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题名单链抗体2F5和4E10的原核表达、纯化和鉴定
被引量：1
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作者
刘秀侠
杨雄
陈红英
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机构
西北农林科技大学生命科学学院
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出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期177-183,共7页
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基金
教育部新世纪优秀人才计划(NCET-09-0625)
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文摘
为深入研究2F5和4E10抗体,构建了特异性识别HIV-1病毒MPER区域的2F5和4E10单链抗体的重组质粒,进行了融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用重叠PCR扩增及基因重组技术,获得2F5-scFv和4E10-scFv基因,将其插入原核表达载体pET-28a(+)上,获得表达质粒。转入大肠杆菌BL21(DE3)及Rosetta-gami2(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测发现,2F5-scFv和4E10-scFv在两种表达菌中均以包涵体形式存在,重组蛋白分子量分别约为27 kD、29 kD。变性条件下,利用镍离子螯合层析方法对包涵体蛋白进行纯化,经复性后获得可溶性单链抗体。ELISA检测表明,制备的单链抗体与原核和真核表达的MPER抗原都有特异性结合活性。
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关键词
HIV-1
GP41
MPER
2F5
4e10
单链抗体
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Keywords
HIV-1
SD41
MPER
2F5
4El0
Sinsle-chain antibodv
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分类号
R392
[医药卫生—免疫学]
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