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大孔吸附树脂提取7-木糖-10-去乙酰紫杉醇酶解产物10-去乙酰紫杉醇 被引量：4
1
作者 刘兴宝 栾宏伟 +2 位作者 葛广波 闫黎 杨凌 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2009年第3期496-501,共6页
本研究利用大孔树脂富集7-木糖10-去乙酰紫杉醇的酶解产物10-去乙酰紫杉醇。首先以10-去乙酰紫杉醇(10-DAT)绝对含量为指标,通过HPLC测定比较HP20、XAD4、XAD16、XAD1600四种大孔树脂对10-去乙酰紫杉醇的吸附与解吸性能力,筛选出最佳树... 本研究利用大孔树脂富集7-木糖10-去乙酰紫杉醇的酶解产物10-去乙酰紫杉醇。首先以10-去乙酰紫杉醇(10-DAT)绝对含量为指标,通过HPLC测定比较HP20、XAD4、XAD16、XAD1600四种大孔树脂对10-去乙酰紫杉醇的吸附与解吸性能力,筛选出最佳树脂XAD1600进行实验。最佳的吸附解吸条件为:树脂柱高径比10∶1,吸附流速20mL/min,吸附量23.85mg/mL,以6倍柱床体积的90%乙醇为洗脱液,洗脱流速20mL/min。经XAD1600型树脂富集后10-去乙酰紫杉醇回收率达96.5%,含量20.5%。且树脂柱重复使用3次后,其吸附能力仅降低5%。 展开更多
关键词 7-木糖-10-去乙酰紫杉醇 10-去乙酰紫杉醇 大孔树脂 吸附与解吸
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工业色谱法分离制备7-木糖基-10-去乙酰紫杉醇酶解产物10-去乙酰紫杉醇 被引量：3
2
作者 刘兴宝 栾宏伟 +3 位作者 葛广波 侯琨 杜逊甫 杨凌 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期165-169,共5页
基于工业色谱法分离制备抗癌药物紫杉醇的半合成前体10-去乙酰紫杉醇(10-DAP)。7-木糖基-10-去乙酰紫杉醇(10-DAXP)在我国特有红豆杉品系(中华红豆杉)枝叶中含量丰富,以其为原料可制备紫杉醇最理想的半合成前体——10-DAP。本研究以部... 基于工业色谱法分离制备抗癌药物紫杉醇的半合成前体10-去乙酰紫杉醇(10-DAP)。7-木糖基-10-去乙酰紫杉醇(10-DAXP)在我国特有红豆杉品系(中华红豆杉)枝叶中含量丰富,以其为原料可制备紫杉醇最理想的半合成前体——10-DAP。本研究以部分纯化后的7-木糖基-10-去乙酰紫杉烷为原料,通过β-木糖苷酶水解该粗提物中的主要成分10-DAXP及其两个微量类似物7-木糖基-10-去乙酰三尖杉宁碱(10-DAXC)和7-木糖基-10-去乙酰紫杉醇C(10-DAXP C),脱去其C-7位上的木糖基,水解产物采用大孔吸附树脂吸附,正相快速柱分离和反相制备色谱分离,可获得高纯度的目标物10-DAP,产物纯度为96%,整个工艺的收率大于75%。该方法适合以10-DAXP为原料大规模制备紫杉醇的半合成前体化合物10-DAP,为工业化生产紫杉醇开辟了一条新途径。 展开更多
关键词 制备色谱 7-木糖基-10-去乙酰紫杉醇 10-去乙酰紫杉醇 紫杉醇 7-木糖基-10-去乙酰紫杉烷 分离纯化
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7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇的优化试验研究 被引量：1
3
作者 张宇 姜守刚 +2 位作者 祖元刚 汪琢 付玉杰 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期369-372,共4页
在寻找东北红豆杉(Taxus cuspidata)中的抗癌的活性物质过程中,一种亲水性紫杉醇衍生物7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇被筛选出来。目的是优化并建立红豆杉中7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇的提取工艺及鉴定,本文以使用RP-HPLC测定的7-木糖-10-去... 在寻找东北红豆杉(Taxus cuspidata)中的抗癌的活性物质过程中,一种亲水性紫杉醇衍生物7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇被筛选出来。目的是优化并建立红豆杉中7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇的提取工艺及鉴定,本文以使用RP-HPLC测定的7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇含量为指标,采用正交试验法对提取过程中乙醇浓度(A)、乙醇用量(B)、提取次数(C)、提取时间(D)4因素进行优化。结果从红豆杉中提取7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇的最主要影响因素是乙醇浓度及固液比,高浓度、高用量有利于提取;提取时间和次数也极为重要,单因素实验结果以2h/次和提取2次为最佳。结论N9(A3B3C2D1)、N8(A3B2C1D3)为优化选出的7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇最佳提取工艺条件。 展开更多
关键词 7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇 HPLC 提取分离 鉴定 正交实验
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南方红豆杉菌根菌液体纯发酵培养产紫杉醇及10-去乙酰巴卡亭Ⅲ 被引量：3
4
作者 龚雪元 杜亚填 +1 位作者 刘姣 张翔宇 《林产化学与工业》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第3期114-120,共7页
从南方红豆杉菌根菌中筛选出产紫杉醇和紫杉烷类化合物10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DAB)的高产菌株,对分离获得的21株菌株进行了液体发酵培养实验,通过TLC、HPLC及LC-MS检测发现,有10株菌株具有产紫杉醇及紫杉烷类化合物的能力,其中4株菌株中... 从南方红豆杉菌根菌中筛选出产紫杉醇和紫杉烷类化合物10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DAB)的高产菌株,对分离获得的21株菌株进行了液体发酵培养实验,通过TLC、HPLC及LC-MS检测发现,有10株菌株具有产紫杉醇及紫杉烷类化合物的能力,其中4株菌株中产10-DAB分别为260.05、92.88、393.27、70.52μg/L,但未检出产紫杉醇;6株中产紫杉醇分别为434.94、1 242.19、200.65、360.77、317.90、29.82μg/L,但未检出产10-DAB,说明南方红豆杉的各种菌根真菌虽具有合成紫杉醇或紫杉烷类化合物的能力,但各自所合成化合物有差异,不同种类的菌根菌可能分别参与了紫杉醇生物合成的不同环节,即南方红豆杉菌根高含量紫杉醇的生物合成可能是多种菌根菌协同参与作用的结果,且其中的高产菌株具有发酵生产紫杉醇的潜力。 展开更多
关键词 南方红豆杉 菌根菌 紫杉醇 10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DAB) 液体发酵
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7-木糖紫杉烷类化合物合成紫杉醇的新工艺研究 被引量：2
5
作者 赵俊宏 樊燕鸽 +6 位作者 王红星 李文锋 李峥 孔宏俊 陈世鹏 陈瑨 薛宝玉 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2020年第6期92-98,105,共8页
以7-木糖-10-去乙酰基紫杉烷类化合物为原料,通过氧化还原、乙酰化、去乙酰化的三步反应得到含有紫杉醇的混合物;通过柱分离和重结晶分离提纯,得到高纯度紫杉醇.合成的紫杉醇经高效液相色谱(HPLC)、核磁共振氢谱(1H-NMR)、核磁共振碳谱(... 以7-木糖-10-去乙酰基紫杉烷类化合物为原料,通过氧化还原、乙酰化、去乙酰化的三步反应得到含有紫杉醇的混合物;通过柱分离和重结晶分离提纯,得到高纯度紫杉醇.合成的紫杉醇经高效液相色谱(HPLC)、核磁共振氢谱(1H-NMR)、核磁共振碳谱(13 C-NMR)和高分辨质谱(HRMS)等进行了表征和分析确认.此合成工艺路线拓展了化学半合成紫杉醇的原料来源,降低了紫杉醇的生产成本,拓展了紫杉醇的原料来源. 展开更多
关键词 7-木糖紫杉烷类化合物 紫杉醇 合成
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南方红豆杉10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶基因的克隆与生物信息学分析 被引量：3
6
作者 程抒劼 黄仕杰 +2 位作者 郭丽琼 韩飞 林俊芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期107-112,共6页
对中国重要药用植物南方红豆杉中的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶(DBAT)基因进行分离、测序以及生物信息学分析。根据GenBank中已登录的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶(DBAT)基因cDNA序列设计引物,采用RT-PCR技术从南方红豆杉叶片... 对中国重要药用植物南方红豆杉中的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶(DBAT)基因进行分离、测序以及生物信息学分析。根据GenBank中已登录的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶(DBAT)基因cDNA序列设计引物,采用RT-PCR技术从南方红豆杉叶片中克隆了1个DBAT基因Tc-DBAT的全长cDNA。结果显示,Tc-DBAT cDNA含有1个1 323 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码440个氨基酸,对应基因组序列含有1个内含子。Tc-DBAT蛋白N端含有5个N-酰基化作用位点和2个保守的N-糖基化作用位点,具有1个保守的B ig-1结构域,多个重要的磷酸化位点以及1个类似钙结合蛋白重复结构。序列同源性比较、系统发生分析以及蛋白质高级结构预测均表明,Tc-DBAT属于转移酶超家族(transferase superfamily),是一个具有乙酰转移酶活性的功能蛋白,能够催化10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DAB)10位的乙酰化,从而生成抗癌新药紫杉醇生物合成途径中的最后一个双萜中间体——巴卡亭Ⅲ。有望通过成功克隆和鉴定紫杉醇生物合成途径中的关键酶基因达到提高其半合成前体巴卡亭Ⅲ产量的目的,并且为进一步利用组合表达系统商业化生产紫杉醇奠定基础。 展开更多
关键词 南方红豆杉 紫杉醇 10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶 基因克隆 生物信息学分析
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美洲大蠊肠道产7-木糖紫杉烷糖基水解酶菌株的筛选及鉴定
7
作者 唐彬 刘文彬 +2 位作者 李小波 王宁 金小宝 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期139-148,共10页
旨在筛选美洲大蠊肠道具有产7-木糖紫杉烷糖基水解酶性能的内生菌,并对其进行生物学鉴定。以实验室保存的178株美洲大蠊肠道内生菌为研究对象,采用刚果红透明圈法和荧光显色法筛选产木聚糖酶菌株,进一步利用薄层色谱法筛选产7-木糖紫杉... 旨在筛选美洲大蠊肠道具有产7-木糖紫杉烷糖基水解酶性能的内生菌,并对其进行生物学鉴定。以实验室保存的178株美洲大蠊肠道内生菌为研究对象,采用刚果红透明圈法和荧光显色法筛选产木聚糖酶菌株,进一步利用薄层色谱法筛选产7-木糖紫杉烷糖基水解酶菌株。在此基础上,选取一株高产7-木糖紫杉烷糖基水解酶菌株进行形态学、生理生化和分子生物学鉴定,并采用高效液相色谱法测定其对7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇的转化率。结果显示,178株美洲大蠊肠道内生菌中有55株菌产木聚糖酶,其中8株链霉菌和2株贪铜菌可产生7-木糖紫杉烷糖基水解酶。高产菌株WA11-2-9经形态学特征、生理生化试验和16S rDNA序列分析鉴定为Streptomyces enissocaesilis。WA11-2-9可将7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇转化为10-去乙酰巴卡亭Ⅲ和10-去乙酰紫杉醇,主要产物10-去乙酰紫杉醇的转化率为21.52%。美洲大蠊肠道内生菌WA 11-2-9(GenBank Accession:MZ411692)具有分泌7-木糖紫杉烷糖基水解酶的能力,它为后续生物转化制备紫杉醇奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 美洲大蠊肠道 7-木糖紫杉烷糖基水解酶 7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇 10-去乙酰紫杉醇
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耐热β-木糖苷酶的可溶性表达及其应用
8
作者 罗佳年华 董玉蓉 +2 位作者 张珊珊 张小濛 赵林果 《林业工程学报》 CSCD 北大核心 2021年第3期81-87,共7页
紫杉醇作为一种具有突出药用价值的天然抗癌药物,其在红豆杉属植物中的含量极少,且已有的紫杉醇制备方法难以满足商业需求,因此酶法制备紫杉醇的研究受到越来越多的关注。通过β-木糖苷酶水解紫杉醇类似物7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇(7-X... 紫杉醇作为一种具有突出药用价值的天然抗癌药物,其在红豆杉属植物中的含量极少,且已有的紫杉醇制备方法难以满足商业需求,因此酶法制备紫杉醇的研究受到越来越多的关注。通过β-木糖苷酶水解紫杉醇类似物7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇(7-XDT)得到10-去乙酰基紫杉醇(10-DT),再进一步被乙酰基转移酶催化变成紫杉醇,此双酶催化反应为紫杉醇的制备提供了一个可靠方法。以嗜热菌Thermotoga petrophila DSM 13995来源的β-木糖苷酶Tpexyl3为研究对象,利用重组酶Tpexyl3催化7-XDT制备10-DT。为了提高重组β-木糖苷酶Tpexyl3在大肠杆菌BL21(DE3)中的可溶性表达量,对6种商业化的分子伴侣蛋白进行了筛选。结果表明:分子伴侣蛋白dnaK-dnaJ-grpE能显著提高Tpexyl3在大肠杆菌中的可溶性表达量;在以质量分数1%的麦芽糊精作为碳源的富集肉汤(TB)培养基中,不添加诱导剂,32℃下发酵48 h,重组酶Tpexyl3的表达量可达190 U/mL,较原始重组质粒在溶菌肉汤(LB)培养基中的表达量(6.81 U/mL)提高了27.9倍;在重组酶Tpexyl3加酶量250 U/mL、7-XDT质量浓度500 mg/L、pH 5.5、80℃下反应4 h,可生成162 mg/L的10-DT,物质的量转化率为45.59%。 展开更多
关键词 Β-木糖苷酶 分子伴侣 表达条件优化 7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇 生物转化
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从南方红豆杉中筛选和鉴定25株产紫杉烷的内生真菌 被引量：3
9
作者 戴黄益 刘明志 +2 位作者 段中岗 马细兰 吕镇城 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期271-278,共8页
为从南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)中分离产紫杉烷的内生真菌,从其幼茎、树皮和叶片中分离纯化了491株内生真菌,经筛选获得25株内生真菌具有产紫杉烷的能力,其中,4株可产紫杉醇、巴卡亭Ⅲ和10-去乙酰巴卡亭Ⅲ,8株能产紫杉醇... 为从南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)中分离产紫杉烷的内生真菌,从其幼茎、树皮和叶片中分离纯化了491株内生真菌,经筛选获得25株内生真菌具有产紫杉烷的能力,其中,4株可产紫杉醇、巴卡亭Ⅲ和10-去乙酰巴卡亭Ⅲ,8株能产紫杉醇和巴卡亭Ⅲ,1株能产紫杉醇和10-去乙酰巴卡亭Ⅲ,1株能产巴卡亭Ⅲ和10-去乙酰巴卡亭Ⅲ,6株仅产紫杉醇,5株仅产巴卡亭Ⅲ。根据内生真菌的来源,幼茎中有11株产紫杉烷的内生真菌,叶片中有9株,而树皮中仅有5株。这些菌株的紫杉醇、巴卡亭和10-去乙酰巴卡亭Ⅲ产量分别为0.64~9.87、0.48~3.42和0.20~1.00μg L^(–1)。因此,南方红豆杉中具有紫杉烷类代谢途径的内生真菌来源广,数量多,是研究真菌中紫杉烷类化合物代谢途径的良好材料,也为紫杉烷类抗癌药生产提供了潜在的真菌种源。 展开更多
关键词 南方红豆杉 内生真菌 紫杉醇 巴卡亭Ⅲ 10-去乙酰巴卡亭Ⅲ
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