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鹿流行性出血病病毒VP7基因的克隆及原核表达被引量：5: 1; 作者杨俊兴花群义 +5 位作者陈焕春陈兵吕建强曹琛福阮周曦张彩红《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第8期5-8,共4页; 根据已经扩增的鹿流行性出血病病毒(EHDV)VP7基因序列,设计一对扩增VP7基因特异性引物,用RT-PCR从血清I型EHDV(EHDV-1)总RNA中扩增VP7基因,并将其克隆到原核表达载体pBAD/Thio中,构建了重组原核表达质粒pBAD/Thio-EHDV VP7。将表达载体... 展开更多; 关键词鹿流行性出血病病毒(ehdv) VP7基因基因克隆表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

鹿流行性出血病病毒单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2: 2; 作者郭莹洁杨俊兴 +6 位作者花群义徐聪林庆燕阮周曦陈兵卢体康詹爱军《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第3期14-17,共4页; 为了更好的研究鹿流行性出血病病毒(EHDV)的生物学特性和建立EHDV免疫学检测方法,本研究用纯化的EHDV免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,获得了2株(1A5和8H6)能够稳定分泌抗EHDV单... 展开更多; 关键词鹿流行性出血病病毒单克隆抗体制备; 在线阅读下载PDF 职称材料

流行性出血病病毒VP7蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：1: 3; 作者李占鸿宋子昂 +6 位作者肖雷朱建波杨振兴李卓然廖德芳李华春杨恒《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第4期1405-1413,共9页; 研究旨在表达流行性出血病病毒(EHDV)VP7蛋白并制备其多克隆抗体,为EHDV检测方法的建立提供材料。试验通过大肠杆菌进行VP7重组蛋白的诱导表达,通过镍离子亲和层析与透析进行重组蛋白的纯化与复性并免疫家兔制备多克隆抗体,通过间接ELIS... 展开更多; 关键词流行性出血病病毒(ehdv) VP7蛋白原核表达多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

4种动物虫媒病病毒多重RT-PCR检测方法的建立被引量：5: 4; 作者阮周曦花群义 +6 位作者杨俊兴曾少灵曹琛福秦智锋吕建强林庆燕周晓黎《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第2期25-31,共7页; 分别设计和合成4对特异性引物,通过对反应条件的优化,初步建立了鉴别蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血病病毒(EHDV)、水疱性口炎病毒(VSV)和赤羽病病毒(AKV)的多重RT-PCR检测方法,并对其特异性和敏感性进行了检测。结果表明,所设计的4对... 展开更多; 关键词蓝舌病病毒鹿流行性出血病病毒水疱性口炎病毒赤羽病病毒多重RT-PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

2019年云南省景洪市哨兵动物多种虫媒病毒的分离鉴定被引量：2: 5; 作者杨振兴寇美玲 +6 位作者廖德芳高翔胡忠燕李占鸿谢佳芮李华春杨恒《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第12期4127-4137,共11页; 本研究旨在了解云南省景洪市虫媒病毒的流行情况。2019年在景洪市勐罕镇设立了3头哨兵动物牛,定期采血进行虫媒病毒的分离与鉴定,共获得7株病毒分离物。经病毒核酸的RT-PCR鉴定,分离到2株血清型分别为6型和7型流行性出血热病毒(epizooti... 展开更多; 关键词蓝舌病病毒(BTV) 流行性出血病病毒(ehdv) 帕利亚血清群病毒(PALV) 病毒分离鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名鹿流行性出血病病毒VP7基因的克隆及原核表达被引量：5: 1; 作者杨俊兴花群义陈焕春陈兵吕建强曹琛福阮周曦张彩红; 机构深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心华中农业大学动物医学院; 出处《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第8期5-8,共4页; 基金国家863计划项目(2006AA10Z445) 中国博士后科学基金项目(20080430855); 文摘根据已经扩增的鹿流行性出血病病毒(EHDV)VP7基因序列,设计一对扩增VP7基因特异性引物,用RT-PCR从血清I型EHDV(EHDV-1)总RNA中扩增VP7基因,并将其克隆到原核表达载体pBAD/Thio中,构建了重组原核表达质粒pBAD/Thio-EHDV VP7。将表达载体转入大肠埃希菌(E.coliLMG194),用L-阿拉伯糖诱导表达。SDS-PAGE和Western blot试验结果表明,EHDV VP7基因在LMG194中得到了表达,其表达产物可以与EHDV阳性血清特异性反应,说明该融和蛋白具有免疫学活性。; 关键词鹿流行性出血病病毒(ehdv) VP7基因基因克隆表达; Keywords Epizootic hemorrhagic disease virus of deer VP7 protein gene cloning expression; 分类号 S859.659.4 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名鹿流行性出血病病毒单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2: 2; 作者郭莹洁杨俊兴花群义徐聪林庆燕阮周曦陈兵卢体康詹爱军; 机构深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心．广东深圳云南农业大学动科院; 出处《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第3期14-17,共4页; 基金国家863计划项目(2006AA10Z445); 文摘为了更好的研究鹿流行性出血病病毒(EHDV)的生物学特性和建立EHDV免疫学检测方法,本研究用纯化的EHDV免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,获得了2株(1A5和8H6)能够稳定分泌抗EHDV单抗的杂交瘤细胞株。其细胞培养上清效价分别为1∶256和1∶512,腹水效价分别为1∶1024000和1∶2048000;McAb 1 A5和8H6的相对亲和力分别为0.9mg/L和0.7mg/L。间接ELISA结果显示,2株单抗仅与EHDV反应,不与蓝舌病病毒、赤羽病病毒、水疱性口炎病毒、小反刍兽疫病毒和BHK细胞反应,表明2株单抗特异性良好。这2株单抗的获得为研究EHDV生物学特性和建立EHDV检测方法奠定了基础。; 关键词鹿流行性出血病病毒单克隆抗体制备; Keywords Epizootic hemorrhagic disease virus monoclonal antibodies preparation; 分类号 S852.659.4 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名流行性出血病病毒VP7蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：1: 3; 作者李占鸿宋子昂肖雷朱建波杨振兴李卓然廖德芳李华春杨恒; 机构云南省畜牧兽医科学院云南农业大学动物医学院; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第4期1405-1413,共9页; 基金国家重点研发计划(2016YFD0500908) 公益性行业(农业)科研专项(201303035) 云南省中青年学术和技术带头人后备人才培养项目(2017HB055)。; 文摘研究旨在表达流行性出血病病毒(EHDV)VP7蛋白并制备其多克隆抗体,为EHDV检测方法的建立提供材料。试验通过大肠杆菌进行VP7重组蛋白的诱导表达,通过镍离子亲和层析与透析进行重组蛋白的纯化与复性并免疫家兔制备多克隆抗体,通过间接ELISA、Western blotting与间接免疫荧光试验(IFA)分析多克隆抗体的效价与反应原性。结果显示,在37℃与IPTG(0.1 mmol/L)的诱导下,VP7重组蛋白(分子质量46 ku)以包涵体形式高效表达,纯化与复性处理后的重组蛋白纯度达94.52%,可与不同血清型的EHDV阳性血清特异性结合。制备的兔抗VP7蛋白多克隆抗体效价达1∶24000;以制备的多克隆抗体为一抗,通过IFA与Western blotting检测到EHDV感染细胞中VP7蛋白的表达。本研究在大肠杆菌中实现了EHDV VP7蛋白的高效表达,制备的兔抗VP7蛋白多克隆抗体具有良好的反应原性与特异性,为EHDV诊断抗原的制备与血清学检测方法的建立提供了试验材料。; 关键词流行性出血病病毒(ehdv) VP7蛋白原核表达多克隆抗体; Keywords Epizootic haemorrhagic disease virus(ehdv) VP7 protein prokaryotic expression polyclonal antibody; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名4种动物虫媒病病毒多重RT-PCR检测方法的建立被引量：5: 4; 作者阮周曦花群义杨俊兴曾少灵曹琛福秦智锋吕建强林庆燕周晓黎; 机构深圳出入境检验检疫局云南出入境检验检疫局; 出处《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第2期25-31,共7页; 基金国家863计划项目(2006AA10Z445); 文摘分别设计和合成4对特异性引物,通过对反应条件的优化,初步建立了鉴别蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血病病毒(EHDV)、水疱性口炎病毒(VSV)和赤羽病病毒(AKV)的多重RT-PCR检测方法,并对其特异性和敏感性进行了检测。结果表明,所设计的4对引物可对同一样品中的VSV、BTV、EHDV和AKV进行特异性扩增,所扩增的目的片段的长度分别为301、351、537、250bp。建立的四重RT-PCR检测方法能够检测出10-7稀释的细胞培养病毒液,4种病毒之间没有发生交叉反应,说明该检测方法特异性强,敏感性较高。所建立的多重RT-PCR方法可用于上述4种动物虫媒病病毒的快速鉴别诊断,在动物检疫、临床诊断和流行病学调查方面具有较好的应用前景。; 关键词蓝舌病病毒鹿流行性出血病病毒水疱性口炎病毒赤羽病病毒多重RT-PCR; Keywords BTV ehdv VSV AKV multiplex RT PCR; 分类号 S852.74 [农业科学—基础兽医学] S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名2019年云南省景洪市哨兵动物多种虫媒病毒的分离鉴定被引量：2: 5; 作者杨振兴寇美玲廖德芳高翔胡忠燕李占鸿谢佳芮李华春杨恒; 机构云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室景洪市动物疫病预防控制中心; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第12期4127-4137,共11页; 基金国家重点研发计划(2016YFD0500908) 国家重点研发计划(2017YFC1200505) +1 种基金云南省中青年学术和技术带头人后备人才培养项目(2017HB055)。; 文摘本研究旨在了解云南省景洪市虫媒病毒的流行情况。2019年在景洪市勐罕镇设立了3头哨兵动物牛,定期采血进行虫媒病毒的分离与鉴定,共获得7株病毒分离物。经病毒核酸的RT-PCR鉴定,分离到2株血清型分别为6型和7型流行性出血热病毒(epizootic haemorrhagic disease virus,EHDV),2株血清型分别为4型和5型的蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV),1株帕利亚血清群病毒(palyam serogroup virus,PALV)中的D’Aguilar virus(DAV)血清型病毒和2株未鉴定出的环状病毒。经病毒Seg-2、Seg-3序列ORF区的比对和进化分析显示,7株病毒的地域型均为Eastern型,与日本、澳大利亚和印度毒株具有最近的亲缘关系。3头哨兵动物的血液和血清,经病毒核酸及血清中和试验检测,证明3头动物均被相应的病毒感染。动物感染病毒后,血清中的特异性抗体迅速上升,3~4周后达最高点并能够在该水平维持较长时间,而血液中病毒核酸含量2~4周到达最高点后则呈迅速下降趋势。本研究报道了景洪虫媒病毒的分离、毒株序列特征以及在动物上的感染特性,研究结果为进一步了解当地的牛虫媒病毒提供数据支撑,同时3头牛分离获得7株病毒,提示当地可能还存在更多种类的虫媒病毒。; 关键词蓝舌病病毒(BTV) 流行性出血病病毒(ehdv) 帕利亚血清群病毒(PALV) 病毒分离鉴定; Keywords bluetongue virus(BTV) epizootic haemorrhagic disease virus(ehdv) palyam serogroup virus(PALV) virus isolation and identification; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	鹿流行性出血病病毒VP7基因的克隆及原核表达	杨俊兴花群义陈焕春陈兵吕建强曹琛福阮周曦张彩红	《动物医学进展》 CSCD 北大核心	2009	5	在线阅读下载PDF 职称材料
2	鹿流行性出血病病毒单克隆抗体的制备与鉴定	郭莹洁杨俊兴花群义徐聪林庆燕阮周曦陈兵卢体康詹爱军	《动物医学进展》 CSCD 北大核心	2009	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	流行性出血病病毒VP7蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备	李占鸿宋子昂肖雷朱建波杨振兴李卓然廖德芳李华春杨恒	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2021	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	4种动物虫媒病病毒多重RT-PCR检测方法的建立	阮周曦花群义杨俊兴曾少灵曹琛福秦智锋吕建强林庆燕周晓黎	《动物医学进展》 CSCD 北大核心	2010	5	在线阅读下载PDF 职称材料
5	2019年云南省景洪市哨兵动物多种虫媒病毒的分离鉴定	杨振兴寇美玲廖德芳高翔胡忠燕李占鸿谢佳芮李华春杨恒	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2020	2	在线阅读下载PDF 职称材料