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鸭腺病毒B血清1型和血清2型双重PCR检测方法的建立及应用
被引量：
5
1
作者
江丹丹
林昶
+9 位作者
黄志坚
肖世峰
王劭
林锋强
程晓霞
朱小丽
陈秀琴
董慧
陈少莺
陈仕龙
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第8期855-860,共6页
番鸭白肝病是2014年以来我国番鸭流行的一种新疫病,其病原为一种与鸭腺病毒B型法国GR株同源性较高的新型腺病毒,暂命名为鸭腺病毒B血清2型(DAdV-B2),将法国GR株命名为鸭腺病毒B血清1型(DAdV-B1)。为建立同时检测DAdV-B1和DAdV-B2的方法...
番鸭白肝病是2014年以来我国番鸭流行的一种新疫病,其病原为一种与鸭腺病毒B型法国GR株同源性较高的新型腺病毒,暂命名为鸭腺病毒B血清2型(DAdV-B2),将法国GR株命名为鸭腺病毒B血清1型(DAdV-B1)。为建立同时检测DAdV-B1和DAdV-B2的方法,本研究根据GenBank中DAdV-B1 fiber基因和DAdV-B2 fiber1基因序列特征,分别设计了2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以同时检测这两种病毒的双重PCR方法。结果显示:优化后的PCR方法最佳退火温度为60.1℃,最适引物浓度为0.16μmol/L;利用该方法对DAdV-B1、DAdV-B2、鸭腺病毒A型(DAdV-A)、禽腺病毒血清4型(FAdV-4)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、新型呼肠孤病毒(NDRV)、番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽坦布苏病毒(ATUMV)等检测,结果显示,该方法仅对DAdV-B1和DAdV-B2有特异性扩增,对其他鸭临床常见病原均无扩增,特异性较强。将DAdV-B1 fiber和DAdV-B2 fiber1质粒标准品等体积混合并作10倍倍比稀释后作为模板,利用该双重PCR方法检测,结果显示,该方法对DAdV-B1 fiber和DAdV-B2 fiber1质粒标准品的最低检测限分别为175拷贝/μL和163拷贝/μL,对DAdV-B2的最低检出滴度为1×10^(1) TCID_(50),敏感性较高。批内和批间的重复性试验检测结果均一致,重复性好。利用该双重PCR与单一PCR方法同时对64份临床样品检测,结果显示二者的符合率为100%,其中DAdV-B2的阳性率为79.7%(51/64),DAdV-B1的阳性率为4.7%(3/64)。以上结果表明本研究建立的双重PCR方法特异性较强、敏感性较高和稳定性较好,为DAdV-B1和DAdV-B2的临床鉴别检测及其分子流行病学调查提供了技术手段。
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关键词
鸭
腺病毒
b
血清
1
型
鸭腺病毒b血清2型
fi
b
er基因
fi
b
er1基因
双重PCR
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题名
鸭腺病毒B血清1型和血清2型双重PCR检测方法的建立及应用
被引量：
5
1
作者
江丹丹
林昶
黄志坚
肖世峰
王劭
林锋强
程晓霞
朱小丽
陈秀琴
董慧
陈少莺
陈仕龙
机构
福建省农业科学院畜牧兽医研究所
福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心
福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)
三明市绿色食品发展中心
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第8期855-860,共6页
基金
福建省公益类科研院所专项(2019R1026-11)
福建省农业科学院创新团队项目(CXTD2021034)
福建省农业科学院“5511”协同创新工程(XTCXGC2021018、XTCXGC2021012)。
文摘
番鸭白肝病是2014年以来我国番鸭流行的一种新疫病,其病原为一种与鸭腺病毒B型法国GR株同源性较高的新型腺病毒,暂命名为鸭腺病毒B血清2型(DAdV-B2),将法国GR株命名为鸭腺病毒B血清1型(DAdV-B1)。为建立同时检测DAdV-B1和DAdV-B2的方法,本研究根据GenBank中DAdV-B1 fiber基因和DAdV-B2 fiber1基因序列特征,分别设计了2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以同时检测这两种病毒的双重PCR方法。结果显示:优化后的PCR方法最佳退火温度为60.1℃,最适引物浓度为0.16μmol/L;利用该方法对DAdV-B1、DAdV-B2、鸭腺病毒A型(DAdV-A)、禽腺病毒血清4型(FAdV-4)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、新型呼肠孤病毒(NDRV)、番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽坦布苏病毒(ATUMV)等检测,结果显示,该方法仅对DAdV-B1和DAdV-B2有特异性扩增,对其他鸭临床常见病原均无扩增,特异性较强。将DAdV-B1 fiber和DAdV-B2 fiber1质粒标准品等体积混合并作10倍倍比稀释后作为模板,利用该双重PCR方法检测,结果显示,该方法对DAdV-B1 fiber和DAdV-B2 fiber1质粒标准品的最低检测限分别为175拷贝/μL和163拷贝/μL,对DAdV-B2的最低检出滴度为1×10^(1) TCID_(50),敏感性较高。批内和批间的重复性试验检测结果均一致,重复性好。利用该双重PCR与单一PCR方法同时对64份临床样品检测,结果显示二者的符合率为100%,其中DAdV-B2的阳性率为79.7%(51/64),DAdV-B1的阳性率为4.7%(3/64)。以上结果表明本研究建立的双重PCR方法特异性较强、敏感性较高和稳定性较好,为DAdV-B1和DAdV-B2的临床鉴别检测及其分子流行病学调查提供了技术手段。
关键词
鸭
腺病毒
b
血清
1
型
鸭腺病毒b血清2型
fi
b
er基因
fi
b
er1基因
双重PCR
Keywords
duck adenovirus
b
serotype 1
duck adenovirus
b
serotype
2
fi
b
er gene
fi
b
er1 gene
duplex PCR
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸭腺病毒B血清1型和血清2型双重PCR检测方法的建立及应用
江丹丹
林昶
黄志坚
肖世峰
王劭
林锋强
程晓霞
朱小丽
陈秀琴
董慧
陈少莺
陈仕龙
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
5
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