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单链抗体2F5和4E10的原核表达、纯化和鉴定 被引量:1
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作者 刘秀侠 杨雄 陈红英 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期177-183,共7页
为深入研究2F5和4E10抗体,构建了特异性识别HIV-1病毒MPER区域的2F5和4E10单链抗体的重组质粒,进行了融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用重叠PCR扩增及基因重组技术,获得2F5-scFv和4E10-scFv基因,将其插入原核表达载体pET-28a(+)上,获得... 为深入研究2F5和4E10抗体,构建了特异性识别HIV-1病毒MPER区域的2F5和4E10单链抗体的重组质粒,进行了融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用重叠PCR扩增及基因重组技术,获得2F5-scFv和4E10-scFv基因,将其插入原核表达载体pET-28a(+)上,获得表达质粒。转入大肠杆菌BL21(DE3)及Rosetta-gami2(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测发现,2F5-scFv和4E10-scFv在两种表达菌中均以包涵体形式存在,重组蛋白分子量分别约为27 kD、29 kD。变性条件下,利用镍离子螯合层析方法对包涵体蛋白进行纯化,经复性后获得可溶性单链抗体。ELISA检测表明,制备的单链抗体与原核和真核表达的MPER抗原都有特异性结合活性。 展开更多
关键词 HIV-1 GP41 MPER 2f5 4E10 单链抗体
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OrfA与E2F5的互作关系及其对肺腺癌细胞增殖的影响
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作者 穆璐 张潇筠 +3 位作者 韩宝泉 陈昱光 张智英 徐坤 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2021年第12期11-17,27,共8页
【目的】确认大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)辅助因子OrfA与转录因子E2F5的互作关系,以及OrfA对肿瘤细胞增殖的影响。【方法】采用重组DNA技术构建orfA与E2F5基因过表达载体;通过Western Blot试验,检测对比HEK293T、Hela229宫颈癌细胞、A... 【目的】确认大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)辅助因子OrfA与转录因子E2F5的互作关系,以及OrfA对肿瘤细胞增殖的影响。【方法】采用重组DNA技术构建orfA与E2F5基因过表达载体;通过Western Blot试验,检测对比HEK293T、Hela229宫颈癌细胞、A375恶性黑色素瘤细胞、SMMC-7721肝癌细胞和SPC-A-1肺腺癌细胞中E2F5的表达量;通过酵母双杂交和免疫共沉淀试验,验证OrfA与E2F5的互作关系;采用CCK-8试剂盒和PI单染色法,检测过表达orfA基因对SPC-A-1细胞增殖的影响;采用RT-qPCR,检测过表达orfA基因对SMAD4和caspase-3基因表达的影响。【结果】成功构建了orfA与E2F5基因过表达载体pLenti-EF1α-orfA和pLenti-EF1α-E2F5;在5种细胞系中,以SPC-A-1细胞E2F5蛋白表达量最高;酵母双杂交和免疫共沉淀试验结果均证明,OrfA与E2F5可以直接相互作用;过表达orfA基因对SPC-A-1细胞增殖具有显著促进作用,同时能够增强SMAD4基因的表达,抑制caspase-3基因的表达。【结论】WDSV OrfA与E2F5有相互作用,且能促进SPC-A-1肺腺癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 逆转录病毒周期蛋白(OrfA) E2f5转录因子 SPC-A-1肺腺癌细胞 细胞增殖
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PEO基聚合物电解质PEO_x-Li(C_2F_5SO_2)_2N-BaTiO_3 被引量:5
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作者 李奇 李雅琳 +1 位作者 夏笑虹 蒋永华 《电池》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期348-350,共3页
研究了以聚环氧乙烷(PEO)为基体,BaTiO3为填充剂,Li(C2F5SO2)2N作为锂盐的聚合物锂离子电池电解质。利用循环伏安法测定了铝的溶解电位,80℃时,铝集流体在PEOx-Li(C2F5SO2)2N体系中溶解电位可达4.1 V(vs.Li/Li+)。采用交流阻抗技术测试... 研究了以聚环氧乙烷(PEO)为基体,BaTiO3为填充剂,Li(C2F5SO2)2N作为锂盐的聚合物锂离子电池电解质。利用循环伏安法测定了铝的溶解电位,80℃时,铝集流体在PEOx-Li(C2F5SO2)2N体系中溶解电位可达4.1 V(vs.Li/Li+)。采用交流阻抗技术测试了其电导率和界面电阻,当x=8时,体系的电导率最大,80℃时为1.65×10-3S/cm,25℃时为1.5×10-5S/cm。 展开更多
关键词 聚合物电解质 PEOx-Li(C2f5SO2)2N-BaTiO3 电导率 界面电阻
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大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)逆转录病毒周期蛋白(OrfA)相互作用蛋白的酵母双杂交筛选 被引量:5
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作者 徐坤 王亮亮 +3 位作者 张婷婷 周罡 张志强 张智英 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期267-275,共9页
大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤(WDS)在秋季发生春季萎缩的季节性生长特点与大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)辅助基因的表达有关.其中辅助基因orfA的表达产物OrfA蛋白可能是1个潜在的肿瘤相关因子,OrfA与细胞周期蛋白cyclin A和cyclin D同源,也被称... 大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤(WDS)在秋季发生春季萎缩的季节性生长特点与大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)辅助基因的表达有关.其中辅助基因orfA的表达产物OrfA蛋白可能是1个潜在的肿瘤相关因子,OrfA与细胞周期蛋白cyclin A和cyclin D同源,也被称为逆转录病毒周期蛋白(retroviral-cyclin).为了深入研究OrfA的作用和功能,我们构建了诱饵表达载体pGBKT7-orfA,采用酵母双杂交技术,从HeLa cDNA文库中筛选与其相互的蛋白因子.通过2轮高强度压力的筛选、β-半乳糖苷酶活性验证、回转验证以及测序分析,最终获得了1个与OrfA相互作用的转录因子E2F5.OrfA C端78个氨基酸的多肽或者缺失C端78个氨基酸的OrfA突变体均不能在酵母双杂交系统中与E2F5相互作用.这些发现为进一步研究OrfA在肿瘤萎缩中的功能奠定了基础. 展开更多
关键词 大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒 逆转录病毒周期蛋白(OrfA) 酵母双杂交 E2f5转录因子
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C_2F_5I分子C—I键解离的自旋-轨道从头算研究 被引量:2
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作者 赵书涛 闫冰 +4 位作者 李瑞 郭庆群 田传进 连科研 潘守甫 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第1期170-173,共4页
采用考虑相对论效应的6-311G**全电子基组与多参考微扰理论,计算了该分子的包含自旋-轨道耦合效应的垂直激发能和基态、激发态C—I键解离势能曲线.理论计算发现,势能曲线33A″与11A″,21A′出现交叉,交叉区域在C—I键长为0.241nm附近;基... 采用考虑相对论效应的6-311G**全电子基组与多参考微扰理论,计算了该分子的包含自旋-轨道耦合效应的垂直激发能和基态、激发态C—I键解离势能曲线.理论计算发现,势能曲线33A″与11A″,21A′出现交叉,交叉区域在C—I键长为0.241nm附近;基态11A′到激发态33A″(3Q0)的垂直激发能为4.658eV,与实验值4.662eV非常吻合.讨论了C2F5I分子作为碘激光介质的可行性. 展开更多
关键词 从头算 C2f5I 自旋-轨道耦合 势能曲线交叉
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一种自制的RNA分离试剂及其在鱼组织总RNA提取中的应用 被引量:1
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作者 徐坤 李铎 +3 位作者 张优优 李陇平 麻丽霞 张智英 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2012年第7期64-69,76,共7页
【目的】尝试自制一种价格低廉的RNA分离试剂,并检验其应用效果。【方法】以商业化的TRizolReagent为对照,使用自制RNA分离试剂提取草鱼皮肤组织总RNA,采用分光光度计法、变性琼脂糖凝胶电泳法和RT-PCR检测其品质,并用提取的总RNA合成... 【目的】尝试自制一种价格低廉的RNA分离试剂,并检验其应用效果。【方法】以商业化的TRizolReagent为对照,使用自制RNA分离试剂提取草鱼皮肤组织总RNA,采用分光光度计法、变性琼脂糖凝胶电泳法和RT-PCR检测其品质,并用提取的总RNA合成草鱼皮肤cDNA。同时使用自制RNA分离试剂提取斑马鱼总RNA,通过RT-PCR进行E2F5基因全长(1 092bp)的克隆,构建其真核和酵母表达载体并测序。【结果】使用自制RNA分离试剂提取草鱼皮肤组织总RNA的品质与用TRizol Reagent提取的总RNA品质相当,用之成功地合成了草鱼皮肤cDNA。使用自制RNA分离试剂提取得到了更高品质的斑马鱼总RNA,用之成功地克隆了斑马鱼E2F5基因,构建了其真核表达载体pcDNA3.1-flag-Zf E2F5和酵母表达载体pGAD GH-Zf E2F5。【结论】自制RNA分离试剂能够用于鱼类组织总RNA的提取,提取的总RNA能满足后续cDNA合成及RT-PCR克隆特定基因的需要。 展开更多
关键词 RNA分离试剂 总RNA 草鱼皮肤cDNA 斑马鱼E2f5基因
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肺癌外周血细胞角蛋白联合2F7/S5A单抗检测及其临床应用 被引量:1
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作者 韩宝惠 廖美琳 +3 位作者 江晓峰 钟华 黄进肃 董强刚 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第2期126-130,共5页
目的 应用流式细胞仪对肺癌外周血中的细胞角蛋白及 2F7/S5A单抗检测阳性细胞进行定量分析 ,探讨临床应用的可行性。方法 取外周血 5ml ,经Ficoll密度、梯度离心获取单个核细胞 ,CD45、细胞角蛋白 (CK)及肺癌单克隆抗体 ( 2F7/S5A)标... 目的 应用流式细胞仪对肺癌外周血中的细胞角蛋白及 2F7/S5A单抗检测阳性细胞进行定量分析 ,探讨临床应用的可行性。方法 取外周血 5ml ,经Ficoll密度、梯度离心获取单个核细胞 ,CD45、细胞角蛋白 (CK)及肺癌单克隆抗体 ( 2F7/S5A)标记 ,应用流式细胞仪检测CD45 - CK+2F7/S5A+细胞 ,计数单位 (升 )血中的CD45 - CK+2F7/S5A+细胞含量。结果 共 15 1例进入研究 ,其中健康对照 2 0例 ,肺癌 116例 ,肺部良性疾病 15例。正常外周血单核细胞的表型为CD45 +CK- 2F7/S5A- ,而小细胞肺癌和非小细胞肺癌标记的表型均为CD45 - CK+2F7/S5A+。 2 0例健康对照均为阴性 ;15例良性肺部疾病中 1例为阳性 ;116例肺癌患者 39例为阳性 ,检测敏感性为 33.6 2 % ,特异性 93.33% ,阳性预测值 97.5 0 % ,阴性预测值 15 .38% ,检测阳性细胞含量的平均数为 0 .12× 10 6/L。结论 应用流式细胞仪检测肺癌患者外周血中CD45 - CK+2F7/S5A+细胞具有较高的特异性和阳性预测值 ,能定量反应肺癌患者外周血中的微量癌细胞 ,对肺癌的临床诊断及治疗具有一定的应用价值。 展开更多
关键词 肺癌 外周血 流式细胞仪 细胞角蛋白 血道转移 诊断 2F7/S5A单抗检测
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CaO-MgO-Al_2O_3-SiO_2-P_2O_5-(F)微晶玻璃的析晶及特征 被引量:3
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作者 王玥 田清波 +2 位作者 岳雪涛 王修慧 高宏 《人工晶体学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第3期692-695,共4页
采用熔融法制备了不同P2O5及F含量的CaO-MgO-Al2O3-SiO2-P2O5-(F)基础玻璃试样,研究了CaO-MgO-Al2O3-SiO2-P2O5-(F)系微晶玻璃的析晶及特征。结果表明:在CaO-MgO-Al2O3-SiO2-8.0wt%P2O5玻璃中,表面析晶和内部析晶同时存在,析出晶体主要... 采用熔融法制备了不同P2O5及F含量的CaO-MgO-Al2O3-SiO2-P2O5-(F)基础玻璃试样,研究了CaO-MgO-Al2O3-SiO2-P2O5-(F)系微晶玻璃的析晶及特征。结果表明:在CaO-MgO-Al2O3-SiO2-8.0wt%P2O5玻璃中,表面析晶和内部析晶同时存在,析出晶体主要为钙长石(CaAl2Si2O8)相、硅灰石(CaSiO3)和α-磷酸钙(Ca3(PO4)2)。玻璃中P2O5含量的提高抑制玻璃的表面析晶,同时促进了玻璃的整体析晶和α-磷酸钙晶体析出。同时添加P2O5和F的玻璃试样以整体析晶为主,析出晶体为块状氟磷灰石和粒状钙长石相。 展开更多
关键词 生物微晶玻璃 α-磷酸钙晶体 氟磷灰石 CaO-MgO-Al2O3-SiO2-P2O5-(F)玻璃
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C_5F_(10)O/CO_2混合气体的绝缘性能 被引量:47
9
作者 王小华 傅熊雄 +4 位作者 韩国辉 卢彦辉 李旭旭 高青青 荣命哲 《高电压技术》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第3期715-720,共6页
SF_6气体由于其优异的电气性能而广泛应用于电力行业,然而,由于其全球变暖潜能值极高,国内外学者在过去的几十年里对SF_6替代气体做了广泛研究,但由于它们都各有缺陷,故很难在实际生产中加以应用。文中以C_5F_(10)O/CO_2混合气体作为主... SF_6气体由于其优异的电气性能而广泛应用于电力行业,然而,由于其全球变暖潜能值极高,国内外学者在过去的几十年里对SF_6替代气体做了广泛研究,但由于它们都各有缺陷,故很难在实际生产中加以应用。文中以C_5F_(10)O/CO_2混合气体作为主要研究对象、以SF_6气体作为对照,研究了混合气体中C_5F_(10)O分压力分别为20 k Pa和40 k Pa、总压力为0.1~0.5 MPa时的工频耐压和雷电冲击(lightning impulse,LI)性能,并分析了其作为SF_6替代气体的可能性。实验结果表明,0.2 MPa的混合气体中混入20 k Pa和40 k Pa的C_5F_(10)O,可分别使混合气体的工频放电电压达到相同气压下SF_6气体的61.89%和81.99%。C_5F_(10)O分压力40 k Pa、总压力0.5 MPa的混合气体正、负极性雷电冲击放电电压分别是0.3 MPa时SF_6气体的88.9%和89.9%。因此,通过增加C_5F_(10)O的含量或提高混合气体的总压力,均可有效提高混合气体的绝缘性能,其中,前者更为有效。 展开更多
关键词 SF6替代气体 C5F10O/CO2混合气体 工频耐压 雷电冲击 绝缘性能
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氮对玉米杂交种F_(2∶5)家系子粒品质及分离特性的影响
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作者 王艳朋 靳静晨 +3 位作者 朱自贤 程荣霞 汤继华 刘宗华 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期11-13,共3页
在施氮和不施氮条件下,对农大108 F2∶5家系子粒主要营养品质含量进行了初步分析.结果表明,家系间子粒各主要营养品质含量均存在极显著差异.除粗脂肪外,其它各营养品质含量在两种氮肥处理间差异均达到极显著水平,增施氮肥有利于F2∶5家... 在施氮和不施氮条件下,对农大108 F2∶5家系子粒主要营养品质含量进行了初步分析.结果表明,家系间子粒各主要营养品质含量均存在极显著差异.除粗脂肪外,其它各营养品质含量在两种氮肥处理间差异均达到极显著水平,增施氮肥有利于F2∶5家系子粒蛋白和赖氨酸含量的提高.F2∶5家系子粒各主要营养品质含量均存在较大程度的变异,其中粗蛋白和赖氨酸的变异系数较大,粗淀粉的变异系数较小.不同家系子粒各主要营养品质含量符合正态分布,并存在不同程度的双向超亲分离. 展开更多
关键词 玉米 F2:5 家系 子粒营养品质 超亲分离
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