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水通道蛋白8基因3’-非翻译区荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定
被引量：
1
1
作者
闵敏
彭丽华
+1 位作者
郭明洲
杨云生
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第8期876-878,共3页
目的:构建水通道蛋白8(AQP8)基因3’-UTR荧光素酶报告载体,与microRNA(miRNA)共转染HT29细胞,分析miRNA对其调控作用。方法:以HT29细胞基因组DNA为模板PCR扩增AQP8基因3’-UTR序列,并将其克隆到荧光素酶报告载体pGL3M上;根据生物信息学...
目的:构建水通道蛋白8(AQP8)基因3’-UTR荧光素酶报告载体,与microRNA(miRNA)共转染HT29细胞,分析miRNA对其调控作用。方法:以HT29细胞基因组DNA为模板PCR扩增AQP8基因3’-UTR序列,并将其克隆到荧光素酶报告载体pGL3M上;根据生物信息学软件Targetscan和miRanda预测可能与AQP8基因3’-UTR作用的miRNA,将pGL3-AQP8 3’-UTR和预测miRNA共转染,利用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性。结果:成功构建AQP8基因3’-UTR序列荧光素酶报告载体;生物信息学软件预测miRNA靶点显示AQP8基因3’-UTR可能是miR-214、miR-15a、miR-330、miR-137、miR-32、miR-612、miR-200a/141、miR-16的作用靶点;与对照组相比,miR-15a、miR-330、miR-32、miR-612、miR-200a、miR-16可使荧光素酶活性降低10%～45%。结论:成功地构建AQP8基因3’UTR荧光素酶报告载体,miR-15a、miR-330、miR-32、miR-612、miR-200a和miR-16可抑制其荧光素酶活性。
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关键词
水通道蛋白8
MICRORNA
3’-非翻译区
荧光素酶报告载体
在线阅读
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职称材料
FLT3基因3′-非翻译区-荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定
被引量：
5
2
作者
高晓宁
林季
+2 位作者
李永辉
王莉莉
于力
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2010年第3期694-697,共4页
为分析FMS样酪氨酸激酶3(FMS-liketyrosine kinase3,FLT3)基因3′-非翻译区(3′-untranslated region,3′-UTR)可能的微小RNA(miRNA)调控位点,构建FLT3基因3′-UTR-荧光素酶报告载体,与miRNA共转染293T细胞,分析miRNA对其调控作用。采用...
为分析FMS样酪氨酸激酶3(FMS-liketyrosine kinase3,FLT3)基因3′-非翻译区(3′-untranslated region,3′-UTR)可能的微小RNA(miRNA)调控位点,构建FLT3基因3′-UTR-荧光素酶报告载体,与miRNA共转染293T细胞,分析miRNA对其调控作用。采用PCR方法从HepG2细胞基因组DNA中扩增FLT3基因3′-UTR区序列,插入经PstI和EcoRI双酶切的经过改造的荧光素酶报告载体pGL3-control(pGL3-control-m);通过Target Scan5.1软件预测可能与FLT3基因3′-UTR作用的miRNA;采用FuGENEHD转染试剂包裹荧光素酶报告重组子和miRNA真核表达载体共转染293T细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。结果表明,成功构建了含有804bp的FLT3基因3′-UTR序列的荧光素酶报告重组子,通过酶切和基因测序的方法鉴定正确;miRNA靶位点预测显示,FLT3基因3′-UTR可能是miRNA-15a、miRNA-15b、miRNA-16、miRNA-195、miRNA-424、miRNA-497的作用靶点;与对照组相比,miRNA-15a、15b、195可使荧光素酶报告重组子的荧光素酶活性降低20%左右。结论:成功构建了FLT3基因3′-UTR-荧光素酶报告载体,而miRNA-15a、miRNA-15b、miRNA-195可抑制其荧光素酶活性。
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关键词
FLT
3
基因
microRNA
3’-非翻译区
荧光素酶报告载体
基因调控
基因转染
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职称材料
题名
水通道蛋白8基因3’-非翻译区荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定
被引量：
1
1
作者
闵敏
彭丽华
郭明洲
杨云生
机构
军事医学科学院附属医院消化内科
解放军总医院消化内科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第8期876-878,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30570822)
文摘
目的:构建水通道蛋白8(AQP8)基因3’-UTR荧光素酶报告载体,与microRNA(miRNA)共转染HT29细胞,分析miRNA对其调控作用。方法:以HT29细胞基因组DNA为模板PCR扩增AQP8基因3’-UTR序列,并将其克隆到荧光素酶报告载体pGL3M上;根据生物信息学软件Targetscan和miRanda预测可能与AQP8基因3’-UTR作用的miRNA,将pGL3-AQP8 3’-UTR和预测miRNA共转染,利用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性。结果:成功构建AQP8基因3’-UTR序列荧光素酶报告载体;生物信息学软件预测miRNA靶点显示AQP8基因3’-UTR可能是miR-214、miR-15a、miR-330、miR-137、miR-32、miR-612、miR-200a/141、miR-16的作用靶点;与对照组相比,miR-15a、miR-330、miR-32、miR-612、miR-200a、miR-16可使荧光素酶活性降低10%～45%。结论:成功地构建AQP8基因3’UTR荧光素酶报告载体,miR-15a、miR-330、miR-32、miR-612、miR-200a和miR-16可抑制其荧光素酶活性。
关键词
水通道蛋白8
MICRORNA
3’-非翻译区
荧光素酶报告载体
分类号
R392.33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
FLT3基因3′-非翻译区-荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定
被引量：
5
2
作者
高晓宁
林季
李永辉
王莉莉
于力
机构
解放军总医院血液科
解放军总医院基础医学所生化室
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2010年第3期694-697,共4页
基金
国家自然科学基金面上项目
编号30670898
+2 种基金
30971297
国家重点基础研究发展计划(973)资助项目
编号2005CB522400
文摘
为分析FMS样酪氨酸激酶3(FMS-liketyrosine kinase3,FLT3)基因3′-非翻译区(3′-untranslated region,3′-UTR)可能的微小RNA(miRNA)调控位点,构建FLT3基因3′-UTR-荧光素酶报告载体,与miRNA共转染293T细胞,分析miRNA对其调控作用。采用PCR方法从HepG2细胞基因组DNA中扩增FLT3基因3′-UTR区序列,插入经PstI和EcoRI双酶切的经过改造的荧光素酶报告载体pGL3-control(pGL3-control-m);通过Target Scan5.1软件预测可能与FLT3基因3′-UTR作用的miRNA;采用FuGENEHD转染试剂包裹荧光素酶报告重组子和miRNA真核表达载体共转染293T细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。结果表明,成功构建了含有804bp的FLT3基因3′-UTR序列的荧光素酶报告重组子,通过酶切和基因测序的方法鉴定正确;miRNA靶位点预测显示,FLT3基因3′-UTR可能是miRNA-15a、miRNA-15b、miRNA-16、miRNA-195、miRNA-424、miRNA-497的作用靶点;与对照组相比,miRNA-15a、15b、195可使荧光素酶报告重组子的荧光素酶活性降低20%左右。结论:成功构建了FLT3基因3′-UTR-荧光素酶报告载体,而miRNA-15a、miRNA-15b、miRNA-195可抑制其荧光素酶活性。
关键词
FLT
3
基因
microRNA
3’-非翻译区
荧光素酶报告载体
基因调控
基因转染
Keywords
Fms
-
like tyrosine kinase
3
gene
microRNA
3
＇
-
UTR
luciferase reporter vector
gene regulation
gene transfer
分类号
R733.7 [医药卫生—肿瘤]
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
水通道蛋白8基因3’-非翻译区荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定
闵敏
彭丽华
郭明洲
杨云生
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
FLT3基因3′-非翻译区-荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定
高晓宁
林季
李永辉
王莉莉
于力
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2010
5
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职称材料
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