鼠疫耶尔森菌低钙应答V抗原人源单克隆抗体筛选与鉴定

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作者 张黎 郑滨洋 +5 位作者 张琪 吴海莲 潘红星 朱凤才 吴海生 周剑芳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期15-20,共6页

目的筛选抗低钙应答V抗原(LcrV)的人源单克隆抗体,分析抗体基因特点,检测抗体与抗原结合的特异性、亲和力及功能。方法使用PCR方法从鼠疫疫苗临床试验志愿者外周血细胞cDNA扩增抗体轻、重链可变区基因片段,构建ScFv噬菌体抗体文库。用L... 目的筛选抗低钙应答V抗原(LcrV)的人源单克隆抗体,分析抗体基因特点,检测抗体与抗原结合的特异性、亲和力及功能。方法使用PCR方法从鼠疫疫苗临床试验志愿者外周血细胞cDNA扩增抗体轻、重链可变区基因片段,构建ScFv噬菌体抗体文库。用LcrV对文库进行富集筛选,将获得的抗体基因表达成人IgG1后,测定抗体与LcrV抗原结合的特异性、亲和力、免疫调节功能以及保护能力。结果成功构建了鼠疫耶尔森菌人源ScFv抗体文库,库容量为7.54×10^(8)。抗体文库经LcrV筛选后获得了3株抗LcrV抗体,命名为RV-B4、RV-D1和RV-E8。3株抗体重链为VH1-46和VH3-30,轻链分别为VL1-51、VK3-20和VK1-39。3株抗体经ELISA及Western blot验证均与LcrV特异性结合,其与V抗原结合的解离常数(KD)分别为2.1 nmol/L、1.24 nmol/L和42 nmol/L。RV-D1体外降低人THP-1分泌TNF-α,动物攻毒试验中未发现抗LcrV抗体的保护效果。结论从鼠疫疫苗免疫人群获得了靶向低钙应答V抗原的人源抗体,以结合抗体为主,不能有效阻断病菌感染。所获得的单抗为鼠疫免疫基础研究、鼠疫诊断应用提供了候选材料。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森菌 低钙应答V抗原 噬菌体展示 重组抗体 保护效果

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鼠疫耶尔森菌脂多糖对小鼠脏器的影响

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作者 张丽 柏吉祥 +5 位作者 张琪 李存香 金泳 张晓璐 辛文媛 吴海莲 《青海畜牧兽医杂志》 2024年第5期18-21,共4页

本研究对提取的鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)脂多糖(LPS)进行动物实验,观察不同剂量LPS对小鼠一般状态和脏器的影响情况,为研究鼠疫菌LPS对机体的毒性作用机制提供实验数据,对内毒素早期感染的临床诊断提供理论基础。本试验采用常规... 本研究对提取的鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)脂多糖(LPS)进行动物实验,观察不同剂量LPS对小鼠一般状态和脏器的影响情况,为研究鼠疫菌LPS对机体的毒性作用机制提供实验数据,对内毒素早期感染的临床诊断提供理论基础。本试验采用常规方法培养鼠疫菌,试剂盒法提取LPS,对提取的LPS进行成分鉴定和SDS-PAGE电泳。小鼠腹腔注射符合实验要求的LPS,观察小鼠的一般状态变化,经处死、解剖、脏器称重后,综合分析LPS对小鼠器官的损伤程度。结果显示,LPS样品纯度为91%,电泳条带分布在10~17 Ku之间。腹腔注射鼠疫菌LPS可致小鼠出现活动减少,蜷缩无力,被毛松乱和昏睡等症状,肝脏和脾脏肿大、充血现象严重。随着LPS注射剂量的增加,试验组小鼠脏器损伤程度也不断加重,但在注射剂量为450μg/只时,其肝脏湿重较注射剂量为350μg/只和250μg/只时减少,其脾脏湿重较LPS注射剂量为350μg/只减少。结果表明,一定剂量的LPS可引起小鼠出现脏器损伤、氧化应激和免疫系统过度活化等现象,且随着LPS注射剂量的增加,损伤程度不断加重。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森菌 脂多糖 小鼠 器官损伤

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甘肃省鼠疫耶尔森菌多位点可变数目串联重复序列基因分型及地区分布 被引量：4

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作者 郭丽民 席进孝 +4 位作者 葛亚俊 王宇萌 苗克军 吴斌 徐大琴 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期715-721,共7页

目的采用多位点可变数目串联重复序列(MLVA)对甘肃省鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)进行基因分型,探讨甘肃省鼠疫菌地区分布特征。方法选取1962-2014年间甘肃省各市县(区)不同生态型的鼠疫菌198株,培养并提取基因组DNA。采用14+12对引物进行PCR扩... 目的采用多位点可变数目串联重复序列(MLVA)对甘肃省鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)进行基因分型,探讨甘肃省鼠疫菌地区分布特征。方法选取1962-2014年间甘肃省各市县(区)不同生态型的鼠疫菌198株,培养并提取基因组DNA。采用14+12对引物进行PCR扩增,产物进行测序,确定每对引物串联重复序列(VNTR)位点的拷贝数。应用BioNumerics 5.10软件对菌株的VNTR位点拷贝数进行聚类分析。结果甘肃省鼠疫菌分为10个群,群内的菌株依据分离地点继续细化为5-28个分支。10个群分别为:阿拉善黄鼠疫源地菌株聚为1个群;甘南高原疫源地菌株聚成1个群;阿克塞县菌株分成2个群,为当金山群和加尔乌宗村群;肃北县菌株分为3个群,为马场群、党城湾镇群和鱼儿红群;玉门市菌株聚集在肃北县鱼儿红群内;肃南县菌株分为3个群,为大河乡群、马蹄乡群和康乐乡群。结论MLVA可以清晰地区分甘肃省不同鼠疫疫源地的菌株,将疫源地内菌株继续细分为不同分支,直至精确的分离地点。MLVA分型方法可用于鼠疫菌株的溯源分析。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森菌 MLVA 地区分布

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大黄抑制鼠疫耶尔森菌的体外转录组学研究 被引量：2

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作者 白群华 贾燕 +4 位作者 代兴碧 肖虹 王应雄 杨瑞馥 邱景富 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期905-908,940,共5页

目的应用鼠疫菌全基因组芯片研究大黄抑制鼠疫菌的分子作用机制。方法液体稀释法测定大黄对鼠疫菌的最低抑菌浓度(MIC),以10倍MIC作用鼠疫菌30min,提取鼠疫菌总RNA,逆转录合成cDNA,荧光素标记,与芯片杂交,扫描仪扫描,应用SAM软件分析结... 目的应用鼠疫菌全基因组芯片研究大黄抑制鼠疫菌的分子作用机制。方法液体稀释法测定大黄对鼠疫菌的最低抑菌浓度(MIC),以10倍MIC作用鼠疫菌30min,提取鼠疫菌总RNA,逆转录合成cDNA,荧光素标记,与芯片杂交,扫描仪扫描,应用SAM软件分析结果。结果获得了大黄作用鼠疫菌的表达谱。大黄作用鼠疫菌的明显差异基因为498个,其中上调基因358个,下调140个。结论蛋白质合成基因、细胞膜相关基因、转运结合蛋白基因以及部分热休克基因的改变是大黄抑制鼠疫菌的主要作用机制。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森菌 大黄 DNA芯片 抗菌作用 分子机制

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西藏自治区鼠疫自然疫源地鼠疫耶尔森菌最低抑菌浓度的测定及研究 被引量：3

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作者 杨晓艳 辛有全 +7 位作者 何建 靳娟 李胜 张琪 吴海莲 柏吉祥 金泳 代瑞霞 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期357-360,I0003,共5页

目的根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)药敏试验方法中的琼脂平板稀释法,对分离自西藏自治区鼠疫自然疫源地内的164株鼠疫耶尔森菌进行抗菌药物最低抑菌浓度的测定,监测西藏地区耐药鼠疫耶尔森菌株,掌握其抑菌范围,为鼠疫的临床治疗... 目的根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)药敏试验方法中的琼脂平板稀释法,对分离自西藏自治区鼠疫自然疫源地内的164株鼠疫耶尔森菌进行抗菌药物最低抑菌浓度的测定,监测西藏地区耐药鼠疫耶尔森菌株,掌握其抑菌范围,为鼠疫的临床治疗提供基础数据。方法利用琼脂平板稀释法分别测定氧氟沙星、环丙沙星、复方磺胺甲恶唑(甲氧苄啶-磺胺甲恶唑)、硫酸卡那霉素、链霉素、头孢曲松钠、氨苄青霉素钠、氯霉素、盐酸壮观霉素、头孢呋辛钠、盐酸四环素、莫西沙星共12种抗生素对164株鼠疫耶尔森菌的最低抑菌浓度(MIC)。若发现耐药菌株,则用K-B法进行验证。结果所测的164株鼠疫耶尔森菌中有1株对链霉素具有耐药性(MIC=4096μg/mL),链霉素K-B法检测抑菌环直径为0,这株菌对其余11种抗菌药物均敏感。其余163株菌对12种抗生素均敏感。结论发现1株鼠疫耶尔森菌对链霉素具有耐药性,这是我国首次发现鼠疫耶尔森菌对链霉素耐药。因链霉素是国内外治疗鼠疫的首选药物,耐药鼠疫耶尔森菌会引起链霉素治疗失败,从临床和公共卫生的角度来看,对鼠疫耶尔森菌分离株的抗菌敏感性监测应常规开展。 展开更多

关键词 耐链霉素鼠疫耶尔森菌株 西藏自治区鼠疫自然疫源地 最低抑菌浓度

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鼠疫耶尔森菌疫苗株荚膜抗原的纯化

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作者 王梅 张爱萍 +7 位作者 于守鸿 赵忠智 谢辉 李君 冯建萍 杨永海 郑谊 唐新元 《青海畜牧兽医杂志》 2014年第5期10-12,共3页

利用AKTA purifier 100纯化系统纯化盐析法制备的粗制鼠疫荚膜抗原,并将纯化洗脱的蛋白进行透析、浓缩后采用UltrospecTM8000紫外光/可见光分光光度计测定其纯度、蛋白浓度和RIHA试验和胶体金纸色谱法对其主要成份的鉴定。结果发现,粗... 利用AKTA purifier 100纯化系统纯化盐析法制备的粗制鼠疫荚膜抗原,并将纯化洗脱的蛋白进行透析、浓缩后采用UltrospecTM8000紫外光/可见光分光光度计测定其纯度、蛋白浓度和RIHA试验和胶体金纸色谱法对其主要成份的鉴定。结果发现,粗制鼠疫荚膜抗原经过蛋白纯化仪SuperdexTM凝胶层析柱获得主要组份是种小分子蛋白,其纯度为88.5%,蛋白浓度为1.594 mg/mL,而且RIHA试验证实此蛋白是鼠疫菌F1抗原。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森菌 荚膜抗原 纯化 F1抗原

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鼠疫耶尔森菌毒力蛋白YopE的新功能

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作者 李典镕 杨慧盈 +4 位作者 柯岳华 唐留军 詹轶群 葛志强 于淼 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期433-441,共9页

鼠疫耶尔森菌外部蛋白E(YopE)是鼠疫耶尔森菌的6种分泌蛋白之一,主要通过其144位的"精氨酸手指"结构与细胞膜耦联蛋白RhoGTP酶相互作用发挥功能.本文构建YopE及其144位突变体YopE(R144A)的可诱导表达系统,并优化了诱导条件.... 鼠疫耶尔森菌外部蛋白E(YopE)是鼠疫耶尔森菌的6种分泌蛋白之一,主要通过其144位的"精氨酸手指"结构与细胞膜耦联蛋白RhoGTP酶相互作用发挥功能.本文构建YopE及其144位突变体YopE(R144A)的可诱导表达系统,并优化了诱导条件.用该系统结合流式细胞技术检测YopE和YopE(R144A)对细胞凋亡、细胞周期和细胞活性氧(ROS)水平的影响.结果显示:YopE(R144A)促进HeLa细胞凋亡;使G0/G1期细胞比例上升,G2/M期细胞比例下降;随着YopE(R144A)表达量增加,p21蛋白的表达量也增加;YopE(R144A)也能抑制细胞ROS的产生.研究结果提示,YopE在细胞内可能存在新的致病靶点. 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森菌外部蛋白E(YopE) 细胞周期 细胞凋亡 活性氧(ROS)

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陕西省鼠疫耶尔森菌MLVA分型研究

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作者 聂守民 罗波艳 +5 位作者 孙养信 范锁平 常文辉 王宇萌 孙杰 安翠红 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期878-884,共7页

目的掌握陕西省鼠疫耶尔森菌分离株的MLVA基因分型特征,阐明不同疫情年份菌株间的遗传进化关系,为今后陕西省鼠疫的监测防治工作提供科学依据。方法采用MLVA(14+12)方法,对分离自陕西省鼠疫疫源地的66株鼠疫耶尔森菌进行基因分型,利用Bi... 目的掌握陕西省鼠疫耶尔森菌分离株的MLVA基因分型特征,阐明不同疫情年份菌株间的遗传进化关系,为今后陕西省鼠疫的监测防治工作提供科学依据。方法采用MLVA(14+12)方法,对分离自陕西省鼠疫疫源地的66株鼠疫耶尔森菌进行基因分型,利用BioNumerics(Version7.6)软件对分型结果进行聚类分析。结果66株鼠疫耶尔森菌分为A、B、C群,根据分离时间聚集成为相应群,A群包含42株菌,其中39株菌分离自2000-2001年,B群包含16株菌,其中15株分离自2006年,C群含8株菌,其中6株分离自1987-1988年。基因型分为19种,8个基因型为多菌株基因型,其他型为单菌株基因型。结论陕西省鼠疫菌MLVA基因型具有多态性,不同疫情年份菌株主导的基因型不同,MLVA分型能够很好区分陕西省不同年代鼠疫菌株,可用于鼠疫菌株的溯源分析。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森菌 MLVA 陕西省

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鼠疫耶尔森菌的研究及其军事医学意义 被引量：13

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作者 杨瑞馥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期172-176,共5页

随着军事医学的发展,防生物危害医学学科研究的范畴应当包括目前认识到的所有可以导致生物危害的领域,包括生物战、生物恐怖、外来有害生物入侵、生物资源流失、转基因生物安全和研发、突发疫情的应对研究等。鼠疫耶尔森菌是导致自然疫... 随着军事医学的发展,防生物危害医学学科研究的范畴应当包括目前认识到的所有可以导致生物危害的领域,包括生物战、生物恐怖、外来有害生物入侵、生物资源流失、转基因生物安全和研发、突发疫情的应对研究等。鼠疫耶尔森菌是导致自然疫源性疾病鼠疫的病原菌,也是重要的生物战和生物恐怖剂之一,历史上曾3次导致世界鼠疫大流行,多次被用于战争,并多次在战争中导致军队感染。目前鼠疫主要分布在亚洲、非洲、美洲及俄罗斯地区,我国现有12种类型的鼠疫自然疫源地,分布在19个省(区),占国土面积的15%左右,疫情监测结果表明,疫区动物鼠疫自然疫源地异常活跃,面积不断扩大,逐渐向城市逼近,防治形势严峻。2001年美国"9.11"恐怖袭击后,鼠疫耶尔森菌的研究方兴未艾,其中很多研究进展对其他生物恐怖剂的研究具有借鉴意义。微生物法医学溯源数据库的建立及其检测新技术的研究进展为生物恐怖剂的溯源和应急处置提供了很好的经验。 展开更多

关键词 耶尔森菌 鼠疫 生物战 军事医学

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鼠疫耶尔森菌菌株91001的蛋白质组学初步研究 被引量：1

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作者 宋亚军 童宗中 +18 位作者 王津 郭兆彪 汪莉 韩延平 裴德翠 周冬生 王敬强 李晓雷 祁芝珍 金丽霞 戴瑞霞 李敏 翟俊辉 杜宗敏 王效义 杨焕明 汪建 黄培堂 杨瑞馥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期315-319,共5页

目的　建立鼠疫耶尔森菌的蛋白质组学研究方法 ,获得鼠疫耶尔森菌的基本蛋白质组数据。方法　以对人无致病能力的布氏田鼠疫源地菌株 910 0 1为研究对象 ,按照溶解性的不同分别收集菌体蛋白 ,以 3种不同方法 (Shotgun LC MS MS ,1D LC M... 目的　建立鼠疫耶尔森菌的蛋白质组学研究方法 ,获得鼠疫耶尔森菌的基本蛋白质组数据。方法　以对人无致病能力的布氏田鼠疫源地菌株 910 0 1为研究对象 ,按照溶解性的不同分别收集菌体蛋白 ,以 3种不同方法 (Shotgun LC MS MS ,1D LC MS MS和2D MS)进行分析 ,将分析数据与基于 910 0 1菌株基因组全序列建立的蛋白质理论数据库进行比对 ,确定 910 0 1菌株本实验培养条件下所表达的蛋白组分。结果　Shotgun LC MS MS方法鉴定了 971种蛋白 ,1D LC MS MS鉴定了 915种 ,而 2D MS方法则鉴定了 2 33种蛋白质 ,三者合计为 1193种蛋白质 ,占基因组预测CDS的 2 8 7% (1193/414 3)。结论　不同的蛋白质组分析方法鉴定的蛋白质种类和数目都存在差异 ,为更全面地获得鼠疫耶尔森菌蛋白质组数据 ,有必要同时采取多种方法进行分析。 展开更多

关键词 耶尔森氏菌 鼠疫 蛋白质组

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鼠疫耶尔森菌小肽基因sORF34缺失株毒力及短期免疫保护效果评价 被引量：2

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作者 郭晓 曹诗洋 +6 位作者 谭亚芳 周亚洲 陈红艳 任一帆 王艳 杨瑞馥 杜宗敏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期757-763,共7页

目的探索小肽基因34(sORF34)缺失对鼠疫耶尔森菌毒力影响,并评价sORF34缺失株免疫保护活性。方法基于鼠疫耶尔森菌201株和鼠疫耶尔森菌EV76疫苗株利用λ-Red一步法构建小肽基因缺失株。比较鼠疫小肽基因缺失株和亲本株之间的毒力差别,... 目的探索小肽基因34(sORF34)缺失对鼠疫耶尔森菌毒力影响,并评价sORF34缺失株免疫保护活性。方法基于鼠疫耶尔森菌201株和鼠疫耶尔森菌EV76疫苗株利用λ-Red一步法构建小肽基因缺失株。比较鼠疫小肽基因缺失株和亲本株之间的毒力差别,并采用皮下免疫方式对小鼠进行免疫,与EV76疫苗株比较,评价体液免疫、保护率等方面的差异。结果PCR扩增结果证实,小肽基因缺失株构建成功。通过皮下LD_(50)测定、生存曲线测定,表明小肽基因缺失株较亲本株毒力下降。鼠疫201ΔsORF34和EV76ΔsORF34皮下免疫后可刺激机体产生抗F1-IgG,其中鼠疫201ΔsORF34免疫组抗体滴度与EV76疫苗株免疫组差异无统计学意义(P>0.05),EV76ΔsORF34免疫组较EV76疫苗株免疫组抗体滴度低;鼠疫EV76ΔsORF34株可刺激机体产生低滴度抗LcrV-IgG,而EV76和201ΔsORF34株不能刺激机体产生抗LcrV-IgG。初免后42 d使用致死剂量鼠疫201株进行皮下攻毒和滴鼻攻毒,3组保护率差异无统计学意义(P>0.05)。结论小肽基因缺失株经皮下途径感染BALB/c小鼠的毒力下降,鼠疫EV76ΔsORF34株较EV76疫苗株残存毒力进一步下降,但保护率差异无统计学意义(P>0.05),EV76ΔsORF34株有作为鼠疫减毒活疫苗候选株的潜力。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森菌 小肽 毒力 疫苗

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鼠疫耶尔森菌caf1基因缺失株体外生物学特性和对小鼠致病性分析 被引量：1

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作者 程鹏博 陆灏 +7 位作者 曹超越 蒋南 张丽丽 赵月峨 鹿建春 周冬生 胡凌飞 杨文慧 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期605-610,共6页

目的探索caf1基因缺失对鼠疫耶尔森菌体外生物学特性与对小鼠致病性的影响.方法利用CRISPR/Cas12a介导的基因编辑技术构建鼠疫耶尔森菌caf1基因缺失株,并通过PCR技术对caf1基因缺失验证.比较鼠疫耶尔森菌caf1基因缺失株和野生株201在生... 目的探索caf1基因缺失对鼠疫耶尔森菌体外生物学特性与对小鼠致病性的影响.方法利用CRISPR/Cas12a介导的基因编辑技术构建鼠疫耶尔森菌caf1基因缺失株,并通过PCR技术对caf1基因缺失验证.比较鼠疫耶尔森菌caf1基因缺失株和野生株201在生长速率、液体培养状态、聚集情况等体外生物学特性和对小鼠致病性等方面的差异.结果PCR扩增结果证实,caf1基因缺失株构建成功.体外生物学特征分析表明,与野生株相比,caf1基因缺失株的形态学和生长速率并未发生明显变化,自凝聚率升高.肺递送途径LD50分析表明,caf1的缺失导致鼠疫耶尔森菌气溶胶感染小鼠半数致死剂量显著降低.结论不同途径感染结果表明,caf1基因缺失株相较于野生株,在肺递送、滴鼻、皮下、尾静脉注射4种途径下对BALB/c小鼠的毒力均降低.caf1基因的缺失导致鼠疫耶尔森菌自凝聚率升高,对BALB/c小鼠致病性下降. 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森菌 caf1基因 CRISPR/Cas12a 毒力 自凝聚率

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鼠疫耶尔森氏菌F1抗原的表位预测 被引量：3

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作者 王文敬 董文其 李明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1014-1016,共3页

目的预测F1抗原的B细胞表位,为抗F1单克隆抗体的制备提供理论依据,探索适合我国鼠疫耶尔森菌（Yersinia pestis）蛋白B细胞表位研究的可行性方案。方法采用EMBOSS网络平台以及DNAStar Protean软件分析F1蛋白的二级结构、可塑性、亲水性... 目的预测F1抗原的B细胞表位,为抗F1单克隆抗体的制备提供理论依据,探索适合我国鼠疫耶尔森菌（Yersinia pestis）蛋白B细胞表位研究的可行性方案。方法采用EMBOSS网络平台以及DNAStar Protean软件分析F1蛋白的二级结构、可塑性、亲水性和抗原性指数等参数,进行B细胞表位的预测。结果F1蛋白的B细胞表位可能位于第106-132和141-155等区域内。结论预测结果为后续抗F1单克隆抗体的制备奠定一定理论基础,表位预测法有利于我国鼠疫菌B细胞表位研究平台的建立。 展开更多

关键词 F1抗原 鼠疫耶尔森菌 B细胞表位

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多重PCR快速鉴定鼠疫耶尔森氏菌 被引量：19

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作者 于学东 裴德翠 +4 位作者 宋亚军 郭兆彪 王津 李永勤 杨瑞馥 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期98-100,107,共4页

目的　建立鼠疫耶尔森氏菌多重PCR鉴定系统 ,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速鉴定。方法　针对分别存在于pFra、pRst质粒上毒力基因caf1和pla ,以及一段 2 76bp染色体序列 3a分别设计引物。采用多重PCR技术 ,同时检测caf1、pla、3a三个靶序列... 目的　建立鼠疫耶尔森氏菌多重PCR鉴定系统 ,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速鉴定。方法　针对分别存在于pFra、pRst质粒上毒力基因caf1和pla ,以及一段 2 76bp染色体序列 3a分别设计引物。采用多重PCR技术 ,同时检测caf1、pla、3a三个靶序列。结果　应用该多重PCR反应体系 ,对我国鼠疫耶尔森氏菌 17个生态型及新发现的青海田鼠鼠疫疫源地菌株的多重PCR扩增结果表明 ,实验菌株中除 2株分别缺失pFra、pPst质粒而扩增出 2条产物带外 ,其余 5 2株均扩增出预期的 3条产物带 ,相关菌株均阴性 ,其检测灵敏度为 1× 10 -4ngDNA。 结论　该方法用于鼠疫耶尔森氏菌的鉴定简便、快捷 ,具有很高的特异性和敏感性 。 展开更多

关键词 多重PCR 快速鉴定 鼠疫耶尔森氏菌 鼠疫

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荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌的实验研究 被引量：13

15

作者 张玲 翟俊辉 +4 位作者 周冬生 郭兆彪 毕玉晶 王津 杨瑞馥 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第3期206-209,共4页

目的　利用LightCycler建立一种简便、特异的荧光定量PCR检测方法 ,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速检测。 方法　采用SYBRGreenI随机掺入法 ,以Roche试剂盒为标准 ,比较两公司的DNA聚合酶 ,用鼠疫菌 310 0 4建立荧光PCR反应体系 ;针对鼠疫耶... 目的　利用LightCycler建立一种简便、特异的荧光定量PCR检测方法 ,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速检测。 方法　采用SYBRGreenI随机掺入法 ,以Roche试剂盒为标准 ,比较两公司的DNA聚合酶 ,用鼠疫菌 310 0 4建立荧光PCR反应体系 ;针对鼠疫耶尔森氏菌特异的染色体标识序列和质粒上F1抗原基因设计引物 ,检测其灵敏度和特异性 ,以盲测试验进行验证 ;在此基础上鉴定 2 75株鼠疫耶尔森氏菌 ,并测试该法检测脏器污染模拟标本的灵敏度。结果　建立以一个公司试剂为主较低成本的PCR反应体系 ;EV76的检测灵敏度可达每反应体系 1.6个菌 ;检测我国 18个生态型共计 2 75株鼠疫耶尔森氏菌及 2 8株非鼠疫菌株的PCR扩增结果表明 ,鼠疫菌株均出现特异的扩增结果 ,2 8株对照菌株均为阴性 ;肝、脾、肺模拟标本检测灵敏度可达每反应体系 4 0 0 0个菌。结论　该方法对于检测鼠疫耶尔森氏菌具有简便、快捷、高敏感性和特异性的特点 。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森氏菌 荧光定量PCR 标识序列 LightCycler

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对1株疑似鼠疫耶尔森氏菌的系统鉴定 被引量：4

16

作者 何建 李艳君 +8 位作者 祁芝珍 崔玉军 任玲玲 代瑞霞 王效义 崔百忠 张青雯 杨瑞馥 宋亚军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期355-358,共4页

目的对1株可疑菌株进行系列验证实验,以确定其是否为鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)。方法用鼠疫细菌学常规方法和分子生物学手段确定其生物学表型特征、特异性基因及基因组特征。结果该菌株具备鼠疫菌的典型形态特征;能被鼠疫噬菌体... 目的对1株可疑菌株进行系列验证实验,以确定其是否为鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)。方法用鼠疫细菌学常规方法和分子生物学手段确定其生物学表型特征、特异性基因及基因组特征。结果该菌株具备鼠疫菌的典型形态特征;能被鼠疫噬菌体完全裂解;主要生化特性为阿胶糖(+)、鼠李糖(-)、麦芽糖(+)、蜜二糖(-)、甘油(+)、脱氮(+),与典型鼠疫菌一致。毒力因子检查结果为均为阴性;对实验动物小白鼠完全无致死能力。全基因组芯片杂交实验和PCR扩增表明55023菌株没有鼠疫菌的三个质粒;也不具鼠疫标识基因;pgm位点代表性基因YPO1954扩增阳性,YPO1908扩增阴性,表明其pgm位点不完整;差异片段(DFR)分型结果表明该菌株缺失了14个DFR,不符合鼠疫菌的特征;多位点序列分型(MLST)分析结果表明该菌株与鼠疫存在16个碱基的差异,而与血清Ⅲ型假结核耶尔森氏菌仅相差两个碱基。结论尽管55023菌株具备鼠疫菌的一些表型特征,但基因组特征表明其不是鼠疫菌,而可能是血清III型的假结核耶尔森氏菌;噬菌体裂解结果等表型不能作为鼠疫菌鉴定的最终标准。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森氏菌 假结核耶尔森氏菌 表型鉴定 基因型鉴定

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鼠疫耶尔森氏菌Pla蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：3

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作者 杜春红 王鹏 +2 位作者 张建中 唐雪 宋志忠 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期985-988,共4页

目的:利用原核表达的鼠疫耶尔森氏菌P la蛋白(rP la),通过杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体(mAb),为相关研究工作奠定基础。方法:大肠杆菌表达的P la蛋白,包涵体经尿素反复洗涤纯化后免疫BALB/c小鼠,取血清抗体效价高的小鼠脾细胞与Sp2/0... 目的:利用原核表达的鼠疫耶尔森氏菌P la蛋白(rP la),通过杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体(mAb),为相关研究工作奠定基础。方法:大肠杆菌表达的P la蛋白,包涵体经尿素反复洗涤纯化后免疫BALB/c小鼠,取血清抗体效价高的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,以表达Pla、表达GST、天然提取Pla 3种蛋白为抗原物,采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,并结合Western blot对所获取mAb的特异性进行鉴定。结果:经间接ELISA筛选,获得3株能稳定分泌抗天然Pla蛋白mAb的杂交瘤细胞株,命名为15B8、14H4、19A4,亚类测定分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ链;腹水经间接ELISA法检测效价可达1∶106;Westernblot实验证实该3株mAb能特异性识别天然Pla蛋白。结论:成功获得了抗鼠疫耶尔森氏菌天然Pla抗原的特异性mAb,为进一步研究Pla蛋白及研发诊断试剂奠定了基础。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森氏菌 Pla蛋白 单克隆抗体

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基于核酸预混室温储运技术的荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌 被引量：2

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作者 谢辉 周蕾 +1 位作者 祁芝珍 邵高祥 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期783-787,共5页

目的实现荧光定量PCR技术在鼠疫现场和基层的应用。方法本试验将已建立的基于核酸预混室温储运技术的荧光定量PCR方法应用于我国各鼠疫疫源地野生菌株的检测,进行特异性评价。选取分布于我国境内不同鼠疫疫源地野生鼠疫耶尔森氏菌株、... 目的实现荧光定量PCR技术在鼠疫现场和基层的应用。方法本试验将已建立的基于核酸预混室温储运技术的荧光定量PCR方法应用于我国各鼠疫疫源地野生菌株的检测,进行特异性评价。选取分布于我国境内不同鼠疫疫源地野生鼠疫耶尔森氏菌株、鼠疫减毒菌株、耶尔森菌属近缘菌株假结核菌及小肠结肠炎菌进行荧光定量PCR检测。结果55株鼠疫耶尔森氏菌及鼠疫减毒菌株扩增阳性,假结核耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌无阳性扩增,冻干试剂在室温25℃和37℃条件下可保存6个月,敏感性与冷冻保存无差异,核酸扩增诊断可在1 h内完成。结论应用基于核酸预混室温储运技术的荧光定量PCR方法对我国各鼠疫疫源地55株鼠疫耶尔森氏菌检测呈现高度特异性,本试验冻干试剂具有可室温保存、便于运输、检测结果精准、快速等特点,具有较好的鼠疫现场应用前景。 展开更多

关键词 室温储运 荧光定量PCR 鼠疫耶尔森氏菌 冻干试剂

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鼠疫耶尔森氏菌LcrV基因的克隆与表达研究 被引量：1

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作者 王忠泽 荫俊 +4 位作者 王威 白洁 侯晓军 宋伟 张松乐 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第5期12-15,共4页

目的　研究鼠疫耶尔森氏菌 (Yersiniapestis)保护性抗原V蛋白的生物学活性 ,进而研究Y .pestis的致病机理。方法　采用PCR方法 ,从Y .pestis菌种中扩增出LcrV基因片段 ,进行鉴定后 ,然后将该片段克隆于原核表达载体pBV2 2 0 ,构建成重... 目的　研究鼠疫耶尔森氏菌 (Yersiniapestis)保护性抗原V蛋白的生物学活性 ,进而研究Y .pestis的致病机理。方法　采用PCR方法 ,从Y .pestis菌种中扩增出LcrV基因片段 ,进行鉴定后 ,然后将该片段克隆于原核表达载体pBV2 2 0 ,构建成重组质粒 pBV/LcrV ,进行温控诱导表达。 结果　 ( 1)获得长约 980bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知LcrV序列相同。( 2 )SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 3 8× 10 3处有表达条带。 ( 3 )经薄层扫描分析 ,目的蛋白条带占全菌蛋白的 3 8.4 %。 ( 4 )表达后菌体超声破碎后 ,目的蛋白主要存在于上清中。结论　获得了LcrV基因 ,并在大肠杆菌中获得了高效表达 ,表达产物主要以可溶状态存在。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森氏菌 基因克隆 测序 基因表达 LcrV基因

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一种选择敏感培养基对腐败材料检测鼠疫耶尔森氏菌检测的应用效果 被引量：1

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作者 谢辉 刘中凯 +3 位作者 耿永强 冯建萍 多杰昂欠 金星 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期906-909,930,共5页

目的研制并筛选适合从腐败材料分离鼠疫菌的选择敏感培养基,对其性能进行评价。方法以自制赫氏消化液为基础,加入刺激鼠疫菌和抑制杂菌生长的生化试剂配制成2种选择敏感培养基,以常见致病菌株、耶尔森氏菌属中与鼠疫菌近源的假结核耶尔... 目的研制并筛选适合从腐败材料分离鼠疫菌的选择敏感培养基,对其性能进行评价。方法以自制赫氏消化液为基础,加入刺激鼠疫菌和抑制杂菌生长的生化试剂配制成2种选择敏感培养基,以常见致病菌株、耶尔森氏菌属中与鼠疫菌近源的假结核耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌评估2种培养基的敏感性和特异性;应用以上培养基分离野外腐败动物材料的鼠疫菌,评价几种选择培养基的应用效果。结果1号培养基(4%十二烷基硫酸钠选择培养基)对鼠疫菌检测的特异性高、敏感性强,培养24 h鼠疫菌发育为典型成熟菌落,应用该培养基从腐败动物材料中分离鼠疫菌阳性检出率与龙胆紫选择培养基一致。结论4%十二烷基硫酸钠选择培养基分离鼠疫菌效果优于龙胆紫选择培养基,可用于野外腐败动物材料的鼠疫菌快速检验。 展开更多

关键词 选择敏感培养基 腐败材料 鼠疫耶尔森氏菌 快速检测 现场应用

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