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5′UTR序列对DR5::GUS基因瞬时表达的影响
被引量：
4
1
作者
王亚红
赵燕
+2 位作者
彭彦
刘晓柱
张学文
《湖南农业大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期146-149,共4页
利用生长素响应原件(DR5)构建了DR5::GUS报告基因表达载体,并在载体构建时,对GUS的5′UTR序列进行2种设计:一种是利用载体GUS基因原有的5′UTR构建成pBI121-DR5::GUS;另一种采用植物增强表达的常用原件烟草花叶病毒(TMV)的5′端序列(Ω...
利用生长素响应原件(DR5)构建了DR5::GUS报告基因表达载体,并在载体构建时,对GUS的5′UTR序列进行2种设计:一种是利用载体GUS基因原有的5′UTR构建成pBI121-DR5::GUS;另一种采用植物增强表达的常用原件烟草花叶病毒(TMV)的5′端序列(Ω′)替换GUS基因原有的5′UTR序列,构建成pBI121-DR5(Ω′)::GUS。将2种载体转化根癌农杆菌后,采用烟草叶片注射浸染的瞬时表达检测法对2个载体的植物表达效果进行检测,2种载体分别转化烟草叶片2 d后,对浸染的叶盘进行GUS染色分析,pBI121-DR5::GUS的转化叶片有明显的GUS反应,而pBI121-DR5(Ω′)::GUS的转化叶片则无GUS反应。分离注射浸染部位叶盘RNA后,对GUS特异引物进行RT-PCR分析,2种转化的基因都已有效转录出RNA,但前者能翻译出相应的Ω-葡萄糖苷酸酶,后者则不能完成翻译过程,说明Ω′序列的引入并未有效提高GUS基因的表达,反而抑制了mRNA的翻译。
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关键词
5′非编码区
生长素基因报告系统
瞬时表达
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职称材料
猪萨佩罗病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立
被引量：
4
2
作者
李倩倩
赵福杰
+2 位作者
丁庆文
张云飞
郑兰兰
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2021年第11期10-16,共7页
【目的】建立快速、特异、灵敏的猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)TaqMan实时荧光定量(RT-qPCR)检测方法,为临床快速检测PSV提供新方法。【方法】参照GenBank中PSV的全基因序列,针对PSV 5′端保守区设计1对特异性引物,PCR扩增目...
【目的】建立快速、特异、灵敏的猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)TaqMan实时荧光定量(RT-qPCR)检测方法,为临床快速检测PSV提供新方法。【方法】参照GenBank中PSV的全基因序列,针对PSV 5′端保守区设计1对特异性引物,PCR扩增目的片段,将目的片段克隆至pMD-18T载体,构建阳性重组质粒,并以阳性质粒标准品为模板,建立标准曲线。在此基础上,设计特异性引物与探针,进行反应体系和反应条件优化,建立PSV TaqMan RT-qPCR检测方法,并对方法的敏感性、特异性和重复性进行验证。应用建立的方法对2018-2019年在河南不同地区猪场收集的83份样品(粪便样品39份,肠道样品44份)进行检测。【结果】建立了PSV TaqMan RT-qPCR检测方法,该方法的灵敏度为3.88×10^(1)拷贝/μL;与猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪δ冠状病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒均无交叉反应,特异性良好;批内与批间变异系数均小于1.0%,重复性较好。临床样品检测结果表明,TaqMan RT-qPCR检测PSV呈阳性的样品有31份(22份粪便样品,9份肠道样品)检出率为37.3%(31/83),显著高于普通PCR检测结果(检出率12.0%(10/83))。【结论】建立了TaqMan RT-qPCR检测方法,该方法灵敏度高,特异性好。
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关键词
猪萨佩罗病毒
5′非编码区
TaqMan实时荧光定量PCR
河南
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职称材料
题名
5′UTR序列对DR5::GUS基因瞬时表达的影响
被引量：
4
1
作者
王亚红
赵燕
彭彦
刘晓柱
张学文
机构
湖南农业大学生物科学技术学院
出处
《湖南农业大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期146-149,共4页
基金
湖南省教育厅项目(SCX1103)
文摘
利用生长素响应原件(DR5)构建了DR5::GUS报告基因表达载体,并在载体构建时,对GUS的5′UTR序列进行2种设计:一种是利用载体GUS基因原有的5′UTR构建成pBI121-DR5::GUS;另一种采用植物增强表达的常用原件烟草花叶病毒(TMV)的5′端序列(Ω′)替换GUS基因原有的5′UTR序列,构建成pBI121-DR5(Ω′)::GUS。将2种载体转化根癌农杆菌后,采用烟草叶片注射浸染的瞬时表达检测法对2个载体的植物表达效果进行检测,2种载体分别转化烟草叶片2 d后,对浸染的叶盘进行GUS染色分析,pBI121-DR5::GUS的转化叶片有明显的GUS反应,而pBI121-DR5(Ω′)::GUS的转化叶片则无GUS反应。分离注射浸染部位叶盘RNA后,对GUS特异引物进行RT-PCR分析,2种转化的基因都已有效转录出RNA,但前者能翻译出相应的Ω-葡萄糖苷酸酶,后者则不能完成翻译过程,说明Ω′序列的引入并未有效提高GUS基因的表达,反而抑制了mRNA的翻译。
关键词
5′非编码区
生长素基因报告系统
瞬时表达
Keywords
5′
UTR
DR
5
：：GUS
transient expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
猪萨佩罗病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立
被引量：
4
2
作者
李倩倩
赵福杰
丁庆文
张云飞
郑兰兰
机构
河南农业大学动物医学院
河南省动物性食品安全重点实验室
出处
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2021年第11期10-16,共7页
基金
国家重点研发计划项目(2018YFD0501205)。
文摘
【目的】建立快速、特异、灵敏的猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)TaqMan实时荧光定量(RT-qPCR)检测方法,为临床快速检测PSV提供新方法。【方法】参照GenBank中PSV的全基因序列,针对PSV 5′端保守区设计1对特异性引物,PCR扩增目的片段,将目的片段克隆至pMD-18T载体,构建阳性重组质粒,并以阳性质粒标准品为模板,建立标准曲线。在此基础上,设计特异性引物与探针,进行反应体系和反应条件优化,建立PSV TaqMan RT-qPCR检测方法,并对方法的敏感性、特异性和重复性进行验证。应用建立的方法对2018-2019年在河南不同地区猪场收集的83份样品(粪便样品39份,肠道样品44份)进行检测。【结果】建立了PSV TaqMan RT-qPCR检测方法,该方法的灵敏度为3.88×10^(1)拷贝/μL;与猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪δ冠状病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒均无交叉反应,特异性良好;批内与批间变异系数均小于1.0%,重复性较好。临床样品检测结果表明,TaqMan RT-qPCR检测PSV呈阳性的样品有31份(22份粪便样品,9份肠道样品)检出率为37.3%(31/83),显著高于普通PCR检测结果(检出率12.0%(10/83))。【结论】建立了TaqMan RT-qPCR检测方法,该方法灵敏度高,特异性好。
关键词
猪萨佩罗病毒
5′非编码区
TaqMan实时荧光定量PCR
河南
Keywords
porcine sapelovirus(PSV)
5′
UTR
TaqMan RT-qPCR
Henan
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
5′UTR序列对DR5::GUS基因瞬时表达的影响
王亚红
赵燕
彭彦
刘晓柱
张学文
《湖南农业大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
猪萨佩罗病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立
李倩倩
赵福杰
丁庆文
张云飞
郑兰兰
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2021
4
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