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Western blot鉴定背肩胛棕色脂肪黑皮质素4型受体的研究
被引量：
1
1
作者
范奎奎
李强
+3 位作者
杨文雅
潘登
李海军
杜晨光
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期841-846,共6页
旨在探究Western blot检测低丰度蛋白表达及试验过程对检测结果的影响。本试验以6~8周龄C57/BL6小鼠背肩甲棕色脂肪组织(Brown adipose tissue,BAT)为试验材料,以低丰度表达的黑皮质素4型受体(Melanocortin-4-receptor,MC4R)为检测蛋白...
旨在探究Western blot检测低丰度蛋白表达及试验过程对检测结果的影响。本试验以6~8周龄C57/BL6小鼠背肩甲棕色脂肪组织(Brown adipose tissue,BAT)为试验材料,以低丰度表达的黑皮质素4型受体(Melanocortin-4-receptor,MC4R)为检测蛋白,不同蛋白处理方法及电转膜液的组分、pH为试验对照条件,探究蛋白提取方法、电转液的组分与pH对转膜效率的影响。结果显示,转膜初始电压及功率与转膜液中十二烷基磺酸钠(SDS)含量及pH极显著相关,恒流转膜时,转膜液中SDS含量与转膜电压及功率呈反比,pH为8.0时的转膜电压及功率极显著高于pH 7.6(P<0.01)和8.6的转膜电压及功率(P<0.001);MC4R及相关蛋白在醇类物混合裂解液(20%Methanol+1%Triton+1%SDS+RIPA)的蛋白处理组的表达显著优于单独RIPA的蛋白处理组(P<0.05),极显著优于Trizol的蛋白处理组(P<0.01)。综上,于MC4R蛋白而言,在裂解液的基础上添加增强剂(Triton和SDS),可促进蛋白提取的效率,提高抗体检测的灵敏性。上述结果有助于相关操作人员对主要细节的认识,提高试验的灵敏及重复性。
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关键词
蛋白印迹
背肩胛骨棕色脂肪组织
转膜液
黑皮质素-4型受体
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职称材料
ML00253764拯救MC4R缺陷型突变体的特性研究
2
作者
王小花
曹小红
樊振川
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第5期255-259,共5页
旨在探究非肽类小分子ML00253764对致肥胖MC4R突变体拯救的特异性及经其拯救后受体的内化动力学特性,构建了黑皮质素受体及其突变体稳定表达的细胞模型。流式细胞术结果显示,ML00253764使MC4R缺陷型变受体N62S与P78L的膜表面表达分别提...
旨在探究非肽类小分子ML00253764对致肥胖MC4R突变体拯救的特异性及经其拯救后受体的内化动力学特性,构建了黑皮质素受体及其突变体稳定表达的细胞模型。流式细胞术结果显示,ML00253764使MC4R缺陷型变受体N62S与P78L的膜表面表达分别提高了43%与34%,但对其他黑皮质素受体及其突变体几乎无影响,说明ML00253764的拯救效果具有MC4R受体特异性及突变受体特异性特征。内化动力学研究结果证明经拯救的突变受体与野生型受体的内化特性相同,内化速率参数t1/2无显著性差异。内源性配体α-MSH及Ag RP对MC4R缺陷型受体膜表面表达无拯救性功效,进一步从侧面证明ML00253764的作用方式与二者不同,而突变受体被拯救是细胞膜渗透性药学伴侣分子特定作用的结果。
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关键词
黑皮质素-4型受体
药学伴侣分子
拯救
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职称材料
题名
Western blot鉴定背肩胛棕色脂肪黑皮质素4型受体的研究
被引量：
1
1
作者
范奎奎
李强
杨文雅
潘登
李海军
杜晨光
机构
内蒙古农业大学兽医学院
内蒙古农业大学职业技术学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期841-846,共6页
基金
国家自然科学基金(31660701
31360283)
文摘
旨在探究Western blot检测低丰度蛋白表达及试验过程对检测结果的影响。本试验以6~8周龄C57/BL6小鼠背肩甲棕色脂肪组织(Brown adipose tissue,BAT)为试验材料,以低丰度表达的黑皮质素4型受体(Melanocortin-4-receptor,MC4R)为检测蛋白,不同蛋白处理方法及电转膜液的组分、pH为试验对照条件,探究蛋白提取方法、电转液的组分与pH对转膜效率的影响。结果显示,转膜初始电压及功率与转膜液中十二烷基磺酸钠(SDS)含量及pH极显著相关,恒流转膜时,转膜液中SDS含量与转膜电压及功率呈反比,pH为8.0时的转膜电压及功率极显著高于pH 7.6(P<0.01)和8.6的转膜电压及功率(P<0.001);MC4R及相关蛋白在醇类物混合裂解液(20%Methanol+1%Triton+1%SDS+RIPA)的蛋白处理组的表达显著优于单独RIPA的蛋白处理组(P<0.05),极显著优于Trizol的蛋白处理组(P<0.01)。综上,于MC4R蛋白而言,在裂解液的基础上添加增强剂(Triton和SDS),可促进蛋白提取的效率,提高抗体检测的灵敏性。上述结果有助于相关操作人员对主要细节的认识,提高试验的灵敏及重复性。
关键词
蛋白印迹
背肩胛骨棕色脂肪组织
转膜液
黑皮质素-4型受体
Keywords
Western blot
back shoulder brown adipose tissue
electrotransfer buffer
Melanocortin
-
4
-
receptor
分类号
Q503 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
ML00253764拯救MC4R缺陷型突变体的特性研究
2
作者
王小花
曹小红
樊振川
机构
天津科技大学
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第5期255-259,共5页
基金
天津市应用基础与前沿技术研究计划(天津自然科学基金一般项目)(13JCYBJC41900)
文摘
旨在探究非肽类小分子ML00253764对致肥胖MC4R突变体拯救的特异性及经其拯救后受体的内化动力学特性,构建了黑皮质素受体及其突变体稳定表达的细胞模型。流式细胞术结果显示,ML00253764使MC4R缺陷型变受体N62S与P78L的膜表面表达分别提高了43%与34%,但对其他黑皮质素受体及其突变体几乎无影响,说明ML00253764的拯救效果具有MC4R受体特异性及突变受体特异性特征。内化动力学研究结果证明经拯救的突变受体与野生型受体的内化特性相同,内化速率参数t1/2无显著性差异。内源性配体α-MSH及Ag RP对MC4R缺陷型受体膜表面表达无拯救性功效,进一步从侧面证明ML00253764的作用方式与二者不同,而突变受体被拯救是细胞膜渗透性药学伴侣分子特定作用的结果。
关键词
黑皮质素-4型受体
药学伴侣分子
拯救
Keywords
melanocortin
-
4
receptor
pharmacological chaperone
rescue
分类号
R91 [医药卫生—药学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Western blot鉴定背肩胛棕色脂肪黑皮质素4型受体的研究
范奎奎
李强
杨文雅
潘登
李海军
杜晨光
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
ML00253764拯救MC4R缺陷型突变体的特性研究
王小花
曹小红
樊振川
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
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职称材料
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