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黑素瘤抗原-a基因在煤焦沥青烟气诱发小鼠肺癌组织中的表达及其意义 被引量:2
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作者 巴月 吴逸明 周小山 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期1007-1010,共4页
目的 :探讨煤焦沥青 (CTP)烟气诱发小鼠肺癌组织中黑素瘤抗原 - a(mage- a)基因 m RNA的表达及其意义。 方法 :CTP烟气诱发小鼠肺癌 ,提取癌组织中 RNA ,用逆转录 -巢式聚合酶链反应 (RT- PCR)方法对癌组织和相应癌旁组织 mage- am RNA... 目的 :探讨煤焦沥青 (CTP)烟气诱发小鼠肺癌组织中黑素瘤抗原 - a(mage- a)基因 m RNA的表达及其意义。 方法 :CTP烟气诱发小鼠肺癌 ,提取癌组织中 RNA ,用逆转录 -巢式聚合酶链反应 (RT- PCR)方法对癌组织和相应癌旁组织 mage- am RNA表达情况进行研究 ;p UC18质粒克隆 ,大肠杆菌 DH5α转化 ;PE- 377DNA测序仪对 2个阳性克隆中的目的基因片段进行 DNA序列测定。结果 :实验组 2 9只小鼠中 8只诱发出肺癌 (8/ 2 9) ;8只小鼠肺癌中 ,有 5只癌组织 mage- a m RNA表达阳性(5 / 8) ;相应的癌旁组织均未表达。 DNA序列测定证明扩增产物中目的基因片段均为 m age- a c DNA序列。结论 :小鼠肺癌组织中 m age- a m RNA呈高比例表达 ,CTP烟气诱发小鼠肺癌可能是 MAGE- A抗原肺癌免疫治疗的理想模型。 展开更多
关键词 表达 黑素瘤抗原-a基因 煤焦沥青烟气 肺肿瘤
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CRT/MAGE-A3重组腺病毒载体的构建及体外表达的研究 被引量:3
2
作者 刘新莉 陈洋 马萍 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期493-496,共4页
目的构建钙网织蛋白/黑素瘤抗原基因-A3(CRT/MAGE-A3)双基因重组腺病毒载体,并进行体外表达研究。方法从表达质粒pcDNA3/CRT中切取目的片段CRT,定向克隆至穿梭载体pShuttle-GFP-CMV。根据Genbank中提供的黑素瘤基因序列,设计并合成引物... 目的构建钙网织蛋白/黑素瘤抗原基因-A3(CRT/MAGE-A3)双基因重组腺病毒载体,并进行体外表达研究。方法从表达质粒pcDNA3/CRT中切取目的片段CRT,定向克隆至穿梭载体pShuttle-GFP-CMV。根据Genbank中提供的黑素瘤基因序列,设计并合成引物,以人肺癌组织cDNA文库为模板采用RT-PCR技术扩增人黑素瘤抗原基因-A3基因片段,测序后将黑素瘤抗原基因-A3基因片段定向克隆至穿梭载体,进而将穿梭载体克隆至PacⅠ限制性内切酶线性化的腺病毒载体pAdxsi。结果目的片段CRT转入穿梭载体后,酶切鉴定pShuttle(-ΔGFP)-CRT正确。人肺癌组织经RT-PCR扩增出大小约950 bp的基因片段,测序证实为MAGE-A3 DNA后,克隆至穿梭载体pShuttle(-ΔGFP)-CRT构建穿梭载体pShuttle-CRT-MAGE-A3,酶切鉴定证实构建正确。酶切穿梭载体将双基因片段克隆至腺病毒载体pAdxsi得到Ad-CRT/MAGE-A3病毒载体,酶切鉴定证实构建成功。转染293LP细胞并用Western blot检测到其体外表达。结论成功构建CRT/MAGE-A3重组腺病毒载体并证实其能在体外有效表达CRT蛋白及MAGE-A3蛋白。 展开更多
关键词 钙网织蛋白 黑素瘤抗原基因-a3 腺病毒 基因治疗
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重组腺病毒Ad-CRT/MAGE-A3联合表柔比星抑制乳腺癌细胞增殖及侵袭 被引量:1
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作者 刘新莉 赵丹 +2 位作者 李晓曦 李岩 马萍 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期491-495,共5页
目的:构建携带钙网蛋白(calreticulin,CRT)基因和黑素瘤抗原基因-A3(melanoma antigen gene-A3,MAGE-A3)的重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3,观察其联合表柔比星对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的抑制作用。方法:构建Ad-CRT/MAGE-A3载... 目的:构建携带钙网蛋白(calreticulin,CRT)基因和黑素瘤抗原基因-A3(melanoma antigen gene-A3,MAGE-A3)的重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3,观察其联合表柔比星对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的抑制作用。方法:构建Ad-CRT/MAGE-A3载体,感染MDA-MB-231细胞后,荧光显微镜观察其最适感染复数(multiplicity of infection,MOI)。分表柔比星、Ad-GFP、Ad-CRT/MAGE-A3、表柔比星+Ad-GFP、表柔比星+Ad-CRT/MAGE-A3共5组,MTT法检测各组MDA-MB-231细胞的增殖,Transwell实验检测各组MDA-MB-231细胞的侵袭力。结果:成功构建重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3,其感染MDA-MB-231细胞的最适MOI为100。与其他各组相比,应用Ad-CRT/MAGE-A3联合表柔比星能明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖[(83.27±1.04)%vs(57.42±1.27)%,(43.26±0.95)%,(61.23±1.47)%,(55.38±1.62)%;P<0.05]和侵袭[(8.41±4.20)vs(14.62±5.33),(107.66±3.35),(100.60±4.42),(104.20±2.60);P<0.05]。结论:腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3能增强表柔比星抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的能力。 展开更多
关键词 钙网蛋白基因 黑素瘤抗原基因-a3 重组腺病毒载体 表柔比星 乳腺癌 增殖 侵袭
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MAGE-A1和MAGE-A3在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义 被引量:6
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作者 国丽茹 王淑彬 +3 位作者 桑梅香 陈丽 孟令振 单保恩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期402-408,共7页
目的:探讨黑色素瘤抗原基因-A1(MAGE-A1)和MAGE-A3在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法:选取2006年1月至2010年1月河北医科大学第四医院神经外科手术切除的78例脑胶质瘤组织标本和15例车祸死亡捐献者的正常脑组织标本。用RT-PCR... 目的:探讨黑色素瘤抗原基因-A1(MAGE-A1)和MAGE-A3在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法:选取2006年1月至2010年1月河北医科大学第四医院神经外科手术切除的78例脑胶质瘤组织标本和15例车祸死亡捐献者的正常脑组织标本。用RT-PCR法检测胶质瘤组织中MAGE-A1和MAGE-A3的表达,分析其表达水平与患者预后的关系;用MSP-PCR术检测MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区的甲基化状态,分析两者表达与甲基化之间的关系;用RT-PCR法检测胶质瘤U251和U87细胞中MAGE-A1和MAGE-A3表达以及经DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)联合作用后两者的表达水平。结果:78例胶质瘤组织中MAGE-A1和MAGE-A3 mRNA阳性表达率分别为65.34%和38.46%,而在15例正常脑组织中未发现2种m RNA表达。MAGE-A1阳性组患者5年生存率较阴性组低(P<0.05)。MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区去甲基化水平与其在mRNA水平上的表达均有显著的相关性(均P<0.01)。未经5-Aza-CdR和TSA处理的U87细胞未见MAGE-A1和MAGE-A3 mRNA的表达,U251细胞则有少量表达。单独给予TSA不能引起MAGE-A1和MAGE-A3基因的表达激活,单独给予5-Aza-CdR或与TSA合用可以引起该2个基因的表达激活,且两者合用的作用优于单独给药。结论:脑胶质瘤组织中有不同程度的MAGE-A1和MAGE-A3基因表达,MAGE-A1基因表达与患者的预后不良相关。DNA启动子区甲基化和组蛋白乙酰化是MAGE-A1和MAGE-A3基因表达激活的重要机制。 展开更多
关键词 胶质瘤 U87细胞 U251细胞 黑色素瘤抗原基因-a1 黑色素瘤抗原基因-a3 DNA甲基化 组蛋白乙酰化
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MAGE-A9对人乳腺癌MDA-MB-231细胞中P53转录活性及功能的影响
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作者 吕伟华 桑梅香 +2 位作者 王彬 于凡 单保恩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期535-539,共5页
目的:探讨黑素瘤相关抗原-A9(melanoma-associated antigen,MAGE-A9)对人乳腺癌细胞中P53转录活性及功能的影响。方法:通过LipofectamineTM2000体外转染质粒pcDNA3.0、pcDNA3.0-p53、pCMV6-MAGE-A9和pcDNA3.0-p53/MAGE-A9至人乳腺癌MDA-... 目的:探讨黑素瘤相关抗原-A9(melanoma-associated antigen,MAGE-A9)对人乳腺癌细胞中P53转录活性及功能的影响。方法:通过LipofectamineTM2000体外转染质粒pcDNA3.0、pcDNA3.0-p53、pCMV6-MAGE-A9和pcDNA3.0-p53/MAGE-A9至人乳腺癌MDA-MB-231细胞,RT-PCR和Western blotting检测细胞中p21WAF1mRNA和蛋白的表达,荧光素酶报告基因分析检测细胞中p21WAF1启动子介导的荧光素酶表达活性,MTT法检测转染不同质粒对MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果:转染pcDNA3.0-p53/MAGE-A9组MDA-MB-231细胞中p21WAF1mRNA和蛋白表达水平均明显低于pcDNA3.0-p53组[(0.15±0.01)vs(0.18±0.02),(0.03±0.00)vs(0.06±0.01);均P<0.05]。转染pcDNA3.0-p53质粒可以增强MDAMB-231细胞中p21WAF1启动子介导的荧光素酶的表达[(58.56±3.47)vs(1.00±0.12),P<0.01],转染pcDNA3.0-p53/MAGE-A9后,MDA-MB-231细胞中p21WAF1启动子介导的荧光素酶的表达较转染pcDNA3.0-p53组明显降低[(22.02±4.91)vs(58.56±3.47),P<0.05]。与pcDNA3.0组相比,pcDNA3.0-p53组MDA-MB-231细胞增殖率明显明显降低[(228.89±22.39)%vs(337.23±23.67)%,P<0.05];而pcDNA3.0-p53/MAGE-A9组MDA-MB-231细胞增殖率明显高于pcDNA3.0-p53组[(291.51±5.91)%vs(228.89±22.39)%,P<0.05]。结论:MAGE-A9可抑制MDA-MB-231细胞中P53的转录活性及细胞增殖。 展开更多
关键词 黑素瘤相关抗原-a9 P53 乳腺癌 转录活性 MDA-MB-231细胞 荧光素酶报告基因分析
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MAGE-A基因亚家族及其在肿瘤临床上的应用前景 被引量:7
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作者 吕伟华 桑梅香 单保恩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期242-246,共5页
黑素瘤相关抗原(melanoma-associated antigen,MAGE)-A基因亚家族属于癌睾丸抗原家族,其定位于X染色体,包括MAGE-A1~MAGE-A12共12个成员。对MAGE-A在基因和蛋白水平的研究发现,其在正常组织中几乎不表达,而在多种肿瘤组织中均有较高水... 黑素瘤相关抗原(melanoma-associated antigen,MAGE)-A基因亚家族属于癌睾丸抗原家族,其定位于X染色体,包括MAGE-A1~MAGE-A12共12个成员。对MAGE-A在基因和蛋白水平的研究发现,其在正常组织中几乎不表达,而在多种肿瘤组织中均有较高水平的表达,并且往往表达一种以上的MAGE-A亚型。正常情况下,由于CpG岛高度甲基化,MAGE-A基因沉默表达。受辐射等因素影响时,基因组易发生去甲基化,促使MAGE-A基因表达。组蛋白的乙酰化也与MAGE-A的表达有关。MAGE-A作为肿瘤相关抗原,与肿瘤的发生、发展、耐药及较差的预后密切相关。由于MAGE-A特异性的表达于多种肿瘤,对MAGE-A亚型的检测尤其是多种亚型的联合检测有助于MAGE-A阳性肿瘤的诊断。此外,MAGE-A基因编码的抗原肽由MHCⅠ分子提呈至细胞毒性T细胞,从而发挥抗肿瘤活性。应用MAGE-A抗原肽的肿瘤疫苗已经投入临床试验,并取得了良好的治疗效果。 展开更多
关键词 黑素瘤相关抗原-a基因(melanoma—associated antigen-a MAGE-a) 肿瘤特异性抗原 诊断 免疫治疗
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