O型口蹄疫病毒P1-2A3C基因在家蚕杆状病毒表达系统中的表达 被引量：4

1

作者 张韵 易咏竹 +2 位作者 李志勇 张志芳 柳纪省 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期148-153,共6页

口蹄疫是一种严重危害畜牧业生产的烈性传染病。为了促进O型口蹄疫病毒(FMDV)基因工程活载体疫苗的研制,选取O型FMDV编码序列中的衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因,插入家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组载体pVL-P1-2A3C,并... 口蹄疫是一种严重危害畜牧业生产的烈性传染病。为了促进O型口蹄疫病毒(FMDV)基因工程活载体疫苗的研制,选取O型FMDV编码序列中的衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因,插入家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组载体pVL-P1-2A3C,并与线性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕BmN细胞,获得重组病毒Bm-P1-2A3C。将重组病毒感染家蚕5龄幼虫,以双抗体夹心ELISA法和间接血凝方法检测血淋巴中的表达产物:目的蛋白在感染病毒后120 h的蚕血淋巴中表达量最高,抗原表达呈阳性的最大稀释倍数为1∶128。结果显示O型FMDV的P1-2A3C基因已在家蚕体内获得表达。 展开更多

关键词 O型口蹄疫病毒 基因工程疫苗 P1-2A3c基因 家蚕杆状病毒表达系统

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表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株的构建及筛选 被引量：2

2

作者 王建科 张云德 +7 位作者 张强 吴国华 颜新敏 朱海霞 李健 邵长春 朱彩珠 吴磊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期434-440,共7页

为构建和筛选表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株,用已构建的口蹄疫病毒O/Chi-na99毒株的EGFP-P7.5-P1-2A-3C基因整体通过平末端连接到KpnⅠ酶切后的线性载体pUC119-TK中,得到重组载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C。重... 为构建和筛选表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株,用已构建的口蹄疫病毒O/Chi-na99毒株的EGFP-P7.5-P1-2A-3C基因整体通过平末端连接到KpnⅠ酶切后的线性载体pUC119-TK中,得到重组载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C。重组载体通过缺失的TK基因与羊痘病毒弱毒株在BHK-21细胞中同源重组,用EGFP作为标记筛选出重组毒株,并进行PCR鉴定、抗原捕获ELISA试验检测及Western blot分析。结果显示该重组弱毒株能在1~10代BHK-21细胞中稳定传代,扩增出约3000bp片段,并经测序确证为基因P1-2A-3C;抗原捕获ELISA试验检测均为阳性;Western blot分析表明转移载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C在感染的GTPV AV41BHK-21细胞中表达的蛋白可被O型FMDV高免血清特异性识别,并具有反应原性。这些结果表明获得了表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的重组山羊痘弱毒株。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 启动子P7.5 P1-2A-3c基因 羊痘病毒

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含O型FMDVP1-2A、3C基因和EGFP基因表达盒的构建 被引量：2

3

作者 王建科 吴国华 +6 位作者 叶奕优 颜新敏 朱海霞 李健 朱彩珠 张强 王雯慧 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期15-20,共6页

采用RT-PCR方法分别扩增口蹄疫病毒O/China99毒株的P1-2A和3C基因,将P1-2A基因连接到pUC119载体,3C基因连接到pMD18-T载体,分别得到重组载体pUC119-P1-2A和pMD18-T-3C;将重组载体pUC119-P1-2A用HindⅢ、BamHⅠ酶切,重组载体pMD18-T-3C用... 采用RT-PCR方法分别扩增口蹄疫病毒O/China99毒株的P1-2A和3C基因,将P1-2A基因连接到pUC119载体,3C基因连接到pMD18-T载体,分别得到重组载体pUC119-P1-2A和pMD18-T-3C;将重组载体pUC119-P1-2A用HindⅢ、BamHⅠ酶切,重组载体pMD18-T-3C用BamHⅠ、NheⅠ酶切;利用酶切所得到的基因片段P1-2A、3C有共同的BamHⅠ酶切位点,实现基因P1-2A、3C的连接,构建重组载体pMD18-T-P1-2A-3C.将基因P1-2A-3C与启动EGFP表达的双向串连痘苗病毒启动子P7.5相连,构建载体p-EGFP-N1-P7.5-P1-2A-3C,并进行PCR扩增、酶切鉴定及序列测定.结果表明:试验成功构建了一侧启动表达P1-2A-3C基因,一侧启动表达标记基因EGFP的表达盒p-EGFP-N1-P7.5-P1-2A-3C. 展开更多

关键词 FMDV 启动子P7 5 P1—2A基因 3c基因

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鸭甲型肝炎病毒1型3C基因的原核表达与多抗的制备 被引量：3

4

作者 王安平 朱善元 王永娟 《江苏农业科学》 北大核心 2015年第8期205-207,共3页

以血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-1)SH株3C基因为序列设计1对特异性引物,RT-PCR方法进行扩增,克隆入原核表达载体p ET-32a,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下重组蛋白并获得成功表达,该重组蛋白分子量约为38 ku,能与多聚组氨酸标签单抗... 以血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-1)SH株3C基因为序列设计1对特异性引物,RT-PCR方法进行扩增,克隆入原核表达载体p ET-32a,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下重组蛋白并获得成功表达,该重组蛋白分子量约为38 ku,能与多聚组氨酸标签单抗发生特异性反应。将目的蛋白切胶免疫ICR小鼠,制备重组蛋白的多抗血清,经Western-blot分析证明,制备的抗血清能够与DHAV-1感染的SPF鸡胚尿囊液总蛋白发生特异反应。3C基因在大肠杆菌中可获得成功表达,制备的多抗血清可用于3C蛋白的检测。 展开更多

关键词 鸭甲型肝炎病毒 3c基因 原核表达 多抗

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共表达Asia1口蹄疫病毒P1-2A-3C基因和猪IL-18基因重组鸡痘病毒构建及表达 被引量：2

5

作者 鲁会军 霍晓伟 +3 位作者 任静强 常巧呈 金扩世 金宁一 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第6期30-35,共6页

为构建Asia1型口蹄疫重组鸡痘病毒疫苗,采集口蹄疫发病牛的水泡液及水泡皮,用RT-PCR法扩增出Asia 1型口蹄疫病毒的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切连接获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C。再将P1-2A... 为构建Asia1型口蹄疫重组鸡痘病毒疫苗,采集口蹄疫发病牛的水泡液及水泡皮,用RT-PCR法扩增出Asia 1型口蹄疫病毒的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切连接获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C。再将P1-2A-3C片段与pUTAL-IL18片段连接起来,构建鸡痘病毒中间转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-IL18。通过脂质体转染法,将pUTAL-P1-2A-3C-IL18与鸡痘病毒282E4株共感染染鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblasts,CEF),通过BrdU三次加压筛选,筛选出重组鸡病毒株vUTAL-P1-2A-3C-IL18。经RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定,证明所筛选的1株重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-3C基因。本研究为研制安全、高效的亚洲Ⅰ型FMD重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 Asia1口蹄疫病毒 鸡痘病毒载体 P1-2A基因 3c基因 IL-18基因 表达

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含O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的羊痘病毒弱毒株转移载体的构建 被引量：2

6

作者 王建科 张强 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第1期31-33,共3页

利用已构建的口蹄疫病毒O/China99毒株的pMD18-T-P1-2A-3C载体和p-EGFP-N1-P7.5载体,分别通过HindⅢ、NheⅠ酶切,将基因P1-2A-3C连接到线性载体p-EGFP-N1-P7.5,构建了载体p-EGFP-N1-P7.5-P1-2A-3C。将EGFP-P7.5-P1-2A-3C基因整体通过平... 利用已构建的口蹄疫病毒O/China99毒株的pMD18-T-P1-2A-3C载体和p-EGFP-N1-P7.5载体,分别通过HindⅢ、NheⅠ酶切,将基因P1-2A-3C连接到线性载体p-EGFP-N1-P7.5,构建了载体p-EGFP-N1-P7.5-P1-2A-3C。将EGFP-P7.5-P1-2A-3C基因整体通过平末端连接到KpnⅠ酶切后的载体pUC119-TK中,得到重组载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C。通过PCR扩增、酶切鉴定及序列测定。结果表明,成功构建了一侧启动表达P1-2A-3C基因,一侧启动表达标记基因EGFP的pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C转移载体。 展开更多

关键词 FMDV cPV EGFP P1-2A-3c基因

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共表达AsiaⅠ型口蹄疫病毒P1-2A和3C基因重组山羊痘病毒的构建及鉴定

7

作者 鞠厚斌 张强 +2 位作者 周锦萍 刘佩红 卫广森 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第5期87-91,共5页

将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因与启动绿色荧光蛋白双向串连痘苗病毒启动子相连,以KpnⅠ为插入位点,将整体基因片段插入山羊痘病毒转移载体骨架pUC119-TK之中,构建共表达重组山羊痘病毒转移载体pTK-P7.5-GFP-P1... 将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因与启动绿色荧光蛋白双向串连痘苗病毒启动子相连,以KpnⅠ为插入位点,将整体基因片段插入山羊痘病毒转移载体骨架pUC119-TK之中,构建共表达重组山羊痘病毒转移载体pTK-P7.5-GFP-P12A3C。与疫苗弱毒株山羊痘病毒共转染BHK21细胞,经绿色荧光筛选,RT-PCR检测,成功获得能正确表达目的蛋白的重组山羊痘病毒株vTK-3CP1-GFP。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 山羊痘病毒 P12A基因 3c基因 TK基因

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采用GFP标记筛选抑制多血清型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA

8

作者 张志彬 张健 +3 位作者 贺明 高倍瑶 贾琪 张立春 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第8期1-5,共5页

为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析,筛选出潜在抗多血清型siRNA位点;通过体外合成A型、O型和Asia I型病毒部分基因序列,制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融... 为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析,筛选出潜在抗多血清型siRNA位点;通过体外合成A型、O型和Asia I型病毒部分基因序列,制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融合表达载体;将化学合成的siRNA与融合表达载体共转染,通过GFP观察、Western blot和实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)方法检验目标siRNA对融合基因的抑制效率。生物信息分析发现,多血清型口蹄疫病毒3C基因高度保守并存在潜在siRNA作用靶位,GFP-3C融合表达载体成功构建,与化学合成的siRNA1-3C共转染293T细胞,GFP观察发现,siRNA1-3C可有效抑制来源于A型、O型和Asia I型3C基因的GFP-3C荧光信号且持续时间达72 h,Western blot检测证实此结果。qRT-PCR检测发现,siRNA1-3C对3个GFP-3C融合基因转录水平抑制效率超85%,且作用可维持72 h。本试验利用GFP作为筛选标记成功筛选出1个作用于FMDV 3C基因的siRNA,为开发多血清型口蹄疫抑制剂提供参考依据。 展开更多

关键词 小干扰RNA(siRNA) 口蹄疫(FMD) 绿色荧光蛋白(GFP) 多血清型 3c基因

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口蹄疫病毒P1和3C基因的联合表达

9

作者 杨启鸿 李华春 《动物医学进展》 CSCD 2008年第5期106-108,共3页

口蹄疫病毒P1和3C基因联合表达能够产生完整的口蹄疫病毒衣壳蛋白,并形成无核酸的与原病毒外形一致的全新的空衣壳,该空衣壳具有与口蹄疫病毒颗粒相同的抗原特性,免疫动物后能诱导产生抗口蹄疫病毒特异性中和抗体,是开发安全高效口蹄疫... 口蹄疫病毒P1和3C基因联合表达能够产生完整的口蹄疫病毒衣壳蛋白,并形成无核酸的与原病毒外形一致的全新的空衣壳,该空衣壳具有与口蹄疫病毒颗粒相同的抗原特性,免疫动物后能诱导产生抗口蹄疫病毒特异性中和抗体,是开发安全高效口蹄疫重组疫苗的理想途径。论文对口蹄疫P1、3C基因及其对应的蛋白功能和P1、3C基因联合表达研究进行综述,对P1、3C基因联合表达重组疫苗的潜在优点进行了讨论。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 P1和3c基因 联合表达

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Mex3c基因敲除对小鼠胚胎神经管发育的影响及其机制

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作者 路志国 吴晓婷 +3 位作者 王凯 张波 汪涌 杜勇 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1029-1037,共9页

目的研究Mex3c基因敲除对小鼠胚胎神经管发育的影响及其可能的机制。方法利用NCBI数据库分析Mex3c基因在小鼠各个组织中的表达情况,荧光原位杂交技术(FISH)检测Mex3c在Mex3c+/+小鼠不同发育时期(E12.5 d、E14.5 d)神经管中的表达情况。... 目的研究Mex3c基因敲除对小鼠胚胎神经管发育的影响及其可能的机制。方法利用NCBI数据库分析Mex3c基因在小鼠各个组织中的表达情况,荧光原位杂交技术(FISH)检测Mex3c在Mex3c+/+小鼠不同发育时期(E12.5 d、E14.5 d)神经管中的表达情况。将性发育成熟的小鼠按照Mex3c+/-雄∶雌(1∶1)的比例进行合笼繁殖,取繁殖的胚胎,采用PCR鉴定小鼠基因型,按照基因型分为3组:野生型组(Mex3c+/+,WT组)、纯合子敲除组(Mex3c-/-,KO组)与杂合子敲除组(Mex3c+/-),采用HE染色观察3组胚胎神经管的发育情况;免疫荧光染色及Western blotting检测WT组、KO组的胚胎神经干细胞增殖及凋亡情况;透射电镜观察WT组、KO组神经管发育及线粒体的超微结构。提取WT组、KO组神经管的RNA,进行RNA-seq测序,利用R.3.6.3对差异表达基因进行KEGG信号通路富集分析,并采用RT-qPCR验证测序结果。结果NCBI数据库分析及FISH检测结果显示,Mex3c基因主要表达于胚胎的中枢神经系统。HE染色结果显示,在E12.5 d、E13.5 d,胚胎神经管的发育在KO组、WT组及杂合子敲除组无明显差异;而在E14.5 d,KO组较WT组的胚胎神经管发育迟缓,表型明显异常,据此选择E14.5 d的KO组及WT组胚胎神经管组织进行后续实验。免疫荧光染色结果显示,KO组PCNA阳性细胞率明显低于WT组(P<0.001)。Western blotting检测结果显示,KO组Bax/Bcl-2比值高于WT组(P<0.01)。透射电镜观察显示,与WT组比较,KO组突触间隙消失,胚胎神经管的线粒体水肿,线粒体嵴断裂,结构明显异常。RNA-seq测序分析结果显示,共获得377个差异基因,其中表达上调101个,表达下调276个。KEGG信号通路富集分析发现,差异基因的主要信号通路富集于神经活性配体受体相互作用信号通路。RT-qPCR验证结果显示该信号通路中的Avpr1a、Drd1、Htr7、Sstr1、Oxtr、Gabra5 mRNA表达水平下调(P<0.05或P<0.01),与RNA-seq结果一致。结论Mex3c在小鼠胚胎神经管发育过程中起着重要作用,可能通过神经活性配体受体相互作用信号通路,参与调控神经干细胞的增殖及凋亡过程,进而影响神经管的发育。 展开更多

关键词 基因 Mex3c 神经管 发育异常 基因敲除

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NR3C2基因变异致新生儿假性醛固酮减少症1例报道

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作者 李俊鹤 张瑞 +1 位作者 刘庆旭 随素敏 《上海交通大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第7期934-938,共5页

假性醛固酮减少症Ⅰ型(pseudohypoaldosteronism typeⅠ,PHAⅠ)是一种罕见的遗传性疾病,主要由醛固酮受体缺乏、醛固酮与其受体结合减少或完全不能结合而引起,表现为新生儿时期出现低钠血症、高钾血症、代谢性酸中毒,伴有脱水、呕吐、... 假性醛固酮减少症Ⅰ型(pseudohypoaldosteronism typeⅠ,PHAⅠ)是一种罕见的遗传性疾病,主要由醛固酮受体缺乏、醛固酮与其受体结合减少或完全不能结合而引起,表现为新生儿时期出现低钠血症、高钾血症、代谢性酸中毒,伴有脱水、呕吐、体质量下降,甚至休克等。该病分为盐皮质激素受体突变的肾型PHAⅠ和上皮钠通道3个亚单位(α、β或γ)中任何一个突变的多脏器型PHAⅠ。肾型PHAⅠ是常染色体显性遗传,由醛固酮受体突变引起,伴有孤立的肾性失盐综合征,与多脏器型相比,临床症状较轻,且随着年龄增加,症状可改善。但不同患儿根据其失盐程度,症状有所差异,如未及时治疗,可能因反复脱水导致休克,甚至因高钾导致心脏骤停。目前研究发现人类盐皮质激素受体由NR3C2基因编码,位于4q31.1与4q31.2区域之间。该文报告1例新发NR3C2基因(4q31.22)变异所致的肾型PHAⅠ患儿,胎儿期检测出染色体异常,且在生后表现出高血压、高血钾和低钠血症,伴随血浆醛固酮水平显著升高(>2 000 pg/mL)。全基因染色体检测显示患儿存在NR3C2基因4q31.22区域微缺失,确诊为肾型PHAⅠ。口服浓氯化钠后电解质紊乱得以纠正,1个月后病情平稳。 展开更多

关键词 新生儿 假性醛固酮减少症Ⅰ型 NR3c2基因 高钾血症 低钠血症

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广金钱草C3H基因家族鉴定及不同品种表达分析

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作者 黄金恒 黄茜 +3 位作者 张家燕 周新裕 廖沛然 杨全 《生物技术通报》 北大核心 2025年第4期243-255,共13页

【目的】C3H家族基因在调控植物生长发育中起着重要作用,探究广金钱草C3H基因家族的特性及功能,为研究其在广金钱草生理和形态形成中的作用奠定基础。【方法】基于‘广药大1号’和野生广金钱草的转录组数据比较,鉴定广金钱草C3H家族基因... 【目的】C3H家族基因在调控植物生长发育中起着重要作用,探究广金钱草C3H基因家族的特性及功能,为研究其在广金钱草生理和形态形成中的作用奠定基础。【方法】基于‘广药大1号’和野生广金钱草的转录组数据比较,鉴定广金钱草C3H家族基因,利用生物信息技术分析基因的理化性质、染色体位置、系统发育关系、保守基序和结构域,以及使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析C3H家族基因在广金钱草不同组织和品种中的表达模式,并对广金钱草C3H基因与类黄酮合成关键基因进行相关性分析,同时测定不同品种茎尖、茎基总黄酮含量。【结果】广金钱草C3H基因家族的27个成员分布在9条染色体上,多编码碱性、不稳定和亲水性蛋白质。系统进化分析显示,广金钱草C3H家族基因分为3个组群,同一组群成员之间相对保守;保守基序和结构域分析显示,数量出现最多的motif与生长素调控相关,广金钱草C3H家族成员存在与ANKYR等结构域协同作用的情况。表达模式分析显示,广金钱草C3H家族基因主要在广金钱草的茎中发挥作用,且在‘广药大1号’茎尖处高表达。相关性分析发现,广金钱草C3H家族基因表达量与类黄酮生物合成关键基因表达量呈正相关。总黄酮含量测定发现,在茎尖部位,‘广药大1号’的总黄酮含量显著高于野生匍匐广金钱草,在茎基情况相反。【结论】GsC3H家族基因可能通过调控黄酮类化合物在茎段的生物合成间接影响‘广药大1号’广金钱草的农艺性状。 展开更多

关键词 c3H家族基因 广金钱草 表达分析 相关性分析 总黄酮 基因家族鉴定 ‘广药大1号’

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木薯C3H基因鉴定及应答菜豆黄单胞菌侵染表达模式分析

13

作者 李敏 魏炳峥 +2 位作者 贾素行 陈银华 李春霞 《热带作物学报》 北大核心 2025年第8期1795-1805,共11页

木薯是世界三大薯类作物之一,同时也是热带、亚热带地区的重要粮食作物。木薯在生长发育过程中易遭受病虫害影响,其中细菌性枯萎病(cassava bacterial blight,CBB)是为害木薯的重要病害。CCCH(C3H)型锌指蛋白广泛存在于各种生物体内,不... 木薯是世界三大薯类作物之一,同时也是热带、亚热带地区的重要粮食作物。木薯在生长发育过程中易遭受病虫害影响,其中细菌性枯萎病(cassava bacterial blight,CBB)是为害木薯的重要病害。CCCH(C3H)型锌指蛋白广泛存在于各种生物体内,不仅参与植物生长发育、激素调控,同时也响应生物及非生物胁迫。在拟南芥、水稻、大豆、小麦、矮牵牛、棉花等植物中,部分C3H基因的功能已有报道,但木薯C3H基因功能还鲜有研究。本研究利用生物信息学工具分析木薯MeC3H基因家族成员的系统进化特征、染色体位置、基因结构、启动子顺式作用元件和共线性等,并利用转录组和实时荧光定量PCR(qPCR)技术研究木薯受病原菌(Xanthomonas phaseoli pv.manihotis,Xpm)侵染后,MeC3H基因的表达模式。结果表明:木薯共有89个MeC3H基因,命名为MeC3H01~MeC3H89,分布在18条不同的染色体上;系统进化树显示,这89个MeC3H蛋白分为4个亚家族;MeC3H基因启动子含有逆境、植物激素以及植物生长发育响应元件;共线性分析发现,有39对木薯C3H基因具有同源关系,表明在进化过程中可能通过复制扩增基因家族成员;通过转录组和实时荧光定量PCR分析发现,在Xpm处理后,部分C3H基因表达发生显著变化,其中MeC3H49、MeC3H42、MeC3H68的表达量显著上调,MeC3H35、MeC3H77、MeC3H36、MeC3H31、MeC3H86的表达量显著下调。本研究结果为进一步分析MeC3H基因的功能提供参考。 展开更多

关键词 木薯 c3H基因家族 基因表达 抗病响应 细菌性枯萎病

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慈竹C3H基因克隆及其生物信息学分析 被引量：11

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作者 周美娟 胡尚连 +4 位作者 曹颖 卢学琴 任鹏 吴晓宇 李晓瑞 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期38-46,共9页

香豆酸-3-羟化酶(C3H)是调控植物木质素生物合成的关键酶,本文以慈竹为材料,利用RT-PCR技术克隆慈竹C3H基因,并对其进行生物信息学分析,为通过基因工程手段降低工业用竹木质素含量奠定基础。结果表明,该cDNA序列全长为1 581 bp,编码区为... 香豆酸-3-羟化酶(C3H)是调控植物木质素生物合成的关键酶,本文以慈竹为材料,利用RT-PCR技术克隆慈竹C3H基因,并对其进行生物信息学分析,为通过基因工程手段降低工业用竹木质素含量奠定基础。结果表明,该cDNA序列全长为1 581 bp,编码区为1 539 bp,编码512个氨基酸,蛋白分子量为58.33KD,等电点为9.09;氨基酸序列和结构分析显示C3H有一个保守区域,即P450结构域。系统进化分析表明,该基因与毛竹和水稻的C3H基因具有很高的同源性。慈竹与毛竹和水稻C3H基因编码蛋白为亲水性蛋白,这三种编码蛋白很可能定位在内质网(膜)上,其编码蛋白的二级结构及三级结构都含有丰富的α-螺旋和无规卷曲,β-转角和延伸链的含量较少,都含有2个相对保守的无序化区域。该基因已在GenBank上注册,基因序列登录号为JF693629,可能与慈竹木质素的生物合成有关。 展开更多

关键词 慈竹 c3H基因 克隆 生物信息学分析

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ITPKC基因功能性SNP rs28493229与川崎病相关性的meta分析 被引量：7

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作者 彭茜 陈昌辉 +1 位作者 吴青 杨元 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期370-375,共6页

目的探讨1,4,5三磷酸肌醇3激酶C基因(ITPKC)功能性单核苷酸多态位点(SNP)rs28493229与川崎病(KD)并发冠状动脉损伤(CALs)的相关性。方法在中英文数据库中检索KD和/或CALs与ITPKC相关性研究的文献,根据纳入与排除标准筛选文献,获取截止2... 目的探讨1,4,5三磷酸肌醇3激酶C基因(ITPKC)功能性单核苷酸多态位点(SNP)rs28493229与川崎病(KD)并发冠状动脉损伤(CALs)的相关性。方法在中英文数据库中检索KD和/或CALs与ITPKC相关性研究的文献,根据纳入与排除标准筛选文献,获取截止2012年9月以前公开发表的病例对照研究资料,评价质量后采用RevMan 5.1软件进行meta分析。结果对纳入的9个ITPKC rs28493229等位基因与KD相关性的病例对照研究(3 292名KD患者与11 897名对照)进行meta分析,结果提示SNP的C等位基因与KD发生风险相关[P<0.001,OR=1.48,95%CI(1.23,1.79)]。rs28493229风险等位基因C的携带者(CG+CC)相对于GG个体,患病风险增加约45%[P=0.01,OR=1.45,95%CI(1.08,1.93)]。针对中国人群ITPKC rs28493229等位基因与KD相关性研究的综合分析提示相似的结果。未发现该SNP与KD合并CALs发生相关联的证据。统计分析未提示明显的发表偏倚。结论 ITPKC基因功能性SNP rs28493229的C等位基因可能增加KD的发生风险,ITPKC基因功能与KD的发生可能相关。目前有限数量的研究还缺乏证据提示该SNP风险等位基因是KD并发CALs的易感遗传标记。 展开更多

关键词 川崎病 冠状动脉损伤 1 4 5三磷酸肌醇3激酶c基因.单核苷酸多态性 META分析

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杨树木质素合成酶c3h基因的克隆及其序列分析 被引量：7

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作者 聂会忠 薛永常 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期889-894,共6页

根据CYP98A3(GenBank登录号为AY064170)cDNA序列保守区设计引物,从正在分化的2年生‘欧美杨107’次生木质部提取的总RNA经RT-PCR扩增出一基因片段,然后与pMD20-T载体连接。重组质粒经限制性内切酶酶切、特异引物PCR扩增和测序鉴定。结... 根据CYP98A3(GenBank登录号为AY064170)cDNA序列保守区设计引物,从正在分化的2年生‘欧美杨107’次生木质部提取的总RNA经RT-PCR扩增出一基因片段,然后与pMD20-T载体连接。重组质粒经限制性内切酶酶切、特异引物PCR扩增和测序鉴定。结果表明,扩增片段长度为994bp,其中包含一个长为495bp的开放阅读框,编码的氨基酸序列(登录号为CAP47423)与NCBI中AY064170的CYP98A3编码氨基酸序列的相似性为91%,初步断定其为CYP98A3家族中的一员,其cNDA序列GenBank登录号为AM920690。参照国内外已发表的部分植物的c3h基因序列,构建了c3h的遗传进化树,分析了不同植物c3h的遗传进化关系。 展开更多

关键词 杨树 木质素 c3h基因 进化

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程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3基因表达的研究 被引量：2

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作者 刘迪 倪和民 +5 位作者 顾美超 卢文瑾 盛熙晖 齐晓龙 王相国 郭勇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第2期514-520,共7页

试验旨在研究程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3蛋白的分布及转录水平的差异表达情况,为阐明哺乳动物胚胎在抗冻过程中的相关调控机制提供理论依据。试验选用ICR系雌性小鼠,从妊娠第5天小鼠子宫回收正常孵化囊胚;构建延迟... 试验旨在研究程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3蛋白的分布及转录水平的差异表达情况,为阐明哺乳动物胚胎在抗冻过程中的相关调控机制提供理论依据。试验选用ICR系雌性小鼠,从妊娠第5天小鼠子宫回收正常孵化囊胚;构建延迟着床模型获取小鼠休眠胚胎,利用激光共聚焦和实时荧光定量PCR技术对各组胚胎进行细胞免疫荧光和C3mRNA相对表达量的检测。结果发现,程序化冷冻前后的正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3在转录和翻译水平均有表达;正常孵化囊胚经冷冻处理后C3mRNA相对表达量显著上调(P<0.05);休眠胚胎冷冻后C3mRNA相对表达量与冷冻前相比显著下调(P<0.05);冷冻前休眠胚胎C3mRNA相对表达量显著高于冷冻前正常孵化囊胚(P<0.05);冷冻后休眠胚胎C3mRNA相对表达量显著低于冷冻后正常孵化囊胚(P<0.05)。结果表明,胚胎中C3基因在转录水平的下调表达对胚胎抗冻具有一定的积极作用,C3基因很可能参与了胚胎抗冻过程的相关调控。 展开更多

关键词 小鼠 囊胚 休眠胚胎 程序化冷冻 c3基因

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过表达C3AR1基因促进HL-60细胞迁移和侵袭 被引量：3

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作者 颜青 李争 +3 位作者 岑建农 陈苏宁 潘健 胡绍燕 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期1-7,共7页

目的:探讨C3AR1基因对人早幼粒细胞白血病细胞株(Human promyelocytic leukemia cells,HL-60)迁移及侵袭的作用和机制。方法:构建HL-60-C3AR1过度表达的细胞株并使其稳转表达。利用transwell小室进行迁移及侵袭实验,应用PCR array和流... 目的:探讨C3AR1基因对人早幼粒细胞白血病细胞株(Human promyelocytic leukemia cells,HL-60)迁移及侵袭的作用和机制。方法:构建HL-60-C3AR1过度表达的细胞株并使其稳转表达。利用transwell小室进行迁移及侵袭实验,应用PCR array和流式细胞术探讨其可能的机制。结果:合适C3AR1的HL-60细胞在C3a和SDF-1的作用下,其细胞迁移及侵袭能力较转染空载体细胞明显增强。PCR array检测发现,包括CCL2在内的16个基因显著上调,而4个基因显著性下调,但与CXCR4基因的表达无关。结论:C3a和SDF-1促进过表达的C3AR1细胞迁移和侵袭,其机制与调控CCL2等相关基因有关。 展开更多

关键词 c3AR1基因 急性粒细胞白血病 细胞迁移 细胞侵袭

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羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因在杆状病毒中的串联表达 被引量：2

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作者 于琳琳 贾红 +4 位作者 侯绍华 刘丹 丁敏 郭晓宇 朱鸿飞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第11期44-50,共7页

本研究通过构建含有3拷贝羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因的重组杆状病毒,旨在通过昆虫细胞表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白,为原核表达和真核表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白的免疫效果的比较奠定了基础。将细粒棘球蚴EG95s基因与3拷贝羊C3d... 本研究通过构建含有3拷贝羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因的重组杆状病毒,旨在通过昆虫细胞表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白,为原核表达和真核表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白的免疫效果的比较奠定了基础。将细粒棘球蚴EG95s基因与3拷贝羊C3d基因串联,插入pTarget载体,获得重组质粒pTarget-EG95-(C3d)3,利用BamHⅠ和XbaⅠ双酶切位点将目的基因EG95-(C3d)3克隆至Bac-to-Bac系统的转移载体pFastBac-Hta中,获得pFastBacHta-EG95-(C3d)3重组质粒,将该重组质粒转化含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中进行转座重组,获得携带3拷贝羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因的重组转座子rBacmid-EG95-(C3d)3,转染Sf9昆虫细胞后获得EG95-(C3d)3重组杆状病毒,并表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting进行重组蛋白的鉴定。同时利用昆虫细胞表达蛋白对羊棘球蚴病特异性抗体进行检测。结果表明,获得了EG95-(C3d)3重组杆状病毒,且EG95-(C3d)3重组融合蛋白在Sf9昆虫细胞得到了正确表达,大小约为132ku,Western blotting鉴定结果显示表达的EG95-(C3d)3重组融合蛋白能与细粒棘球蚴阳性血清产生特异性反应,表明EG95-(C3d)3基因表达产物具有免疫活性。同时表达蛋白对羊棘球蚴病特异性抗体有良好的敏感性。EG95-(C3d)3基因在昆虫细胞获得表达,为原核表达和真核表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白的免疫效果的比较,及细粒棘球蚴病的高效检测方法的建立奠定了基础。 展开更多

关键词 包虫病 EG95s基因 c3d基因 重组杆状病毒

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沉默CX3CL1基因对骨髓间充质干细胞生长及其趋化效应的影响 被引量：4

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作者 郝磊 田洪 +4 位作者 牟长河 张玉波 周虎传 宋川 刘磊 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期34-41,共8页

目的构建大鼠趋化因子CX3C的配体1(chemokine CX3C ligand 1,CX3CL1)基因慢病毒RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体,观测其沉默CX3CL1基因对骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,b MSCs)生长及其趋化效应的... 目的构建大鼠趋化因子CX3C的配体1(chemokine CX3C ligand 1,CX3CL1)基因慢病毒RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体,观测其沉默CX3CL1基因对骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,b MSCs)生长及其趋化效应的影响。方法首先分离、培养大鼠骨髓b MSCs,并予以流式细胞术检测鉴定。针对CX3CL1基因mRNA序列,筛选3个小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)靶点并予以合成。把合成的siRNA导入b MSCs,Western blot检测其对靶基因编码蛋白的抑制效应,以此明确最佳siRNA。设计与合成针对最佳siRNA序列的短发夹RNA(short hair RNA,shRNA),连入CD513B-1慢病毒载体,构建CD513B-1/CX3CL1 shRNA慢病毒,并行测序鉴定。测序正确者用293T细胞包装成具有高效感染力的CD513B-1/CX3CL1 shRNA重组慢病毒,该重组病毒用于感染b MSCs。分离培养大鼠脾巨噬细胞,将其与被感染的b MSCs共培养。倒置显微镜下观测被感染b MSCs的绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况;CCK-8检测被感染b MSCs的生长变化;Real-time PCR检测被感染b MSCs的CX3CL1与核抗原PCNA基因的表达变化;Western blot检测被感染b MSCs的CX3CL1和PCNA蛋白,与被感染的b MSCs共培养的脾巨噬细胞的趋化因子M-CSF和IL-8的表达变化。结果大鼠b MSCs得以分离、培养和鉴定。筛检得CX3CL1基因的最佳干扰序列:CTCTATGAGCAATTATTTA;测序证实,成功构建重组慢病毒载体CD513B-1/CX3CL1 shRNA。荧光观察表明,被CD513B-1/CX3CL1shRNA病毒感染的b MSCs明显表达GFP。CCK-8检测结果显示,与对照细胞比较,沉默CX3CL1的b MSCs的生长减慢,48 h开始更为明显(P<0.01);Real-time PCR、Western blot检测结果证实,CX3CL1基因的shRNA慢病毒能有效沉默b MSCs的CX3CL1,并下调其核抗原基因PCNA及其蛋白的表达,沉默CX3CL1的b MSCs能下调与其共培养的脾巨噬细胞的趋化因子M-CSF、IL-8的表达。结论成功构建CX3CL1基因RNAi重组慢病毒载体。该病毒载体能有效沉默b MSCs的CX3CL1基因,使b MSCs的生长减慢并下调其核抗原PCNA基因及其编码蛋白的表达。沉默CX3CL1的b MSCs能下调与其共培养的脾巨噬细胞的趋化因子M-CSF、IL-8的表达。 展开更多

关键词 趋化因子cX3c的配体1基因 短发夹RNA 骨髓间充质干细胞 慢病毒 趋化效应

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