【目的】探究黑龙江林蛙(Rana amurensis)热休克蛋白90α家族B类成员1(heat shock protein 90 alpha class B member 1,HSP90AB1)基因的序列特征,了解其组织表达特性和脂多糖(LPS)诱导下的表达变化。【方法】以黑龙江林蛙脾脏组织cDNA...【目的】探究黑龙江林蛙(Rana amurensis)热休克蛋白90α家族B类成员1(heat shock protein 90 alpha class B member 1,HSP90AB1)基因的序列特征,了解其组织表达特性和脂多糖(LPS)诱导下的表达变化。【方法】以黑龙江林蛙脾脏组织cDNA为模板,通过PCR扩增HSP90AB1基因完整编码区(CDS)序列,使用在线软件对其编码蛋白进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测生理状态下HSP90AB1基因在黑龙江林蛙皮肤、肌肉、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和胃等组织器官中的表达量,同时对LPS诱导下不同时间点HSP90AB1基因在不同组织器官的转录水平进行检测。【结果】黑龙江林蛙HSP90AB1基因CDS长2178 bp,共编码725个氨基酸。生物信息学分析显示,HSP90AB1蛋白不存在信号肽且无跨膜信号,属于非跨膜蛋白,存在62个潜在磷酸化位点(含33个丝氨酸、19个苏氨酸及10个酪氨酸位点),其二级结构以α-螺旋为主(占47.03%),其次为无规则卷曲(占39.59%)和延伸链(占13.38%)。系统进化树结果显示,黑龙江林蛙与欧洲林蛙亲缘关系最近。在生理状态下,HSP90AB1基因在黑龙江林蛙胃中表达量最高,且显著高于其他组织(P<0.05);在肌肉组织中表达量最低,且显著低于其他组织(P<0.05)。Western blotting结果显示,HSP90AB1蛋白在黑龙江林蛙胃中表达量最高;在心脏中表达量最低,且显著低于其他组织(P<0.05)。LPS诱导后,黑龙江林蛙各组织中HSP90AB1基因表达量随诱导时间延长而呈降低趋势,其中诱导72和96 h表达量均显著低于其他时间点(P<0.05);诱导12、72 h时脾脏中HSP90AB1基因表达量显著高于其他组织(P<0.05);24 h时肌肉和脾脏中HSP90AB1基因表达量显著高于其他组织(P<0.05)。【结论】本研究成功克隆了黑龙江林蛙HSP90AB1基因CDS区序列,并明确了其在不同组织中的表达规律,其中在胃中表达量最高,肌肉组织中表达量最低。LPS诱导可明显抑制HSP90AB1基因在黑龙江林蛙不同组织中的转录水平。本试验结果为深入探究HSP90AB1基因在林蛙生理及应激过程中的功能机制提供了理论依据。展开更多
文摘【目的】探究黑龙江林蛙(Rana amurensis)热休克蛋白90α家族B类成员1(heat shock protein 90 alpha class B member 1,HSP90AB1)基因的序列特征,了解其组织表达特性和脂多糖(LPS)诱导下的表达变化。【方法】以黑龙江林蛙脾脏组织cDNA为模板,通过PCR扩增HSP90AB1基因完整编码区(CDS)序列,使用在线软件对其编码蛋白进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测生理状态下HSP90AB1基因在黑龙江林蛙皮肤、肌肉、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和胃等组织器官中的表达量,同时对LPS诱导下不同时间点HSP90AB1基因在不同组织器官的转录水平进行检测。【结果】黑龙江林蛙HSP90AB1基因CDS长2178 bp,共编码725个氨基酸。生物信息学分析显示,HSP90AB1蛋白不存在信号肽且无跨膜信号,属于非跨膜蛋白,存在62个潜在磷酸化位点(含33个丝氨酸、19个苏氨酸及10个酪氨酸位点),其二级结构以α-螺旋为主(占47.03%),其次为无规则卷曲(占39.59%)和延伸链(占13.38%)。系统进化树结果显示,黑龙江林蛙与欧洲林蛙亲缘关系最近。在生理状态下,HSP90AB1基因在黑龙江林蛙胃中表达量最高,且显著高于其他组织(P<0.05);在肌肉组织中表达量最低,且显著低于其他组织(P<0.05)。Western blotting结果显示,HSP90AB1蛋白在黑龙江林蛙胃中表达量最高;在心脏中表达量最低,且显著低于其他组织(P<0.05)。LPS诱导后,黑龙江林蛙各组织中HSP90AB1基因表达量随诱导时间延长而呈降低趋势,其中诱导72和96 h表达量均显著低于其他时间点(P<0.05);诱导12、72 h时脾脏中HSP90AB1基因表达量显著高于其他组织(P<0.05);24 h时肌肉和脾脏中HSP90AB1基因表达量显著高于其他组织(P<0.05)。【结论】本研究成功克隆了黑龙江林蛙HSP90AB1基因CDS区序列,并明确了其在不同组织中的表达规律,其中在胃中表达量最高,肌肉组织中表达量最低。LPS诱导可明显抑制HSP90AB1基因在黑龙江林蛙不同组织中的转录水平。本试验结果为深入探究HSP90AB1基因在林蛙生理及应激过程中的功能机制提供了理论依据。
