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鹅黑素皮质素受体-4基因的克隆与序列分析 被引量：9
1
作者 张同燕 陈宏权 +2 位作者 梁忠 李艳和 甘小伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期913-919,共7页
黑素皮质素受体-4（Melanocortin receptor-4,MC4R）是其黑素皮质素受体MCR（MC1-5R）家族成员之一,属G蛋白偶联受体。它可与瘦蛋白、神经肽、α-黑素细胞刺激素等一起调节动物体重和采食量。参考鸡MC4R基因序列设计引物,克隆并测序了鹅... 黑素皮质素受体-4（Melanocortin receptor-4,MC4R）是其黑素皮质素受体MCR（MC1-5R）家族成员之一,属G蛋白偶联受体。它可与瘦蛋白、神经肽、α-黑素细胞刺激素等一起调节动物体重和采食量。参考鸡MC4R基因序列设计引物,克隆并测序了鹅MC4R基因。结果表明,鹅MC4R基因编码区全长996 bp,其核苷酸序列与鸡的同源性为95.3%,与人、牛、猪等哺乳动物同源性在75%-79%;其氨基酸序列与鸡的同源性达到98.5%。构建哺乳类、鸟类和鱼类MC4R基因核苷酸进化树显示,鹅较早地与哺乳类动物分化开来。分析MC4R蛋白的氨基酸残基特性参数表明,MC4R的7次跨膜结构与MC4R的亲水性区域、电荷密度以及氨基酸残基位于表面概率的变化规律相一致。 展开更多
关键词 黑素皮质素受体-4 序列分析 同源性 氨基酸残基特性参数
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黑素皮质素受体-4的研究进展 被引量：10
2
作者 张轶博 巴彩凤 +1 位作者 苏玉虹 朱宝芹 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第1期59-63,共5页
黑素皮质素受体 4 (MC4R)是人类中枢神经系统中参与调节肥胖症发生的重要因素 ,可调节动物的体重和采食量。自MC4R基因克隆以来 ,学者们对MC4R的结构 ,生理功能 ,调控 ,作用机制及其基因突变与体重的关系等方面进行了大量的研究。
关键词 黑素皮质素受体-4 体重 基因突变 肥胖症 采食量 结构 生理功能 作用机制
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雷公山山区放牧山羊黑素皮质素受体-4mRNA表达的研究 被引量：2
3
作者 杨家大 吴声榕 潘盛榕 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第3期601-607,共7页
为研究放牧山羊黑素皮质素受体-4(melanocortin-4receptor,MC4R)mRNA表达水平的组织差异和品种差异,试验以β-actin基因为内参,应用双标准曲线法实时荧光定量PCR技术检测放牧饲养的黔东南小香羊、贵州白山羊、贵州黑山羊、黔北麻羊和南... 为研究放牧山羊黑素皮质素受体-4(melanocortin-4receptor,MC4R)mRNA表达水平的组织差异和品种差异,试验以β-actin基因为内参,应用双标准曲线法实时荧光定量PCR技术检测放牧饲养的黔东南小香羊、贵州白山羊、贵州黑山羊、黔北麻羊和南江黄羊的7个组织MC4R基因mRNA的表达水平。结果表明,5个放牧山羊品种7种组织中均有MC4R mRNA表达,其水平以皮下脂肪和肾脏最高,肝脏其次,肺脏和心脏第三,半膜肌和背最长肌最低。肝脏MC4R mRNA的表达水平无品种差异,皮下脂肪、肾脏、肺脏、心脏、半膜肌和背最长肌MC4R mRNA的表达水平都以贵州白山羊最高。结果提示,放牧山羊MC4R mRNA的表达水平存在组织差异。除肝脏以外,其余组织MC4R mRNA的表达水平存在品种差异。本研究为开展放牧山羊的生长、胴体、肉质等性状的分子标记辅助选择育种奠定了基础。 展开更多
关键词 放牧山羊 黑素皮质素受体-4 基因表达
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鸡黑素皮质素受体-4反向激动剂细胞筛选模型的建立 被引量：2
4
作者 周家华 李栋 +4 位作者 姜军娜 柴继田 王建兵 李颖颖 王志强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第7期1661-1667,共7页
本试验旨在建立体外鸡黑素皮质素受体-4(cMC4R)反向激动剂的细胞筛选模型,为从中草药中筛选出能与cMC4R作用且存在活性的中药成分提供一些基础性的研究。将成功构建的cMC4R真核表达质粒cMC4RpcDNA3.1(+)-myc与报告基因质粒pGL4.29[luc2p... 本试验旨在建立体外鸡黑素皮质素受体-4(cMC4R)反向激动剂的细胞筛选模型,为从中草药中筛选出能与cMC4R作用且存在活性的中药成分提供一些基础性的研究。将成功构建的cMC4R真核表达质粒cMC4RpcDNA3.1(+)-myc与报告基因质粒pGL4.29[luc2p/CRE/Hygro]按1∶5的比例共转染到CHO-K1细胞,两周后经有限稀释法获得单克隆;将获得的单克隆分别用CRE激活剂Forskolin和MC4R激动剂NDP-MSH作用6h,挑选萤火虫荧光素酶的相对表达量最高的单克隆作为阳性细胞株;提取阳性细胞总RNA,RT-PCR检测阳性细胞内cMC4R基因、荧光素酶报告基因的转录水平;对MC4R激动剂NDP-MSH的终浓度、NDP-MSH孵育时间及溶剂DMSO的终浓度进行优化,应用Z’因子对筛选方法进行评估。结果显示,获得了5个单克隆(A2、F7、F8、F9、H10),其中单克隆A2的萤火虫荧光素酶的相对表达量最高,将其作为阳性细胞株;RT-PCR在预期位置扩增出大小分别为996和1 653bp的两条目的条带;激动剂NDP-MSH终浓度为10-9 mol/L、NDP-MSH孵育时间为8h、溶剂DMSO终浓度小于2%时,筛选模型Z’因子为0.82。结果表明,本试验所建立的筛选方法可靠、稳定,细胞筛选模型可用于cMC4R反向激动剂的筛选,为进一步从中药中筛选出有效物质奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡黑素皮质素受体-4(cMC4R) 报告基因 细胞筛选模型
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犬黑素皮质素受体-4裸质粒注射促进小鼠肥胖的研究 被引量：1
5
作者 吕金钢 李久纯 +3 位作者 巴彩凤 王光川 苏荣健 张轶博 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第15期7032-7034,7042,共4页
[目的]探讨犬黑素皮质素受体-4(MC4R)cDNA的重组真核表达质粒对小鼠肥胖的影响。[方法]3次尾静脉高压注射pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R质粒,RT-PCR成功验证小鼠体内犬MC4R表达后,适时监测每只小鼠的体重,同窝小鼠相互对照,利用两两比较的秩... [目的]探讨犬黑素皮质素受体-4(MC4R)cDNA的重组真核表达质粒对小鼠肥胖的影响。[方法]3次尾静脉高压注射pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R质粒,RT-PCR成功验证小鼠体内犬MC4R表达后,适时监测每只小鼠的体重,同窝小鼠相互对照,利用两两比较的秩和检验进行统计学分析。另外,用脂肪组织病理切片分析小鼠皮下脂肪细胞变化。[结果]试验得出,小鼠体重变化有统计学意义;饲养时间相同、相互对照组的每一组小鼠脂肪细胞直径对比明显,且具有统计学意义。[结论]犬MC4R基因在小鼠体内表达,能促进小鼠体重增加,为犬MC4R调节肥胖机制的研究提供理论依据。 展开更多
关键词 犬 黑素皮质素受体-4 裸质粒注射 肥胖 基因转染
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软鳍新光唇鱼MC4R基因多态性与生长性状关联性分析
6
作者 唐智慧 殷艳慧 +4 位作者 潘晓赋 吴安丽 张源伟 王茉 王晓爱 《渔业研究》 2025年第1期1-10,共10页
【背景】软鳍新光唇鱼(Neolissochilus benasi)是重要的水产种质资源,但在培育过程中存在个体间生长速度差异较大的问题。【目的】筛选与软鳍新光唇鱼生长性状显著相关的分子标记,推动其生长性状的改良。【方法】本研究对与摄食、能量... 【背景】软鳍新光唇鱼(Neolissochilus benasi)是重要的水产种质资源,但在培育过程中存在个体间生长速度差异较大的问题。【目的】筛选与软鳍新光唇鱼生长性状显著相关的分子标记,推动其生长性状的改良。【方法】本研究对与摄食、能量代谢、生长发育密切相关的黑素皮质素受体-4(MC4R)基因开展研究,通过PCR-Sanger测序技术进行单核苷酸多态性(SNP)检测和分型,并将SNP位点与其生长性状进行关联性分析,挖掘软鳍新光唇鱼生长性状关联的SNP标记。【结果】MC4R基因2个拷贝共存在15个SNP位点,其中第1个拷贝有1个SNP位点,第2个拷贝有14个SNP位点。15个SNP位点中仅G227A为错义突变,氨基酸类型由缬氨酸(V)变为异亮氨酸(I),其余位点均为同义突变;群体遗传分析结果显示,除第1个拷贝SNP位点G669C遗传参数值较低外,MC4R基因第2个拷贝的SNP位点期望杂合度(He)和观测杂合度(Ho)分别为0.860±0.027和0.503±0.001,多态信息含量(PIC)为0.373~0.375,属于中度多态性,表明该群体的遗传多样性处于中上水平;关联性分析显示,MC4R基因2个拷贝15个SNP位点中,13个位点对软鳍新光唇鱼的生长性状具有不同程度的影响:位点G227A、A322G、C364T、G403A、T451C、G457A、G472A、T484C、G520A、T583C、G736A、C775G与体长、体质量显著相关(P<0.05),且均以纯合子为优势基因型,分别为AA、GG、TT、AA、CC、AA、AA、CC、AA、CC、AA、GG型;位点C664T仅检测到CC和CT两种基因型,并以杂合子CT型为优势基因型,与体质量显著相关(P<0.05)。【结论】本研究初步筛选了15个与软鳍新光唇鱼生长性状相关联的候选SNP位点,为今后其生长相关机制和分子标记的进一步解析,以及生长性状的改良提供了科学依据。 展开更多
关键词 软鳍新光唇鱼 黑素皮质素受体-4 SNP 性状关联
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绵羊MC4R基因的半定量RT-PCR及生物信息学分析 被引量：13
7
作者 张菊 杜立新 +1 位作者 李宏滨 魏彩虹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期804-810,共7页
本研究旨在对绵羊MC4R基因进行组织表达谱和生物信息学分析。参考牛MC4R基因序列设计引物,采用PCR技术克隆绵羊MC4R基因序列,并利用半定量RT-PCR进行组织表达谱分析;同时对其进行生物信息学分析。结果表明,克隆的绵羊MC4R基因全长1 919 ... 本研究旨在对绵羊MC4R基因进行组织表达谱和生物信息学分析。参考牛MC4R基因序列设计引物,采用PCR技术克隆绵羊MC4R基因序列,并利用半定量RT-PCR进行组织表达谱分析;同时对其进行生物信息学分析。结果表明,克隆的绵羊MC4R基因全长1 919 bp,含有999 bp的完整CDS编码区,编码332个氨基酸。其CDS编码区的核苷酸序列与牛、人、猪、大鼠、小鼠MC4R基因对应序列的同源性分别为95.2%、68.8%、82.7%、76.6%、77.1%,预测的氨基酸序列同源性分别为97.0%、92.8%、93.7%、92.2%、91.6%。组织表达谱分析表明MC4R基因在各组织均不同程度的表达,其中在大脑表达量很高,其他组织较低。生物信息学预测MC4R蛋白功能发现,绵羊的MC4R蛋白存在7个跨膜螺旋结构域,同时预测MC4R存在10个磷酸化位点和1个特异性蛋白激酶磷酸化位点。结果表明,MC4R是一个非常保守的蛋白,在绵羊的生长发育中起着重要作用。 展开更多
关键词 黑素皮质素受体-4 基因克隆 半定量RT-PCR 生物信息学
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猪MC4R基因突变体真核表达载体的构建及功能研究
8
作者 韩立强 郭豫杰 +4 位作者 鲁维飞 张欣 褚贝贝 王江 杨国宇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期679-685,共7页
为研究MC4R基因不同突变体的功能差异,本研究从猪肌肉组织中克隆得到MC4R基因的编码序列,将克隆片段与pcDNA3.1真核表达载体进行KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切,连接形成重组表达载体MC4R1,将载体转染BHK细胞后Western blotting检测蛋白表达。通... 为研究MC4R基因不同突变体的功能差异,本研究从猪肌肉组织中克隆得到MC4R基因的编码序列,将克隆片段与pcDNA3.1真核表达载体进行KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切,连接形成重组表达载体MC4R1,将载体转染BHK细胞后Western blotting检测蛋白表达。通过点突变法得到MC4R基因在707/892位点的3个突变载体,将突变载体瞬时转染到BHK细胞,采用免疫荧光对细胞进行标记,通过激光共聚焦显微镜和流式细胞检测荧光表达,结果发现,克隆的MC4R1基因序列长度大约1 000bp,在707/892位点序列为G/G,将构建的真核表达载体MC4R1转染BHK细胞,经过Western blotting检测发现MC4R1蛋白正常表达;通过点突变法得到在707/892位点突变的突变载体MC4R2(G/A)、MC4R3(A/G)、MC4R4(A/A),经过激光共聚焦观察荧光表达后发现,突变受体在细胞膜上均有正常表达,流式检测发现4个突变受体表达的荧光平均强度并没有显著差异(P>0.05)。通过构建MC4R基因突变载体后发现,707/892位点突变对于MC4R受体在细胞膜的表达没有显著影响,其具体机制作用还需深入研究。 展开更多
关键词 猪 黑素皮质素受体-4 突变体 表达
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三个绵羊群体MC4R基因多态性及生物信息学分析 被引量：2
9
作者 刘娇娇 马友记 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期87-93,共7页
旨在探讨绵羊黑素皮质素受体-4(melanocortin-4 receptor,MC4R)的分子机理,采用PCR-SSCP方法对3个绵羊群体(甘肃肉用绵羊新品种群、小尾寒羊和湖羊)的MC4R基因外显子进行多态性检测和生物信息学分析。结果表明,3个绵羊群体均存在3种基因... 旨在探讨绵羊黑素皮质素受体-4(melanocortin-4 receptor,MC4R)的分子机理,采用PCR-SSCP方法对3个绵羊群体(甘肃肉用绵羊新品种群、小尾寒羊和湖羊)的MC4R基因外显子进行多态性检测和生物信息学分析。结果表明,3个绵羊群体均存在3种基因型AA型、AB型和BB型,优势基因型为BB,其中优势等位基因为B;测序结果表明,野生型BB型和突变型AB型相比,AB型个体在该基因编码区第511位点发生G→A突变,第495位发生C→T突变;AA型个体在该基因编码区第511位点发生G→A突变,出现AA的纯合,第495位发生C→T突变,出现CC纯合;3个绵羊群体中小尾寒羊的多态信息含量属于中度多态(0.25<PIC<0.50),甘肃肉用绵羊新品种群羊和湖羊属于低度多态(PIC<0.25);χ2适合性检验表明除湖羊之外,其余2个绵羊品种均处于Hardy-Weinberg平衡状态。生物信息学分析发现MC4R氨基酸序列有明显的疏水性区域,有7个跨膜螺旋区及信号肽,其编码蛋白主要的二级结构元件是α螺旋和无规则卷曲;同源性比对发现绵羊MC4R基因与山羊、牛、野猪、人类及大猩猩的相似度分别为97%、94%、81%、83%及83%,说明MC4R是一个非常保守的蛋白,在绵羊的生长发育中起着重要作用。 展开更多
关键词 绵羊 黑素皮质素受体-4 多态性 生物信息学
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MC4R基因研究进展 被引量：13
10
作者 左北瑶 钱宏光 《中国草食动物》 2011年第5期45-50,共6页
黑素皮质素受体-4(melanocortin-4 receptor,MC4R)是下丘脑腹内侧核分泌的一类肽类物质,为黑素皮质素受体家族5个亚型(MC1-5R)之一。在哺乳动物中,MC4R具有介导瘦蛋白(leptin)的功能,是一个调节能量平衡与能量动态平衡的重要信号分子,... 黑素皮质素受体-4(melanocortin-4 receptor,MC4R)是下丘脑腹内侧核分泌的一类肽类物质,为黑素皮质素受体家族5个亚型(MC1-5R)之一。在哺乳动物中,MC4R具有介导瘦蛋白(leptin)的功能,是一个调节能量平衡与能量动态平衡的重要信号分子,可与其内源性配体黑素皮质素激素(melanocortin,MC)或刺鼠色蛋白(agouti protein,agouti蛋白)和agouti相关蛋白(agouti related protein,AGRP)相结合,从而在控制食欲和体重稳态中起关键作用。因此,MC4R在人类肥胖研究中作为重要的调节因子倍受关注。最近有研究表明:MC4R的1232位点的G→A的突变与绵羊背膘厚度间存在关联,AG和AA型较GG型具有较高的背膘厚度。 展开更多
关键词 黑素皮质素受体-4(MC4R) MC4R基因多态性 肥胖调节因子 背膘厚度
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