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优化简并引物PCR克隆Candida glycerinogenes 3-磷酸甘油脱氢酶基因片段
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作者 陈献忠 饶志明 +4 位作者 沈微 诸葛斌 方慧英 王正祥 诸葛健 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期91-96,共6页
为了从工业生产菌株耐高渗产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)克隆甘油合成的限速酶编码基因胞浆NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶基因(ctGPD),对不同酵母和其他真核生物的NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶进行比对,分析氨基酸和核苷酸的保守序列,设计... 为了从工业生产菌株耐高渗产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)克隆甘油合成的限速酶编码基因胞浆NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶基因(ctGPD),对不同酵母和其他真核生物的NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶进行比对,分析氨基酸和核苷酸的保守序列,设计了4对简并引物用于扩增C.glycerinogenes的NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶(GPD)基因片段,经过优化PCR反应条件,利用其中一对中等简并度的引物扩增出CgGPD基因中约600 bp的保守核心片段。DNA序列及推绎的氨基酸序列进行比对分析表明,该基因片段与其他酵母的胞浆NAD+-3-磷酸甘油脱氢酶基因的对应区域具有典型的保守区域,并且与安格斯毕赤酵母的GPD基因相似性较高。 展开更多
关键词 PCR NAD^+依赖3-磷酸甘油 甘油假丝酵母 克隆 简并引物
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3-磷酸甘油醛脱氢酶与酵母线粒体基因组维持蛋白Mgm101的相互作用
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作者 薛冬桦 王丽 左小明 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第4期646-650,共5页
采用酵母双杂交方法,以Mgm101p为诱饵,筛选酵母cDNA文库.分离鉴定15个与Mgm101p相互作用的蛋白因子,其中5个阳性克隆均为GPD1编码的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH).克隆了GPD1在S.cerevisi-ae的同系物ScTDH2基因,进行绿色荧光蛋白GFP标记、... 采用酵母双杂交方法,以Mgm101p为诱饵,筛选酵母cDNA文库.分离鉴定15个与Mgm101p相互作用的蛋白因子,其中5个阳性克隆均为GPD1编码的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH).克隆了GPD1在S.cerevisi-ae的同系物ScTDH2基因,进行绿色荧光蛋白GFP标记、亚细胞组分分离和蛋白质印迹分析,结果表明,GAP-DH除了在细胞质为糖酵解酶的主要作用外,可能为多功能蛋白,在酵母线粒体中与Mgm101p相互作用参与线粒体DNA维持的生物过程. 展开更多
关键词 3-磷酸甘油 酵母线粒体DNA 酵母双杂交 Mgm101蛋白
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斑玉蕈甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因克隆与序列分析 被引量:4
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作者 张津京 陈辉 +2 位作者 冯志勇 陈明杰 汪虹 《食用菌学报》 北大核心 2011年第2期5-9,共5页
甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)是糖酵解和卡尔文循环中的关键酶,本实验室之前的研究发现斑玉蕈菌丝的GAPDH表达随培养基中葡萄糖添加浓度的变化而变化,在此基础上我们首次克隆了斑玉蕈GAPDH的DN... 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)是糖酵解和卡尔文循环中的关键酶,本实验室之前的研究发现斑玉蕈菌丝的GAPDH表达随培养基中葡萄糖添加浓度的变化而变化,在此基础上我们首次克隆了斑玉蕈GAPDH的DNA和cDNA序列,结果斑玉蕈gpd基因长2 724 bp,对比基因组DNA和cDNA序列知其中有7个内含子、8个外显子;其理论分子量为36.15 kD、编码蛋白质含338个氨基酸、等电点(PI)为8.24。 展开更多
关键词 斑玉蕈 甘油-3-磷酸 基因克隆 序列分析
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顶复门原虫3-磷酸甘油醛脱氢酶功能及其应用研究进展 被引量:2
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作者 廖申权 戚南山 +4 位作者 吴彩艳 吕敏娜 袁建丰 余劲术 孙铭飞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第1期71-74,共4页
糖酵解途径广泛存在于各类生物中,是顶复门原虫的主要供能方式。3-磷酸甘油醛脱氢酶是糖酵解途径的重要酶,与顶复门原虫的生存密切相关,可以作为抗寄生虫药物研发的重要靶标。文章主要从顶复门原虫糖酵解途径、3-磷酸甘油醛脱氢酶的基... 糖酵解途径广泛存在于各类生物中,是顶复门原虫的主要供能方式。3-磷酸甘油醛脱氢酶是糖酵解途径的重要酶,与顶复门原虫的生存密切相关,可以作为抗寄生虫药物研发的重要靶标。文章主要从顶复门原虫糖酵解途径、3-磷酸甘油醛脱氢酶的基因分析、作用机理及应用等方面进行综述。 展开更多
关键词 顶复门原虫 3-磷酸甘油 药物靶标
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3-磷酸甘油醛脱氢酶测定在糖尿病肾病诊断中的临床意义 被引量:1
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作者 张一兵 时娟 张淑芹 《中国医药科学》 2012年第22期116-117,130,共3页
目的通过测定血中3-磷酸甘油醛脱氢酶的活性,探讨GAPD在糖尿病肾病早期诊断中的意义。方法测定190例健康者和80例2型糖尿病患者的血GAPD,尿微量白蛋白和β2-微球蛋白,对结果进行统计分析。结果疾病组中GAPD活性水平均高于正常对照组,差... 目的通过测定血中3-磷酸甘油醛脱氢酶的活性,探讨GAPD在糖尿病肾病早期诊断中的意义。方法测定190例健康者和80例2型糖尿病患者的血GAPD,尿微量白蛋白和β2-微球蛋白,对结果进行统计分析。结果疾病组中GAPD活性水平均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。疾病组中的微量白蛋白尿组、大量白蛋白尿组中的微量白蛋白和β2-微球蛋白高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。但是正常白蛋白尿组中的微量白蛋白和β2-微球蛋白与对照组相比差异无统计学意(P>0.05)。结论 GAPD在正常白蛋白尿期活性已经发生变化,比微量白蛋白和β2-微球蛋白活性变化更早,能够提早预测糖尿病肾脏疾病的发生,有利于临床做出诊断,改善患者的预后。 展开更多
关键词 3-磷酸甘油 2型糖尿病 微量白蛋白 Β2-微球蛋白
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环形泰勒虫3-磷酸甘油醛脱氢酶的原核表达、多克隆抗体制备及亚细胞定位
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作者 赵洪喜 刘军龙 +6 位作者 杨聪山 赵帅阳 刘娟 刘光远 殷宏 关贵全 罗建勋 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第2期304-310,共7页
为了研究环形泰勒虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的功能,本试验利用PCR技术从环形泰勒虫裂殖体cDNA中扩增环形泰勒虫GAPDH(TaGAPDH)基因,将扩增产物克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,并转入大肠... 为了研究环形泰勒虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的功能,本试验利用PCR技术从环形泰勒虫裂殖体cDNA中扩增环形泰勒虫GAPDH(TaGAPDH)基因,将扩增产物克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行融合蛋白诱导表达,融合蛋白纯化后免疫家兔,制备多克隆抗体,分别用间接ELISA和Western blotting检测抗体的效价和特异性;利用激光共聚焦荧光显微镜观察TaGAPDH蛋白在环形泰勒虫裂殖体中的亚细胞定位。结果显示,克隆得到了TaGAPDH全长基因,大小为1 020bp;SDS-PAGE分析结果显示,融合蛋白大小约44ku,且以包涵体形式存在。制备的多克隆抗体效价高达1∶12 800,具有很高的特异性;亚细胞定位显示TaGAPDH蛋白主要分布于环形泰勒虫裂殖体细胞质内。以上结果表明本试验成功克隆表达了TaGAPDH基因,并制备了针对TaGAPDH蛋白的兔多克隆抗体,为筛选环形泰勒虫病疫苗、药物靶点及研究环形泰勒虫能量代谢奠定了基础。 展开更多
关键词 环形泰勒虫 3-磷酸甘油 多克隆抗体
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氨甲酰化诱导的牛晶状体3-磷酸甘油醛脱氢酶和硫醇转移酶的失活(英文)
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作者 张婕 严宏 《国际眼科杂志》 CAS 2008年第6期1083-1086,共4页
目的:3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是糖酵解过程中的一个关键酶,与老化和白内障发生密切相关,硫醇转移酶(TTase)可断裂晶状体蛋白质氧化形成的二硫键使硫醇化的蛋白质脱硫醇,对于维持晶状体透明性极为重要。氨甲酰化为重要的翻译后修饰。... 目的:3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是糖酵解过程中的一个关键酶,与老化和白内障发生密切相关,硫醇转移酶(TTase)可断裂晶状体蛋白质氧化形成的二硫键使硫醇化的蛋白质脱硫醇,对于维持晶状体透明性极为重要。氨甲酰化为重要的翻译后修饰。本研究观察氨甲酰化是否能诱导晶状体GAPDH和TTase的失活。方法:透明新鲜的晶状体取自2周岁健康牛,与100mmol/L氰酸钾于37℃水孵箱分别振动温育7d和12d。设透明晶状体为正常对照组。所有晶状体孵育在50mmol/LDMEM液中,然后每只晶状体去囊膜,匀浆,提取水溶性蛋白质。用分光光度计分别测量GAPDH和TTase的活性。结果:与氰酸钾孵育后GAPDH的活性与正常对照组相比显著降低(P<0.01),其中12d组与7d组相比,活性明显下降。TTase的活性在孵育7d后与对照组相比有统计学差异(P<0.05),12d组的活性与对照组相比有显著差异(P<0.01),7d组活性与12d组相比无统计学差异(P=0.19296)。结论:研究结果显示,分别与100mmol/L氰酸钾孵育7d和12d后,氨甲酰化组的GAPDH和TTase活性与对照组相比有统计学差异,证实氨甲酰化可以诱导GAPDH和TTase酶的失活,为TTase和GAPDH在白内障发病机制中的进一步研究提供了新思路。 展开更多
关键词 氨甲酰化 白内障 氰酸钾 3-磷酸甘油 硫醇转移
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加强表达3-磷酸甘油醛脱氢酶对谷氨酸棒杆菌产L-丝氨酸的影响 被引量:2
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作者 郭雯 赖联贺 +2 位作者 张晓梅 史劲松 许正宏 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期15-20,共6页
在谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)中,由3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)催化的反应是糖酵解途径的限速步骤,该反应还直接影响了L-丝氨酸的前体3-磷酸甘油酸的合成。研究首先比较了产L-... 在谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)中,由3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)催化的反应是糖酵解途径的限速步骤,该反应还直接影响了L-丝氨酸的前体3-磷酸甘油酸的合成。研究首先比较了产L-丝氨酸的野生型菌株C.glutamicum SYPS-062与模式菌株C.glutamicum ATCC14067的GAPDH酶活力,发现SYPS-062的GAPDH酶活力比ATCC14067高了55.8%。进一步采用在C.glutamicum33a△SS基因组上增加gap A拷贝数的方法加强表达GAPDH,构建了重组菌C.glutamicum33a△SS-2gap A。重组菌GAPDH转录水平和酶活力分别提高119%和53%,最大比生长速率提高10.6%,总糖耗速率提高4.4%,L-丝氨酸产量提高17.4%,糖酸转化率提高12.2%,生产强度提高17.4%。结果表明,加强表达GAPDH能够提高重组菌的生长和糖耗速率,并能够提高L-丝氨酸的产量、糖酸转化率和生产强度。 展开更多
关键词 3-磷酸甘油 谷氨酸棒杆菌 L-丝氨酸
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3-磷酸甘油醛脱氢酶促进谷氨酸棒杆菌发酵生产L-精氨酸和L-鸟氨酸 被引量:1
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作者 阚宝军 董晋军 +4 位作者 刘晖 占米林 许国超 韩瑞枝 倪晔 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期9-16,共8页
在谷氨酸棒状杆菌( Corynebacterium glutamicum )SNK118中表达NADP +依赖型的3-磷酸甘油醛脱氢酶编码基因,提高胞内NADPH水平,以提高 L -精氨酸( L -Arginine)和 L -鸟氨酸(L-Ornithine)发酵产量。通过NCBI数据库检索,选取了3个不同来... 在谷氨酸棒状杆菌( Corynebacterium glutamicum )SNK118中表达NADP +依赖型的3-磷酸甘油醛脱氢酶编码基因,提高胞内NADPH水平,以提高 L -精氨酸( L -Arginine)和 L -鸟氨酸(L-Ornithine)发酵产量。通过NCBI数据库检索,选取了3个不同来源的3-磷酸甘油醛脱氢酶编码基因。经测定酶活力,最终选择糖丁基梭菌( Clostridium saccharobutylicum) DSM13864来源的NADP +依赖型的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因( CsgapC )。构建了产 L -精氨酸的重组菌SNK118/pXMJ19- CsgapC,当摇瓶发酵70 h时产 L -精氨酸11.55 g/L,糖酸转化率0.13 g/g,与对照菌SNK118/pXMJ19相比,精氨酸产量和糖酸转化率分别提高了26%和10.2%。在 L -鸟氨酸生产菌株SNK118Δ argF Δ argR 中重组表达 CsgapC,重组菌SNK118Δ argF Δ argR /pXMJ19- CsgapC 摇瓶发酵70 h产 L -鸟氨酸27.76 g/L,糖酸转化率0.274 g/g,与对照菌SNK118Δ argF Δ argR /pXMJ19相比, L -鸟氨酸产量和糖酸转化率分别提高了20.1%和15.6%。结果表明,异源表达 CsgapC 有助于提高谷氨酸棒杆菌发酵生产 L -精氨酸和 L -鸟氨酸的水平。 展开更多
关键词 谷氨酸棒状杆菌 3-磷酸甘油 NADPH L-精氨酸 L-鸟氨酸
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3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPD)动力学方法的初步研究 被引量:1
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作者 时娟 张一兵 +2 位作者 罗喜钢 王毅 赵园园 《中国医学工程》 2011年第10期14-16,共3页
目的建立一种简便、快捷、准确的GAPD的检测方法,为以后的临床推广奠定基础。方法以三乙醇胺作为缓冲液(PH为7.4),1,3-二磷酸甘油酸为底物,偶联3-磷酸甘油酸激酶,还原型辅酶Ⅰ(NADH)被氧化成氧化型辅酶Ⅰ(NAD+),在波长340nm处检测吸光... 目的建立一种简便、快捷、准确的GAPD的检测方法,为以后的临床推广奠定基础。方法以三乙醇胺作为缓冲液(PH为7.4),1,3-二磷酸甘油酸为底物,偶联3-磷酸甘油酸激酶,还原型辅酶Ⅰ(NADH)被氧化成氧化型辅酶Ⅰ(NAD+),在波长340nm处检测吸光度的变化值,在一定范围内,吸光度的下降与GAPD的活性成正比,间接地计算出GAPD的活性。结果本测定方法的最适PH为7.4,米氏常数(Km)值为6.3×10-4mmol/L,最适基质浓度为0.007mmol/L,批内、批间变异系数为1.60%、1.94%,回收率为96.6%。在0-140U/L范围内线性关系良好,参考值的范围是4-28U/L(逆向法)。结论本法能够准确快速的测定GAPD的活性,是用各种生化自动分析仪。 展开更多
关键词 3-磷酸甘油 动力学方法 自动化分析
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细粒棘球绦虫三磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆、表达及其分子特征的生物信息学分析 被引量:3
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作者 王家海 王凝 +5 位作者 胡丹丹 钟秀琴 宋星桔 古小彬 汪涛 杨光友 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1629-1637,共9页
三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是糖酵解途径中的关键酶,现已发现该酶可作为一些寄生虫的疫苗候选分子和药物靶标。然而,有关绦虫三磷酸甘油醛脱氢酶的研究报道较少。为探究细粒棘球绦虫GAPDH(EgGAPDH)的分子特征与应用价值,克隆细粒棘球绦... 三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是糖酵解途径中的关键酶,现已发现该酶可作为一些寄生虫的疫苗候选分子和药物靶标。然而,有关绦虫三磷酸甘油醛脱氢酶的研究报道较少。为探究细粒棘球绦虫GAPDH(EgGAPDH)的分子特征与应用价值,克隆细粒棘球绦虫的GAPDH基因,并以生物信息学方法对其进行系统的分析。结果显示:EgGAPDH基因全长1 011bp,编码336个氨基酸。EgGAPDH是由4个结构相同的单体蛋白(O、P、Q、R)组成的一个同源四聚体,每个单体蛋白质含有3个活性中心,即NAD+绑定区域(aa 4-151和aa 315-336)、催化结合区域(aa 156-314)和一个酶活性位点(aa 149-156)。通过对EgGAPDH的氨基酸序列的抗原表位预测得到了16个B细胞抗原表位和9个T细胞结合位点;Western blot显示原核表达的重组EgGAPDH能与感染细粒棘球蚴的小鼠血清发生特异性结合;以纯化的重组EgGAPDH蛋白为抗原通过ELISA法检测17份细粒棘球蚴小鼠阳性血清,阳性检出率为100%。试验结果表明:成功克隆并表达细粒棘球绦虫的EgGAPDH基因,EgGAPDH蛋白具有3个酶功能区域和多个免疫结合位点,Western blot和ELISA结果显示,该蛋白质可能具有作为抗细粒棘球蚴的药物靶标和疫苗候选分子的潜力。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 3-磷酸甘油(GAPDH) 分子特征
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细胞内铁沉积对PC12细胞凋亡及表达3-磷酸甘油醛脱氢酶的影响
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作者 田香珠 刘学源 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第8期818-821,共4页
目的铁是重要的金属元素,参与了各种生命活动。文中探讨细胞内铁沉积对PC12细胞凋亡的影响,及其对3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehy de-3-phospha te dehydrog enase,GAPDH)表达的影响。方法实验分为对照组、50μmol/L FeCl_3组、100μm... 目的铁是重要的金属元素,参与了各种生命活动。文中探讨细胞内铁沉积对PC12细胞凋亡的影响,及其对3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehy de-3-phospha te dehydrog enase,GAPDH)表达的影响。方法实验分为对照组、50μmol/L FeCl_3组、100μmol/L FeCl_3组、500μmol/L FeCl_3组。以FeCl_3与PC12细胞共育,建立体外铁沉积于细胞模型,CCK-8检测细胞增殖生长能力;TUNEL法观察细胞凋亡情况;荧光定量PCR测定GAPDH基因mRNA表达;Western blot测定GAPDH蛋白的表达情况;免疫荧光法检测细胞核内GAPDH表达。结果 CCK-8检测结果显示,与对照组的细胞增殖率(100%)比较,50μmol/L FeCl_3组增殖率[(77.13±3.9)%]下降,但差异无统计学意义(P>0.05);100μmol/L FeCl_3组、500μmol/L FeCl_3组增殖率[(66.19±3.37)%、(13.84±0.43)%]明显下降(P<0.05)。荧光定量PCR检测GAPDH mRNA表达显示,与对照组GAPDH mRNA表达量(1.00±0.00)相比,50μmol/L FeCl_3组表达量升高(1.42±0.03),但差异无统计学意义(P>0.05),100μmol/L FeCl_3组、500μmol/L FeCl_3组表达量(1.93±0.07、2.33±0.15)明显升高(P<0.05)。与对照组GAPDH蛋白表达(1.00±0.00)比较,50μmol/L FeCl_3组表达(0.94±0.11)下降(P>0.05),50μmol/L FeCl_3组、100μmol/L FeCl_3组表达(1.45±0.13、1.79±0.07)明显升高(P<0.05)。免疫荧光结果显示,铁沉积后,细胞GAPDH发生亚细胞定位改变,由细胞浆转移至细胞核,发生核聚集现象。结论铁沉积于PC12细胞致细胞凋亡增加,其原因与核内GAPDH表达增强有关。 展开更多
关键词 3-磷酸甘油 细胞凋亡
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滇牡丹ω-3脂肪酸脱氢酶基因克隆与功能分析 被引量:2
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作者 朱金鑫 孙金金 +3 位作者 原晓龙 王娟 杨宇明 王毅 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期102-106,共5页
ω-3脂肪酸脱氢酶是多不饱和脂肪酸亚麻酸生物合成途径的关键酶。依据转录组数据设计特异性引物,使用RT-PCR方法从滇牡丹克隆得到1个FAD3基因的c DNA全长序列,命名为Pd FAD3(Gene Bank登录号为KX289610)。生物信息学分析结果表明Pd FAD... ω-3脂肪酸脱氢酶是多不饱和脂肪酸亚麻酸生物合成途径的关键酶。依据转录组数据设计特异性引物,使用RT-PCR方法从滇牡丹克隆得到1个FAD3基因的c DNA全长序列,命名为Pd FAD3(Gene Bank登录号为KX289610)。生物信息学分析结果表明Pd FAD3基因片段序列全长2 134 bp,包含完整的c DNA开放阅读框,编码含有450个氨基酸残基的蛋白质;Blast比对结果显示该蛋白质属于FAD蛋白质家族;系统进化树分析结果显示与芍药属芍药组植物芍药亲缘关系较近;该蛋白质属于跨膜蛋白质,亲水性较低;RT-PCR结果显示其在种子中的表达随着种子成熟出现双峰型的表达量变化,与目前所报道的其他物种的FAD3表达情况相似。为进一步研究其调控机理提供理论依据及获得含高不饱和脂肪酸转基因滇牡丹品种奠定理论基础。 展开更多
关键词 滇牡丹 ω-3脂肪酸 基因克隆 基因功能分析
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草菇gpd基因的克隆、序列分析和其启动子的推测以及冷诱导对其表达方式的影响 被引量:7
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作者 孙晓红 陈明杰 潘迎捷 《食用菌学报》 2008年第1期17-31,共15页
草菇3-磷酸-甘油酯脱氢酶(GPD)基因全长1489bp,含有9个内含子。gpd全长cDNA含有1157核苷酸,包含1个编码337个氨基酸的1011bp开放阅读框和1个95bp3’端非翻译区。在1220bp的5’端侧翼区内检测到启动子元件,该元件含有2个TATA框和3个CAAT... 草菇3-磷酸-甘油酯脱氢酶(GPD)基因全长1489bp,含有9个内含子。gpd全长cDNA含有1157核苷酸,包含1个编码337个氨基酸的1011bp开放阅读框和1个95bp3’端非翻译区。在1220bp的5’端侧翼区内检测到启动子元件,该元件含有2个TATA框和3个CAAT框,分别位于开始密码子ATG上游第80、559、333、340和406bp位点。Southern杂交分析表明,草菇基因组含有1个拷贝的gpd基因。Northern杂交分析表明,gpd基因的表达不受冷胁迫诱导。 展开更多
关键词 冷胁迫 基因表达 3-磷酸-甘油基因 调控因子 草菇
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产甘油假丝酵母甘油合成关键酶基因CgGPD1多拷贝表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达 被引量:1
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作者 王震 饶志明 +3 位作者 诸葛斌 沈微 方慧英 诸葛健 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期50-56,共7页
采用PCR的方法从产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)中扩增出3-磷酸甘油脱氢酶的编码基因及侧翼序列CgGPD1,分别构建了含不同CgGPD1拷贝数的根癌农杆菌双元载体pCAM3300?zeocin-CgGPD1(Ⅰ)、pCAM3300-zeocin-CgGPD1-CgGPD1(Ⅱ)和pC... 采用PCR的方法从产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)中扩增出3-磷酸甘油脱氢酶的编码基因及侧翼序列CgGPD1,分别构建了含不同CgGPD1拷贝数的根癌农杆菌双元载体pCAM3300?zeocin-CgGPD1(Ⅰ)、pCAM3300-zeocin-CgGPD1-CgGPD1(Ⅱ)和pCAM3300-zeocin-Cg GPD1-CgGPD1-CgGPD1(Ⅲ)。在大肠杆菌JM109中,研究了其在不同质量浓度NaCl、葡萄糖胁迫下表达情况。结果表明,在大肠杆菌中GPDH的活性随着NaCl、葡萄糖质量浓度的升高而增加。当NaCl质量浓度达到2.5 g/dL时,GPDH的酶活比在0.5 g/dL NaCl下平均提高31.2%;当葡萄糖质量浓度提高至10 g/dL时,GPDH的酶活比2 g/dL葡萄糖下平均提高31.8%;在相同的NaCl、葡萄糖质量浓度下,GPDH的活性随着CgGPD1拷贝数的增加而升高,JM109(Ⅱ)比JM109(Ⅰ)的GPDH酶活平均提高8.2%,JM109(Ⅲ)比JM109(Ⅱ)的GPDH酶活平均提高9.9%。以上结果表明,在大肠杆菌中CgGPD1基因的表达同样受渗透压胁迫调节。 展开更多
关键词 胞浆3-磷酸甘油 甘油假丝酵母 渗透压胁迫
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麻疯树JcFAD7基因启动子克隆及植物表达载体构建 被引量:3
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作者 曾玲 吴平治 +3 位作者 魏倩 姜华武 吴国江 李美茹 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期177-180,共4页
利用TAIL-PCR技术成功克隆了麻疯树JcFAD7基因起始密码子的上游1926bp序列。利用生物信息学手段对其序列特征和潜在的调控元件进行分析表明,该序列含有4个TATA-box和6个CAAT-box,还包含光响应元件、MYB结合位点、不同的激素反应元件以... 利用TAIL-PCR技术成功克隆了麻疯树JcFAD7基因起始密码子的上游1926bp序列。利用生物信息学手段对其序列特征和潜在的调控元件进行分析表明,该序列含有4个TATA-box和6个CAAT-box,还包含光响应元件、MYB结合位点、不同的激素反应元件以及各种胁迫响应元件,说明JcFAD7的表达可能受多种因素的调控。将启动子连接到pBI101.1载体,成功构建了驱动报告基因GUS的植物表达载体。为阐明麻疯树不饱和脂肪酸的合成代谢过程和植物生长发育的调控机理奠定了基础。 展开更多
关键词 麻疯树 ω-3脂肪酸 三烯脂肪酸 启动子
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马铃薯和拟南芥GAPC酶基因的克隆及分析 被引量:2
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作者 邹雪 张烨 +1 位作者 吴明阳 王西瑶 《草业学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期239-247,共9页
胞质三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPC)是糖酵解中的关键酶,近年的研究表明其对盐、低温、高温、氧化、高渗、低磷等多种逆境胁迫均有响应。本实验采用RT-PCR,分别从马铃薯和拟南芥中克隆GAPC的编码区序列(CDS),并作生物信息学比较,同时构建2个... 胞质三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPC)是糖酵解中的关键酶,近年的研究表明其对盐、低温、高温、氧化、高渗、低磷等多种逆境胁迫均有响应。本实验采用RT-PCR,分别从马铃薯和拟南芥中克隆GAPC的编码区序列(CDS),并作生物信息学比较,同时构建2个基因的植物表达载体。结果表明,StGAPC和AtGAPC2的CDS长度均为1017bp,相似性84%,编码338个氨基酸,相似性为92%。蛋白分子量分别为36.65和36.91 kDa,理论等电点为6.34和6.67,均属稳定蛋白;三级结构预测表明两者和水稻(2e5rC)GAPC蛋白结构相似,具有GAPC保守功能域。多种植物GAPC基因的序列进化分析表明同科属植物的同源性较高可归于同一分支,与现有的分类系统相对应。以pBI121为基础载体,构建了由CaMV35S启动GAPC基因的植物表达载体,导入农杆菌EHA105,经PCR检测确定获得阳性克隆。本研究为获得转GAPC基因的材料并进一步研究GAPC在逆境中的功能奠定基础。 展开更多
关键词 马铃薯 拟南芥 胞质3-磷酸甘油 基因克隆 生物信息学分析
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安全酵母Candida glycerinogenesis食品级甘油合成关键基因的研究
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作者 刘小红 陈文强 +4 位作者 诸葛斌 宗红 陆信曜 方慧英 宋健 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2014年第1期11-14,33,共5页
为了研究酵母甘油合成关键酶基因在食品级甘油合成中的重要作用,以产甘油假丝酵母基因组为模板,设计引物,克隆获得甘油合成关键酶基因3-磷酸-甘油脱氢酶基因(CgGPD),并在大肠杆菌中通过tac启动子串联表达来自酿酒酵母的3-磷酸甘油酯酶基... 为了研究酵母甘油合成关键酶基因在食品级甘油合成中的重要作用,以产甘油假丝酵母基因组为模板,设计引物,克隆获得甘油合成关键酶基因3-磷酸-甘油脱氢酶基因(CgGPD),并在大肠杆菌中通过tac启动子串联表达来自酿酒酵母的3-磷酸甘油酯酶基因(ScGPP2)。经IPTG诱导培养后,3-磷酸-甘油脱氢酶(CgGPD)的比酶活达到了60mU/mg。在30%的葡萄糖浓度下,经过48h的摇瓶发酵,可合成甘油2.52g/L。表明3-磷酸甘油酯酶在甘油合成过程中起了关键作用,过表达CgGPD基因有助于食品级甘油大量合成,从而降低下游分离纯化的难度,可从分子水平进一步提高甘油的产量。 展开更多
关键词 甘油 关键合成 甘油假丝酵母 3-磷酸-甘油基因
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壮族盐敏感高血压患者HSD3B1基因多态性研究 被引量:2
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作者 韦秋社 李达汉 +5 位作者 韦润峰 朱名毅 王若琦 潘征 黄照河 潘兴寿 《内科》 2017年第2期147-149,156,共4页
目的探讨人类Ⅰ型3β-羟基类固醇脱氢酶(HSD3B1)基因多态性与壮族盐敏感高血压的关系。方法随机选取壮族盐敏感高血压患者与盐不敏感高血压患者各80例,记录并分析入选者病史、体格检查资料、实验室检查资料和超声心动图检查资料;提取入... 目的探讨人类Ⅰ型3β-羟基类固醇脱氢酶(HSD3B1)基因多态性与壮族盐敏感高血压的关系。方法随机选取壮族盐敏感高血压患者与盐不敏感高血压患者各80例,记录并分析入选者病史、体格检查资料、实验室检查资料和超声心动图检查资料;提取入选者外周血DNA,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测HSD3B1基因rs1047303的A/C多态性,比较不同组基因型和等位基因频率。结果与盐不敏感高血压患者比较,壮族盐敏感高血压患者存在较高的基础心率,较高的血压,较高的总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白水平(P<0.05或P<0.01),但两组患者的体质指数和高密度脂蛋白水平比较差异没有统计学意义(P>0.05);两组患者HSD3B1基因rs1047303的A/C等位基因和基因型频率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 HSD3B1基因A/C多态性与壮族盐敏感高血压无显著关联,HSD3B1基因的rs1047303多态性不是壮族盐敏感高血压的危险因素。 展开更多
关键词 高血压 基因 盐敏感 人类Ⅰ型3β-羟基类固醇基因 A/C基因多态性
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Fat-1基因载体构建及其在家鸡中的体外表达
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作者 王颖 顾真真 +3 位作者 郭若婷 欧科鹏 刘乙 刘小军 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第4期921-927,共7页
试验旨在构建一种适合于家禽体外表达的ω-3脂肪酸脱氢酶Fat-1基因的真核生物表达载体,为后续转基因鸡的生产奠定基础。根据家鸡密码子使用频率,对秀丽隐杆线虫Fat-1基因进行优化改造;将改造后的Fat-1基因(cFat-1)连接至pLL3.7表达载体... 试验旨在构建一种适合于家禽体外表达的ω-3脂肪酸脱氢酶Fat-1基因的真核生物表达载体,为后续转基因鸡的生产奠定基础。根据家鸡密码子使用频率,对秀丽隐杆线虫Fat-1基因进行优化改造;将改造后的Fat-1基因(cFat-1)连接至pLL3.7表达载体,构建重组质粒pLL3.7-cFat-1;经PCR、酶切、序列分析等手段对重组质粒进行鉴定;用胰酶消化法培养鸡成纤维细胞,利用TurboFect TM转染试剂将pLL3.7-cFat-1转染体外培养的成纤维细胞;通过RT-PCR检测和绿色荧光观察分析cFat-1基因在细胞中的表达。结果表明cFat-1基因在鸡成纤维细胞中高效转录并表达,成功构建了可在家禽体外表达cFat-1基因的特异性表达载体。本研究首次获得可在家禽体外表达cFat-1基因的转基因细胞系,证实了经基因改造后cFat-1基因可在家禽体外的高效转录和表达,为后续制备富含ω-3脂肪酸的转基因鸡奠定基础。 展开更多
关键词 ω-3脂肪酸 载体构建 成纤维细胞 基因表达 基因
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