E3泛素连接酶FBXL8对A亚群禽白血病病毒复制的影响

1

作者 郑诗龄 陈雪阳 +3 位作者 刘晶 方春 梁雄燕 杨玉莹 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1696-1705,共10页

【目的】制备鸡E3泛素连接酶FBXL8多克隆抗体,探究鸡源FBXL8对A亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)在鸡胚成纤维细胞(DF-1)内复制的影响。【方法】以DF-1细胞cDNA为模板,通过PCR扩增FBXL 8基因,构建鸡源FBXL8原... 【目的】制备鸡E3泛素连接酶FBXL8多克隆抗体,探究鸡源FBXL8对A亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)在鸡胚成纤维细胞(DF-1)内复制的影响。【方法】以DF-1细胞cDNA为模板,通过PCR扩增FBXL 8基因,构建鸡源FBXL8原核表达重组质粒pET-28a-FBXL8,将其转化大肠杆菌表达菌株RIL进行诱导表达及纯化,将表达产物His-FBXL8免疫10月龄新西兰大白兔制备多克隆抗体,利用Western blotting和间接ELISA分别检测抗体特异性及效价;针对已公布的FBXL 8基因序列设计过表达引物及靶向FBXL 8基因的干扰序列,构建过表达质粒psi-flag-FBXL8及干扰质粒pLKO.1-FBXL8-shRNA,使用Western blotting检测其表达效果。将构建成功的过表达质粒和干扰质粒转染DF-1细胞,24 h后感染ALV-A,通过半定量PCR、Western blotting分别检测ALV-A的结构蛋白P27、GP85表达水平。【结果】PCR成功扩增出大小为1182 bp的FBXL 8基因片段,并成功构建FBXL8原核表达重组质粒pET-28a-FBXL8,诱导表达的融合蛋白His-FBXL8大小为43 ku。Western blotting和间接ELISA结果显示,制备的FBXL8兔多克隆抗体可特异性识别外源蛋白,且抗体效价为1∶64000。成功构建了FBXL8过表达质粒和干扰质粒,其在DF-1细胞中能够实现对FBXL8的过表达和敲低。半定量PCR和Western blotting检测结果显示,过表达FBXL8可抑制ALV-A复制,而敲低FBXL8则促进其复制。【结论】本研究制备的FBXL8多克隆抗体具有良好特异性及反应性;在DF-1细胞中,FBXL8负向调控ALV-A复制,研究结果为进一步深入探究FBXL8生物学特性提供了重要参考,并为揭示FBXL8抗ALV-A感染分子机制奠定了基础。 展开更多

关键词 FBXL8 a亚群禽白血病病毒(ALV-A) 多克隆抗体 病毒复制

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A亚群禽白血病病毒env基因在昆虫细胞中的表达与鉴定 被引量：1

2

作者 梅梅 胡晓田 +4 位作者 秦爱建 陆吉虎 张雪花 侯继波 唐应华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期1316-1320,共5页

为获得A亚群禽白血病病毒(ALV-A)env基因的表达产物,以ALV-A AH10毒株病毒RNA为模板,通过反转录PCR扩增得到env基因,将其克隆到转移载体p Fast Bac1中,转化DH10Bac感受态细胞,获得重组穿梭质粒r Bacmid-env A,r Bacmid-env A转染昆虫细... 为获得A亚群禽白血病病毒(ALV-A)env基因的表达产物,以ALV-A AH10毒株病毒RNA为模板,通过反转录PCR扩增得到env基因,将其克隆到转移载体p Fast Bac1中,转化DH10Bac感受态细胞,获得重组穿梭质粒r Bacmid-env A,r Bacmid-env A转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒。间接免疫荧光试验(IFA)和免疫印迹试验(Western-blot)结果显示,重组蛋白可与抗ALV-A抗体发生特异性反应,重组蛋白分子大小约为90 000,与预期大小相符,表明env基因在Sf9细胞中获得了良好表达。 展开更多

关键词 a亚群禽白血病病毒 ENV基因 表达

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HB2015株A亚群禽白血病病毒的蛋鸡实验性感染研究 被引量：1

3

作者 梁雄燕 王爽 +5 位作者 李长风 李晓娟 王莹 杨玉莹 方守国 顾玉芳 《中国家禽》 北大核心 2017年第8期24-27,共4页

通过鸡胚静脉接种,对分离于湖北某蛋鸡群的A亚群禽白血病病毒(ALV-A)HB2015株进行实验性感染研究。结果:试验组鸡胚孵出14只雏鸡,对照组孵出3只;ALV-A特异性PCR结果显示:试验组孵出的小鸡4周龄时有11只(11/14)的血液样本呈ALV-A核酸阳... 通过鸡胚静脉接种,对分离于湖北某蛋鸡群的A亚群禽白血病病毒(ALV-A)HB2015株进行实验性感染研究。结果:试验组鸡胚孵出14只雏鸡,对照组孵出3只;ALV-A特异性PCR结果显示:试验组孵出的小鸡4周龄时有11只(11/14)的血液样本呈ALV-A核酸阳性,3只(3/11)呈ALV-A核酸阴性,对照组则全部为ALV-A核酸阴性;16周龄试验组鸡血涂片中可见少量髓细胞性瘤细胞,剖检可见内脏器官有不同病变结节;病理组织学观察显示,内脏组织中可见原淋巴细胞、髓细胞性瘤细胞、成红细胞等多种瘤细胞增生;感染鸡的肝组织中可分离到病毒,表明ALV-A HB2015株通过鸡胚静脉接种可诱发蛋鸡多种类型瘤细胞增生。 展开更多

关键词 a亚群禽白血病病毒 实验性感染 蛋鸡 瘤细胞

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E3泛素连接酶RNF165在A亚群禽白血病病毒复制中的作用 被引量：1

4

作者 王兴明 王后坤 +3 位作者 陈雪阳 方春 梁雄燕 杨玉莹 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3781-3789,共9页

【目的】探明鸡源环指蛋白165(ring finger protein 165,RNF165)在A亚群禽白血病病毒(ALV-A)复制中的作用,为进一步研究鸡源RNF165对ALV-A致病性的影响提供参考。【方法】将ALV-A接种于DF-1细胞和1日龄雏鸡,通过Western blotting和实时... 【目的】探明鸡源环指蛋白165(ring finger protein 165,RNF165)在A亚群禽白血病病毒(ALV-A)复制中的作用,为进一步研究鸡源RNF165对ALV-A致病性的影响提供参考。【方法】将ALV-A接种于DF-1细胞和1日龄雏鸡,通过Western blotting和实时荧光定量PCR方法分别从体外和体内两个方面验证ALV-A对宿主RNF165表达的影响;参考已公布的RNF165基因序列设计过表达引物,通过PCR扩增RNF165基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1;将验证表达的重组质粒转染DF-1细胞,1 d后接种ALV-A,使用Western blotting检测过表达RNF165对病毒复制的影响;最后设计突变引物,构建RNF165功能结构域突变质粒,将过表达质粒和突变质粒分别转染DF-1细胞,1 d后接种ALV-A,Western blotting测定gp85蛋白表达差异。【结果】ALV-A感染DF-1细胞后未能检测到内源性的RNF165蛋白,但基因转录水平较对照组明显下调(P<0.01)。在体内试验中,与对照组相比,感染病毒雏鸡肝脏中RNF165基因和蛋白表达水平均有所下调(P<0.01);通过PCR成功扩增到大小为1068 bp的目的片段并成功克隆至pcDNA3.1,Western blotting结果显示,在39 ku处出现目的条带,RNF165过表达后促进了病毒复制;测序结果显示,成功构建出功能结构域突变质粒,与过表达质粒组相比,RNF165突变质粒组病毒的复制水平受到显著抑制。【结论】ALV-A感染抑制DF-1细胞和雏鸡肝脏RNF165的表达,在体外试验中,过表达RNF165会促进ALV-A的复制,且这种影响与其保守结构域有关。 展开更多

关键词 环指蛋白165 a亚群禽白血病病毒(ALV-A) 病毒复制 功能结构域突变

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表达A亚群禽白血病病毒Gp85蛋白的乳酸菌的构建 被引量：1

5

作者 李鼎伟 高可丽 +4 位作者 曾扬 方春 杨玉莹 刘晶 梁雄燕 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第9期3456-3463,共8页

本研究旨在构建乳酸菌表达载体以研制A亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)的活菌疫苗,用于预防禽白血病。使用锚定表达载体构建2株分别表达gp85和gp85-DCpep基因的重组植物乳杆菌,以感染ALV-A的DF-1细胞的基因组... 本研究旨在构建乳酸菌表达载体以研制A亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)的活菌疫苗,用于预防禽白血病。使用锚定表达载体构建2株分别表达gp85和gp85-DCpep基因的重组植物乳杆菌,以感染ALV-A的DF-1细胞的基因组DNA为模板,使用PCR方法扩增ALV-A Gp85蛋白的编码基因gp85,将树突状细胞靶向肽(DC-targeting peptide,DCpep)编码基因与gp85基因进行融合,获得gp85-DCpep基因;使用乳酸菌锚定表达载体pSIP409-pgsA’通过同源重组的方法构建重组质粒pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA’-gp85;经测序正确后将上述质粒分别电转化植物乳杆菌NC8感受态细胞,获得重组植物乳杆菌;使用SppIP诱导重组植物乳杆菌的表达,收集处于对数生长期的菌体,通过反复冻融获取细胞膜的蛋白样,采用Western blotting技术检测pgsA’-gp85-DCpep和pgsA’-gp85蛋白的表达情况。结果显示,试验成功获得基因片段gp85和gp85-DCpep,构建的重组质粒pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA’-gp85测序无突变和丢失情况,并成功电转到植物乳杆菌NC8感受态细胞中,使用SDS-PAGE和Western blotting技术在细胞膜蛋白样中检测到蛋白的表达,大小分别为48.3(pgsA’-gp85-DCpep)和47 ku(pgsA’-gp85)。本试验成功构建了重组质粒pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA’-gp85,获得的重组植物乳杆菌NC8-pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和NC8-pSIP409-pgsA’-gp85中的蛋白均成功表达,且具有反应原性,为后期深入研究重组植物乳杆菌在抗ALV-A感染中的保护机制奠定良好的基础。 展开更多

关键词 a亚群禽白血病病毒(ALV-A) Gp85蛋白 植物乳杆菌 树突状细胞 锚定表达

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tva受体基因起始密码子突变对鸡感染A亚群禽白血病病毒的影响 被引量：2

6

作者 陈伟国 邝智祥 +4 位作者 张翔宇 李文雪 徐慧娟 朱学凤 谢青梅 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期367-373,共7页

[目的]探索tva受体基因起始密码子突变(tva c.3G>A)对鸡感染A亚群禽白血病病毒(Avian leukemia virus subgroup A, ALV-A)的影响。[方法]利用Sanger测序和RT-PCR验证我国黄羽肉鸡存在tva c.3G>A突变。利用流式细胞术检测tva c.3G&... [目的]探索tva受体基因起始密码子突变(tva c.3G>A)对鸡感染A亚群禽白血病病毒(Avian leukemia virus subgroup A, ALV-A)的影响。[方法]利用Sanger测序和RT-PCR验证我国黄羽肉鸡存在tva c.3G>A突变。利用流式细胞术检测tva c.3G>A突变对鸡体外感染RCASBP(A)-GFP荧光报告病毒的影响。通过ALV-A体内攻毒试验,探究tva c.3G>A突变对鸡体内感染ALV-A的影响。利用直接测序方法对我国黄羽肉鸡品系tva c.3G>A突变位点进行基因分型。[结果]Sanger测序和RT-PCR结果鉴定我国黄羽肉鸡品系tva基因编码区第3位碱基由G突变为A,该突变引起tva基因起始密码子序列由ATG突变为ATA。流式细胞术检测结果显示野生型tva c.3G/G鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast, CEF)对RCASBP(A)-GFP易感,纯合突变型tva c.3A/A CEF抗RCASBP(A)-GFP感染,表明tva c.3G>A突变导致鸡体外抗RCASBP(A)-GFP的感染。ALVA体内攻毒试验的结果表明,tva c.3G>A突变导致鸡体内抗ALV-A的感染。tva c.3G>A突变位点基因分型发现,CB01、CB08、CB10和CB15品系存在纯合抗性基因型tva c.3A/A,频率分别为0.10、0.15、0.23和0.08。[结论]tva c.3G>A突变引起鸡在体外、体内抗ALV-A感染,tva c.3G>A突变位点可作为ALV-A的遗传抗性位点。 展开更多

关键词 a亚群禽白血病病毒 tva受体基因 起始密码子 突变 遗传抗性 黄羽肉鸡

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E3泛素连接酶RNF185对A亚群禽白血病病毒体外复制的影响 被引量：3

7

作者 刘晶 陈雪阳 +1 位作者 曾扬 杨玉莹 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第11期4364-4371,共8页

【目的】环指蛋白185(ring finger protein 185,RNF185)是Ring家族E3泛素连接酶的一员。试验旨在探明鸡源RNF185对A亚群禽白血病病毒(Avian leukemia virus subgroup A,ALV-A)体外复制的影响,为进一步研究鸡源RNF185对ALV-A致病性的影... 【目的】环指蛋白185(ring finger protein 185,RNF185)是Ring家族E3泛素连接酶的一员。试验旨在探明鸡源RNF185对A亚群禽白血病病毒(Avian leukemia virus subgroup A,ALV-A)体外复制的影响,为进一步研究鸡源RNF185对ALV-A致病性的影响和介导的致瘤机制提供参考。【方法】参考GenBank中已公布的鸡RNF185基因(登录号:NP_001007841)序列分别设计RNF185过表达引物和RNF185单链shRNA,通过PCR扩增RNF185基因及合成双链shRNA,将其分别克隆至真核表达载体psi-flag和干扰载体pLKO.1-GFP,并使用PCR、双酶切和测序等方法验证重组质粒。使用Western blotting验证重组质粒的表达和干扰效果,并使用CCK-8试剂盒检测重组质粒对DF-1细胞活性的影响。在RNF185过表达和干扰后的DF-1细胞中分别接种10~4半数组织感染剂量(TCID)ALV-A(rHB2015012)病毒液,于接种完成后3、4和5 d收取细胞,并使用Western blotting检测ALV-A的病毒载量。【结果】PCR成功扩增出RNF185基因,单链shRNA经退火后形成双链shRNA,并成功构建重组质粒psi-flag-RNF185、pLKO.1-RNF185-1和pLKO.1-RNF185-2。Western blotting结果表明,构建的过表达和干扰质粒能够在DF-1细胞中稳定表达和干扰RNF185。CCK-8结果表明,过表达和干扰RNF185不影响DF-1细胞的活性。RNF185过表达可以促进ALV-A在DF-1细胞中的复制,干扰RNF185表达可以抑制ALV-A在DF-1细胞中的复制。【结论】本研究构建了可以在DF-1细胞中高效表达和干扰RNF185的过表达质粒和干扰质粒,RNF185对DF-1细胞增殖无明显影响,能够促进ALV-A(rHB2015012)在体外的复制。 展开更多

关键词 环指蛋白185(RNF185) a亚群禽白血病病毒(ALV-A) 病毒复制

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乌鸡一株A亚群禽白血病病毒的分离鉴定与全基因组序列分析 被引量：4

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作者 高延利 李敏 +5 位作者 陆乔娥 石梦雅 王威威 李秋红 邓乔木 韦平 《广西畜牧兽医》 2020年第3期114-117,共4页

为了解广西地区某乌鸡养殖场中是否存在禽白血病病毒(ALV)感染,将从该养殖场中无菌采集的抗凝血分离的血浆接种DF-1细胞进行病毒分离,并采用ELISA和PCR扩增的方法对细胞培养物分别进行检测,成功分离鉴定出一株A亚群禽白血病病毒(ALV-A)... 为了解广西地区某乌鸡养殖场中是否存在禽白血病病毒(ALV)感染,将从该养殖场中无菌采集的抗凝血分离的血浆接种DF-1细胞进行病毒分离,并采用ELISA和PCR扩增的方法对细胞培养物分别进行检测,成功分离鉴定出一株A亚群禽白血病病毒(ALV-A),命名为GX18LZA01株。测序结果显示GX18LZA01株前病毒基因组DNA序列全长7 561bp。遗传演化分析显示,GX18LZA01与10株国内外A亚群参考毒株同处一个大的分支,核苷酸(nt)相似性为91. 8%~96. 6%,其中与SDAU09C1参考株相似性最高(96. 6%);进一步对其gp85基因的分析发现,它与A亚群参考毒株也同处一个大的分支(nt:87. 9%~97. 8%),与全基因组分析的结果一致。本研究结果表明,乌鸡存在A亚群ALV感染,gp85基因可以替代全基因组作为其分子流行病学和系统发育研究的最佳选择。 展开更多

关键词 乌鸡 a亚群禽白血病病毒 病毒分离与鉴定 全基因组序列分析 gp85基因

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禽白血病病毒A亚群和J亚群混合感染引起雏鸡腺胃炎的病理学诊断

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作者 关昕睿 谢泽鑫 +2 位作者 何慧 刘晓丽 谷长勤 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第12期93-98,共6页

为了明确湖北省某鸡场疑似腺胃炎病鸡发病原因,本试验对病鸡进行解剖,观察各组织病变情况;对腺胃、肝脏、法氏囊、胸腺等组织进行组织病理学检查;对腺胃石蜡切片进行禽白血病病毒(ALV)-p27抗原的免疫组织化学染色;对腺胃匀浆进行病原检... 为了明确湖北省某鸡场疑似腺胃炎病鸡发病原因,本试验对病鸡进行解剖,观察各组织病变情况;对腺胃、肝脏、法氏囊、胸腺等组织进行组织病理学检查;对腺胃石蜡切片进行禽白血病病毒(ALV)-p27抗原的免疫组织化学染色;对腺胃匀浆进行病原检测和ALV-p27抗原检测;将过滤除菌后的腺胃匀浆接种于鸡胚成纤维细胞(DF-1)分离病毒,并进行ALV亚群鉴定。结果显示,剖检可见病鸡的腺胃肿大,腺胃壁增厚,质软,腺胃乳头扁平消失;腺胃黏膜下层不同程度的淋巴细胞浸润,腺小管上皮增生,腺上皮细胞脱落坏死;其他器官不同程度的变性、坏死和炎性细胞浸润。腺管上皮胞质内出现p27抗原阳性信号。腺胃匀浆中扩增出ALV的特异性条带,同时酶联免疫吸附试验(ELISA)检测为p27抗原阳性。DF-1细胞培养物的ALV亚群鉴定为A亚群(ALV-A)和J亚群(ALV-J)共感染。结果表明,该鸡场鸡只是由ALV-A和ALV-J共同引起的腺胃炎。 展开更多

关键词 腺胃炎 病理变化 p27 禽白血病病毒a亚群 禽白血病病毒J亚群

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广西麻鸡感染A亚群与J亚群禽白血病病毒的诊断 被引量：20

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作者 王培坤 秦丽莉 +3 位作者 毕玉彧 邹广珍 彭昊 韦平 《中国家禽》 北大核心 2015年第5期56-58,共3页

对疑似患有禽白血病的广西麻鸡进行病理剖检、接种DF-1细胞进行病毒分离以及对细胞培养上清进行p27抗原检测、细胞培养物进行PCR扩增,并对分离到病毒的gp85基因进行测序和分析比较。结果表明,从该病鸡同时分离到了A亚群禽白血病病毒（AL... 对疑似患有禽白血病的广西麻鸡进行病理剖检、接种DF-1细胞进行病毒分离以及对细胞培养上清进行p27抗原检测、细胞培养物进行PCR扩增,并对分离到病毒的gp85基因进行测序和分析比较。结果表明,从该病鸡同时分离到了A亚群禽白血病病毒（ALV-A）与J亚群禽白血病病毒（ALV-J）,分别命名为ZS14-A株、ZS14-J株。对ALV-A gp85、ALV-J gp85基因的遗传变异分析结果显示,ZS14-A与6株国内外A亚群参考毒株之间的氨基酸同源性为86.3%~87.8%,其中与国外株MAV-1同源性最高,为87.8%。ZS14-J与7株国内外J亚群参考毒株之间的氨基酸同源性为83.4%~96.1%,其中与J亚群原型株HPRS103同源性最高,为96.1%。 展开更多

关键词 a亚群禽白血病病毒 J亚群禽白血病病毒 共感染 广西麻鸡 gp85

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三黄鸡临床血管瘤病例中分离出A亚群与J亚群禽白血病病毒 被引量：16

11

作者 王培坤 毕玉彧 +3 位作者 秦丽莉 邹广珍 彭昊 韦平 《动物医学进展》 北大核心 2015年第3期13-16,共4页

为了解禽白血病病毒在广西鸡群中流行情况,采用DF-1细胞接种、细胞培养上清p27抗原检测、PCR扩增,对临床血管瘤型禽白血病的三黄鸡病料进行了病毒分离,并对分离病毒gp85基因进行测序和序列比较。结果表明,从1只病鸡同时分离到了一株A亚... 为了解禽白血病病毒在广西鸡群中流行情况,采用DF-1细胞接种、细胞培养上清p27抗原检测、PCR扩增,对临床血管瘤型禽白血病的三黄鸡病料进行了病毒分离,并对分离病毒gp85基因进行测序和序列比较。结果表明,从1只病鸡同时分离到了一株A亚群禽白血病病毒（ALV-A）与一株J亚群禽白血病病毒（ALV-J）,分别命名为HG01-A株和HG01-J株。ALV-A gp85与7株A亚群氨基酸同源性为85.8%-87.5%,与A亚群美国株MQNCSU同源性最高为87.5%,与A亚群原型株RSA同源性为86.9%。而ALV-J gp85与7株毒株核酸序列同源性为84.0%-93.8%,与广东株XX2-08以及四川株SCSM01同源性最高为93.8%,与英国原型株HPRS103同源性为90.2%。进化分析进一步表明,HG01-A与各参考株亲缘关系较远,HG01-J与SCSM01亲缘关系最近。本研究首次从同一只广西三黄鸡中同时分离到ALV-A及ALV-J,进一步完善了我国地方品种鸡群中禽白血病的流行病学信息。 展开更多

关键词 共感染 a亚群禽白血病病毒 J亚群禽白血病病毒 gp85 聚合酶链反应

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A、J亚群禽白血病病毒感染肉用种鸡的诊断 被引量：8

12

作者 李先桥 史开志 +2 位作者 罗明星 吴松成 汪德生 《贵州畜牧兽医》 2009年第4期4-6,共3页

通过流行病学调查、剖检病变和组织病理学观察,结合PCR技术检测病原核酸,确诊肉用种鸡群发生了由ALV-A和ALV-J感染而导致的淋巴细胞性白血病和骨髓细胞瘤型白血病。在检测的6只病鸡中,6只病鸡均感染了ALV-J,2只病鸡感染了ALV-A。

关键词 J亚群禽白血病病毒 a亚群禽白血病病毒 诊断

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黑豆皮花色苷抗禽白血病病毒A亚群活性的研究 被引量：2

13

作者 雷用东 王丹 +4 位作者 童军茂 张莉 马越 张超 赵晓燕 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期344-349,共6页

为探寻黑豆皮花色苷(anthocyanins from black soybean seed coat,ABSC)抗禽白血病病毒A亚群(subgroup A avian leukosis virus,ALV-A)的活性效果。本文以ABSC粉为原料,采用高效液相色谱仪与质谱仪联机(HPLC-MS)的方法鉴定了其花色苷主... 为探寻黑豆皮花色苷(anthocyanins from black soybean seed coat,ABSC)抗禽白血病病毒A亚群(subgroup A avian leukosis virus,ALV-A)的活性效果。本文以ABSC粉为原料,采用高效液相色谱仪与质谱仪联机(HPLC-MS)的方法鉴定了其花色苷主要活性成分,随后采用体外实验,应用MTT法和观察细胞形态法检测了ABSC对鸡成纤维细胞系(DF-1)的细胞毒性,建立细胞模型,研究加入ABSC后对ALV-A的预防和治疗作用。结果表明:黑豆皮花色苷粉中含四种花色苷成分,其中主要为矢车菊色素-3-葡萄糖苷;ABSC对DF-1无细胞毒性的最大相对安全质量浓度为20μg/mL;ABSC在安全浓度范围内能抑制ALV-A的增殖,且抑制程度成剂量关系。结论,ABSC质量浓度为12μg/mL能够显著抑制ALV-A诱导的DF-1细胞形态变化,降低凋亡。 展开更多

关键词 黑豆皮花色苷 鸡成纤维细胞系 禽白血病病毒a亚群 生物活性

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笃斯越桔花色苷抗禽白血病病毒A亚群活性的试验研究 被引量：2

14

作者 张莉 雷用东 +5 位作者 盖丽丽 赵晓燕 童军茂 王丹 马越 张超 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期174-180,共7页

为探讨笃斯越桔花色苷(Anthocyanin from Vaccinium uliginosum L.,AVU)抑制禽白血病病毒A亚群(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)的生物活性作用。以笃斯越桔花色苷粉为试验材料,采用高效液相色谱仪与质谱仪联机(HPLC-MS)方法鉴... 为探讨笃斯越桔花色苷(Anthocyanin from Vaccinium uliginosum L.,AVU)抑制禽白血病病毒A亚群(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)的生物活性作用。以笃斯越桔花色苷粉为试验材料,采用高效液相色谱仪与质谱仪联机(HPLC-MS)方法鉴定其花色苷主要活性成分,将AVU作用于感染ALV-A的DF-1鸡胚成纤维细胞(DF-1细胞)单层表面,通过检测AVU对感染ALV-A的DF-1细胞形态学变化及采用MTT法测定细胞存活情况来研究AVU的抗病毒作用。结果表明,笃斯越桔花色苷粉中含6种花色苷活性成分,其中主要为矢车菊色素-3-葡萄糖苷;AVU对DF-1细胞的最大安全质量浓度为80μg/mL;AVU在40～80μg/mL安全浓度范围内能抑制ALV-A的增殖,且抑制程度与剂量呈一定相关性;AVU质量浓度为60μg/mL能够显著抑制ALV-A对DF-1细胞感染。 展开更多

关键词 笃斯越桔 花色苷 DF-1鸡成纤维细胞 禽白血病病毒a亚群 生物活性

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种禽场A亚群禽白血病病原学调查及分离株遗传进化分析 被引量：11

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作者 冯敏 谭利强 +5 位作者 代曼曼 郝建勇 秦建如 黄小容 廖明 曹伟胜 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期11-15,共5页

【目的】了解广东地区种禽场A亚群禽白血病病毒(ALV-A)流行情况.【方法】从A、B、C、D 4个种禽场采集1 561份血浆样品,接种DF-1细胞,培养7 d后通过ELISA方法对细胞上清液进行p27抗原检测,通过PCR、间接免疫荧光试验2种方法对p27抗原阳... 【目的】了解广东地区种禽场A亚群禽白血病病毒(ALV-A)流行情况.【方法】从A、B、C、D 4个种禽场采集1 561份血浆样品,接种DF-1细胞,培养7 d后通过ELISA方法对细胞上清液进行p27抗原检测,通过PCR、间接免疫荧光试验2种方法对p27抗原阳性样品进行鉴定.【结果和结论】从4个种禽场共检出71份阳性样品,外源性禽白血病病毒分离阳性率为4.6%.其中,仅从C种禽场分离到2株ALV-A,命名为GD13-1和GD13-2,前病毒全基因序列分别为7 721和7 715 bp,且GD13-2与J亚群禽白血病病毒混合感染.与国内外其他ALV-A的LTR、gp85核苷酸序列进行分析比对,发现该研究分离的2株ALV-A与国内A亚群分离株SDAU09E2相似度最高,其中与LTR相似性分别为96.9%、97.2%,与gp85相似性分别为98.4%、98.7%;与广东地区5年前ALV-A分离株GD08的LTR核苷酸序列相似性分别为88.9%、89.5%,与gp85相似性分别为98.5%、98.8%.调查结果表明,广东地区部分种禽场内仍然存在ALV-A感染,但ALV-A已经不是流行毒株,且变异程度不大. 展开更多

关键词 种禽场 a亚群禽白血病病毒 前病毒全基因组序列

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黑加仑花色苷抗禽白血病A亚群病毒作用

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作者 雷用东 王丹 +4 位作者 童军茂 张莉 马越 张超 赵晓燕 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期821-827,共7页

研究了黑加仑花色苷(Anthocyanin from Blackcurrant,ACB)对禽白血病A亚群病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)的抑制作用。作者以ACB粉为原料,采用高效液相色谱仪与质谱仪联机(HPLC-MS)的方法鉴定了其主要活性成分,随后采用... 研究了黑加仑花色苷(Anthocyanin from Blackcurrant,ACB)对禽白血病A亚群病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)的抑制作用。作者以ACB粉为原料,采用高效液相色谱仪与质谱仪联机(HPLC-MS)的方法鉴定了其主要活性成分,随后采用体外实验,应用MTT法和观察细胞形态法检测了ACB对鸡成纤维细胞系(DF1)的细胞毒性的影响,建立细胞模型,研究加入ACB后对ALV-A的预防和治疗作用。结果表明:ACB主要含飞燕草色素-3-鼠李糖苷-5-葡萄糖苷和矢车菊色素-3-鼠李糖苷-5-葡萄糖苷两种组分;ACB对DF1无细胞毒性的质量浓度为10μg/mL;基于ACB的预防和治疗实验,ACB可明显抑制ALV-A的增殖,具有良好的剂量-效应关系,因此ACB具有一定的体外抗ALV-A作用。 展开更多

关键词 黑加仑花色苷 鸡成纤维细胞系 禽白血病病毒a亚群 MTT法

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在ALV-K gp85交叉干扰下ALV-A gp85突变位点的研究

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作者 李锦群 梁灿新 +5 位作者 郑小雪 陈建 郭妍妍 李文静 陈湘 曹伟胜 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1252-1260,共9页

禽白血病病毒(ALV)囊膜表面蛋白gp85与细胞受体的结合介导病毒侵入细胞。A亚群ALV(ALV-A)与K亚群ALV(ALV-K)共用细胞中的Tva受体,在ALV-K gp85交叉干扰下,ALV-A gp85与Tva结合的关键氨基酸位点可能发生突变以重新建立有效感染。为鉴定... 禽白血病病毒(ALV)囊膜表面蛋白gp85与细胞受体的结合介导病毒侵入细胞。A亚群ALV(ALV-A)与K亚群ALV(ALV-K)共用细胞中的Tva受体,在ALV-K gp85交叉干扰下,ALV-A gp85与Tva结合的关键氨基酸位点可能发生突变以重新建立有效感染。为鉴定这些位点,本研究以前期构建的pCAGGS-s-K-gp85-flag为模板,经PCR扩增融合信号肽s和标签flag的ALV-K gp85基因并克隆至pLV-sfGFP(2A)Pure慢病毒载体,构建重组慢病毒质粒pLV-s-K-gp85-flag-GFP,并经酶切和测序鉴定后与辅助质粒共转染HEK293T细胞,包装获得重组慢病毒。将重组慢病毒感染DF-1细胞,通过嘌呤霉素筛选获得细胞系DF-1/K-gp85。RT-qPCR和western blot检测结果显示,DF-1/K-gp85能够稳定表达ALV-K gp85基因并将62 ku左右的ALV-K gp85蛋白分泌至细胞上清;荧光和ALV p27抗原ELISA检测结果显示,过表达ALV-K gp85蛋白能够有效抑制MOI 1 ALV-A重组病毒RCASBP(A)-Mcherry的感染。将RCASBP(A)-Mcherry接种DF-1/K-gp85并连续传20代,通过测序共检测到7个ALV-A gp85突变位点(第5代:S^(272)N、P^(280)L和F^(288)S;第10代:L^(154)P;第15代:T^(127)A;第20代:L^(154)P、R^(173)G和R^(212)H)。进一步表达野生型(wt)和L^(154)P突变的ALV-A gp85重组蛋白,将其分别与DF-1细胞孵育,然后接种MOI 0.1 RCASBP(A)-Mcherry,进行交叉干扰试验,流式细胞术检测结果显示,L^(154)P组Mcherry阳性细胞百分比显著高于ALV-A gp85wt组;另外构建L^(154)P突变的重组病毒载体RCASBP(A)-EGFP L^(154)P,将其与RCASBP(A)-EGFP分别转染DF-1细胞,5 d后经流式细胞术检测结果显示,RCASBP(A)-EGFP L^(154)P组EGFP阳性细胞百分比显著低于RCASBP(A)-EGFP组;进一步将0.1 MOI RCASBP(A)-EGFP L^(154)P和RCASBP(A)-EGFP重组病毒分别感染DF-1/K-gp85细胞系,7 d后采用ALV p27抗原ELISA检测结果显示,RCASBP(A)-EGFP L^(154)P组S/P值显著高于RCASBP(A)-EGFP组,提示RCASBP(A)-EGFP L^(154)P可能利用了其他受体侵入细胞。上述结果首次表明L^(154)是ALV-A结合Tva受体及启动感染的关键位点。本研究为阐明ALV-A gp85与细胞受体相互作用的分子机制奠定了基础。 展开更多

关键词 a亚群禽白血病病毒 gp85 慢病毒载体 交叉干扰 突变

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