海藻酸钙固定麦芽寡糖基海藻糖合酶的研究

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作者 高启禹 徐光翠 吴襟 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第9期3884-3885,共2页

比较麦芽寡糖基海藻糖合酶(MTSase)与其固定化酶的最适反应pH值、pH稳定性、最适反应温度和热稳定性。结果表明,固定化酶的最适反应pH值(5.5)较原酶(6.0)低,最适反应温度(65℃)较原酶(60℃)高,pH稳定性和热稳定性均较原酶高。

关键词 麦芽寡糖基海藻糖合酶 固定化酶 pH稳定性 热稳定性

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易错PCR技术提高源于Sulfolobus acidocaldarius麦芽寡糖基海藻糖合成酶活性

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作者 姚锴琳 宿玲恰 吴敬 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期16-23,共8页

利用易错PCR技术结合高通量筛选技术对源于Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909的MTSase进行定向进化,获得一个酶活提高的突变体酶D-6。基因分析表明,突变体酶发生了2个位点突变:G432D/G586D,其中突变位点G586D位于Aβ8与AEα14的loo... 利用易错PCR技术结合高通量筛选技术对源于Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909的MTSase进行定向进化,获得一个酶活提高的突变体酶D-6。基因分析表明,突变体酶发生了2个位点突变:G432D/G586D,其中突变位点G586D位于Aβ8与AEα14的loop环上。将野生型MTSase和突变体酶D-6进行蛋白质纯化后,测定其酶学性质,结果表明:突变体酶D-6的比活力为野生型MTSase的1.22倍;野生型的Km值为4.74 mmol/L,而突变体D-6为2.77 mmol/L,表明其对底物亲和性较野生型有所提高。 展开更多

关键词 麦芽寡糖基海藻糖合成酶 嗜酸热硫化叶菌 易错PCR

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海藻酸钙固定麦芽寡糖基海藻糖水解酶的研究 被引量：3

3

作者 高启禹 吴襟 +1 位作者 段子渊 刘孟洲 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2005年第3期311-314,共4页

研究了一种用海藻酸钙包埋麦芽寡糖基海藻糖水解酶(maltooligosyltrehalosetrehalohydrolase,MTHase)的固定化新技术,比较了原酶与固定化酶的最适反应温度、最适反应pH值和热稳定性。结果显示:固定化酶的最适反应温度和稳定温度都由原酶... 研究了一种用海藻酸钙包埋麦芽寡糖基海藻糖水解酶(maltooligosyltrehalosetrehalohydrolase,MTHase)的固定化新技术,比较了原酶与固定化酶的最适反应温度、最适反应pH值和热稳定性。结果显示:固定化酶的最适反应温度和稳定温度都由原酶的60℃提高到65℃;固定化酶的最适反应pH值较原酶的5.5降低到5.0。表明MTHase的固定化能有效地提高它的耐热性及耐酸性。这对在未来的海藻糖工业生产中,降低微生物的污染和增加淀粉的溶解度,在更高的反应温度条件下进行海藻糖的合成,提供了一个新思路。 展开更多

关键词 麦芽寡糖基海藻糖水解酶(MTHase) 海藻酸钙 固定化酶 海藻糖

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Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909麦芽寡糖基海藻糖水解酶突变株的酶学性质及其制备海藻糖的条件优化

4

作者 王振栋 宿玲恰 吴敬 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期14-19,共6页

来源于古细菌嗜酸热硫矿硫化叶菌(Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909)的麦芽寡糖基海藻糖水解酶(maltooligosyltrehalose trehalohydrolase,MTHase)是双酶法生产海藻糖的关键酶。对1株蛋白表达量提高1.9倍的突变株L202P/L218D/Y323... 来源于古细菌嗜酸热硫矿硫化叶菌(Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909)的麦芽寡糖基海藻糖水解酶(maltooligosyltrehalose trehalohydrolase,MTHase)是双酶法生产海藻糖的关键酶。对1株蛋白表达量提高1.9倍的突变株L202P/L218D/Y323G进行酶学性质方面的测定和海藻糖转化。对突变株L202P/L218D/Y323G Sa MTHase进行最适温度、最适pH值、pH稳定性和60℃半衰期的测定,发现该突变株的酶学性质未发生较大变化。将麦芽四糖基海藻糖为底物,测定突变株L202P/L218D/Y323G Sa MTHase酶动力学相关参数。将麦芽糊精(DE值5~7)作为底物,利用嗜酸热硫矿硫化叶菌的麦芽寡糖基海藻糖合成酶(maltooligosyl trehalose synthase,MTSase)与突变株L202P/L218D/Y323G Sa MTHase以不同比例作用于底物生产海藻糖,海藻糖的转化率最高达到76.0%。 展开更多

关键词 麦芽寡糖基海藻糖水解酶 突变株 酶学性质 酶转化 海藻糖

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麦芽糖生物合成海藻糖的途径及合成条件的研究 被引量：5

5

作者 刘建龙 谭海刚 +1 位作者 王瑞明 杨连生 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期161-163,共3页

由土壤分离出一株能合成海藻糖的菌株T007,经验证含有特异性地将麦芽糖转化为海藻糖的酶系。对麦芽糖浓度、反应时间、反应温度和反应转速等因素对麦芽糖转化率的影响进行了研究。结果表明,麦芽糖浓度对转化率影响很微弱;反应初期,温度... 由土壤分离出一株能合成海藻糖的菌株T007,经验证含有特异性地将麦芽糖转化为海藻糖的酶系。对麦芽糖浓度、反应时间、反应温度和反应转速等因素对麦芽糖转化率的影响进行了研究。结果表明,麦芽糖浓度对转化率影响很微弱;反应初期,温度越高,生成海藻糖的初始速度越快,但是到反应末期,反应速度减弱得也越快,转化率反而不是很高;反应转速对麦芽糖转化海藻糖有较大影响,反应的最佳转速为200r/min。 展开更多

关键词 海藻糖 合酶 生物合成途径 麦芽糖

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海藻糖合成酶产生菌筛选、鉴定及其产酶特性 被引量：6

6

作者 刘德海 权淑静 +4 位作者 解复红 马焕 巩涛 贾彬 陈国参 《中国酿造》 CAS 北大核心 2016年第9期95-100,共6页

以麦芽糖为唯一碳源高盐培养基，经高温培养，从温泉水样及其附近土壤中筛选得到一株菌株T2，经过生物合成途径初步验证，该菌株产海藻糖合酶，能够通过海藻糖合成酶（TreS）途径将麦芽糖转化为海藻糖。菌株T2为革兰氏阳性菌，杆状，有... 以麦芽糖为唯一碳源高盐培养基，经高温培养，从温泉水样及其附近土壤中筛选得到一株菌株T2，经过生物合成途径初步验证，该菌株产海藻糖合酶，能够通过海藻糖合成酶（TreS）途径将麦芽糖转化为海藻糖。菌株T2为革兰氏阳性菌，杆状，有芽孢，经过生物学鉴定，将其初步鉴定为芽孢杆菌属（Bacillus sp．）。对其产海藻糖合酶的酶学性质进行了研究：酶反应最适作用温度为60℃，在60℃条件下保温100min仍能保持酶活性80．7％；最适作用pH值为7．0，在pH6．0～7．5范围内稳定。采用正交试验对其发酵培养基配方进行了优化研究，确定了最佳的培养基组成为牛肉膏3．0g／L，麦芽糖20．0g／L，蛋白胨7．5g／L，无机盐（K2HPO4＋NaH2PO4＋MgSO4·7H2O）3．0g／L。在此条件下，菌株T2产海藻糖合酶酶活力达到310．6U／L。 展开更多

关键词 海藻糖 海藻糖合酶 TreS途径 筛选 鉴定

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水生栖热菌FL-03海藻糖合酶基因的克隆及真核表达 被引量：6

7

作者 刘俊梅 聂海彦 +1 位作者 郑微微 胡耀辉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第23期267-270,共4页

通过基因工程技术合成海藻糖合酶Tres全基因,插入到毕赤酵母菌表达载体pPICZα中。电转化毕赤酵母菌GS115后,经Zeocin抗性筛选阳性菌株。用PCR和全基因测序鉴定目的基因的表达。通过诱导表达目的蛋白,并以SDS-PAGE和Western blotting进... 通过基因工程技术合成海藻糖合酶Tres全基因,插入到毕赤酵母菌表达载体pPICZα中。电转化毕赤酵母菌GS115后,经Zeocin抗性筛选阳性菌株。用PCR和全基因测序鉴定目的基因的表达。通过诱导表达目的蛋白,并以SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。成功地构建了pPICZα-Tres重组质粒,并证明目的基因已整合于毕赤酵母菌的基因组。 展开更多

关键词 海藻糖合酶 Tres全基因 基因克隆 真核表达

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海藻酸锶凝胶固定化含海藻糖合酶细胞的研究 被引量：4

8

作者 张峻 陈晓云 +2 位作者 陈颖 齐欣 魏雪生 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第3期332-335,共4页

含有海藻糖合酶的亚栖热菌CBS-01菌株细胞经过透性化处理后,以海藻酸锶凝胶对透性化细胞进行了固定化,当加酶量为12U/g海藻酸钠时,所得固定化细胞的载酶量可达6U/g海藻酸钠。细胞固定化后,最适酶反应pH值由6.5升至7.0,最适酶反应温度未... 含有海藻糖合酶的亚栖热菌CBS-01菌株细胞经过透性化处理后,以海藻酸锶凝胶对透性化细胞进行了固定化,当加酶量为12U/g海藻酸钠时,所得固定化细胞的载酶量可达6U/g海藻酸钠。细胞固定化后,最适酶反应pH值由6.5升至7.0,最适酶反应温度未变,为60℃,但热稳定性有所提高,70℃保温60min时,固定化细胞的残存酶活为60%,而未固定化细胞的残存酶活约30%。间歇反应时,固定化细胞催化麦芽糖转化为海藻糖的转化率可达60%,重复使用10次,仍可保持约70%的酶活。 展开更多

关键词 亚栖热菌 海藻糖合酶 固定化 海藻酸盐

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重组海藻糖合酶工程菌高密度发酵条件的研究 被引量：6

9

作者 陈颖 杨丽维 +4 位作者 齐欣 陈晓云 李明春 唐柳 张峻 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第17期154-158,共5页

目的:通过对前期构建的海藻糖合酶基因工程菌进行高密度发酵的研究,获得了其高密度工艺条件。方法:采用摇瓶发酵和10L自控罐高密度发酵研究了培养基、pH、发酵方式对工程菌生长及目的蛋白表达的影响,并考察了工程菌中重组质粒的遗传稳... 目的:通过对前期构建的海藻糖合酶基因工程菌进行高密度发酵的研究,获得了其高密度工艺条件。方法:采用摇瓶发酵和10L自控罐高密度发酵研究了培养基、pH、发酵方式对工程菌生长及目的蛋白表达的影响,并考察了工程菌中重组质粒的遗传稳定性。结果:海藻糖合酶基因工程菌高密度发酵的培养基为2YT+0.2%葡萄糖,最适pH为7.0,发酵方式为分批补料,通过10L自控罐高密度发酵最终得到的工程菌细胞密度达到了50.78g/L,酶活达到了3.197U/mL。所构建的重组质粒在宿主中得到了稳定遗传。结论:优化了海藻糖合酶基因工程菌高密度发酵的条件,为海藻糖规模化生产奠定了基础。 展开更多

关键词 海藻糖合酶 基因工程菌 高密度发酵

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海藻糖合酶研究进展 被引量：8

10

作者 井瑞洁 王腾飞 王瑞明 《中国酿造》 CAS 北大核心 2008年第8期1-4,共4页

介绍了海藻糖合酶的来源、性质、固定化及细胞透性化技术。并通过实例探讨适合海藻糖工业化生产的方法,展望海藻糖合酶固定化及透性化技术的研究趋势。

关键词 海藻糖合酶 海藻糖 固定化 透性化

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嗜热栖热菌海藻糖合酶的分子改造及其应用 被引量：6

11

作者 宿玲恰 张悦 吴敬 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1-5,共5页

对前期获得的Thermus thermophilus海藻糖合酶进行了分子改造以提升其催化制备海藻糖的性能。利用定点突变技术,将第251位Pro突变为Leu,得到突变体P251L,并于E.coli BL21(DE3)中重组表达,重组菌在摇瓶中发酵酶活为6.9 U/m L。以突变体... 对前期获得的Thermus thermophilus海藻糖合酶进行了分子改造以提升其催化制备海藻糖的性能。利用定点突变技术,将第251位Pro突变为Leu,得到突变体P251L,并于E.coli BL21(DE3)中重组表达,重组菌在摇瓶中发酵酶活为6.9 U/m L。以突变体催化制备海藻糖的研究表明,当以0.3 g/m L麦芽糖为底物,初始反应p H为7.5,温度为50℃,加酶量为20 U/g麦芽糖时,转化率达到最高值62.0%,比天然酶高出13.0%。 展开更多

关键词 嗜热栖热菌 海藻糖合酶 分子改造 海藻糖

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细菌纤维素固定化海藻糖合酶的研究 被引量：9

12

作者 丁振 刘建龙 王瑞明 《中国酿造》 CAS 北大核心 2006年第9期19-23,共5页

以细菌纤维素为载体,采用吸附-交联的方法将海藻糖合酶固定化,在最适固定化条件下,15℃吸附20h,然后与6%戊二醛在15℃交联20h。实验发现,与游离酶相比,固定化酶的最适pH值向碱性方向移动0.4,为pH7.4,最适作用温度为45℃,比游离海藻糖合... 以细菌纤维素为载体,采用吸附-交联的方法将海藻糖合酶固定化,在最适固定化条件下,15℃吸附20h,然后与6%戊二醛在15℃交联20h。实验发现,与游离酶相比,固定化酶的最适pH值向碱性方向移动0.4,为pH7.4,最适作用温度为45℃,比游离海藻糖合酶提高10℃,酸碱稳定性、热稳定性均有较大提高;重复使用6次后,酶剩余活力保持在87%左右,有较好的操作稳定性和重复使用稳定性。 展开更多

关键词 海藻糖合酶 细菌纤维素 固定化酶

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壳聚糖固定化海藻糖合酶 被引量：3

13

作者 黄珍 王慧 +4 位作者 黄芳 李欣 王志 代俊 陈雄 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第19期130-133,141,共5页

利用壳聚糖作为载体,将大肠杆菌BL21异源表达且纯化后的海藻糖合酶(TreS),采用吸附法制备成固定化酶。固定化单因素实验结果表明,最适海藻糖合酶与壳聚糖的加入量为32.0 mg/g,最适吸附时间为2.5 h。固定化酶最适反应温度为40℃,最适反... 利用壳聚糖作为载体,将大肠杆菌BL21异源表达且纯化后的海藻糖合酶(TreS),采用吸附法制备成固定化酶。固定化单因素实验结果表明,最适海藻糖合酶与壳聚糖的加入量为32.0 mg/g,最适吸附时间为2.5 h。固定化酶最适反应温度为40℃,最适反应pH为6.0,酶活回收率为40.17%,重复使用9次后,固定化酶酶活残留率为64.64%,重复使用性良好。在4~60℃范围内放置20 min后,固定化酶的相对酶活均高于87%,与游离酶相比温度稳定性没有明显变化。在pH3.5~8.5范围内放置20 min后,固定化酶的相对酶活均高于60%,酸碱稳定性优于游离酶。反应进程试验结果表明,2 h时海藻糖得率达最大,为61.4%。 展开更多

关键词 海藻糖合酶 壳聚糖 固定化 海藻糖

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响应面法优化大肠杆菌产海藻糖合酶发酵培养基 被引量：5

14

作者 刘红娟 王腾飞 +3 位作者 汤丹丹 王升 戴琨 王瑞明 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期181-187,共7页

以海藻糖合酶基因工程菌E.coli BL21(p ET15b-Tre S)为研究对象,以海藻糖合酶的酶活为考察指标,对海藻糖合酶基因工程菌E.coli BL21(p ET15b-Tre S)的培养基进行优化。首先运用单因素实验对大肠杆菌(E.Coli)产海藻糖合酶进行了优化,利用... 以海藻糖合酶基因工程菌E.coli BL21(p ET15b-Tre S)为研究对象,以海藻糖合酶的酶活为考察指标,对海藻糖合酶基因工程菌E.coli BL21(p ET15b-Tre S)的培养基进行优化。首先运用单因素实验对大肠杆菌(E.Coli)产海藻糖合酶进行了优化,利用Plackett-Burman进行两因素两水平设计对影响其产酶因素进行评估并筛选出具显著效应的3种因素:葡萄糖、酵母浸粉和K2HPO4。用最陡爬坡实验逼近以上三种因素的最大响应面区域后,采用Box-Behnken进行三因素三水平的设计以及响应面分析,获得最佳产海藻糖合酶的培养基。结果表明,发酵大肠杆菌的最佳培养基配方为:葡萄糖7.2g/L,酵母浸粉6.6g/L,蛋白胨10g/L,(NH4)2SO45g/L,K2HPO415.7g/L,KH2PO44g/L,Mg SO4·7H2O1.6g/L,微量元素混合液0.5m L/L。在此条件下进行产酶重复实验5次,海藻糖合酶酶活为65U/mg,比优化前提高了91.2%。 展开更多

关键词 大肠杆菌 海藻糖合酶 PLACKETT-BURMAN设计 响应面法

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透性化海藻糖合酶的研究 被引量：10

15

作者 薛璐 马莺 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期16-18,共3页

海藻糖是一种新型食品添加剂 ,目前其主要生产方法是利用微生物酶法合成。文章研究了在不易破壁取得胞内酶的情况下 ,采用渗透处理细胞技术生产透性化细胞酶的方法 。

关键词 海藻糖 海藻糖合酶 透性化处理 食品添加剂 生产方法

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海藻糖合酶基因工程菌诱导表达条件的研究 被引量：3

16

作者 陈颖 朱月明 +3 位作者 张峻 李明春 齐欣 唐柳 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期178-179,193,共3页

实验将构建后的重组质粒pET21TreS转入大肠杆菌Rosetta gami(DE3)中,得到海藻糖合酶基因工程菌,并通过对培养时间、温度及诱导剂浓度等条件的优化,对其进行诱导表达,得到了该基因工程菌诱导表达的最适条件:发酵培养至菌体浓度(OD600)至... 实验将构建后的重组质粒pET21TreS转入大肠杆菌Rosetta gami(DE3)中,得到海藻糖合酶基因工程菌,并通过对培养时间、温度及诱导剂浓度等条件的优化,对其进行诱导表达,得到了该基因工程菌诱导表达的最适条件:发酵培养至菌体浓度(OD600)至0.6～0.8时,以1mmol/L浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG),37℃,诱导2h后得到的蛋白表达量较高。 展开更多

关键词 海藻糖合酶 基因工程菌 诱导表达

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产海藻糖合酶嗜热菌的筛选 被引量：2

17

作者 张峻 陈晓云 +3 位作者 齐欣 王成球 陈颖 魏雪生 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期20-23,共4页

采用薄层层析及高效液相色谱对酶反应产物进行分析的方法,从地热水样中筛选出一株产胞内海藻糖合酶的嗜热菌CBS-01菌株。该菌株在固体培养基中细胞为杆状,在液体培养基中细胞通常为丝状,丝状体长度可变,好氧,革兰氏染色阴性,无芽孢,菌... 采用薄层层析及高效液相色谱对酶反应产物进行分析的方法,从地热水样中筛选出一株产胞内海藻糖合酶的嗜热菌CBS-01菌株。该菌株在固体培养基中细胞为杆状,在液体培养基中细胞通常为丝状,丝状体长度可变,好氧,革兰氏染色阴性,无芽孢,菌落呈圆形,表面光滑,凸起,边缘整齐,暗红色,生长温度范围为40～70℃,最适生长温度为55～60℃,生长pH范围为6.5～9.5,最适生长pH值为7.5～8.5,初步鉴定为亚栖热菌(Meiothermus sp.)。 展开更多

关键词 海藻糖合酶 嗜热菌 筛选

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产海藻糖合成酶SH-110号菌的培养特性及其发酵条件的研究 被引量：2

18

作者 尚宏丽 顾英 +1 位作者 付丽 张力莉 《中国酿造》 CAS 北大核心 2009年第8期73-76,共4页

在筛选出产海藻糖合酶菌株SH-110基础上研究其培养特性和最佳的发酵条件。优化培养基组成为:1%麦芽糖、0.5%蛋白胨、0.2%牛肉膏、0.1%K2HPO4、0.12%NaH2PO4。其最佳的发酵条件为:最佳发酵温度为36℃,最佳发酵pH值为7.2,选取最佳装液量为... 在筛选出产海藻糖合酶菌株SH-110基础上研究其培养特性和最佳的发酵条件。优化培养基组成为:1%麦芽糖、0.5%蛋白胨、0.2%牛肉膏、0.1%K2HPO4、0.12%NaH2PO4。其最佳的发酵条件为:最佳发酵温度为36℃,最佳发酵pH值为7.2,选取最佳装液量为15 mL,发酵终点确定为48h。 展开更多

关键词 海藻糖 海藻糖合酶 培养特性 发酵条件

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透性化细胞海藻糖合酶特性的研究 被引量：7

19

作者 薛璐 马莺 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第3期26-29,共4页

海藻糖是一种新型食品添加剂,目前多以微生物酶法生产。海藻糖合酶是近年来新发现的一种海藻糖合成酶。本文研究了经渗透细胞技术处理得到的透性化细胞海藻糖合酶的酶学特性。研究表明,该细胞酶的反应最适温度为35℃,最适pH7.4,Mg2+及K... 海藻糖是一种新型食品添加剂,目前多以微生物酶法生产。海藻糖合酶是近年来新发现的一种海藻糖合成酶。本文研究了经渗透细胞技术处理得到的透性化细胞海藻糖合酶的酶学特性。研究表明,该细胞酶的反应最适温度为35℃,最适pH7.4,Mg2+及K+对该细胞酶有明显激活作用,Zn2+,Mn2+及Cu2+则可强烈地抑制酶活力。该酶对底物特异性极强,能特异性地将麦芽糖转化为海藻糖。 展开更多

关键词 海藻糖 透性化细胞海藻糖合酶 酶学特性

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海藻糖合酶的结构和催化机制研究进展 被引量：2

20

作者 王一雯 马焕 +4 位作者 权淑静 刘德海 解复红 王佰涛 安明理 《中国酿造》 CAS 北大核心 2018年第3期14-18,共5页

海藻糖合酶是一种能够催化麦芽糖和海藻糖之间发生双向替换反应的分子异构酶,这种合成途径是目前已知的海藻糖生成方式中最简洁的一条路径。该异构酶的结构特点及作用机制受到学术界和药理学界的广泛关注。该文从海藻糖合酶的晶体结构... 海藻糖合酶是一种能够催化麦芽糖和海藻糖之间发生双向替换反应的分子异构酶,这种合成途径是目前已知的海藻糖生成方式中最简洁的一条路径。该异构酶的结构特点及作用机制受到学术界和药理学界的广泛关注。该文从海藻糖合酶的晶体结构、催化机制及应用现状三个方面阐述有关海藻糖合酶的最新研究成果,有助于改进海藻糖相关产品研发模式,增加海藻糖工业生产经济效益。 展开更多

关键词 海藻糖合酶 分子异构酶 晶体结构 催化机制

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