便样品,27株分离株均为A型产气荚膜梭菌,对小鼠有致病性,对庆大霉素、复方新诺明耐药率高,对头孢曲松敏感,为该菌的进一步研究提供了资料。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 奶牛 耐药性 致病性试验
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内蒙古部分地区牛源产气荚膜梭菌的分离鉴定及耐药性分析
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作者 蔺冰冰 赵洪哲 +5 位作者 关娜 乌日古木拉 其根 张杨 温永俊 王凤雪 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期1873-1883,共11页
【目的】探明内蒙古部分地区肉牛源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,C.perfringens)分离株的流行特性和耐药性,为该地区肉牛产气荚膜梭菌病的防治提供科学依据。【方法】试验采集37头病死肉牛的组织样品,采用分离培养、染色镜检... 【目的】探明内蒙古部分地区肉牛源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,C.perfringens)分离株的流行特性和耐药性,为该地区肉牛产气荚膜梭菌病的防治提供科学依据。【方法】试验采集37头病死肉牛的组织样品,采用分离培养、染色镜检、生化试验等方法进行细菌分离鉴定,PCR检测分离菌的毒素类型及耐药基因,并采用K-B纸片法进行药敏试验。【结果】分离菌在TSC培养基上呈黑色圆形菌落,在TSA培养基中浑浊产气,镜检见短粗的革兰阳性直杆菌。分离菌发酵蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、硫化氢,使明胶液化,在含铁牛乳培养基中“爆裂发酵”。从37头患畜组织样品中分离出8株产气荚膜梭菌,分离率为21.62%。毒素基因PCR分型结果显示,分离株均只含有cpa毒素,为A型产气荚膜梭菌。耐药基因PCR检测结果显示,检出多种耐药基因,其中blaTEM、tetM、ermB和sul2基因检出率最高,均为100%;耐药基因aph(3′)-Ⅲ-F、tetB(P)、ermC检出率分别为87.5%、62.5%和62.5%,其余耐药基因未检出。药敏试验结果显示,8株产气荚膜梭菌对氨基糖苷类药物耐药,对丁胺卡那、链霉素耐药率均为100%;对庆大霉素、卡那霉素耐药率均为87.5%;对复方新诺明、四环素、红霉素耐药率分别为100%、75.0%和50.0%;对氨苄西林、头孢唑林、氯霉素、克林霉素均表现为敏感。【结论】内蒙古部分地区牛群中存在产气荚膜梭菌流行,主要以A型为主,对抗生素产生了较严重的耐受情况,且存在多重耐药。试验结果可为产气荚膜梭菌流行病学研究、临床合理用药和科学防控提供科学依据。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 分离鉴定 耐药性 耐药基因
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鸡源产气荚膜梭菌分离鉴定和药敏试验及枯草芽孢杆菌对其抑制作用
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作者 叶碧锦 欧兰欣 +6 位作者 王定爱 方肆云 申翰钦 严专强 戚南山 孙铭飞 黄福强 《动物医学进展》 北大核心 2025年第1期16-22,共7页
为探究产气荚膜梭菌在黄羽肉鸡重要养殖区域的流行及耐药情况,采集广东、广西等华南地区,安徽、江苏、福建等华东地区6个规模化肉鸡养殖场9份肠道病变样品进行分离鉴定和毒素分型检测、耐药性分析,琼脂扩散试验检测野外分离枯草芽孢杆菌... 为探究产气荚膜梭菌在黄羽肉鸡重要养殖区域的流行及耐药情况,采集广东、广西等华南地区,安徽、江苏、福建等华东地区6个规模化肉鸡养殖场9份肠道病变样品进行分离鉴定和毒素分型检测、耐药性分析,琼脂扩散试验检测野外分离枯草芽孢杆菌BSGZ7对产气荚膜梭菌的抑菌效果。结果显示,从肠道样品中分离到7株A型和2株G型产气荚膜梭菌,9株分离菌和1株标准菌均对阿莫西林、青霉素、头孢噻肟、氨苄西林、头孢氨苄、氟苯尼考、头孢曲松具有较高的敏感性,对庆大霉素、卡那霉素、四环素、多西环素、链霉素、磺胺异恶唑、林可霉素、红霉素、多黏菌素B等抗菌药物普遍耐药,枯草芽孢杆菌BSGZ7发酵液均对10株菌有抑菌效果。结果表明枯草芽孢杆菌对产气荚膜梭菌具有一定抑菌作用,有望成为防控鸡坏死性肠炎的新型绿色安全的抗菌制剂,同时也为临床上鸡坏死性肠炎的防控和治疗提供了参考依据。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 分离鉴定 药敏试验 枯草芽孢杆菌 抑菌活性
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一例牛源产气荚膜梭菌的分离鉴定和药敏试验
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作者 宫震 付修龙 +4 位作者 金映红 薛晶 李月 张凌 夏俊 《草食家畜》 2025年第1期23-28,共6页
【目的】新疆某牛场2头犊牛突然死亡,本试验旨在明确此次发病的病原,为牛场疫病防控提供指导。【方法】无菌采集2份突然死亡的犊牛脏器和肠道样品,从脏器中分离纯化出1株细菌,对其进行培养特性观察、PCR鉴定和药敏试验。【结果】结果显... 【目的】新疆某牛场2头犊牛突然死亡,本试验旨在明确此次发病的病原,为牛场疫病防控提供指导。【方法】无菌采集2份突然死亡的犊牛脏器和肠道样品,从脏器中分离纯化出1株细菌,对其进行培养特性观察、PCR鉴定和药敏试验。【结果】结果显示分离细菌为产气荚膜梭菌,该分离菌株对氨苄西林、头孢噻呋钠、环丙沙星等抗生素敏感性较高,对链霉素、卡那霉素、替米考星等不敏感。【结论】结果表明,此次导致牛场犊牛突然死亡的病原为产气荚膜梭菌,对氨苄西林、头孢噻呋钠、环丙沙星等抗生素敏感,对链霉素、卡那霉素、替米考星等抗生素耐药。 展开更多
关键词 分离鉴定 产气荚膜梭菌 药敏试验
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一株山羊源产气荚膜梭菌的分离鉴定及全基因组测序分析
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作者 赵学乾 朱珂 +2 位作者 李辉 刘坤 孙晓 《中国动物保健》 2025年第2期194-195,共2页
本研究采集一严重腹泻、血便急性死亡的山羊心包积液进行厌氧培养,通过特异性培养基筛选、革兰氏染色镜检初步鉴定为产气荚膜梭菌;采用PCR对毒素进行分析,鉴定为A型。全基因组测序显示基因组大小为3 239 894 bp,平均G+C含量为28.23%。... 本研究采集一严重腹泻、血便急性死亡的山羊心包积液进行厌氧培养,通过特异性培养基筛选、革兰氏染色镜检初步鉴定为产气荚膜梭菌;采用PCR对毒素进行分析,鉴定为A型。全基因组测序显示基因组大小为3 239 894 bp,平均G+C含量为28.23%。多位点序列分析(MLST)显示该ST型尚未报道。共检测到10种染色体毒力基因和87种耐药基因亚型。泛基因组分析显示核心基因组占55.76%,附属基因数占19.64%,特有基因数占24.59%,在系统进化分析中与JXJA17GCA_003350945.1株处于同一分支,同源性高。 展开更多
关键词 山羊 产气荚膜梭菌 全基因组测序
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产气荚膜梭菌α-毒素基因数字PCR方法的建立及其在标准物质研制方面的应用 被引量：2
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作者 张铭洋 张喜悦 +7 位作者 赵格 曲志娜 高宏伟 孙敏 程慧敏 徐佳微 王君玮 邹明 《山东农业科学》 北大核心 2024年第1期156-163,共8页
产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是一种重要的人兽共患病原菌,α-毒素是其分子生物学检测的主要靶标。试验选取Clper引物及探针建立微滴式数字PCR(droplet digtial PCR,ddPCR)方法,最佳引物浓度0.85μmol/L,探针浓度为0.3μmol/L... 产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是一种重要的人兽共患病原菌,α-毒素是其分子生物学检测的主要靶标。试验选取Clper引物及探针建立微滴式数字PCR(droplet digtial PCR,ddPCR)方法,最佳引物浓度0.85μmol/L,探针浓度为0.3μmol/L,退火温度为60℃。利用建立的ddPCR方法检测单核细胞增生李斯特菌、沙门氏菌、大肠杆菌、肠球菌、金黄色葡萄球菌、弯曲杆菌的DNA,结果均为阴性,表明该方法具有较好的特异性。合成产气荚膜梭菌α-毒素基因,制成DNA标准品,选取3个稀释梯度的标准品进行重复试验,组内和组间变异系数均小于5%,证明该方法具有较好的重复性。采用7个稀释梯度的标准品进行重复检测,计算出该方法的检测限为12.39 copies/μL,定量限为33.97 copies/μL。通过对68份临床样品进行检测,证实该方法可用于临床,且用于检测质粒DNA时无明显的基质效应。应用ddPCR方法对标准品进行均匀性和稳定性检验,并联合9家实验室进行定值,最终获得了国家市场监督管理总局颁发的标准物质证书(GBW(E)091237)。α-毒素基因ddPCR方法的建立和DNA标准物的研制,为产气荚膜梭菌分子生物学检测试剂的标准化奠定了基础。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 ddPCR α-毒素基因 标准物质 特异性 灵敏度 可重复性 定值
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牦牛源A型产气荚膜梭菌的分离鉴定及生物学特性研究 被引量：3
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作者 王冬经 吴金措姆 曾江勇 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期229-241,共13页
【目的】2023年4月至2023年5月,西藏拉萨市多地出现牦牛严重腹泻、便血甚至死亡的现象。试验旨在确定牦牛腹泻的病原菌并研究其生物学特性,以期为该地区牦牛腹泻病的防治提供参考。【方法】采集新鲜牦牛腹泻粪便样品进行厌氧培养,通过... 【目的】2023年4月至2023年5月,西藏拉萨市多地出现牦牛严重腹泻、便血甚至死亡的现象。试验旨在确定牦牛腹泻的病原菌并研究其生物学特性,以期为该地区牦牛腹泻病的防治提供参考。【方法】采集新鲜牦牛腹泻粪便样品进行厌氧培养,通过培养特性及染色镜检进行初步鉴定;对可疑阳性菌株进行生化特性、多重PCR毒素基因分型及cpe、netB、cpb2毒素鉴定,并进行cpa、cpb2、16S rRNA基因的遗传进化分析、部分分离株生长曲线测定及动物致病性试验;采用K-B法测定分离株的体外药物敏感性,统计不同分离株的多重耐药结果。【结果】从样品中分离纯化得到8株分离菌,在厌氧培养基中生长旺盛,在TSC培养基、5%脱纤维绵羊血平板、卵黄琼脂培养基上均呈现与产气荚膜梭菌相似的典型菌落,革兰染色为紫色大杆菌,初步判定为产气荚膜梭菌,命名为XZ-1~XZ-8。分离株生化检测结果与产气荚膜梭菌相符;分离株均携带cpa和cpb2基因,为A型产气荚膜梭菌;16S rRNA基因分析结果显示,8株分离株与产气荚膜梭菌参考株的相似性为97.3%~100%,在系统进化树中处于同一分支,而与屎肠球菌、大肠杆菌参考株处于不同分支;分离株cpa和cpb2基因存在一定的变异性。生长曲线显示,3株分离株(XZ-1、XZ-4、XZ-7)生长规律基本一致,其中0~4 h为迟缓期,4~8 h为对数期,8~22 h为稳定期,22 h后开始进入衰亡期。动物致病性试验结果显示,分离株对昆明小鼠具有较强的致病性。分离株对苯唑西林、红霉素、氯霉素、氧氟沙星、米诺环素、头孢哌酮、利福平及罗红霉素敏感,对青霉素、哌拉西林、羧苄西林、麦迪霉素、头孢曲松等22种药物均存在不同程度的耐药性,存在多重耐药性,其中XZ-7株耐药数量多达11种,6重以上耐药的菌株占75.0%。【结论】本研究成功从拉萨严重腹泻、血便牦牛粪样中分离出8株A型产气荚膜梭菌,分离株对小鼠具有较强的致病性,对青霉素、哌拉西林、羧苄西林等药物存在不同程度的耐药性。研究结果为该地区牦牛腹泻病防控提供了参考依据。 展开更多
关键词 牦牛 产气荚膜梭菌 分离鉴定 生长曲线 动物致病性 耐药性
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1株猪源A型产气荚膜梭菌的分离鉴定及致病性研究 被引量：1
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作者 吴钰兴 邹潍力 +9 位作者 程子馨 莫玉鹏 张凌源 纪宛彤 陈思宇 郑浩东 麻润雯 李珣 李茂宁 王晓晔 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2697-2706,共10页
【目的】探究A型产气荚膜梭菌在仔猪腹泻中的致病性,为A型产气荚膜梭菌感染所致腹泻的诊断和治疗提供理论依据和参考。【方法】通过培养特性和革兰染色镜检对分离菌进行初步鉴定,通过生化试验、毒素基因PCR扩增、16S rRNA序列比对并构... 【目的】探究A型产气荚膜梭菌在仔猪腹泻中的致病性,为A型产气荚膜梭菌感染所致腹泻的诊断和治疗提供理论依据和参考。【方法】通过培养特性和革兰染色镜检对分离菌进行初步鉴定,通过生化试验、毒素基因PCR扩增、16S rRNA序列比对并构建进化树对可疑菌株进一步鉴定,利用药敏试验和动物回归试验研究分离菌株的耐药性和致病性。【结果】分离菌株在TSN平板上呈黑色菌落,在血平板上呈α、β双溶血环,革兰染色呈紫色粗大杆菌。生化试验结果显示,分离菌株葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、还原性硝酸盐试验、H_2S试验和明胶液化均呈阳性,甘露醇、吲哚试验和水杨酸结果呈阴性。16S rRNA序列比对结果显示,分离菌与NCBI数据库中已公布的产气荚膜梭菌16S rRNA基因序列相似性均>99%,鉴定该菌株为产气荚膜梭菌。PCR扩增出plc及cpb2基因,表明该菌株为携带β2毒素的A型产气荚膜梭菌。药敏试验结果显示,分离菌株对青霉素G、庆大霉素、林可霉素、磺胺异噁唑、环丙沙星、诺氟沙星耐药。动物回归试验结果显示,攻菌后仔猪粪便中可检出大量产气荚膜梭菌,该菌株可引起仔猪腹泻,死亡率达50%;死亡仔猪剖检可见小肠充血、出血、鼓气,从脾脏、小肠中可分离出产气荚膜梭菌,且在损伤严重的空肠肠段中分离出高载量A型产气荚膜梭菌。【结论】本试验成功分离出1株A型产气荚膜梭菌,可引起新生仔猪发病,致病性较强,该研究结果为A型产气荚膜梭菌感染仔猪的诊断、流行病学调查、治疗提供了参考依据。 展开更多
关键词 a型产气荚膜梭菌 新生仔猪 分离鉴定 致病性
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A型产气荚膜梭菌冻干毒素在疫苗效力检验中的应用研究
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作者 曲海波 白同臣 +2 位作者 丁国杰 孙德君 马世华 《中国兽药杂志》 2008年第5期40-41,共2页
通过冻干毒素和常规方法制备的毒素对家兔的毒力变化以及在疫苗效力检验中的效果比较,发现冻干毒素在2～8℃保存,毒力稳定,且不影响疫苗检验结果,说明毒素冻干保存是一种可行的方法。
关键词 a型产气荚膜梭菌毒素 效力检验
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鸭肠炎病毒和A型产气荚膜梭菌共感染绿壳蛋鸭十二指肠代谢组学分析
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作者 张晨旭 田琴 +3 位作者 毕文文 王开功 周碧君 文明 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期24-30,共7页
旨在探究鸭肠炎病毒(DEV)和A型产气荚膜梭菌(CpA)共感染绿壳蛋鸭114 h时十二指肠的差异代谢物变化。试验选取12只健康绿壳蛋鸭,随机分为对照组(CK)和共感染组(TCD)。通过临床观察、剖检病理观察以及PCR检测确定DEV和CpA共感染成功,再使... 旨在探究鸭肠炎病毒(DEV)和A型产气荚膜梭菌(CpA)共感染绿壳蛋鸭114 h时十二指肠的差异代谢物变化。试验选取12只健康绿壳蛋鸭,随机分为对照组(CK)和共感染组(TCD)。通过临床观察、剖检病理观察以及PCR检测确定DEV和CpA共感染成功,再使用液相色谱-质谱联用(LC-MS)检测CK组和TCD组感染114 h时鸭十二指肠的代谢物变化,筛选潜在差异代谢物及代谢通路。结果表明,与CK组相比,TCD组鸭十二指肠感染114 h时的总差异代谢物29种,主要有5′-s-甲基-5′-硫腺苷、胞苷、脱氧皮质酮21-葡萄糖苷、腐胺和2-氧吲哚、腐胺、柚皮素、2-氧吲哚、吲哚-3-乙醛等;差异代谢物通过KEGG通路富集分析,共显著富集到22条代谢通路,主要有烟酸酯和烟酰胺代谢、半胱氨酸和蛋氨酸的代谢、酪氨酸代谢、色氨酸代谢、甘油磷脂代谢等,其中与机体免疫和炎症相关的有腐胺、柚皮素、2-氧吲哚、吲哚-3-乙醛、5′-s-甲基-5′-硫腺苷、烟酸脂和半胱氨酸-蛋氨酸代谢、色氨酸代谢和烟酰胺代谢等。综上所述,DEV和CpA共感染绿壳蛋鸭后,可能通过影响腐胺和柚皮素等代谢物以及色氨酸代谢和半胱氨酸-蛋氨酸代谢通路来影响绿壳蛋鸭十二指肠的炎症,为阐明DEV和CpA共感染机制提供科学依据。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 a型产气荚膜梭菌 代谢组学 十二指肠
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A型产气荚膜梭菌Fba重组干酪乳杆菌的构建与表达
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作者 杨启尧 范佳霖 +5 位作者 秦达 曲艺 王嘉彬 余丽芸 史同瑞 侯喜林 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第6期36-42,71,共8页
为了构建重组乳酸菌,以A型产气荚膜梭菌全基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增出Fba基因并将其连接到大肠杆菌表达载体pET-28a上,鉴定正确后,用1.0 mmol·L-1 IPTG诱导表达,最佳诱导表达时间为5 h。表达的目的蛋白纯化后与弗氏佐剂乳... 为了构建重组乳酸菌,以A型产气荚膜梭菌全基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增出Fba基因并将其连接到大肠杆菌表达载体pET-28a上,鉴定正确后,用1.0 mmol·L-1 IPTG诱导表达,最佳诱导表达时间为5 h。表达的目的蛋白纯化后与弗氏佐剂乳化制备抗血清,Western blot分析表明,目的蛋白能与制备的抗血清特异结合,具有很好的反应原性。将正确的Fba基因与pLA乳酸菌载体构建成重组质粒并电转至干酪乳杆菌中,Western blot结果显示,重组的干酪乳杆菌表达的蛋白与抗血清具有良好的反应原性。间接免疫荧光、流式细胞仪检测结果表明,目的蛋白能够展示表达到菌体表面。 展开更多
关键词 a型产气荚膜梭菌 Fba基因 干酪乳杆菌 构建与表达
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三重荧光PCR技术在食品产气荚膜梭菌毒素基因检测中的应用
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作者 邹淑慧 何震 唐美秀 《食品安全导刊》 2024年第2期91-93,共3页
目的:建立食品中产气荚膜梭菌常见3种毒素(α、β、ε)的基因cpa、cpb、ext的三重荧光PCR检测方法。方法:设计产气荚膜梭菌的α、β、ε 3种毒素基因的引物和探针,优化退火温度,建立三重荧光PCR方法,探讨其特异性、灵敏度。结果:该方法... 目的:建立食品中产气荚膜梭菌常见3种毒素(α、β、ε)的基因cpa、cpb、ext的三重荧光PCR检测方法。方法:设计产气荚膜梭菌的α、β、ε 3种毒素基因的引物和探针,优化退火温度,建立三重荧光PCR方法,探讨其特异性、灵敏度。结果:该方法的特异性较强,仅能检测出产气荚膜梭菌,对其他梭菌与常见食源性致病菌的扩增结果均为阴性;三重荧光PCR体系的检测灵敏度达到0.000 1 ng·μL^(-1)。用建立的方法对实验室样品进行鉴定,发现2份食品样品中有产气荚膜梭菌(均为A型)。结论:本研究建立的三重荧光PCR方法的特异性、灵敏度均较高,且操作简单、检测速度快,适用于食品中产气荚膜梭菌的检测。 展开更多
关键词 三重荧光PCR 产气荚膜梭菌 毒素
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