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5株鼠抗人CD28单克隆抗体的研制及生物学特性的研究 被引量：11
1
作者 孙中文 陶然 +4 位作者 陆艳红 石云杰 於葛华 邱玉华 张学光 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期406-410,共5页
目的:制备鼠抗人CD28分子功能性单克隆抗体,研究其对T细胞活化、增殖及信号转导等方面的生物学效应。方法:以天然高表达CD28分子的人多发性骨髓瘤细胞株U266和小鼠淋巴瘤细胞转人CD28基因细胞株CD28-T分别作为免疫原和检测细胞株,采用B... 目的:制备鼠抗人CD28分子功能性单克隆抗体,研究其对T细胞活化、增殖及信号转导等方面的生物学效应。方法:以天然高表达CD28分子的人多发性骨髓瘤细胞株U266和小鼠淋巴瘤细胞转人CD28基因细胞株CD28-T分别作为免疫原和检测细胞株,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行单抗的研制;以快速定性试纸法鉴定单抗亚类;腹水诱生法和免疫亲和层析法进行单抗的制备和纯化;经间接免疫荧光法分析单抗对不同细胞膜表面CD28分子的识别;采用竞争抑制法分析单抗识别的抗原位点;利用3H-TdR掺入法分析单抗对PBTC的刺激效应和免疫荧光法分析PBTC活化前后的表型变化。结果:成功获得5株鼠抗人CD28功能性单克隆抗体,分别命名为2D5、2F5、3B6、3F8和8G8,其中2D5为IgG2a亚类,其余均为IgG1亚类;流式细胞仪分析结果显示,5株单抗均能良好识别CD28-T、U266、XG1和Jurkat细胞表面的CD28分子;竞争抑制试验表明,2D5和8G8能完全阻断标准抗人CD28单抗与U266膜CD28分子的结合,其余3株为部分阻断;3H-TdR掺入法实验结果表明,单抗8G8联合激发型CD3单抗能明显促进PBTC的增殖,刺激指数为7.4,活化细胞CD4、CD25、ICOS、41BB及OX40分子的表达上调。结论:5株单抗均为抗人CD28单克隆抗体,具有重要的基础研究及潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 cd28 杂交瘤 单克隆抗体 增殖效应 协同刺激分子
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鼠抗人CD28单克隆抗体的制备及体外生物学活性的初步研究 被引量：1
2
作者 沈立军 孔永 +3 位作者 颜天铭 王玉玉 王婧 邱玉华(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第18期2253-2257,共5页
目的:制备纯化的鼠抗人CD28分子的单克隆抗体,初步研究其体外生物学活性。方法:采用诱生腹水法制备抗体,ProteinA免疫亲和层析法进行纯化,并对纯化的抗体进行SEC-HPLC分析测定其纯度;ELISA及流式细胞术检测抗体与重组CD28抗原及Jurkat... 目的:制备纯化的鼠抗人CD28分子的单克隆抗体,初步研究其体外生物学活性。方法:采用诱生腹水法制备抗体,ProteinA免疫亲和层析法进行纯化,并对纯化的抗体进行SEC-HPLC分析测定其纯度;ELISA及流式细胞术检测抗体与重组CD28抗原及Jurkat膜表达CD28的结合活性,表面等离子体共振技术检测抗体与CD28的结合动力学参数,并研究抗体对外周血T细胞增殖的影响。结果:制备获得纯化的鼠抗人CD28分子的单克隆抗体,其纯度>95%,能够结合重组及天然表达的CD28,其半数效应浓度(EC50)分别为19.8μg/ml和15.2μg/ml,该抗体与CD28结合亲和力常数(KD)为2.13×10^-9M。基于细胞的活性分析结果表明,该抗体具有明显的促进人外周血T细胞增殖的活性。结论:本研究制备获得纯化的鼠抗人CD28单克隆抗体,该抗体具有良好的识别CD28的特性以及促进外周血T细胞增殖的活性。 展开更多
关键词 cd28 单克隆抗体 生物学活性 表面等离子共振技术 结合动力学
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儿童肝移植受者围手术期CD25人源化单克隆抗体联合激素减量免疫诱导的疗效探讨
3
作者 习剑鑫 陈玉国 +2 位作者 耿笑辰 邱伟 吕国悦 《临床小儿外科杂志》 北大核心 2025年第3期207-214,共8页
目的观察重组抗白细胞分化抗原25(cluster of differentiation 25, CD25)人源化单克隆抗体联合激素减量免疫诱导方案预防儿童肝移植受者急性排斥反应(acute rejection, AR)的效果。方法回顾性分析2015年7月至2024年8月于吉林大学第一医... 目的观察重组抗白细胞分化抗原25(cluster of differentiation 25, CD25)人源化单克隆抗体联合激素减量免疫诱导方案预防儿童肝移植受者急性排斥反应(acute rejection, AR)的效果。方法回顾性分析2015年7月至2024年8月于吉林大学第一医院接受肝移植的79例儿童受者资料, 根据围手术期免疫诱导方案分为全量激素组60例、CD25单抗联合半量激素组19例。全量激素组围手术期采用全量激素诱导, 术后采用他克莫司联合激素免疫抑制;CD25单抗联合半量激素组围手术期采用重组抗CD25人源化单克隆抗体联合半量激素诱导, 术后单用他克莫司免疫抑制。对比两组术后AR、感染及激素相关并发症等主要结局, 以及重症监护室(intensive care unit, ICU)停留时间、移植物存活率、患者存活率、住院时间及住院花费等次要结局的差异。结果 CD25单抗联合半量激素组与全量激素组相比, 术后AR发生率(4/19比16/60)、感染发生率(12/19比40/60)、激素相关并发症发生率(11/19比24/60)、排斥反应发生时间[(9.00±6.78)d比(8.50±7.19)d]差异无统计学意义(P>0.05), ICU停留时间[7.5(3.0, 11.0)d比3.5(0.0, 12.0)d]、住院花费[18.99(13.13, 41.45)万元比19.54(15.22±29.32)万元]、移植物存活率(18/19比59/60)、患者存活率(19/19比54/60)差异无统计学意义(P>0.05), 但两组住院时间[24.0(17.0, 34.0)d比35.0(27.0, 46.5)d]差异有统计学意义(P<0.05)。结论重组抗CD25人源化单克隆抗体联合激素减量免疫诱导方案安全有效, 能够在减少激素用量的同时实现相似的免疫抑制效果, 但与全量激素诱导相比, 并不能降低AR、感染及激素相关并发症的发生率。 展开更多
关键词 肝移植 重组抗cd25人源化单克隆抗体 急性排斥反应 糖皮质激素 外科手术 儿童
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鼠抗人CD28分子单克隆抗体的研制及生物学特性研究 被引量：22
4
作者 邱玉华 张学光 +2 位作者 季玉红 居颂光 王廷 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期368-370,共3页
目的制备鼠抗人CD28分子的单克隆抗体(mAb)，研究其在T细胞的活化、增殖及信号传导中的作用。方法以小鼠淋巴瘤细胞转染人CD28基因的细胞株(CD28-T)为免疫原，采用B淋巴细胞杂交瘤技术，获取分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株。以体内诱生法... 目的制备鼠抗人CD28分子的单克隆抗体(mAb)，研究其在T细胞的活化、增殖及信号传导中的作用。方法以小鼠淋巴瘤细胞转染人CD28基因的细胞株(CD28-T)为免疫原，采用B淋巴细胞杂交瘤技术，获取分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株。以体内诱生法生产腹水，并以免疫亲和层析法对其纯化。以快速定性试纸法鉴定mAb的Ig亚类，竞争抑制法分析mAb识别的抗原表位，3H-TdR掺入法研究mAb对T细胞的刺激效应。结果成功地获得了5株分泌特异性抗人CD28 mAb的杂交瘤细胞株，鉴定的1株(克隆18G8)属IgG2a，腹水效价(流式细胞仪分析)达1:2 400以上。该mAb能60％阻断标准鼠抗人CD28抗体与相应抗原的结合，提示其识别的抗原表位与标准mAb不完全相同。mAb 18G8可取代B7-1分子介导的协同刺激信号，促进人外周血T细胞增殖(SI=7)。结论18G8是1株功能性mAb，具有重要的研究和应用价值。 展开更多
关键词 cd28分子 协同刺激信号 杂交瘤 单克隆抗体 增殖效应
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CD3和CD28单克隆抗体联合作用对CIK细胞及其亚群增殖及功能的影响 被引量：7
5
作者 李玉 韩娇玲 +7 位作者 张震 王菲 李红 黄建敏 赵璇 杨黎 黄岚 张毅 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期255-260,共6页
目的:探讨CD3和CD28单克隆抗体联合作用对细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞及其亚群增殖及功能的影响。方法:采集2014年6月至2015年6月在郑州大学第一附属医院接受生物细胞治疗的20例肿瘤患者(肾癌6例,肺癌5例,肝... 目的:探讨CD3和CD28单克隆抗体联合作用对细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞及其亚群增殖及功能的影响。方法:采集2014年6月至2015年6月在郑州大学第一附属医院接受生物细胞治疗的20例肿瘤患者(肾癌6例,肺癌5例,肝癌、乳腺癌和恶性黑素瘤各2例,胆囊癌、淋巴瘤和卵巢癌各1例)的外周血,每例外周血均分为4组(对照组,单用CD3单抗组,单用CD28单抗组,CD3和CD28单抗联合作用组)进行CIK细胞的诱导培养。用CFSE染色检测CIK细胞的增殖能力;ELISA检测CIK细胞分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的水平;磁珠分选CIK细胞亚群CD4+、CD8+和CD56+细胞,然后用ELISA检测对CIK细胞亚群分泌IFN-γ、TNF-α和IL-2能力的影响。结果:CD3/CD28单抗联合作用(PI=59.35)对CIK细胞的增殖能力的影响与单独使用CD3单抗(PI=64.4)相比效果并不明显,但是可以刺激CIK细胞分泌较高水平的IFN-γ和TNF-α[IFN-γ:(384.6±263.1)vs(201.5±271.5)pg/ml,P=0.0361;TNF-α:(4.795±1.251)vs(2.835±0.443)pg/ml,P=0.0265];进一步分析发现,两单抗的联合作用可增强亚群细胞CD8+分泌IFN-γ、CD56+分泌IL-2和TNF-α的活性,从而起到对淋巴细胞功能的增强作用。结论:CD3与CD28单抗联合作用不能增强CIK的增殖能力,但可以在一定程度上增强CIK细胞的功能,在肿瘤的细胞免疫治疗应用中具有一定的潜力。 展开更多
关键词 cd3单克隆抗体 cd28单克隆抗体 细胞因子诱导的杀伤细胞 IFN-Γ TNF-α IL-2 肿瘤免疫治疗
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N-乙酰-D-乳糖胺、抗CD28单克隆抗体对肺癌患者来源的CIK细胞增殖及杀伤功能的影响 被引量：1
6
作者 石晓娟 乔永涛 +5 位作者 杨黎 杨双宁 黄建敏 赵璇 李红 张毅 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2016年第2期176-179,共4页
目的:观察N-乙酰-D-乳糖胺联合抗CD28单克隆抗体对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)增殖及杀伤功能的影响。方法:提取32例肺癌患者的外周血单个核细胞,分为对照组、抗CD28单克隆抗体组、N-乙酰-D-乳糖胺组及抗CD28单克隆抗体和N-乙酰-D... 目的:观察N-乙酰-D-乳糖胺联合抗CD28单克隆抗体对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)增殖及杀伤功能的影响。方法:提取32例肺癌患者的外周血单个核细胞,分为对照组、抗CD28单克隆抗体组、N-乙酰-D-乳糖胺组及抗CD28单克隆抗体和N-乙酰-D-乳糖胺联合组(联合组),依据CIK细胞培养流程培养和分组处理后于第4、8、10、12、14天测定各组细胞增殖,第14天测定IL-2、IL-10、γ干扰素及肿瘤坏死因子-α的分泌及对K562细胞的杀伤作用。结果:抗CD28单克隆抗体、N-乙酰-D-乳糖胺单独作用均能促进CIK细胞增殖及IL-2及肿瘤坏死因子-α的分泌,增加效应细胞(CD3^+CD8^+细胞)的比例,增强CIK细胞对K562细胞的杀伤能力(P<0.05),但二者联合没有协同效应(P>0.05)。结论:N-乙酰-D-乳糖胺与抗CD28单克隆抗体均能增强CIK细胞增殖及杀伤功能,但二者无协同作用。 展开更多
关键词 N-乙酰-D-乳糖胺 CIK细胞 抗cd28单克隆抗体 细胞增殖 杀伤功能 肺肿瘤
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抗CD49d单克隆抗体与rhG CSF动员的外周血干细胞移植重建小鼠造血功能的比较研究 被引量：1
7
作者 杜遵民 刘传方 +3 位作者 张玉昆 唐天华 张立成 孙军山 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期914-916,共3页
为比较研究抗CD49d单克隆抗体和重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)动员的外周血干细胞对造血功能重建的影响 ,经放、化疗预处理的BALB/c小鼠分别接受经生理盐水(对照组 )、rhG CSF(实验 1组 )、抗CD49d单克隆抗体 (实验 2组 )动员的... 为比较研究抗CD49d单克隆抗体和重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)动员的外周血干细胞对造血功能重建的影响 ,经放、化疗预处理的BALB/c小鼠分别接受经生理盐水(对照组 )、rhG CSF(实验 1组 )、抗CD49d单克隆抗体 (实验 2组 )动员的同系小鼠的外周血干细胞移植 ,观察受体小鼠的 4周存活率、外周血白细胞 (WBC)、骨髓有核细胞 (BMNC)、粒细胞巨噬细胞集落形成单位 (CFU GM)及脾集落形成单位 (CFU S)等指标。结果显示 ,实验 1、2组小鼠的 4周存活率、WBC、BMNC ,CFU GM和CFU S均明显高于对照组(P <0 0 1) ,实验 1、2组之间比较差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。提示抗CD49d单克隆抗体或rhG CSF均能动员小鼠外周血干细胞 ,并能重建同系小鼠的造血功能。 展开更多
关键词 外周血 干细胞移植 抗cd49d单克隆抗体 粒细胞集落刺激因子 小鼠 近交BALB/C
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聚乙二醇修饰鼠抗人CD3单克隆抗体的研究 被引量：1
8
作者 马杭圣 王鸿 +2 位作者 孙汉栋 易喻 应国清 《浙江工业大学学报》 CAS 2008年第6期633-637,共5页
确定一条聚乙二醇化鼠抗人CD3单克隆抗体和抗体片段的制备工艺路线.以胃蛋白酶酶解并通过凝胶柱分离和纯化得到抗体Fab′,利用PEG-SPA修饰抗体和抗体片段Fab′上的氨基,通过体内和体外T细胞增殖实验,考查修饰后的抗体和抗体片段的免疫活... 确定一条聚乙二醇化鼠抗人CD3单克隆抗体和抗体片段的制备工艺路线.以胃蛋白酶酶解并通过凝胶柱分离和纯化得到抗体Fab′,利用PEG-SPA修饰抗体和抗体片段Fab′上的氨基,通过体内和体外T细胞增殖实验,考查修饰后的抗体和抗体片段的免疫活性.较佳的修饰工艺条件为:在pH9.0硼酸缓冲液,反应温度25℃,抗体浓度0.2 mg/mL,抗体和聚乙二醇摩尔比为1∶20,反应3 h.修饰后抗CD3单抗全抗,对T淋巴细胞增殖抑制活性下降了32.28%,抗体Fab′下降了7.96%,PEG化Fab′下降了19.92%.利用聚乙二醇修饰抗体和抗体片段,提高了抗体半衰期,且无细胞毒性,活性损失较小,该技术具有较高的可行性,可极大的提高单克隆抗体尤其是非人源性抗体在临床上的应用. 展开更多
关键词 抗cd3单克隆抗体 聚乙二醇 化学修饰 免疫活性
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CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞在抗IL-6单克隆抗体延长小鼠心脏移植物存活中的作用
9
作者 雷钧 陈磊峰 +5 位作者 刘秀霞 方路 胡俊文 黄达 戈进 陈知水 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期43-48,共6页
目的探讨CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞在anti-IL-6mAb抑制同种异体心脏移植急性排斥反应中的作用及机制。方法构建小鼠心脏移植模型。实验动物随机分为移植模型组、移植对照组(注射rat-IgG)、anti-IL-17mAb治疗组和anti-IL-6mAb治疗... 目的探讨CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞在anti-IL-6mAb抑制同种异体心脏移植急性排斥反应中的作用及机制。方法构建小鼠心脏移植模型。实验动物随机分为移植模型组、移植对照组(注射rat-IgG)、anti-IL-17mAb治疗组和anti-IL-6mAb治疗组。流式细胞术检测各组受鼠移植术后第7天脾脏及移植心脏中CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞的比例。分别于anti-IL-6mAb组术后第1、3、5天给予anti-CD25mAb输注,于术后第7天检测受鼠脾脏及移植心脏CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞的比例,观察移植心脏存活时间并进行组织学检查;Real-time PCR检测anti-CD25mAb输注后第3、7、10天移植心脏中IFN-γmRNA的表达情况。使用去增殖的BALB/c或C3H小鼠脾脏淋巴细胞作为刺激细胞,各实验组受鼠移植物来源的淋巴细胞作为反应细胞,行混合淋巴细胞培养检测细胞增殖情况。结果 anti-IL-6mAb组移植术后第7天CD4^+CD25^+T细胞的比例明显升高,CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞占CD3^+T细胞的比例表现出同样的趋势,而anti-IL-17mAb组与移植模型组比较无明显差异。anti-CD25mAb输注anti-IL-6mAb组明显缩短了小鼠移植心脏的存活时间(10.6±1.2)d,伴随CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞比例明显下降,同时移植物中IFN-γmRNA的转录水平升高。混合淋巴细胞培养结果显示anti-IL-6mAb组受鼠淋巴细胞经刺激后其细胞增殖程度较rat-IgG对照组、anti-IL-6mAb^+anti-CD25mAb组及移植模型组明显下降,而针对来自第三方C3H小鼠的脾脏淋巴细胞刺激则无此抑制效应。结论 anti-IL-6mAb延长小鼠移植心脏存活可能是通过促进移植小鼠脾脏及移植心脏中CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞的产生而实现的。使用anti-CD25mAb降低CD4^+CD25^+T细胞水平抑制了anti-IL-6mAb的抗排斥效应,并且伴随着移植物中IFN-γmRNA转录水平的升高。 展开更多
关键词 急性排斥反应 心脏移植 抗IL-6单克隆抗体 抗cd25单克隆抗体 调节性T细胞 IFN-γ
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共刺激分子CD28单克隆抗体制备的新策略
10
作者 车小燕 林来兴妹 +2 位作者 陈伟平 聂飚 邱庆林 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第6期411-413,共3页
目的发展一种制备抗人ＣＤ２８单克隆抗体的新方法。方法构建编码人ＣＤ２８基因的逆转录病毒表达系统，感染 ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨髓瘤细胞ＮＳ－ｌ，使其细胞膜表达ＣＤ２８抗原并用于免疫小鼠，制备单克隆抗体。结果获得分泌抗人 ＣＤ... 目的发展一种制备抗人ＣＤ２８单克隆抗体的新方法。方法构建编码人ＣＤ２８基因的逆转录病毒表达系统，感染 ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨髓瘤细胞ＮＳ－ｌ，使其细胞膜表达ＣＤ２８抗原并用于免疫小鼠，制备单克隆抗体。结果获得分泌抗人 ＣＤ２８单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为Ｅ６６－３Ｓ，ＩｇＧ亚类鉴定为ＩｇＧ１。该株单抗能够特异性识别ＣＤ２８阳性的Ｔ细 胞，并完全阻断标准ＣＤ２８抗体与细胞表面ＣＤ２８抗原结合。在亚剂量分裂原的共刺激下，具有促进Ｔ淋巴细胞活化和 增殖作用。结论Ｅ６６－３Ｓ具有高度特异性和共刺激活性，为临床免疫治疗奠定了基础，同时，也为进一步制备其它膜抗 原的单克隆抗体提供了一种新途径． 展开更多
关键词 抗原 cd28 单克隆抗体 多发性骨髓瘤 逆转录病毒体 共刺激分子
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抗CD40L单克隆抗体对哮喘大鼠血液和淋巴液调节性T细胞的影响
11
作者 石涛 吴福玲 冯学斌 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期968-971,共4页
目的:研究抗CD40L单克隆抗体(抗CD40L mAb)对哮喘大鼠外周血和淋巴液中CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)数量及其功能的影响。方法:抗CD40L mAb处理血液和淋巴液中的单个核细胞(MNCs),流式细胞仪(FCM)检测MNCs中CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞的... 目的:研究抗CD40L单克隆抗体(抗CD40L mAb)对哮喘大鼠外周血和淋巴液中CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)数量及其功能的影响。方法:抗CD40L mAb处理血液和淋巴液中的单个核细胞(MNCs),流式细胞仪(FCM)检测MNCs中CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞的百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中IL-10和TGF-β1的含量。结果:体外培养72 h后,淋巴液来源MNCs中CD4+CD25+Foxp3+Treg的比例均明显高于血液来源的MNCs,末次激发后各组淋巴液和血液来源MNCs中CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg比例随细胞收集时间距末次激发时间延长呈先升高后降低的趋势;哮喘组淋巴液和血液来源MNCs中CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg比例均显著低于正常对照组和抗CD40L mAb组(P<0.05);末次激发后0、12 h收集的血液MNCs培养上清中抗CD40L mAb组TGF-β1的水平显著高于哮喘组和正常对照组(P<0.05);末次激发后24 h收集的淋巴液来源MNCs培养上清中抗CD40L mAb组IL-10的水平显著高于哮喘组和正常对照组(P<0.05)。结论:抗CD40L mAb促进CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞增殖,并在哮喘激发早期(0、12 h)促进血液来源CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞分泌TGF-β1,哮喘激发后期(24 h)促进淋巴液来源CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞分泌IL-10。 展开更多
关键词 哮喘 抗cd40L单克隆抗体 cd4+ cd25+ FOXP3+调节性T细胞 IL-10 TGF-β1
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人鼠嵌合型CD20单克隆抗体增强树突状细胞诱导抗淋巴瘤CTL免疫效应研究 被引量：2
12
作者 艾丽梅 任汉云 石永进 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第6期1247-1252,共6页
本研究利用人鼠嵌合型抗CD20单克隆抗体对B细胞淋巴瘤的靶向作用特点和其人源Fc段结合人树突状细胞(DC)的特点,探讨抗CD20单克隆抗体激发人DC呈递肿瘤抗原从而诱导抗淋巴瘤的细胞免疫效应。用人体外周血单个核细胞(MNC)体外诱导DC生成... 本研究利用人鼠嵌合型抗CD20单克隆抗体对B细胞淋巴瘤的靶向作用特点和其人源Fc段结合人树突状细胞(DC)的特点,探讨抗CD20单克隆抗体激发人DC呈递肿瘤抗原从而诱导抗淋巴瘤的细胞免疫效应。用人体外周血单个核细胞(MNC)体外诱导DC生成。对高表达CD20的人淋巴瘤细胞株(Raji)分别进行抗CD20单克隆抗体单独作用(R组)、加热诱导凋亡(A组)、诱导凋亡同时加用抗CD20单克隆抗体作用(R+A组)。经上述处理的肿瘤抗原分别负载于DC,应用透射电子显微镜观察DC对肿瘤抗原的吞噬作用,用抗原处理的DC进行自体混合淋巴细胞反应,应用ELISPOT分析效应细胞-干扰素产生和用MTT法分析效应细胞对Raji靶细胞的杀伤作用。结果表明:R组处理的DC无明显吞噬现象,A组中易见DC吞噬凋亡小体,而R+A组中DC吞噬较多的细胞碎片。流式细胞术检测显示,3个实验组DC上的CD80、CD86、HLA-DR表达高于对照组,差别显著(p<0.05),其中R+A组的CD86表达阳性率明显大于R组和A组(p<0.05)。淋巴细胞表面抗原检测结果显示,所有实验组CD8+细胞的比例均明显高于对照组(p<0.05),且应用抗CD20单克隆抗体的实验组(R组和R+A组)CD56+细胞数均有所增加,与不用抗CD20单克隆抗体组比较差别显著(p<0.05)。ELISPOT方法证明,各实验组产生γ-干扰素的细胞数均高于对照组,且当效靶比为1∶10时,R+A组斑点数明显高于其它组(p<0.05)。MTT法测定杀伤实验结果表明,各实验组对Raji细胞的杀伤率均较对照组增加,其中R+A组的杀伤率高于R组和A组,具有显著统计学差异(p<0.05)。结论:抗CD20单克隆抗体能够介导DC产生抗淋巴瘤效应,即激活并扩增肿瘤特异性细胞毒性淋巴细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK),抗CD20单克隆抗体同时加凋亡诱导处理肿瘤细胞作为抗原冲击树突状细胞,能进一步增强抗淋巴瘤的细胞免疫效应。 展开更多
关键词 抗cd20单克隆抗体 树突状细胞 淋巴瘤 CTL NK细胞
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小鼠抗小鼠CD226单克隆抗体的制备及应用 被引量：2
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作者 张学鑫 李娜 +5 位作者 李琦 程坤 马菁昌 王玉玲 张圆 庄然 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期934-940,共7页
目的利用CD226基因敲除小鼠作为免疫动物,制备抗小鼠CD226单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法用真核表达的重组小鼠CD226蛋白免疫动物,利用常规B细胞杂交瘤技术制备抗小鼠CD226 mAb,进行流式细胞术、Western blot实验等应用的鉴定。... 目的利用CD226基因敲除小鼠作为免疫动物,制备抗小鼠CD226单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法用真核表达的重组小鼠CD226蛋白免疫动物,利用常规B细胞杂交瘤技术制备抗小鼠CD226 mAb,进行流式细胞术、Western blot实验等应用的鉴定。建立夹心ELISA检测小鼠可溶性CD226的方法。应用已建立的夹心ELISA检测脂多糖诱导脓毒症小鼠血浆可溶性CD226浓度。结果获得2株分泌小鼠抗小鼠CD226 mAb的杂交瘤细胞株,克隆号分别命名为mA1.1和mA1.3,抗体亚类均为IgG1,轻链型均为κ。鉴定发现所获得的mAb可以应用于流式细胞术,能够识别细胞表面外源性转染表达的CD226和小鼠血小板表面的CD226;可以应用于Western blot实验,结合相对分子量(Mr)为67000的淋巴细胞膜蛋白,与CD226的Mr相符。用mA1.3 mAb包被酶标板,mA1.1 mAb标记辣根过氧化物酶或生物素,敏感度分别为3.0 ng/mL和0.25ng/mL,检测脓毒症小鼠血浆中可溶性的CD226浓度较正常小鼠降低。结论成功制备了识别小鼠CD226的小鼠mAb,可应用多种检测技术。 展开更多
关键词 cd226 单克隆抗体(mAb) 基因敲除小鼠 抗体应用
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抗人CD154单克隆抗体抑制免疫应答的实验研究 被引量：4
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作者 张春艳 张志方 +3 位作者 李树浓 宁波 陈凤英 黄文革 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期288-291,共4页
目的 :探讨抗人CD1 54单克隆抗体对免疫应答的抑制作用。方法 :①在体外进行混合淋巴细胞反应 ,研究抗人CD1 54单克隆抗体对淋巴细胞增殖反应的影响 ;②在严重免疫联合缺陷 (SCID)鼠体内重建人的免疫功能后 ,研究抗人CD1 54单克隆抗体在... 目的 :探讨抗人CD1 54单克隆抗体对免疫应答的抑制作用。方法 :①在体外进行混合淋巴细胞反应 ,研究抗人CD1 54单克隆抗体对淋巴细胞增殖反应的影响 ;②在严重免疫联合缺陷 (SCID)鼠体内重建人的免疫功能后 ,研究抗人CD1 54单克隆抗体在SCID小鼠体内对T细胞增殖的影响和对B细胞功能的影响。结果 :①双向混合淋巴细胞反应结果显示 ,抗体的 5个剂量组的 [3H] -TdR的掺入率均显著低于对照组 (均P <0 .0 1 ) ;②在输注人外周血单个核细胞第 6d、第 1 2d、第 2 1d ,实验组SCID鼠体内人T细胞占SCID鼠淋巴细胞的百分率均明显低于对照组(均P <0 .0 5) ;在输注人外周血单个核细胞后的第 1 2d、第 2 1d、第 31d ,实验组SCID鼠体内人IgG的含量明显低于对照组 (均P <0 .0 5)。结论 :抗人CD1 54单克隆抗体能够在体外抑制淋巴细胞的增殖 。 展开更多
关键词 cd40配体 单克隆抗体 免疫应答 抗人cd154抗体 实验研究
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抗CD20单克隆抗体治疗难治性自身免疫性溶血性贫血 被引量：8
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作者 王莉 徐卫 +2 位作者 李建勇 谢晓艳 盛瑞兰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期425-428,共4页
本研究初步观察抗CD20单克隆抗体利妥昔(rituximab)用于治疗难治性自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的疗效和安全性。对1例用糖皮质激素、脾切除治疗无效的AIHA患者,采用利妥昔单克隆抗体,375mg/m2,每周1次,共4次,观察溶血症状的改变并监测... 本研究初步观察抗CD20单克隆抗体利妥昔(rituximab)用于治疗难治性自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的疗效和安全性。对1例用糖皮质激素、脾切除治疗无效的AIHA患者,采用利妥昔单克隆抗体,375mg/m2,每周1次,共4次,观察溶血症状的改变并监测血红蛋白(Hb)水平及其它检验指标,同时观察有无不良反应发生。结果表明,首次治疗后11天乳酸脱氢酶(LDH)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(IBIL)逐渐下降,第45天降至正常范围;首剂治疗25天后Hb水平比治疗之前升高到95-100g/L以上。治疗后已4月余,患者仍处于缓解状态。治疗过程中未发生明显不良反应。结论:抗CD20单克隆抗体利妥昔用于治疗难治性自身免疫性溶血性贫血是有效而且安全的。 展开更多
关键词 抗cd20单克隆抗体 利妥昔 溶血性贫血 难治性自身免疫性溶血性贫血
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抗CD25单克隆抗体治疗耐激素的急性移植物抗宿主病疗效分析 被引量：5
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作者 刘静 王恒湘 +5 位作者 段连宁 阎洪敏 薛梅 朱玲 丁丽 王志东 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期160-163,共4页
本研究探讨抗CD25单克隆抗体在单倍体相合骨髓移植术(hiBMT)后耐激素的急性移植物抗宿主病(aGVHD)治疗中的作用。对15例单倍体相合BMT后出现耐激素的Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的患者给予巴利昔单克隆抗体20 mg,第1、4天静脉点滴,未达到疗效的病人间... 本研究探讨抗CD25单克隆抗体在单倍体相合骨髓移植术(hiBMT)后耐激素的急性移植物抗宿主病(aGVHD)治疗中的作用。对15例单倍体相合BMT后出现耐激素的Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的患者给予巴利昔单克隆抗体20 mg,第1、4天静脉点滴,未达到疗效的病人间隔1周后重复本治疗。结果显示:完全有效8例(53.33%),其中4例无病生存,2例生存伴局限性cGVHD,2例死于肺部感染;3例部分有效(20%),其中1例无病生存,1例死于aGVHD及感染,1例死于肺部感染;4例无效(26.67%)死亡,死亡原因有GVHD、肺部感染、心力衰竭。总有效率73.33%,总生存率46.67%。该药应用安全,未发现输注相关的毒副作用。结论:抗CD25单克隆抗体对单倍体相合BMT后耐激素的Ⅱ-Ⅳ度aGVHD具有较好的疗效,但总的生存率仍然较低,感染仍然是导致该类患者死亡的主要原因,因此加强环境保护,预防感染极为重要。 展开更多
关键词 抗cd25单克隆抗体 骨髓移植 急性移植物抗宿主病 巴利昔
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抗CD20单克隆抗体在儿童原发性难治性肾病综合征的应用新进展 被引量：9
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作者 方香 杨晓 +1 位作者 高春林 夏正坤 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2017年第3期315-318,共4页
原发性难治性肾病综合征(idiopathic refractory nephritic syndrome,IRNS)一直是临床治疗的棘手问题。抗CD20单克隆抗体是一种诱导B细胞溶解和凋亡的新型免疫抑制剂,其出现极大地改善了IRNS患者的预后。近年来,多数病例分析和临床试验... 原发性难治性肾病综合征(idiopathic refractory nephritic syndrome,IRNS)一直是临床治疗的棘手问题。抗CD20单克隆抗体是一种诱导B细胞溶解和凋亡的新型免疫抑制剂,其出现极大地改善了IRNS患者的预后。近年来,多数病例分析和临床试验对抗CD20单克隆抗体治疗儿童IRNS的有效性进行了报道。本文就抗CD20单克隆抗体的作用机制、在IRNS的临床应用、不良反应及研究中存在的问题进行综述。 展开更多
关键词 肾病综合征 抗cd20单克隆抗体 利妥昔单抗 免疫抑制剂 儿童
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RACE策略克隆抗人CD16单克隆抗体轻链可变区基因 被引量：4
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作者 解志刚 郭宁 +4 位作者 冯健男 施明 孙瑛勋 于鸣 沈倍奋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期82-83,共2页
鼠源性单克隆抗体(mAb)应用于人体治疗首先需对其进行基因工程化改造.目前, 常用的克隆mAb可变区基因的方法, 是利用抗体可变区内骨架区(FR)序列的保守性, 设计一组通用引物, 采用RT-PCR法扩增可变区基因[1,2].但由于引物的简并性, 克... 鼠源性单克隆抗体(mAb)应用于人体治疗首先需对其进行基因工程化改造.目前, 常用的克隆mAb可变区基因的方法, 是利用抗体可变区内骨架区(FR)序列的保守性, 设计一组通用引物, 采用RT-PCR法扩增可变区基因[1,2].但由于引物的简并性, 克隆过程中将不可避免地改变抗体可变区两侧(FR1、FR4)的氨基酸序列, 这些改变可能导致基因工程抗体亲和力降低[3].我们对传统方法进行了改进, 采用5′-RACE(rapid amplification of cDNA end, RACE)克隆的策略, 获得了抗人CD16 mAb轻链可变区(VL)基因的真实序列. 展开更多
关键词 RACE策略 抗人cd16单克隆抗体 基因克隆 基因序列
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抗人CD28鼠-人嵌合抗体的构建及瞬时表达 被引量：2
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作者 程钢 陈永井 +5 位作者 马震宇 费敏 孙中文 徐耀瑜 胡玲玲 邱玉华 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期482-485,共4页
目的构建及瞬时表达抗人CD28鼠-人嵌合抗体。方法采用基因工程技术,从分泌鼠抗人CD28单克隆抗体的杂交瘤细胞株(克隆号:2F5)中克隆出抗体重链和轻链可变区基因及相应信号肽编码序列。分别与人免疫球蛋白IgG1恒定区重、轻链基因拼接,构... 目的构建及瞬时表达抗人CD28鼠-人嵌合抗体。方法采用基因工程技术,从分泌鼠抗人CD28单克隆抗体的杂交瘤细胞株(克隆号:2F5)中克隆出抗体重链和轻链可变区基因及相应信号肽编码序列。分别与人免疫球蛋白IgG1恒定区重、轻链基因拼接,构建含有重组基因的pIRES表达质粒pIRES/h2F5。转染293T细胞并用抗性药物G418选择培养。采用流式细胞术,检测瞬时转染细胞后嵌合抗体的表达情况。结果抗人CD28鼠人嵌合抗体得到表达并能与CD28分子特异性结合。结论抗人CD28鼠-人嵌合抗体的构建和瞬时表达是成功的,为后续构建稳定分泌抗人CD28鼠-人嵌合抗体的CHO基因转染细胞株奠定了基础。 展开更多
关键词 cd28 单克隆抗体 嵌合抗体 瞬时表达
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氟哒拉滨联合抗CD单克隆抗体和氨磷汀治疗高龄慢性淋巴细胞白血病 被引量：6
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作者 刘洋 朱宏丽 +1 位作者 卢学春 李素霞 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期989-992,共4页
慢性淋巴细胞白血病(CLL)是一种恶性淋巴细胞增生性疾病,老年人多发。目前CLL治疗的主要问题是:①治疗完全缓解率低;②CLL伴随免疫系统功能紊乱和治疗药物的骨髓抑制、感染等副作用,高龄患者难以耐受。本研究报告我科成功治疗1例74岁高... 慢性淋巴细胞白血病(CLL)是一种恶性淋巴细胞增生性疾病,老年人多发。目前CLL治疗的主要问题是:①治疗完全缓解率低;②CLL伴随免疫系统功能紊乱和治疗药物的骨髓抑制、感染等副作用,高龄患者难以耐受。本研究报告我科成功治疗1例74岁高龄B细胞性慢性淋巴细胞白血病患者。在治疗中采用核苷酸还原酶抑制剂即氟达拉滨,联合抗CD20单克隆抗体方案,按标准治疗剂量给药,并根据患者个体情况调整给药时间,运用泛细胞保护剂氨磷汀进行辅助治疗。结果表明:1个疗程治疗后患者达到完全缓解,外周血的细胞计数和分类恢复正常;继续应用氨磷汀辅助治疗20天,患者贫血得到纠正,血红蛋白量稳定在120g/L以上,化疗药物的副作用和并发症均得到了有效的控制。结论:老年CLL患者化疗过程中,采用氟哒拉滨联合抗CD20单克隆抗体方案,按标准剂量给药,同时根据患者自身情况调整给药次序和给药时间,体现个性化治疗,获得满意疗效;氨磷汀可以有效减轻或克服CLL伴随的免疫系统功能紊乱,以及氟哒拉滨、抗CD20单克隆抗体引起的骨髓抑制、感染、发热等副反应。 展开更多
关键词 慢性淋巴细胞白血病 氨磷汀 核苷酸还原酶抑制剂 抗cd20单克隆抗体
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