鸽疱疹病毒gB基因SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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作者 李鹏 苏和 +4 位作者 韩慧敏 孟海 王昊 王凤雪 温永俊 《中国家禽》 北大核心 2025年第3期93-99,共7页

为建立检测鸽疱疹病毒(PiHV)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR(qPCR)方法,研究根据PiHV gB基因的高度保守区域设计特异性引物,构建质粒作为标准品建立PiHV qPCR检测方法,并进行敏感性和特异性试验。结果显示:建立的PiHV qPCR方法最低DNA检出... 为建立检测鸽疱疹病毒(PiHV)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR(qPCR)方法,研究根据PiHV gB基因的高度保守区域设计特异性引物,构建质粒作为标准品建立PiHV qPCR检测方法,并进行敏感性和特异性试验。结果显示:建立的PiHV qPCR方法最低DNA检出浓度为8.62×10^(2)拷贝/μL,敏感性比普通PCR方法高100倍,可特异性区分鸽疱疹病毒与其他多种常见感染鸽的细菌和病毒,其批内变异系数小于1%,批间变异系数小于2%;应用该方法对呼和浩特市及周边地区赛鸽公棚和鸽养殖场采集的30份疑似病鸽肝脏样品进行检测,可快速准确地检出样品中的PiHV,并且检出率比普通PCR方法高。研究表明,建立的PiHV qPCR检测方法特异性强,敏感性较高,能够应用于赛鸽、肉鸽等的鸽疱疹病毒快速检测。 展开更多

关键词 鸽疱疹病毒 SYBR Green 荧光定量PCR 聚合酶链式反应 GB基因

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鸽疱疹病毒荧光定量PCR检测方法的建立和初步应用

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作者 安乐乐 杨宣叶 +4 位作者 周海云 宋晓琛 李彦彤 罗迅 赵永清 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第2期166-171,共6页

为建立可快速、灵敏且特异性检测鸽疱疹病毒(Pi HV)的SYBR Green I荧光定量PCR方法(qPCR),本实验根据GenBank中登录的PiHV DNA聚合酶基因(KJ995972.1)保守区域设计引物,经PCR扩增该基因后连接至pMD19-T载体,构建质粒标准品pMD19-T-PiHV... 为建立可快速、灵敏且特异性检测鸽疱疹病毒(Pi HV)的SYBR Green I荧光定量PCR方法(qPCR),本实验根据GenBank中登录的PiHV DNA聚合酶基因(KJ995972.1)保守区域设计引物,经PCR扩增该基因后连接至pMD19-T载体,构建质粒标准品pMD19-T-PiHV。采用方阵试验对引物终浓度和退火温度优化后,建立检测PiHV的qPCR方法,并用10倍倍比稀释的质粒标准品进行qPCR扩增建立标准曲线。利用建立的该检测方法对鸽圆环病毒(PiCV)、鸽痘病毒(PPV)、鸽腺病毒(PiADV)、鸽轮状病毒(PiRV)、鸽细环病毒(PTTV)核酸和重组质粒pMD19-T-PiHV进行检测,评估该qPCR方法的特异性;利用建立的qPCR和常规PCR分别检测10~0拷贝/μL~10^(8)拷贝/μL的质粒标准品,比较二者的敏感性;以5个浓度质粒标准品作为模板进行组内和组间重复性试验,评估该qPCR方法的重复性;使用该qPCR方法和常规PCR方法对112份疑似Pi HV感染鸽临床组织样品同时检测。标准曲线结果显示,重组质粒标准品在9.47×10^(3)拷贝/μL~9.47×10^(9)拷贝/μL内与其各自的Ct值呈良好的线性关系,相关系数R^(2)=0.9988,扩增效率E=97.7%;特异性试验结果显示,该qPCR方法仅重组质粒pMD19-T-PiHV出现S型扩增曲线,与其他病原核酸均未出现交叉反应,特异性强;敏感性试验结果显示,该qPCR方法对质粒标准品的检测限为9.47拷贝/μL,敏感性是常规PCR方法的100倍;重复性试验结果显示,该qPCR方法组内和组间重复性试验的变异系数均小于1%,重复性好。临床样品检测结果显示,qPCR方法阳性检出率45.54%(51/112),高于常规PCR方法的阳性检出率35.71%(40/112),二者阳性符合率为100%,总符合率为90.18%。本实验在国内首次建立的PiHV qPCR检测方法特异性强、敏感性高和重复性好,可快速高效检测临床样品中的PiHV,为鸽疱疹病毒的临床检测及流行病学调查提供了新的技术手段。 展开更多

关键词 鸽疱疹病毒 DNA聚合酶基因 荧光定量PCR 临床检测 流行病学调查

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鸽Ⅰ型副黏病毒、圆环病毒和疱疹病毒混合感染的诊断 被引量：3

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作者 黄运福 颜国庆 +5 位作者 梁海皇 银慧慧 赵武 曾雪颜 兰天艳 刘伟 《现代畜牧兽医》 2024年第3期59-63,共5页

研究旨在确诊广西某肉鸽场中出现神经症状的病鸽并为该场提供相应的防治方案,通过临床诊断、病理解剖、分子生物学检测、细菌分离、病毒分离等方法对广西某肉鸽场病鸽进行诊断。结果显示,剖检可见病鸽肝脾肿大、坏死,花斑肾;分子生物学... 研究旨在确诊广西某肉鸽场中出现神经症状的病鸽并为该场提供相应的防治方案,通过临床诊断、病理解剖、分子生物学检测、细菌分离、病毒分离等方法对广西某肉鸽场病鸽进行诊断。结果显示,剖检可见病鸽肝脾肿大、坏死,花斑肾;分子生物学检测结果显示,鸽Ⅰ型副黏病毒(pigeon paramyxovirus type 1,PPMV-1)、圆环病毒(pigeon circovirus,PiCV)和疱疹病毒(pigeon herpesvirus,PiHV)为阳性;对病样进行细菌培养,结果未分离到细菌;将病样接种SPF鸡胚进行病毒分离,结果显示,尿囊液血凝效价稳定在8 log2,其血凝性可被新城疫病毒(NDV)阳性血清抑制,但不能被禽流感病毒(AIV)阳性血清抑制。研究表明,最终诊断结果为PPMV-1、PiCV和PiHV混合感染。 展开更多

关键词 鸽Ⅰ型副黏病毒 鸽圆环病毒 鸽疱疹病毒

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鸽疱疹病毒与腺病毒感染的PCR检测方法的建立 被引量：12

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作者 蒋文明 侯广宇 +3 位作者 李金平 陈杰 刘朔 陈继明 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第8期63-65,共3页

鸽疱疹病毒和腺病毒是幼鸽常见的病原体,这些病毒共同引起一种疾病,称为幼鸽疾病综合征。论文建立了鸽疱疹病毒和腺病毒的PCR检测方法和双重PCR检测方法,并对发病鸽子进行了诊断。

关键词 鸽疱疹病毒 腺病毒 双重PCR 诊断方法

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肉鸽圆环病毒、腺病毒及疱疹病毒Ⅰ型混合感染的多重PCR检测 被引量：9

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作者 陈俊红 何宇 +6 位作者 祁宇晨 刘裕鹏 邢光东 王莹 徐善金 方光远 戴鼎震 《江苏农业科学》 北大核心 2021年第22期167-171,共5页

运用多重PCR同时检测肉鸽病原(圆环病毒、腺病毒及疱疹病毒Ⅰ型)的方法,分别设计与合成3种病毒基因扩增引物,并提取疑似病鸽的肝脏样品DNA、进行单一PCR扩增及基因序列测定,结果分别获得了大小为239、418、618 bp的DNA产物。通过摸索多... 运用多重PCR同时检测肉鸽病原(圆环病毒、腺病毒及疱疹病毒Ⅰ型)的方法,分别设计与合成3种病毒基因扩增引物,并提取疑似病鸽的肝脏样品DNA、进行单一PCR扩增及基因序列测定,结果分别获得了大小为239、418、618 bp的DNA产物。通过摸索多重PCR反应条件,应用多重PCR同时检测3种病毒基因片段,同时获得了鸽疱疹病毒Ⅰ型、鸽圆环病毒及鸽源腺病毒的基因片段。再对疑似混合感染这3种病毒的肝脏样品进行检测,发现50%(6/12)样品存在3种病毒的混合感染、25%(3/12)样品存在鸽圆环病毒和鸽源腺病毒的混合感染、8.3%(1/12)样品存在鸽源腺病毒和Ⅰ型鸽疱疹病毒的混合感染、8.3%(1/12)样品存在鸽圆环病毒和Ⅰ型鸽疱疹病毒的混合感染、8.3%(1/12)样品未发生任何感染。结果表明,多重PCR可快速检测鸽疱疹病毒Ⅰ型、鸽圆环病毒及鸽源腺病毒的混合感染,表明运用三重PCR检测3种病毒混合感染有很好的应用价值。 展开更多

关键词 鸽圆环病毒 鸽源腺病毒 鸽疱疹病毒Ⅰ型 多重PCR 基因测序

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鸽疱疹病毒XY2019株的分离鉴定与UL30基因序列分析 被引量：5

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作者 吴旭锦 朱小甫 +3 位作者 熊忙利 张文娟 尚红梅 杨萍 《陕西农业科学》 2020年第7期71-72,79,共3页

从咸阳市某疑似鸽疱疹病毒感染病例中分离病原,并对其UL30基因分子特征进行分析,为防控鸽疱疹病毒感染提供参考。通过SPF鸡胚传代分离病毒,克隆UL30基因并构建质粒测序比对分析。结果显示,病毒分离传代3次后鸡胚死亡呈现一定的规律性,... 从咸阳市某疑似鸽疱疹病毒感染病例中分离病原,并对其UL30基因分子特征进行分析,为防控鸽疱疹病毒感染提供参考。通过SPF鸡胚传代分离病毒,克隆UL30基因并构建质粒测序比对分析。结果显示,病毒分离传代3次后鸡胚死亡呈现一定的规律性,并出现典型病变。UL30基因克隆测序提示病毒分离成功,命名为XY2019株。XY2019株UL30基因与4株参考序列同源性在99.9%~100%之间,基因进化树上形成2个大分支,XY2019、HLJ、S-18、BJ株处在一个分支上,而AF141890单独在一个分支上。研究提示,不同动物种类、不同国家或地区的PiHV UL30基因均高度保守,遗传性高度稳定。 展开更多

关键词 鸽疱疹病毒 UL30基因 分离 序列分析

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鸽疱疹病毒PCR检测方法的建立及试剂盒的研制 被引量：7

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作者 薛媚 庄林林 +1 位作者 戴鼎震 张志成 《现代农业科技》 2013年第12期229-230,232,共3页

鸽疱疹病毒(PiHV1)感染是由I型鸽疱疹病毒引起的以幼鸽为主的一种常见病毒性传染病,临床上以鼻炎、结膜炎为主要特征。偶尔也会出现精神沉郁、食欲下降、腹泻、呕吐、神经症状。根据已发表的鸽疱疹病毒的基因序列,设计并合成了一对能特... 鸽疱疹病毒(PiHV1)感染是由I型鸽疱疹病毒引起的以幼鸽为主的一种常见病毒性传染病,临床上以鼻炎、结膜炎为主要特征。偶尔也会出现精神沉郁、食欲下降、腹泻、呕吐、神经症状。根据已发表的鸽疱疹病毒的基因序列,设计并合成了一对能特异性扩增鸽疱疹病毒的引物,通过对PCR的退火条件的优化,建立了鸽疱疹病毒的PCR检测方法,对发病鸽子进行诊断。并研制出检测试剂盒,再进一步对该试剂盒的敏感性、特异性和稳定性进行了研究,证明该试剂盒具有很高的敏感性和特异性,并且在-20℃条件下可保存1年以上。 展开更多

关键词 鸽疱疹病毒 PCR检测 试剂盒

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鸽圆环病毒和鸽疱疹病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：8

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作者 兰世捷 苗艳 +13 位作者 陈亮 李洪彬 朱庆贺 冯万宇 李丹 沈思思 张蕾 钟鹏 史同瑞 江波涛 罗天瑶 王志强 金振华 吴宪 《中国家禽》 北大核心 2022年第4期113-116,共4页

为建立同时检测鸽圆环病毒(PiCV)和鸽疱疹病毒(PiHV)的双重PCR,试验参照GenBank中两种病毒的基因序列设计2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了同时检测2种病毒的双重PCR技术。结果显示:该PCR可同时扩增出269 bp(PiCV)和505 bp(PiHV)... 为建立同时检测鸽圆环病毒(PiCV)和鸽疱疹病毒(PiHV)的双重PCR,试验参照GenBank中两种病毒的基因序列设计2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了同时检测2种病毒的双重PCR技术。结果显示:该PCR可同时扩增出269 bp(PiCV)和505 bp(PiHV)目的条带,对鸽Ⅰ型副黏病毒、鸽痘病毒和禽腺病毒检测结果为阴性;对PiCV和PiHV的最低检出量分别为1.45×10;copies/μL和1.45×10;copies/μL,敏感性较高;利用该方法对黑龙江省部分鸽场88份疑似样品检测显示,PiCV和PiHV感染的比例分别81.8%和36.4%,双重PCR与单一PCR的符合率为100%。结果表明:建立的方法使用便捷,对于PiHV和PiCV的临床快速检测与流行病学调查具有重要的应用价值。 展开更多

关键词 鸽圆环病毒 鸽疱疹病毒 双重PCR

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一例鸽疱疹病毒感染病例的诊治 被引量：5

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作者 王慧 程小果 《上海畜牧兽医通讯》 2020年第1期59-60,共2页

Ⅰ型鸽疱疹病毒(Pigeon herpesvirus 1, PHV-1)又称哥伦比亚疱疹病毒Ⅰ型(Columbid herpesvirus 1, CoHV-1),是禽疱疹病毒科、α-疱疹病毒亚科、马立克氏病毒属的一员^([1-2])。鸽是该病毒的自然宿主,鸽感染Ⅰ型疱疹病毒后,主要表现为... Ⅰ型鸽疱疹病毒(Pigeon herpesvirus 1, PHV-1)又称哥伦比亚疱疹病毒Ⅰ型(Columbid herpesvirus 1, CoHV-1),是禽疱疹病毒科、α-疱疹病毒亚科、马立克氏病毒属的一员^([1-2])。鸽是该病毒的自然宿主,鸽感染Ⅰ型疱疹病毒后,主要表现为厌食、精神不振等,发病急,死亡率高,给养鸽业造成较大的经济损失。随着国内养鸽业的快速发展,鸽存栏量持续增加,鸽病也越来越多,且临床表现越来越复杂^([3])。 展开更多

关键词 马立克氏病毒 自然宿主 鸽疱疹病毒 养鸽业 死亡率高 疱疹病毒科 存栏量 Ⅰ型疱疹病毒

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一例鸽圆环病毒和鸽疱疹病毒混合感染的诊治 被引量：7

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作者 兰世捷 陈亮 +5 位作者 苗艳 冯万宇 吴宪 李丹 沈思思 黄宝银 《现代畜牧科技》 2021年第1期11-13,共3页

为了确诊黑龙江省某赛鸽场的2~4月龄幼鸽发病死亡的原因,本实验根据临床症状和病理解剖情况,采集相应病料,利用PCR技术进行了鸽圆环病毒(PiCV)、鸽腺病毒(FAdV)和鸽疱疹病毒(PiHV)检测。PiCV扩增到了629bp目的条带,PiHV扩增到了242bp目... 为了确诊黑龙江省某赛鸽场的2~4月龄幼鸽发病死亡的原因,本实验根据临床症状和病理解剖情况,采集相应病料,利用PCR技术进行了鸽圆环病毒(PiCV)、鸽腺病毒(FAdV)和鸽疱疹病毒(PiHV)检测。PiCV扩增到了629bp目的条带,PiHV扩增到了242bp目的条带,FAdV无条带。结果表明:该赛鸽棚PiCV和PiHV均为阳性,FAdV为阴性。综合多项检测结果最终诊断该鸽场病死鸽的死亡原因为鸽圆环病毒和疱疹病毒混合感染。 展开更多

关键词 鸽 圆环病毒 疱疹病毒 PCR检测与测序 诊治

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鸽疱疹病毒病的中草药防治

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作者 兰世捷 苗艳 +12 位作者 陈亮 冯万宇 李丹 沈思思 张蕾 于辰龙 朱庆贺 丁丽艳 江波涛 钟鹏 罗天瑶 吴宪 薛沾枚 《家禽科学》 2022年第10期18-20,共3页

近年来,在高额奖金刺激下赛鸽运动发展迅猛,而且鸽肉营养丰富,人们对商品肉鸽的需求量也在逐年增加,双重利好因素使得养鸽产业得到快速发展。鸽I型疱疹病毒病是由I型疱疹病毒引起的鸽的一种以急性经过和极高死亡率为特征的传染病,呈世... 近年来,在高额奖金刺激下赛鸽运动发展迅猛,而且鸽肉营养丰富,人们对商品肉鸽的需求量也在逐年增加,双重利好因素使得养鸽产业得到快速发展。鸽I型疱疹病毒病是由I型疱疹病毒引起的鸽的一种以急性经过和极高死亡率为特征的传染病,呈世界性分布[1]。自1967年以来,有许多国家已从患病鸽中分离到鸽I型疱疹病毒。 展开更多

关键词 疱疹病毒 急性经过 肉鸽 高额奖金 中草药防治 高死亡率 营养丰富 养鸽

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1例肉鸽多重病原混合感染的实验室诊断与分析

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作者 黄运福 唐作顺 +5 位作者 梁海皇 兰天艳 银慧慧 曾雪颜 彭婷 刘伟 《现代畜牧兽医》 2025年第6期64-69,共6页

试验旨在了解广西某肉鸽养殖场病死鸽携带的病原,为当地鸽病的防控提供参考。试验对送检的病死青年鸽采集咽喉拭子,解剖观察内脏病理变化并采集肝、肾、脾、肺等组织,通过病理剖检、显微镜观察、病毒核酸检测、病原菌分离鉴定等方法进... 试验旨在了解广西某肉鸽养殖场病死鸽携带的病原,为当地鸽病的防控提供参考。试验对送检的病死青年鸽采集咽喉拭子,解剖观察内脏病理变化并采集肝、肾、脾、肺等组织,通过病理剖检、显微镜观察、病毒核酸检测、病原菌分离鉴定等方法进行实验室诊断,同时进行病毒对鸡胚的适应性和病原菌的药物敏感性研究。结果显示,显微镜观察到病死鸽携带鸽毛滴虫,病毒核酸检出鸽Ⅰ型副黏病毒(PPMV-1)、圆环病毒(PiCV)和鸽疱疹病毒(PiHV)。PiHV能够通过鸡胚培养,但PiCV仅表现一定适应性。病原菌分离鉴定为大肠杆菌和白色念珠菌,大肠杆菌对阿米卡星和庆大霉素敏感,白色念珠菌对制霉菌素和克霉唑敏感。研究表明,病死鸽为PPMV-1、PiCV、PiHV、大肠杆菌、白色念珠菌和鸽毛滴虫混合感染,提示鸽场需要重视对鸽病的防控并做好相应的生物安全措施。 展开更多

关键词 鸽 鸽Ⅰ型副黏病毒(PPMV-1) 圆环病毒(PiCV) 鸽疱疹病毒(pihv) 大肠杆菌 白色念珠菌 鸽毛滴虫

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七个不同地区鸽场PTTV、PPMV-Ⅰ和PiHV混合感染的调查 被引量：3

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作者 茅慧华 张志成 +3 位作者 方光远 张旭 晏文梅 戴鼎震 《中国家禽》 北大核心 2017年第17期69-72,共4页

研究采用PCR(RT-PCR)法对来自7个不同地区鸽场总计418份病料样品进行检测,调查分析鸽细环病毒(Pigeon torque teno virus,PTTV)、鸽Ⅰ型副黏病毒(Pigeonparamyxo virus-Ⅰ,PPMV-Ⅰ)及鸽疱疹病毒(Pigeon Herpes Virus,PiHV)三种病毒感染... 研究采用PCR(RT-PCR)法对来自7个不同地区鸽场总计418份病料样品进行检测,调查分析鸽细环病毒(Pigeon torque teno virus,PTTV)、鸽Ⅰ型副黏病毒(Pigeonparamyxo virus-Ⅰ,PPMV-Ⅰ)及鸽疱疹病毒(Pigeon Herpes Virus,PiHV)三种病毒感染情况及其混合感染的状况。结果显示:PTTV阳性为292份(69.86%),PPMV-Ⅰ阳性为145份(34.69%),PiHV阳性为92份(22.01%),阳性样品中PTTV和PPMV-Ⅰ呈混合感染的有81份(19.38%),PTTV和PiHV呈混合感染的有29份(6.94%),而三种病毒混合感染的仅有7份(1.67%)。调查结果表明,这7个鸽群中PTTV感染情况较严重,PTTV和PPMV-Ⅰ混合感染现象较为普遍,对养鸽产业构成一定威胁。 展开更多

关键词 鸽细环病毒 鸽Ⅰ型副黏病毒 鸽疱疹病毒 混合感染 RT-PCR

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