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5-Aza-CdR对德保黑猪手工克隆重构胚胎体外发育效果的影响 被引量：2
1
作者 吕玲燕 陆杏蓉 +5 位作者 孙俊铭 陈宝剑 吴永绍 孙如玉 汪燕玲 崔奎青 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第11期3144-3152,共9页
为了探讨5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对德保黑猪手工克隆(HMC)重构胚胎体外发育效果的影响,本研究分别从供体细胞和重构胚入手,比较了5个不同处理浓度(0、5、10、20和40nmol/L)5-Aza-CdR处理HMC重构胚的体外发育效果,筛选最佳处理浓... 为了探讨5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对德保黑猪手工克隆(HMC)重构胚胎体外发育效果的影响,本研究分别从供体细胞和重构胚入手,比较了5个不同处理浓度(0、5、10、20和40nmol/L)5-Aza-CdR处理HMC重构胚的体外发育效果,筛选最佳处理浓度;在最佳浓度下比较5个不同处理时间(0、24、48、72和96h)对HMC重构胚的体外发育效果,筛选最佳处理时间;用4个不同浓度(0、0.25、0.5和1μmol/L)5-Aza-CdR结合最佳浓度和最佳时间处理供体和重构胚,比较其体外发育潜能。结果显示,与空白对照组相比,5、10、20和40nmol/L5-Aza-CdR处理72h对重构胚卵裂率均无显著差异(P>0.05),20nmol/L 5-Aza-CdR处理能显著提高重构胚的囊胚率(P<0.05),10和20nmol/L 5-Aza-CdR处理均能显著提高囊胚细胞数(P<0.05),其中以20nmol/L 5-AzaCdR效果最佳;与空白对照组相比,利用20nmol/L 5-Aza-CdR处理HMC重构胚72h能显著提高重构胚的囊胚率和囊胚细胞数(P<0.05),其余处理时间对重构胚卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数均无显著影响(P>0.05);在囊胚的最佳处理浓度(20nmol/L)和最佳处理时间(72h)下,结合供体的4个处理浓度(0、0.25、0.5和1μmol/L),同时处理重构胚和供体,各处理组HMC重构胚的发育潜能均有提高,但效果均不显著(P>0.05),其中0.25～0.5μmol/L 5-Aza-CdR处理效果较佳。综上表明,适宜浓度(0.25～0.5μmol/L)的DNA甲基化酶抑制剂5-AzaCdR处理供体细胞72h并结合20nmol/L 5-Aza-CdR处理重构胚72h均能有效提高德保黑猪HMC重构胚胎的体外发育潜能,该结果可为今后研究德保黑猪HMC胚胎DNA甲基化调控机制提供参考。 展开更多
关键词 5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR) 德保黑猪 手工克隆(HMC) 发育效果
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甲基化酶抑制剂5-Aza-CdR处理对德保猪手工克隆胚胎体外发育潜能的影响 被引量：3
2
作者 陆杏蓉 孙俊铭 +5 位作者 李志鹏 李兰玉 谢炳坤 刘庆友 石德顺 崔奎青 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1274-1281,共8页
供体细胞的不完全重编程是动物克隆效率低的主要原因。本研究采用不同浓度(0.00(对照)、0.25、0.50和1.00μmol·L^(-1))的DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理德保猪耳成纤维... 供体细胞的不完全重编程是动物克隆效率低的主要原因。本研究采用不同浓度(0.00(对照)、0.25、0.50和1.00μmol·L^(-1))的DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理德保猪耳成纤维细胞,将处理后成纤维细胞作供体进行手工克隆。结果显示:各处理组细胞生长曲线均呈"S"型,其中0.25μmol·L^(-1)组细胞生长曲线与对照组最相近。随着5-Aza-CdR浓度增加,细胞均有不同程度的畸变、生长抑制甚至致死。0.00~0.50μmol·L^(-1)5-Aza-CdR处理对德保猪成纤维细胞不会显著改变其细胞染色体整倍性。5-Aza-CdR不同程度下调了德保猪耳成纤维细胞中Dnmtl、Tet1、Tet2和Tet3的相对表达,对Dnmt1、Tet1和Tet3表达量的下调呈剂量相关。以处理后成纤维细胞作供体,猪手工克隆重构胚体外发育的卵裂率(24、48 h)和桑椹胚率各组间差异不显著(P>0.05),其中0.25μmol·L^(-1)组和0.50μmol·L^(-1)组囊胚发育率显著高于1.00μmol·L^(-1)组(P<0.05),而与对照组差异不显著(P>0.05)。0.50μmol·L^(-1)组囊胚细胞数显著高于对照组和1.00μmol·L^(-1)组(P<0.05),而与0.25μmol·L^(-1)组之间差异不显著(P>0.05)。综上表明:高浓度5-Aza-CdR对德保猪成纤维细胞增殖和染色体具有副作用,低浓度(≤0.25μmol·L^(-1))的5-Aza-CdR可用于供体处理以降低克隆胚胎甲基化水平及提高手工克隆猪胚胎发育潜能。 展开更多
关键词 手工克隆 5-AZA-CDR 重编程
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DNA甲基化酶抑制剂5-Aza-CdR对多能基因及甲基化相关基因在徒手克隆胚胎中表达模式的影响 被引量：2
3
作者 陆杏蓉 李志鹏 +5 位作者 孙俊铭 吕玲燕 许钟峯 刘庆友 石德顺 崔奎青 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期2240-2248,共9页
本试验通过实时荧光定量PCR方法对多能基因Oct4和Nanog及DNA甲基化相关基因Dnmt1和Tets在徒手克隆(handmade cloning,HMC)胚胎中的表达模式进行初步研究,并探讨5-Aza-CdR处理重构胚对这些基因表达模式的影响。结果显示,Oct4、Nanog和Tet... 本试验通过实时荧光定量PCR方法对多能基因Oct4和Nanog及DNA甲基化相关基因Dnmt1和Tets在徒手克隆(handmade cloning,HMC)胚胎中的表达模式进行初步研究,并探讨5-Aza-CdR处理重构胚对这些基因表达模式的影响。结果显示,Oct4、Nanog和Tet3的表达在2细胞时期达到顶峰,Dnmt1和Tet2基因的表达随HMC胚胎发育而下降,而Tet1基因随HMC胚胎发育表达上升。使用5-Aza-CdR处理重构胚没有改变Oct4、Tet1和Tet3基因的表达模式,使Nanog基因在胚胎发育初期表达增加,Dnmt1和Tet2基因在胚胎发育初期表达降低。研究初步确立了Oct4、Nanog、Dnmt1和Tets基因在HMC胚胎的表达模式,5-Aza-CdR对重构胚的处理可对HMC胚胎的甲基化模式产生影响。 展开更多
关键词 徒手克隆 5-AZA-CDR 基因 表达模式
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