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MAGE-3逆抗原转染树突状细胞的抗胃癌免疫效率 被引量:2
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作者 黎皓 陈雪华 +5 位作者 俞焙秦 柯山 郑重 朱正纲 顾琴龙 刘炳亚 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期512-515,共4页
目的构建逆抗原表达载体,以获得理想的肿瘤疫苗。方法运用RT-PCR方法合成MAGE-3cDNA,分别将RANTES基因分泌段前导序列和受体Fc段克隆至MAGE-3cDNA两端(pS-MAGE-3-Fc)再转染入DC表达,将致敏的DC与外周血T细胞和胃癌细胞共培养,观察产生... 目的构建逆抗原表达载体,以获得理想的肿瘤疫苗。方法运用RT-PCR方法合成MAGE-3cDNA,分别将RANTES基因分泌段前导序列和受体Fc段克隆至MAGE-3cDNA两端(pS-MAGE-3-Fc)再转染入DC表达,将致敏的DC与外周血T细胞和胃癌细胞共培养,观察产生的免疫效应。结果转染pS-MAGE-3-Fc的DC诱导的刺激淋巴细胞增殖反应和CTL杀伤效应均显著高于转染pMAGE-3的转染组和对照组(P<0.05)。结论逆抗原策略是理想的肿瘤疫苗策略,能够显著提高肿瘤免疫效率。 展开更多
关键词 黑色素瘤抗原编码基因-3 抗原 树突状细胞 转染 主要组织相容性复合体
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CpG ODN协同MAGE-3抗原肽致敏DC疫苗对膀胱癌细胞BIU-87的抑制作用 被引量:1
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作者 李秀真 薛庆节 +5 位作者 路海 聂尚丹 王晖 李运清 赵龙玉 谭文彬 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期891-897,共7页
目的:探讨含未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤(CpG)序列的细菌寡核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG ODN)免疫佐剂在增强黑色素瘤抗原基因-3(melanoma antigen gene-3,MAGE-3)抗原肽致敏DC抗膀胱肿瘤细胞的作用及其分子机制。方法:采用Ficoll法... 目的:探讨含未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤(CpG)序列的细菌寡核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG ODN)免疫佐剂在增强黑色素瘤抗原基因-3(melanoma antigen gene-3,MAGE-3)抗原肽致敏DC抗膀胱肿瘤细胞的作用及其分子机制。方法:采用Ficoll法从健康志愿者HLA-A2型外周血中分离单个核细胞,常规方法诱导培养制备成熟DC。MTT法检测不同方式(MAGE-3、CpG ODN、MAGE-3+CpG ODN和无关抗原对照)致敏DC对T淋巴细胞增殖和CTL对靶细胞BIU-87的杀伤作用。CpG ODN+MAGE-3抗原肽致敏DC抗裸鼠BIU-87膀胱癌细胞移植瘤治疗7、11 d测定移植瘤质量变化,MTT和Western blotting法分别检测移植瘤细胞的增殖水平及其凋亡蛋白表达的变化。结果:CpG ODN+MAGE-3抗原肽致敏DC能够促进T淋巴细胞增殖(P<0.05),并显著提高活化T淋巴细胞的CTL对靶细胞BIU-87的杀伤活性(P<0.05)。体内实验表明,致敏DC治疗7、11 d的各组移植瘤质量均明显降低(均P<0.05),移植瘤的增殖能力下降也较明显(P<0.05);与其他致敏DC方式相比较,尤以CpG ODN+MAGE-3致敏DC组在治疗11 d时的移植瘤质量降低非常显著(P<0.01),且明显促进荷瘤小鼠脾脏单个核细胞的增殖能力(P<0.01);该组在治疗第3天起移植瘤组织Bcl-2表达水平明显降低、Bax水平明显升高(均P<0.05或P<0.01)。结论:CpG ODN能促进MAGE-3抗原肽致敏DC对膀胱癌BIU-87细胞的抑制作用,为膀胱癌DC疫苗的临床应用提供了实验依据。 展开更多
关键词 膀胱癌 BIU-8细胞 树突状细胞 含CpG序列的细菌寡核苷酸 黑色素瘤抗原基因-3
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MAGE-3基因稳定转染的HHCC细胞系的建立及其mRNA的表达 被引量:3
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作者 张秀敏 隋延仿 +4 位作者 司少艳 李侠 黄杨 胡沛臻 葛伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期450-451,453,共3页
目的:构建肿瘤抗原MAGE-3基因的真核表达载体,建立MAGE-3基因稳定转染的人肝细胞癌细胞系(humanhepatocellularcarcinomacellline,HHCC)。方法:利用分子生物学方法,构建带有MAGE-3基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的重组真核表... 目的:构建肿瘤抗原MAGE-3基因的真核表达载体,建立MAGE-3基因稳定转染的人肝细胞癌细胞系(humanhepatocellularcarcinomacellline,HHCC)。方法:利用分子生物学方法,构建带有MAGE-3基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-MAGE-3,经脂质体法转染HHCC后,用G418筛选阳性克隆。在荧光显微镜下观察HHCC中EGFP的表达,用RT-PCR法检测HHCC中MAGE-3mRNA的表达。结果:成功地构建了重组真核表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-3。以其转染HHCC后,经荧光显微镜及RT-PCR分别检测到MAGE-3mRNA转录和EGFP的表达。结论:建立了1株可稳定转染MAGE-3基因的肝细胞癌HHCC,为进一步应用该基因进行肝癌的免疫治疗提供了实验依据。 展开更多
关键词 黑色素瘤抗原-3 基因转染 绿色荧光蛋白 肿瘤 免疫治疗
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MAGE-3基因的表达、纯化及其抗血清的制备 被引量:3
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作者 肖刚 张文敏 +3 位作者 张萌 谢丹 郭爱林 文剑明 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期176-179,共4页
【目的】构建MAGE-3的原核表达质粒,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。【方法】利用RT- PCR方法扩增MAGE-3基因片段.连接入原核表达载体pGEX-4T-1,构建MAGE-3的原核表达质粒pGEX- MAGE-3并测序。将该质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达,... 【目的】构建MAGE-3的原核表达质粒,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。【方法】利用RT- PCR方法扩增MAGE-3基因片段.连接入原核表达载体pGEX-4T-1,构建MAGE-3的原核表达质粒pGEX- MAGE-3并测序。将该质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达,并通过谷胱甘肽巯基转移酶纯化系统进行分离纯化。用纯化的融合蛋白GST-MAGE-3免疫新西兰大白兔,ELISA法测定抗体效价,饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体,Western-blot检测抗体活性。【结果】构建了pGEX-MAGE-3原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后表达-相对分子质量约为72×103的蛋白,经GST融合蛋白纯化系统纯化,得到了MAGE-3的重组蛋白GST-MAGE-3。制备了兔抗GST-MAGE-3抗体。Western blot证实该抗体可与GST-MAGE-3蛋白特异性结合。【结论】获得了肿瘤抗原MAGE-3的纯化重组蛋白及其特异的多克隆抗体,为进一步研究MAGE-3抗原在肿瘤免疫治疗中的作用提供了一件检测工具。 展开更多
关键词 黑色素瘤抗原-3 原核表达 重组蛋白 纯化 抗体
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MAGE-3基因疫苗的构建及其免疫活性的实验研究
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作者 方耀敏 陈玉丙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1322-1325,共4页
目的:构建肿瘤抗原MAGE-3基因疫苗,观察其诱导免疫应答的能力。方法:构建带有目的基因MAGE-3基因和报告基因FGFP的重组表达质粒pEGFP-MAGE3,酶切鉴定后经脂质体法转染LA795后,用G418筛选阳性克隆。在荧光显微镜下观察FGFP的表达,用RT-PC... 目的:构建肿瘤抗原MAGE-3基因疫苗,观察其诱导免疫应答的能力。方法:构建带有目的基因MAGE-3基因和报告基因FGFP的重组表达质粒pEGFP-MAGE3,酶切鉴定后经脂质体法转染LA795后,用G418筛选阳性克隆。在荧光显微镜下观察FGFP的表达,用RT-PCR法检测LA795中MAGE-3 mRNA表达。将重组质粒pEGFP-MAGE3肌肉注射接种C57BL/6J小鼠,间隔10天,共3次,末次免疫7天后利用乳酸脱氢酶法检测脾淋巴细胞CIL杀伤活性、ELISA法脾细胞培养上清IL-2、IFN-γ浓度。结果:成功地构建了重组pEGFP-MAGE3质粒。转染LA795后,经荧光显微镜及RT-PCR分别检测到MAGE-3和EGFP的表达。杀伤实验结果显示,免疫组小鼠脾细胞对B16的杀伤率明显高于对照组(P<0.05)。脾细胞培养上清中Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2水平明显升高。结论:成功地构建了MAGE-3基因疫苗,该疫苗能够有效地诱导特异性免疫应答,为进一步应用该基因进行免疫治疗提供了实验依据。 展开更多
关键词 黑色素瘤抗原-3 基因疫苗 免疫应答
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