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鹦鹉热嗜性衣原体特异性TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法的建立与应用
被引量：
7
1
作者
冯悦
张忠华
+1 位作者
龚福明
柳陈坚
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期1041-1044,1058,共5页
目的建立一种特异、灵敏、重复性好的鹦鹉热嗜性衣原体的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。方法利用鹦鹉热嗜性衣原体MOMP基因的特异保守序列设计引物和MGB探针,通过优化,获得最佳反应体系与反应条件,同时进行特异性、重复性、灵敏性评价...
目的建立一种特异、灵敏、重复性好的鹦鹉热嗜性衣原体的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。方法利用鹦鹉热嗜性衣原体MOMP基因的特异保守序列设计引物和MGB探针,通过优化,获得最佳反应体系与反应条件,同时进行特异性、重复性、灵敏性评价与Spike-test实验进行临床应用性评价,利用该检测方法对禽鸟类粪便样品进行检测,并与常规PCR检测方法进行比较。结果该方法在0.01pg^100pg范围内线性相关系数为0.999,扩增效率为97.7%;对鹦鹉热嗜性衣原体菌株检测结果均呈现阳性,而非鹦鹉热嗜性衣原体菌株及其它衣原体菌株为阴性;重复性试验中,变异系数为0.317%~0.563%;检测灵敏性为0.01pg;Spike-test试验中最低检出量为25个EB;该方法对禽鸟类粪便样品的检出率为14.3%(40/282),高于常规PCR检测法的7.4%(21/282)。结论本文所建立的Taqman-MGB荧光定量PCR检测法是一种灵敏、高效、稳定,可在嗜性衣原体属中准确检测鹦鹉热嗜性衣原体的方法,该方法的建立更有意于今后对禽鸟类实施鹦鹉热的临床诊断与分子流行病学研究。
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关键词
鹦鹉热嗜性衣原体
荧光定量PCR
MGB探针
MOMP基因
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职称材料
三种方法对禽鹦鹉热嗜性衣原体疑似病例病原的流行调查
被引量：
4
2
作者
张畅
曹金元
+1 位作者
杨君敬
何诚
《中国比较医学杂志》
CAS
2008年第4期39-43,共5页
目的利用免疫荧光抗体法、PCE-ELISA、PCR法分别检测北京市及周边地区禽鹦鹉热嗜性衣原体疑似病例的病原,以了解和评价该病原流行状况。方法收集临床疑似禽衣原体的父母代、商品代家禽、SPF鸡喉头拭子、气囊组织、子宫黏膜,组织标本固...
目的利用免疫荧光抗体法、PCE-ELISA、PCR法分别检测北京市及周边地区禽鹦鹉热嗜性衣原体疑似病例的病原,以了解和评价该病原流行状况。方法收集临床疑似禽衣原体的父母代、商品代家禽、SPF鸡喉头拭子、气囊组织、子宫黏膜,组织标本固定后采用直接免疫荧光染色测定衣原体包含体;喉头拭子、子宫黏膜处理后以PCE-ELISA定量测定衣原体;以衣原体保守性高的序列设计CTU/CTL引物扩增病料组织的omp-1基因片段。结果直接荧光染色法显示家禽衣原体平均阳性率为38.7%,组织检出率依次为子宫黏膜、气囊、喉头拭子;PCE-ELISA检测显示平均阳性率为58.7%,其中SPF鸡阳性率为10.0%,健康肉鸡达到30.0%;PCR法检测家禽衣原体平均阳性率为71.6%,SPF鸡为10.0%。样本的目的基因与标准禽衣原体6BC同源性超过99%。结论种禽场和商品养殖场均发现疑似病例中禽鹦鹉热嗜性衣原体感染情况较为严重。荧光抗体染色、PCE-ELISA可用于临床实践中进行快速、准确检测。
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关键词
禽
鹦鹉热嗜性衣原体
免疫荧光检测
PCE-ELISA
PCR
家禽
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职称材料
鹦鹉热嗜性衣原体感染SPF鸡和污染相关疫苗的初步调查
被引量：
1
3
作者
陈曦
袁吉磊
+3 位作者
张圣
曾汶曙
陈慧
何诚
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2010年第10期166-169,共4页
为初步调查SPF鸡感染鹦鹉热嗜性衣原体状况及相关SPF鸡胚源疫苗是否出现污染,本试验通过采集不同日龄的SPF鸡血清70份、SPF种蛋卵黄膜30份,收集市场上销售的SPF鸡胚源疫苗共41支,利用国产间接血凝试剂盒检测抗体,进口免疫荧光试剂盒分...
为初步调查SPF鸡感染鹦鹉热嗜性衣原体状况及相关SPF鸡胚源疫苗是否出现污染,本试验通过采集不同日龄的SPF鸡血清70份、SPF种蛋卵黄膜30份,收集市场上销售的SPF鸡胚源疫苗共41支,利用国产间接血凝试剂盒检测抗体,进口免疫荧光试剂盒分别测定其抗体、抗原阳性率,以评价SPF鸡鹦鹉热嗜性衣原体的流行状况和相关疫苗的污染状况。本试验结果显示,SPF鸡血清阳性率分别为31.4%(荧光法)、5.7%(间接血凝法);SPF种蛋阳性率33.3%,SPF鸡胚源疫苗平均阳性率31.7%。SPF鸡已经感染了鹦鹉热嗜性衣原体,且发现经鸡胚卵黄膜而传播病原的新途径,进而造成SPF鸡胚源疫苗出现衣原体污染。因此,加强SPF鸡鹦鹉热嗜性衣原体监测已势在必行。
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关键词
鹦鹉热嗜性衣原体
抗原
抗体
疫苗
SPF鸡
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职称材料
题名
鹦鹉热嗜性衣原体特异性TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法的建立与应用
被引量：
7
1
作者
冯悦
张忠华
龚福明
柳陈坚
机构
昆明理工大学生命科学与技术学院
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期1041-1044,1058,共5页
基金
云南省科技厅面上项目(KKSA200926038)资助
文摘
目的建立一种特异、灵敏、重复性好的鹦鹉热嗜性衣原体的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。方法利用鹦鹉热嗜性衣原体MOMP基因的特异保守序列设计引物和MGB探针,通过优化,获得最佳反应体系与反应条件,同时进行特异性、重复性、灵敏性评价与Spike-test实验进行临床应用性评价,利用该检测方法对禽鸟类粪便样品进行检测,并与常规PCR检测方法进行比较。结果该方法在0.01pg^100pg范围内线性相关系数为0.999,扩增效率为97.7%;对鹦鹉热嗜性衣原体菌株检测结果均呈现阳性,而非鹦鹉热嗜性衣原体菌株及其它衣原体菌株为阴性;重复性试验中,变异系数为0.317%~0.563%;检测灵敏性为0.01pg;Spike-test试验中最低检出量为25个EB;该方法对禽鸟类粪便样品的检出率为14.3%(40/282),高于常规PCR检测法的7.4%(21/282)。结论本文所建立的Taqman-MGB荧光定量PCR检测法是一种灵敏、高效、稳定,可在嗜性衣原体属中准确检测鹦鹉热嗜性衣原体的方法,该方法的建立更有意于今后对禽鸟类实施鹦鹉热的临床诊断与分子流行病学研究。
关键词
鹦鹉热嗜性衣原体
荧光定量PCR
MGB探针
MOMP基因
Keywords
Chlamydophila psittaci
quantitative fluorescence PCR
MGB probe
MOMP gene
分类号
R379 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
三种方法对禽鹦鹉热嗜性衣原体疑似病例病原的流行调查
被引量：
4
2
作者
张畅
曹金元
杨君敬
何诚
机构
中国农业大学动物医学院
出处
《中国比较医学杂志》
CAS
2008年第4期39-43,共5页
文摘
目的利用免疫荧光抗体法、PCE-ELISA、PCR法分别检测北京市及周边地区禽鹦鹉热嗜性衣原体疑似病例的病原,以了解和评价该病原流行状况。方法收集临床疑似禽衣原体的父母代、商品代家禽、SPF鸡喉头拭子、气囊组织、子宫黏膜,组织标本固定后采用直接免疫荧光染色测定衣原体包含体;喉头拭子、子宫黏膜处理后以PCE-ELISA定量测定衣原体;以衣原体保守性高的序列设计CTU/CTL引物扩增病料组织的omp-1基因片段。结果直接荧光染色法显示家禽衣原体平均阳性率为38.7%,组织检出率依次为子宫黏膜、气囊、喉头拭子;PCE-ELISA检测显示平均阳性率为58.7%,其中SPF鸡阳性率为10.0%,健康肉鸡达到30.0%;PCR法检测家禽衣原体平均阳性率为71.6%,SPF鸡为10.0%。样本的目的基因与标准禽衣原体6BC同源性超过99%。结论种禽场和商品养殖场均发现疑似病例中禽鹦鹉热嗜性衣原体感染情况较为严重。荧光抗体染色、PCE-ELISA可用于临床实践中进行快速、准确检测。
关键词
禽
鹦鹉热嗜性衣原体
免疫荧光检测
PCE-ELISA
PCR
家禽
Keywords
Avian Chlamydophila psittaci, Immunofluorescence test, PCE-ELISA, PCR, Birds
分类号
R-33 [医药卫生]
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职称材料
题名
鹦鹉热嗜性衣原体感染SPF鸡和污染相关疫苗的初步调查
被引量：
1
3
作者
陈曦
袁吉磊
张圣
曾汶曙
陈慧
何诚
机构
中国农业大学动物医学院农业部人畜共患病重点开放实验室
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2010年第10期166-169,共4页
基金
教育部博士点基金项目(200902010510749)
北京市共建项目(200902910510772)
文摘
为初步调查SPF鸡感染鹦鹉热嗜性衣原体状况及相关SPF鸡胚源疫苗是否出现污染,本试验通过采集不同日龄的SPF鸡血清70份、SPF种蛋卵黄膜30份,收集市场上销售的SPF鸡胚源疫苗共41支,利用国产间接血凝试剂盒检测抗体,进口免疫荧光试剂盒分别测定其抗体、抗原阳性率,以评价SPF鸡鹦鹉热嗜性衣原体的流行状况和相关疫苗的污染状况。本试验结果显示,SPF鸡血清阳性率分别为31.4%(荧光法)、5.7%(间接血凝法);SPF种蛋阳性率33.3%,SPF鸡胚源疫苗平均阳性率31.7%。SPF鸡已经感染了鹦鹉热嗜性衣原体,且发现经鸡胚卵黄膜而传播病原的新途径,进而造成SPF鸡胚源疫苗出现衣原体污染。因此,加强SPF鸡鹦鹉热嗜性衣原体监测已势在必行。
关键词
鹦鹉热嗜性衣原体
抗原
抗体
疫苗
SPF鸡
Keywords
Chlamydophila psittaci
antigen
antibody
vaccine
SPF chicken
分类号
S859.797 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鹦鹉热嗜性衣原体特异性TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法的建立与应用
冯悦
张忠华
龚福明
柳陈坚
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
7
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下载PDF
职称材料
2
三种方法对禽鹦鹉热嗜性衣原体疑似病例病原的流行调查
张畅
曹金元
杨君敬
何诚
《中国比较医学杂志》
CAS
2008
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
鹦鹉热嗜性衣原体感染SPF鸡和污染相关疫苗的初步调查
陈曦
袁吉磊
张圣
曾汶曙
陈慧
何诚
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2010
1
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职称材料
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