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5-AzadC联合TSA对人胃癌SGC-7901细胞生长及Reprimo基因表达的影响
被引量：
5
1
作者
王海
胡世莲
+5 位作者
沈干
孙玉蓓
沈国栋
徐维平
黄毕林
方中良
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2012年第1期1-5,共5页
目的探讨5-氮杂2-脱氧胞苷(5-AzadC)联合曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌SGC-7901细胞生长及Reprimo基因表达的影响。方法 SGC-7901细胞分为对照组、5-Aza-dC、TSA、5-AzadC+TSA组,MTS法测定各组药物对其生长的影响,RT-PCR和Western Blot法分...
目的探讨5-氮杂2-脱氧胞苷(5-AzadC)联合曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌SGC-7901细胞生长及Reprimo基因表达的影响。方法 SGC-7901细胞分为对照组、5-Aza-dC、TSA、5-AzadC+TSA组,MTS法测定各组药物对其生长的影响,RT-PCR和Western Blot法分析SGC-7901细胞Rep-rimo基因mRNA和蛋白表达情况。结果 5-AzadC和(或)TSA分别作用24、48、60、72 h后均抑制细胞生长,两药联合组比单药组抑制率显著增强,并且随着药物浓度增加和作用时间延长,抑制率增强更加显著;5-AzadC和(或)TSA干预胃癌细胞72 h后,联合用药组和单药组比较,Reprimo mRNA和蛋白的表达显著增强(P<0.05)。结论 5-AzadC联合TSA干预可抑制SGC-7901细胞生长,抑癌基因Reprimo再表达发挥抑癌作用。
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关键词
曲古抑菌素A
5-azadc
SGC-7901细胞
Reprimo基因中
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职称材料
5-Azadc和TSA对鸡Nanog基因启动活性及ESC多能性维持的影响
被引量：
2
2
作者
张亚妮
王颖洁
+7 位作者
左其生
李东
张蕾
汤贝贝
连超
毕瑜林
张文慧
李碧春
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第12期2176-2184,共9页
旨在克隆如皋黄鸡Nanog基因启动子,并构建含有双荧光素酶报告基因的表达载体进行启动子活性分析,找出该基因启动子的核心调控区;探索甲基化抑制剂5-Azadc(5-Aza-2′-deoxycytidine)或曲古抑菌素(Trichostatin A,TSA)对Nanog基因启动活...
旨在克隆如皋黄鸡Nanog基因启动子,并构建含有双荧光素酶报告基因的表达载体进行启动子活性分析,找出该基因启动子的核心调控区;探索甲基化抑制剂5-Azadc(5-Aza-2′-deoxycytidine)或曲古抑菌素(Trichostatin A,TSA)对Nanog基因启动活性及其ESC体外培养条件下多能性维持的影响,为初步阐明Nanog基因的表达调控机制提供理论依据。PCR扩增Nanog基因不同长度片段的启动子序列,定向克隆至pGL3-basic载体和pEGFP-N1构建重组载体;将重组载体转染DF-1细胞后,48h收集蛋白,采用双荧光素酶报告基因检测系统测定其转录活性,确定基本转录调控区;将重组载体转染DF-1细胞后添加5-Azadc或TSA对Nanog基因进行诱导表达,并通过双荧光素酶报告基因检测系统,分析其对Nanog基因启动子活性的影响。选取生长至第3代的ESC,培养基中添加最适浓度的5-Azadc和TSA,每隔两天观察细胞,分析其对ESC体外多能性维持的影响,并对诱导至第10天的细胞进行间接免疫荧光检测。结果表明,成功构建3个片段的双荧光素酶报告基因表达载体;双荧光素酶活性检测结果显示,pGL3/1967活性最强;分别添加或者联合添加5-Azadc和TSA均可使Nanog基因的转录活性增强;5-Azadc和TSA诱导对ESC体外培养条件下多能性维持的影响结果显示,诱导6d后,对照组细胞大量分化,细胞克隆无法维持,而5-Azadc和TSA诱导组克隆明显,5-Azadc+TSA联合诱导组细胞克隆数量显著多于对照组;诱导至第10天,对照组细胞完全分化,没有细胞克隆,而诱导组存在大量细胞克隆,联合诱导组克隆数量显著多于其他两组;SSEA-1间接免疫荧光结果显示,对照组没有明显的ESC克隆,而5-Azadc组和联合诱导组细胞克隆明显,综上表明,5-Azadc和TSA可有效地通过提高Nanog基因的表达而维持鸡ESC在体外培养过程中的多能性。
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关键词
NANOG基因
启动子
5-azadc
TSA
双荧光素酶活性检测系统
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职称材料
鸡RIPK2基因启动子核心区域及生物信息学分析
被引量：
5
3
作者
马予怡
杨业新
+2 位作者
李欢
孙长花
孙红艳
《中国家禽》
北大核心
2022年第2期10-18,共9页
为了对前期高通量测序筛选出的抗禽致病性大肠杆菌鸡中高表达RIPK2基因进行结构和蛋白功能探析,试验通过PCR技术克隆鸡RIPK2起始密码子前3 201 bp的启动子区,构建系列启动子区缺失载体,转染HD11细胞,双荧光素酶试验检测启动子核心区域;5...
为了对前期高通量测序筛选出的抗禽致病性大肠杆菌鸡中高表达RIPK2基因进行结构和蛋白功能探析,试验通过PCR技术克隆鸡RIPK2起始密码子前3 201 bp的启动子区,构建系列启动子区缺失载体,转染HD11细胞,双荧光素酶试验检测启动子核心区域;5-Azadc、TSA或5-Azadc和TSA联合处理鸡RIPK2启动子;并结合生物信息学技术对鸡RIPK2蛋白的理化性质进行系统分析。结果显示:通过PCR技术成功克隆鸡RIPK2启动子区不同片段,单、双酶切测序结果准确;-2 300~+38 bp区域是鸡RIPK2基因启动子的基本活性区域,-2 300~-1 839 bp之间存在AP-1、CEBPA和NFκB等重要正调控元件。用5-Azadc、TSA以及5-Azadc和TSA联合分别处理鸡RIPK2启动子,均可提高其转录活性。生物信息学分析表明:鸡RIPK2蛋白在细胞核中表达;在生物进化进程中物种间保守性一般,禽类中保守性很高;存在自身磷酸化位点。试验结果为进一步研究鸡RIPK2基因转录调控机制和蛋白功能奠定了基础。
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关键词
鸡RIPK2基因
启动子
5-azadc
TSA
生物信息学
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职称材料
题名
5-AzadC联合TSA对人胃癌SGC-7901细胞生长及Reprimo基因表达的影响
被引量：
5
1
作者
王海
胡世莲
沈干
孙玉蓓
沈国栋
徐维平
黄毕林
方中良
机构
安徽医科大学附属省立医院老年病科
安徽省委机关医院老年病科
安徽医科大学附属省立医院肿瘤科
安徽医科大学附属省立医院分子生物学实验室
安徽医科大学附属省立医院药剂科
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2012年第1期1-5,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:81071808)
安徽省卫生厅资助项目(编号:09A083)
文摘
目的探讨5-氮杂2-脱氧胞苷(5-AzadC)联合曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌SGC-7901细胞生长及Reprimo基因表达的影响。方法 SGC-7901细胞分为对照组、5-Aza-dC、TSA、5-AzadC+TSA组,MTS法测定各组药物对其生长的影响,RT-PCR和Western Blot法分析SGC-7901细胞Rep-rimo基因mRNA和蛋白表达情况。结果 5-AzadC和(或)TSA分别作用24、48、60、72 h后均抑制细胞生长,两药联合组比单药组抑制率显著增强,并且随着药物浓度增加和作用时间延长,抑制率增强更加显著;5-AzadC和(或)TSA干预胃癌细胞72 h后,联合用药组和单药组比较,Reprimo mRNA和蛋白的表达显著增强(P<0.05)。结论 5-AzadC联合TSA干预可抑制SGC-7901细胞生长,抑癌基因Reprimo再表达发挥抑癌作用。
关键词
曲古抑菌素A
5-azadc
SGC-7901细胞
Reprimo基因中
Keywords
trichostatin A
5
-Aza-2′-deoxycytidine SGC-7901 gastric cancer cell Reprimo gene
分类号
R735.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
5-Azadc和TSA对鸡Nanog基因启动活性及ESC多能性维持的影响
被引量：
2
2
作者
张亚妮
王颖洁
左其生
李东
张蕾
汤贝贝
连超
毕瑜林
张文慧
李碧春
机构
扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第12期2176-2184,共9页
基金
国家自然科学基金(31301959
31272429
+3 种基金
31472087)
高等学校博士学科点专项科研基金(20123250120009)
中国博士后基金((2012M511326))
江苏高校优势学科建设工程资助项目
文摘
旨在克隆如皋黄鸡Nanog基因启动子,并构建含有双荧光素酶报告基因的表达载体进行启动子活性分析,找出该基因启动子的核心调控区;探索甲基化抑制剂5-Azadc(5-Aza-2′-deoxycytidine)或曲古抑菌素(Trichostatin A,TSA)对Nanog基因启动活性及其ESC体外培养条件下多能性维持的影响,为初步阐明Nanog基因的表达调控机制提供理论依据。PCR扩增Nanog基因不同长度片段的启动子序列,定向克隆至pGL3-basic载体和pEGFP-N1构建重组载体;将重组载体转染DF-1细胞后,48h收集蛋白,采用双荧光素酶报告基因检测系统测定其转录活性,确定基本转录调控区;将重组载体转染DF-1细胞后添加5-Azadc或TSA对Nanog基因进行诱导表达,并通过双荧光素酶报告基因检测系统,分析其对Nanog基因启动子活性的影响。选取生长至第3代的ESC,培养基中添加最适浓度的5-Azadc和TSA,每隔两天观察细胞,分析其对ESC体外多能性维持的影响,并对诱导至第10天的细胞进行间接免疫荧光检测。结果表明,成功构建3个片段的双荧光素酶报告基因表达载体;双荧光素酶活性检测结果显示,pGL3/1967活性最强;分别添加或者联合添加5-Azadc和TSA均可使Nanog基因的转录活性增强;5-Azadc和TSA诱导对ESC体外培养条件下多能性维持的影响结果显示,诱导6d后,对照组细胞大量分化,细胞克隆无法维持,而5-Azadc和TSA诱导组克隆明显,5-Azadc+TSA联合诱导组细胞克隆数量显著多于对照组;诱导至第10天,对照组细胞完全分化,没有细胞克隆,而诱导组存在大量细胞克隆,联合诱导组克隆数量显著多于其他两组;SSEA-1间接免疫荧光结果显示,对照组没有明显的ESC克隆,而5-Azadc组和联合诱导组细胞克隆明显,综上表明,5-Azadc和TSA可有效地通过提高Nanog基因的表达而维持鸡ESC在体外培养过程中的多能性。
关键词
NANOG基因
启动子
5-azadc
TSA
双荧光素酶活性检测系统
Keywords
Nanog
promoter
5-azadc
TSA
dual luciferase activity system
分类号
S831.2 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
鸡RIPK2基因启动子核心区域及生物信息学分析
被引量：
5
3
作者
马予怡
杨业新
李欢
孙长花
孙红艳
机构
扬州大学动物科学与技术学院
扬州市职业大学生物与化工工程学院
中国教育部国际农业与农产品安全研究联合实验室
出处
《中国家禽》
北大核心
2022年第2期10-18,共9页
基金
国家自然科学青年基金(31802053)
江苏省自然科学青年基金(BK20180907)
+5 种基金
中国博士后面上基金(2019M661950)
江苏省博士后面上基金(137070510)
扬州市省自然科学青年基金(YZ2017104)
扬州大学大学生科创基金(X20200635)
江苏省高校“青蓝工程”资助项目
扬州市第四期“英才培育计划”优秀教育人才资助项目。
文摘
为了对前期高通量测序筛选出的抗禽致病性大肠杆菌鸡中高表达RIPK2基因进行结构和蛋白功能探析,试验通过PCR技术克隆鸡RIPK2起始密码子前3 201 bp的启动子区,构建系列启动子区缺失载体,转染HD11细胞,双荧光素酶试验检测启动子核心区域;5-Azadc、TSA或5-Azadc和TSA联合处理鸡RIPK2启动子;并结合生物信息学技术对鸡RIPK2蛋白的理化性质进行系统分析。结果显示:通过PCR技术成功克隆鸡RIPK2启动子区不同片段,单、双酶切测序结果准确;-2 300~+38 bp区域是鸡RIPK2基因启动子的基本活性区域,-2 300~-1 839 bp之间存在AP-1、CEBPA和NFκB等重要正调控元件。用5-Azadc、TSA以及5-Azadc和TSA联合分别处理鸡RIPK2启动子,均可提高其转录活性。生物信息学分析表明:鸡RIPK2蛋白在细胞核中表达;在生物进化进程中物种间保守性一般,禽类中保守性很高;存在自身磷酸化位点。试验结果为进一步研究鸡RIPK2基因转录调控机制和蛋白功能奠定了基础。
关键词
鸡RIPK2基因
启动子
5-azadc
TSA
生物信息学
Keywords
chicken RIPK2 gene
promoter
5-azadc
TSA
bioinformatics
分类号
S831.2 [农业科学—畜牧学]
在线阅读
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
5-AzadC联合TSA对人胃癌SGC-7901细胞生长及Reprimo基因表达的影响
王海
胡世莲
沈干
孙玉蓓
沈国栋
徐维平
黄毕林
方中良
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2012
5
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下载PDF
职称材料
2
5-Azadc和TSA对鸡Nanog基因启动活性及ESC多能性维持的影响
张亚妮
王颖洁
左其生
李东
张蕾
汤贝贝
连超
毕瑜林
张文慧
李碧春
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
鸡RIPK2基因启动子核心区域及生物信息学分析
马予怡
杨业新
李欢
孙长花
孙红艳
《中国家禽》
北大核心
2022
5
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