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滇龙胆GrCMS基因的克隆与表达分析
被引量：
2
1
作者
张晓东
李彩霞
王元忠
《植物研究》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期258-265,共8页
2-C-甲基-D-赤藓醇4-磷酸胞苷酰转移酶是赤藓糖磷酸酯(MEP)途径中的第三个催化酶。以滇龙胆转录组为基础,采用RT-PCR技术从滇龙胆幼叶克隆2-C-甲基-D-赤藓醇4-磷酸胞苷酰转移酶基因GrCMS,并进行原核表达和组织特异性表达分析。序列分析...
2-C-甲基-D-赤藓醇4-磷酸胞苷酰转移酶是赤藓糖磷酸酯(MEP)途径中的第三个催化酶。以滇龙胆转录组为基础,采用RT-PCR技术从滇龙胆幼叶克隆2-C-甲基-D-赤藓醇4-磷酸胞苷酰转移酶基因GrCMS,并进行原核表达和组织特异性表达分析。序列分析显示,GrCMS基因(登录号KJ917164)开放阅读框(ORF)长933 bp,编码310氨基酸,推测分子量为34.23 kD,等电点为7.68。蛋白质序列分析显示,GrCMS无信号肽,为亲水稳定蛋白,主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,可能定位叶绿体;具有CMS保守结构域。进化分析结果表明,GrCMS蛋白与长春花CrCMS蛋白亲缘关系最近。原核表达结果表明,GrCMS与预期蛋白大小一致。定量PCR结果表明,GrCMS基因主要在叶中表达。结果为进一步研究该基因功能和龙胆苦苷生物合成途径奠定基础。
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关键词
滇龙胆
2-c-甲基-d-赤藓醇4-磷酸胞苷酰转移酶
基因克隆
表达分析
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职称材料
银杏MECT基因启动子克隆及序列分析
被引量：
1
2
作者
袁红慧
程华
+2 位作者
李琳玲
陈小玲
程水源
《湖北农业科学》
2015年第7期1746-1750,共5页
以前期获得的银杏(Ginkgo biloba L.)MECT基因的c DNA序列为模板,通过设计特异性引物及采用染色体步移的方法从银杏基因组中克隆到Gb MECT翻译起始位点上游982 bp的启动子序列,研究银杏MECT基因启动子的结构及功能特点。生物信息学分析...
以前期获得的银杏(Ginkgo biloba L.)MECT基因的c DNA序列为模板,通过设计特异性引物及采用染色体步移的方法从银杏基因组中克隆到Gb MECT翻译起始位点上游982 bp的启动子序列,研究银杏MECT基因启动子的结构及功能特点。生物信息学分析结果表明,该启动子序列中含有多种类型的顺式作用元件,主要有典型的光响应调节元件、激素响应调控元件、抗病虫害响应元件TGTCA序列、抗损伤应答元件ERF3和热激响应元件HSE等。此外,在该启动子片段中还含有氧胁迫和铜离子响应元件、淀粉酶响应元件等其他类型的作用元件,充分体现了启动子对基因表达调控具有转录水平上的高效性和复杂性的特点。
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关键词
银杏(Ginkgo
biloba
L.)
染色体步移
2
-c-
甲基
-d-
赤藓醇
-
4
-
磷酸
胱氨
酰
转移
酶
基因
调控元件
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职称材料
南方红豆杉MCT基因克隆、功能验证及组织表达特异性检测
被引量：
5
3
作者
简东琴
曾令江
+1 位作者
杨颖舫
杨春贤
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第7期1408-1416,共9页
【目的】克隆南方红豆杉的2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(MCT)基因(TcMCT),分析其功能,并检测组织表达特异性,为深入研究TcMCT基因在紫杉醇生物合成中的作用机制提供理论依据。【方法】采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得TcMC...
【目的】克隆南方红豆杉的2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(MCT)基因(TcMCT),分析其功能,并检测组织表达特异性,为深入研究TcMCT基因在紫杉醇生物合成中的作用机制提供理论依据。【方法】采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得TcMCT基因的cDNA全长序列,对其编码蛋白进行生物信息学分析及亚细胞定位,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TcMCT基因的组织表达模式,并在大肠杆菌中超表达该基因以验证其功能。【结果】克隆获得的TcMCT基因cDNA序列全长为1293 bp,开放阅读框(ORF)为942 bp,编码313个氨基酸。TcMCT蛋白与其他植物MCT蛋白中均含保守的MEP结合位点和CTP结合位点,但在N端氨基酸序列保守性较差,其中与同为裸子植物银杏GbMCT蛋白的亲缘关系最近,氨基酸序列的相似性为59.3%。TcMCT蛋白的三级结构与AtMCT蛋白相似,均属于同源二聚体。TcMCT蛋白N端含84个氨基酸残基的质体转运肽,且以Arg88作为切割位点,定位于叶绿体中。TcMCT基因在南方红豆杉不同组织中均有表达,在绿色树皮中的相对表达量显著高于其他组织(P<0.05,下同),且在老叶和嫩叶中的相对表达量显著高于茎和根,在茎和根中的表达量极少甚至不表达。大肠杆菌中超表达TcMCT基因可促进β-胡萝卜素大量积累。【结论】不同物种MCT氨基酸序列具有较高的保守性,TcMCT基因具有明显的组织表达特异性,可调控萜类物质如β-胡萝卜素等的生物合成,推测其在紫杉醇生物合成中发挥重要调控作用。
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关键词
南方红豆杉
2
-c-
甲基
-d-
赤藓醇
-
4
-
磷酸
胱氨
酰
转移
酶
(MCT)
生物信息学分析
功能验证
紫杉醇
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职称材料
题名
滇龙胆GrCMS基因的克隆与表达分析
被引量：
2
1
作者
张晓东
李彩霞
王元忠
机构
玉溪师范学院资源环境学院
云南省农业科学院药用植物研究所
出处
《植物研究》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期258-265,共8页
基金
国家自然科学基金(81260608)
云南省教育厅重点项目(2015Z171)
科技部"十二五"国家科技支撑计划项目
文摘
2-C-甲基-D-赤藓醇4-磷酸胞苷酰转移酶是赤藓糖磷酸酯(MEP)途径中的第三个催化酶。以滇龙胆转录组为基础,采用RT-PCR技术从滇龙胆幼叶克隆2-C-甲基-D-赤藓醇4-磷酸胞苷酰转移酶基因GrCMS,并进行原核表达和组织特异性表达分析。序列分析显示,GrCMS基因(登录号KJ917164)开放阅读框(ORF)长933 bp,编码310氨基酸,推测分子量为34.23 kD,等电点为7.68。蛋白质序列分析显示,GrCMS无信号肽,为亲水稳定蛋白,主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,可能定位叶绿体;具有CMS保守结构域。进化分析结果表明,GrCMS蛋白与长春花CrCMS蛋白亲缘关系最近。原核表达结果表明,GrCMS与预期蛋白大小一致。定量PCR结果表明,GrCMS基因主要在叶中表达。结果为进一步研究该基因功能和龙胆苦苷生物合成途径奠定基础。
关键词
滇龙胆
2-c-甲基-d-赤藓醇4-磷酸胞苷酰转移酶
基因克隆
表达分析
Keywords
Gentiana rigescens
2
-c-
methyl
-d-
erythritol
4
-
phosphatecytidyltransferase
gene cloning
expression analysis
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
银杏MECT基因启动子克隆及序列分析
被引量：
1
2
作者
袁红慧
程华
李琳玲
陈小玲
程水源
机构
黄冈师范学院生命科学学院
武汉轻工大学生物与制药工程学院
出处
《湖北农业科学》
2015年第7期1746-1750,共5页
基金
2014年国家自然科学基金项目(31400556/C1610)
湖北省自然科学基金创新群体项目(2011CDA117)
文摘
以前期获得的银杏(Ginkgo biloba L.)MECT基因的c DNA序列为模板,通过设计特异性引物及采用染色体步移的方法从银杏基因组中克隆到Gb MECT翻译起始位点上游982 bp的启动子序列,研究银杏MECT基因启动子的结构及功能特点。生物信息学分析结果表明,该启动子序列中含有多种类型的顺式作用元件,主要有典型的光响应调节元件、激素响应调控元件、抗病虫害响应元件TGTCA序列、抗损伤应答元件ERF3和热激响应元件HSE等。此外,在该启动子片段中还含有氧胁迫和铜离子响应元件、淀粉酶响应元件等其他类型的作用元件,充分体现了启动子对基因表达调控具有转录水平上的高效性和复杂性的特点。
关键词
银杏(Ginkgo
biloba
L.)
染色体步移
2
-c-
甲基
-d-
赤藓醇
-
4
-
磷酸
胱氨
酰
转移
酶
基因
调控元件
Keywords
Ginkgo biloba L.
genome walking
MECT
regulatory elements
分类号
S792.95 [农业科学—林木遗传育种]
在线阅读
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职称材料
题名
南方红豆杉MCT基因克隆、功能验证及组织表达特异性检测
被引量：
5
3
作者
简东琴
曾令江
杨颖舫
杨春贤
机构
西南大学生命科学学院
重庆北碚区公安局
出处
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第7期1408-1416,共9页
基金
国家自然科学基金项目（30771238)
文摘
【目的】克隆南方红豆杉的2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸胱氨酰转移酶(MCT)基因(TcMCT),分析其功能,并检测组织表达特异性,为深入研究TcMCT基因在紫杉醇生物合成中的作用机制提供理论依据。【方法】采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得TcMCT基因的cDNA全长序列,对其编码蛋白进行生物信息学分析及亚细胞定位,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TcMCT基因的组织表达模式,并在大肠杆菌中超表达该基因以验证其功能。【结果】克隆获得的TcMCT基因cDNA序列全长为1293 bp,开放阅读框(ORF)为942 bp,编码313个氨基酸。TcMCT蛋白与其他植物MCT蛋白中均含保守的MEP结合位点和CTP结合位点,但在N端氨基酸序列保守性较差,其中与同为裸子植物银杏GbMCT蛋白的亲缘关系最近,氨基酸序列的相似性为59.3%。TcMCT蛋白的三级结构与AtMCT蛋白相似,均属于同源二聚体。TcMCT蛋白N端含84个氨基酸残基的质体转运肽,且以Arg88作为切割位点,定位于叶绿体中。TcMCT基因在南方红豆杉不同组织中均有表达,在绿色树皮中的相对表达量显著高于其他组织(P<0.05,下同),且在老叶和嫩叶中的相对表达量显著高于茎和根,在茎和根中的表达量极少甚至不表达。大肠杆菌中超表达TcMCT基因可促进β-胡萝卜素大量积累。【结论】不同物种MCT氨基酸序列具有较高的保守性,TcMCT基因具有明显的组织表达特异性,可调控萜类物质如β-胡萝卜素等的生物合成,推测其在紫杉醇生物合成中发挥重要调控作用。
关键词
南方红豆杉
2
-c-
甲基
-d-
赤藓醇
-
4
-
磷酸
胱氨
酰
转移
酶
(MCT)
生物信息学分析
功能验证
紫杉醇
Keywords
Taxus chinensis
2
-c-
methyl
-d-
erythritol
-
4
-
phosphate cytidylyltransferase(MCT)
bioinformatics analysis
functional verification
taxol
分类号
S791.49 [农业科学—林木遗传育种]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
滇龙胆GrCMS基因的克隆与表达分析
张晓东
李彩霞
王元忠
《植物研究》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
银杏MECT基因启动子克隆及序列分析
袁红慧
程华
李琳玲
陈小玲
程水源
《湖北农业科学》
2015
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
南方红豆杉MCT基因克隆、功能验证及组织表达特异性检测
简东琴
曾令江
杨颖舫
杨春贤
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
5
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