基因C型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备 被引量：3

1

作者 赵立娜 崔言顺 +4 位作者 任建亭 李建亮 黄兵 李玉峰 马秀丽 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期258-262,共5页

采用RT-PCR方法,扩增基因C型DHV JFX08株的VP1基因,与pMD18-T载体进行连接,构建新型DHVVP1基因克隆重组质粒。然后将VP1基因定向插入到pET-32a(+)表达载体中,筛选原核表达载体pET-32a-VP1,进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析表明,基因C... 采用RT-PCR方法,扩增基因C型DHV JFX08株的VP1基因,与pMD18-T载体进行连接,构建新型DHVVP1基因克隆重组质粒。然后将VP1基因定向插入到pET-32a(+)表达载体中,筛选原核表达载体pET-32a-VP1,进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析表明,基因C型DHV-VP1基因可在大肠杆菌中稳定高效的表达。Western-blot检测表明,表达产物可与基因C型DHV阳性血清发生特异性反应。将纯化的重组蛋白免疫4周龄SPF鸡,以纯化的VP1重组蛋白和基因C型DHV全病毒分别包板,制备的抗血清ELISA效价分别可达1∶25 600,1∶51 200,表明该重组蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 鸭肝炎病毒 基因C型 VP1基因 克隆表达 多克隆抗体

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一例鸭1型甲肝病毒和11型鸭疫里默氏杆菌混合感染的诊断及其病原的分离鉴定 被引量：8

2

作者 陈翠腾 程龙飞 +8 位作者 傅光华 万春和 刘荣昌 傅秋玲 陈珍 朱春华 陈红梅 施少华 黄瑜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第11期3053-3058,共6页

为确定引起2015年6月底福州仓山区某一养鸭场10日龄左右麻鸭发病死亡的病原,无菌采取病死鸭的肝脏、脾脏、脑等组织,经病毒分离、细菌分离纯化、PCR检测、血清学检测、药物敏感性试验,结果检测并分离到鸭1型甲肝病毒和11型鸭疫里默氏杆... 为确定引起2015年6月底福州仓山区某一养鸭场10日龄左右麻鸭发病死亡的病原,无菌采取病死鸭的肝脏、脾脏、脑等组织,经病毒分离、细菌分离纯化、PCR检测、血清学检测、药物敏感性试验,结果检测并分离到鸭1型甲肝病毒和11型鸭疫里默氏杆菌,该鸭1型甲肝病毒分离株与MPZJ1206株和GD株同源性最高,均为98.7%。结果表明,该病例为鸭甲肝病毒1型和11型鸭疫里默氏杆菌混合感染。 展开更多

关键词 鸭甲肝病毒1型 11型鸭疫里默氏杆菌 分离鉴定

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疫区夏秋季鸡鸭H5N1亚型禽流感病毒隐性感染调查 被引量：1

3

作者 蒋就喜 马蕾 +4 位作者 李国坚 胡婷婷 康马飞 王晓 张才儒 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第38期27-28,共2页

目的调查H5N1亚型禽流感疫区夏秋季鸡鸭H5N1亚型禽流感病毒的流行情况。方法以2005年12月出现过因H5N1亚型禽流感感染死亡病例的烟竹村及周围3 km范围为疫区,10 km外未发生过禽流感疫情的塘洞村为非疫区,于2008年11月(秋季)和2009年7月... 目的调查H5N1亚型禽流感疫区夏秋季鸡鸭H5N1亚型禽流感病毒的流行情况。方法以2005年12月出现过因H5N1亚型禽流感感染死亡病例的烟竹村及周围3 km范围为疫区,10 km外未发生过禽流感疫情的塘洞村为非疫区,于2008年11月(秋季)和2009年7月(夏季)采集疫区与非疫区健康散养鸡鸭血,采用酶联免疫吸附法检测H5N1亚型禽流感病毒隐性感染情况。结果总感染率为44%。疫区和非疫区隐性感染率分别为49.12%和42.11%,两者相比P>0.05。2008年11月鸡鸭H5N1亚型病毒隐性感染阳性率为63.6%,明显高于2009年7月的29.0%,P<0.05。烟竹村鸡隐性感染总阳性率为59.34%,明显高于鸭的11.02%,P<0.05。结论 H5N1亚型禽流感疫区健康散养鸡鸭对H5N1病毒普遍易感,有可能成为H5N1亚型禽流感主要传染源,其中鸡作为传染源的可能性更大。秋季隐性感染率偏高,对禽流感的防控重点应放在秋季。 展开更多

关键词 H5N1型禽流感病毒 鸡 鸭流行病学

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鸭1型甲肝病毒亚型VP1蛋白单克隆抗体的研制及鉴定 被引量：1

4

作者 傅秋玲 刘伟 +9 位作者 黄瑜 傅光华 万春和 程龙飞 陈红梅 施少华 刘荣昌 陈珍 陈翠腾 林建生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第2期554-560,共7页

为制备抗鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)结构蛋白VP1的单克隆抗体(MAbs),本研究以pGEX-VP1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,同时以纯化浓缩的全病毒作为包被抗原,建立了筛选抗VP1蛋白阳性杂交瘤细胞株的间接ELISA方法,经融合、筛选制备杂交瘤细胞... 为制备抗鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)结构蛋白VP1的单克隆抗体(MAbs),本研究以pGEX-VP1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,同时以纯化浓缩的全病毒作为包被抗原,建立了筛选抗VP1蛋白阳性杂交瘤细胞株的间接ELISA方法,经融合、筛选制备杂交瘤细胞及鉴定MAbs的稳定性、特异性、腹水效价和中和活性等生物学活性,获得了2株持续且稳定分泌抗体的杂交瘤细胞(1A2和5G3)。MAbs腹水ELISA效价分别为1∶3.2×104和1∶2.0×106。亚类鉴定均为IgG1/κ型。Western blotting结果显示,2株MAbs均能与DHAV-1aVP1蛋白和DHAV-1a全病毒发生特异性反应。特异性试验结果显示2株MAbs能与鸭1型甲肝病毒(DHAV-1)和DHAV-1a发生交叉反应。中和试验结果显示5G3株具有中和活性。结果表明2株MAbs的ELISA效价高、特异性强、稳定性好,均能与DHAV-1和DHAV-1a全病毒发生特异性反应,其中一株具有中和活性。 展开更多

关键词 鸭1型甲肝病毒亚型 单克隆抗体 生物学特性

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交叉中和血清1型和血清3型鸭甲肝病毒单克隆抗体的制备与鉴定

5

作者 刘燕 汤承 +1 位作者 岳华 王远微 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1963-1974,共12页

鸭甲型肝炎(duck hepatitis A,DHA)是危害养鸭业的主要疾病之一,是一种雏鸭的急性、高度致死性传染病。本研究旨在研制一种对我国流行的鸭甲型肝炎血清1型(DHAV-1)和血清3型(DHAV-3)病毒具有交叉中和作用的单克隆抗体(monoclonal antibo... 鸭甲型肝炎(duck hepatitis A,DHA)是危害养鸭业的主要疾病之一,是一种雏鸭的急性、高度致死性传染病。本研究旨在研制一种对我国流行的鸭甲型肝炎血清1型(DHAV-1)和血清3型(DHAV-3)病毒具有交叉中和作用的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)。人工合成12条DHAV-1和DHAV-3的VP1蛋白共有的抗原表位肽,分别与钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)载体偶联作为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠制备McAb。通过检测McAb与DHAV-1和DHAV-3的交叉反应性,测定McAb对病毒增殖的抑制效率、中和效价以及攻毒保护率等来筛选McAb。本研究共获得了12株稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株,其中6株(C1、C4、C7、C12、C13、C16)分泌的McAb同时与DHAV-1和DHAV-3发生特异性交叉反应;C1、C4、C7、C16可以抑制DHAV-1和DHAV-3在鸭胚中的增殖,抑制率在75.34%~100.00%不等;对DHAV-1和DHAV-3的中和效价:C1(1∶3&1∶5)、C4(1∶3&1∶3)、C7(1∶10&1∶11)和C16(1∶9&1∶9);C7和C16对DHAV-1和DHAV-3攻毒雏鸭的保护率较高,分别为“70%、80%”和“100%、60%”。本研究成功研制出对DHAV-1和DHAV-3具有交叉中和活性的McAb 4株,其中2株对病毒的感染具有良好的预防效果,为DHA的防控提供了新材料和新思路。 展开更多

关键词 鸭甲型肝炎 血清1型 血清3型 单克隆抗体 交叉中和活性

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鸭疱疹病毒1型套式PCR检测方法的建立及应用 被引量：4

6

作者 朱树全 邬孝红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第8期210-213,共4页

为建立一种快速鸭疱疹病毒1型(Anatid herpesvirus 1,AHV-1),又名鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)病原检测方法,本研究根据GenBank上登录的DEV基因序列,设计合成内、外2对引物,建立了检测DEV的套式PCR方法。该方法对正常鸭胚、健... 为建立一种快速鸭疱疹病毒1型(Anatid herpesvirus 1,AHV-1),又名鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)病原检测方法,本研究根据GenBank上登录的DEV基因序列,设计合成内、外2对引物,建立了检测DEV的套式PCR方法。该方法对正常鸭胚、健康鸭肝肠组织、鸡传染性喉气管炎病毒、伪狂犬病病毒、减蛋综合征病毒、鸭肝炎病毒和新城疫病毒的扩增结果均为阴性;该方法第1次扩增的敏感性是10ng,第2次扩增的敏感性是0.1ng,第2次比第1次扩增的敏感性高100倍。建立的套式PCR方法具有良好的特异性、敏感性,可以准确快速检测出极低含量的DEV,将为鸭病毒性肠炎的病原检测及分子流行病学调查等提供一种高效、快速、特异、灵敏的检测方法。 展开更多

关键词 鸭疱疹病毒1型 套式PCR 检测

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小鹅瘟病毒、鹅星状病毒Ⅰ型与鸭疫里默氏杆菌混合感染的诊断及病原分析

7

作者 张晓战 邢忠玉 +10 位作者 吕楠楠 董轩志 李育林 毛天绩 梁尧涵 郭运泽 宋予震 乔宏兴 边传周 袁野 梁群超 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1183-1193,共11页

【目的】2023年4月,河南新乡某地鹅场雏鹅群急性发病,死亡率高达25%,为确定引起该鹅场雏鹅发病的病因,本研究对送检的病死雏鹅进行剖检和实验室诊断。【方法】无菌采集病死雏鹅肝脏、脾脏、肾脏和小肠等组织样品及心血和肝脏外层纤维素... 【目的】2023年4月,河南新乡某地鹅场雏鹅群急性发病,死亡率高达25%,为确定引起该鹅场雏鹅发病的病因,本研究对送检的病死雏鹅进行剖检和实验室诊断。【方法】无菌采集病死雏鹅肝脏、脾脏、肾脏和小肠等组织样品及心血和肝脏外层纤维素性渗出物,通过对心血及肝脏外层纤维素性渗出物样品进行细菌分离培养、革兰染色镜检观察、16S rRNA基因及药物敏感性试验鉴定病鹅感染细菌及感染菌株的药物敏感性情况;通过PCR/RT-PCR方法对其常见雏鹅病毒性传染病病原核酸进行检验,并对阳性病原的主要结构蛋白基因进行测序分析,确定病鹅感染的病毒性病原及其分子流行病学情况。【结果】细菌学试验结果显示,分离菌株在血平板上呈半透明圆形突起、边缘整齐、表面光滑菌落,形态学观察显示,该菌为单个和成对的革兰阴性短杆菌,符合鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)的特性。16S rRNA基因扩增测序与BLAST分析进一步证实该菌为RA。药敏试验结果显示,该菌株对头孢曲松和头孢噻肟敏感,对阿莫西林、四环素和多黏菌素B耐药。常见雏鹅病毒性传染病病原核酸PCR/RT-PCR检测发现,该鹅场样品小鹅瘟病毒(Goose parvovirus,GPV)和鹅星状病毒Ⅰ型(genotypeⅠGoose astrovirus,GAstV-1)核酸呈阳性,GAstV-2、禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)和鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus,GRV)核酸阴性,将致病毒株分别命名为GPV/HN-2023和GAstV-1/HN-2023。进一步对GPV/HN-2023和GAstV-1/HN-2023的主要结构蛋白基因分析发现,GPV/HN-2023与DY-16株的亲缘关系较近,属于DY-16-like毒株,且VP3蛋白存在2个特有的氨基酸位点突变D248E和V314L;GAstV-1/HN-2023与GAstV-1毒株亲缘关系较近,属于GAstV-1分支,ORF2蛋白存在3个特有的氨基酸位点突变G47R、S207G和A628T。【结论】本研究通过综合诊断方法明确了GPV、GAstV-1与RA混合感染是引起该鹅场雏鹅发病的病因,分析了致病菌RA的耐药性和病毒性致病原GPV和GAstV-1的遗传演化及变异特点,为河南地区雏鹅疫病的科学防控提供理论参考。 展开更多

关键词 小鹅瘟病毒(GPV) 鹅星状病毒Ⅰ型(GAstV-1) 鸭疫里默氏杆菌 混合感染 病原分析

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芒果苷抗DHAV-1致鸭胚肝细胞炎性损伤的研究 被引量：1

8

作者 孙伟翔 秦枫 +6 位作者 袁亚梅 卜潇 张力 吴双 林梦舟 吴植 朱善元 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第11期4485-4494,共10页

【目的】探究芒果苷(mangiferin,Man)对鸭甲型肝炎病毒1型(Duck hepatitis A virus-1,DHAV-1)致鸭胚肝细胞(DEHCs)炎性损伤的影响。【方法】从14日龄SPF级麻鸭鸭胚肝脏组织分离原代DEHCs,用含不同浓度芒果苷(0、5、10、20、40、80和160... 【目的】探究芒果苷(mangiferin,Man)对鸭甲型肝炎病毒1型(Duck hepatitis A virus-1,DHAV-1)致鸭胚肝细胞(DEHCs)炎性损伤的影响。【方法】从14日龄SPF级麻鸭鸭胚肝脏组织分离原代DEHCs,用含不同浓度芒果苷(0、5、10、20、40、80和160μmol/L)的培养液培养48 h后,通过CCK-8法检测其安全浓度范围;用安全浓度的芒果苷培养DEHCs 12、24和48 h后,检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)的活力,判定芒果苷对DEHCs的毒性作用。将DEHCs分为对照组(Mock)、模型组(Model)、芒果苷组(Man10、Man20和Man40)和利巴韦林组(Rib),每组3个重复,所有组细胞血清饥饿培养12 h后,Mock组加入含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基,Model、Man10、Man20、Man40和Rib组用DHAV-1(MOI=1.0)攻毒2 h后,Model组更换为含10%FBS的DMEM培养基,Man10、Man20、Man40培养基中分别添加10、20和40μmol/L芒果苷,Rib组添加1μmol/L利巴韦林。48 h后收集各组细胞,用比色法检测丙二醛(MDA)含量及过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、总一氧化氮合酶(T-NOS)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;免疫荧光(IF)法检测DHAV-1在各组DEHCs中的分布情况;Western blotting法检测NLRP3/Pro-Caspase1/IL-1β通路蛋白的表达情况。提取2日龄SPF麻鸭的新鲜全血,分离鸭外周血单个核细胞(duPBMCs),duPBMCs分组及处理同DEHCs,ELISA法检测各组duPBMCs上清液中白介素8(IL-8)和IL-1β的含量。【结果】与0μmol/L芒果苷组相比,80和160μmol/L芒果苷组细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),因此5~40μmol/L芒果苷为处理DEHCs的安全给药浓度。20和40μmol/L芒果苷处理48 h细胞上清液中LDH活力显著低于处理12和24 h(P<0.05),20和40μmol/L芒果苷处理12和24 h细胞上清液中LDH活力显著高于5和10μmol/L芒果苷处理(P<0.05),各浓度芒果苷处理48 h细胞上清液中LDH活力均差异不显著(P>0.05),故48 h为最适处理时间。与Mock组相比,Model组DEHCs中CAT、T-AOC、SOD和GSH-Px活性均显著降低(P<0.05),DEHCs中MDA含量、T-NOS活性、DHAV-1拷贝数、DHAV-1阳性率、NLRP3表达量及duPBMCs中IL-8、IL-1β分泌量均显著升高(P<0.05)。与Model组相比,Man10、Man20和Man40组DEHCs中CAT、T-AOC、SOD和GSH-Px活性均显著提高(P<0.05),DEHCs中MDA含量、T-NOS活性、DHAV-1拷贝数、DHAV-1阳性率、NLRP3表达量及duPBMCs中IL-8、IL-1β分泌量均显著降低(P<0.05)。【结论】芒果苷可通过增加抗氧化能力、降低DHAV-1的复制水平、抑制NLRP3通路的激活、降低促炎细胞因子的释放抗DHAV-1感染DEHCs造成的炎性损伤。 展开更多

关键词 芒果苷 鸭甲型肝炎病毒1型(dhav-1) 鸭胚肝细胞 鸭外周血单个核细胞

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鸭病毒性肝炎病毒JH2株感染雏鸭血清生化指标的动态变化

9

作者 马秀丽 杨军 +3 位作者 于可响 林树乾 宋敏训 廖明 《广东农业科学》 CAS CSCD 2008年第9期103-107,共5页

用1型鸭肝炎病毒山东分离株JH2人工感染3日龄健康樱桃谷雏鸭,对接种后1～5 d的血清酶、血糖及血脂等多项血清生化指标进行测定,结果表明:鸭肝炎病毒感染雏鸭1～2 d内丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活性较未攻毒的对照组极显著... 用1型鸭肝炎病毒山东分离株JH2人工感染3日龄健康樱桃谷雏鸭,对接种后1～5 d的血清酶、血糖及血脂等多项血清生化指标进行测定,结果表明:鸭肝炎病毒感染雏鸭1～2 d内丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活性较未攻毒的对照组极显著升高;碱性磷酸酶活性在接种后2～3 d内与对照组差异极显著;接种后1～5 d攻毒组总胆红素和间接胆红素的含量均低于对照组,其中接种后1、3、4 d时差异显著;攻毒组胆碱脂酶和甘油三脂在接种后1～2 d内较对照组极显著升高,胆固醇在整个试验中无明显变化;谷氨酰胺转移酶活性在接种后1～4 d内较对照组有极显著升高;乳酸脱氢酶活性1～3 d内较对照组极显著升高,而肌酸激酶活性虽高于对照组,但差异不显著;雏鸭在接种后1～3 d内表现出明显的低尿酸血症,接种后1 d肌酐含量较对照组显著升高;α-淀粉酶活性呈逐渐升高的趋势,但均低于对照组,接种后1～2d与对照组差异极显著;攻毒组总蛋白、白蛋白和球蛋白在整个试验期间表现为先升高后降低的趋势,血清葡萄糖在接种后1 d降至最低,与对照组差异极显著。 展开更多

关键词 雏鸭 鸭病毒性肝炎病毒 1型 血清 生化指标

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中国部分地区鸭、鹅携带四种病毒状况的调查与分析 被引量：7

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作者 刘洋 王传彬 +7 位作者 霍斯琪 翟新验 辛盛鹏 刘玉良 韩雪 张倩 杨卫铮 顾小雪 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1610-1617,共8页

为了解中国部分地区鸭、鹅的病毒携带情况,作者于2014年11月,从安徽、浙江、福建、广东、广西5省的多个表观健康鸭、鹅群中采集样品1 931份,采用荧光定量PCR对鸭瘟病毒(DPV)、鸭甲型肝炎病毒1型(DHAV-1)、小鹅瘟病毒(GPV)、鸭坦布苏病毒... 为了解中国部分地区鸭、鹅的病毒携带情况,作者于2014年11月,从安徽、浙江、福建、广东、广西5省的多个表观健康鸭、鹅群中采集样品1 931份,采用荧光定量PCR对鸭瘟病毒(DPV)、鸭甲型肝炎病毒1型(DHAV-1)、小鹅瘟病毒(GPV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)进行检测。结果显示,DTMUV阳性率为1.2%,DPV阳性率为0.3%;其余两种病毒均未检出。结果表明,临床表观健康的鸭、鹅可携带鸭坦布苏病毒和鸭瘟病毒,而且,序列分析结果显示,所携带的毒株与临床分离的相应致病性毒株相似性较高,提示在水禽疫病传播过程中,表观健康但带毒的动物可能成为疫病传播的风险点。 展开更多

关键词 鸭瘟病毒 鸭甲型肝炎病毒1型 小鹅瘟病毒 鸭坦布苏病毒 流行病学调查

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鸭病毒性疾病流行病学和相关知识

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作者 卢绪秀 《中国动物保健》 2023年第8期47-48,共2页

本文对鸭禽副黏病毒1型感染和高致病性禽流感H5N1病毒感染这两种高发病率和高死亡率的病毒性疾病的相关知识进行综述,主要是流行病学和疫苗方案。

关键词 鸭 禽副黏病毒1型 高致病性禽流感H5N1病毒 流行病学

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德国巴伐利亚州再现禽流感疫情

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《湖北畜牧兽医》 2007年第10期15-15,共1页

据2007年9月7日报道，德国南部巴伐利亚州又有两个养鸭场发现禽流感疫情？初步检验显示，巴伐利亚州小镇尼特瑙附近两家养鸭场的死亡鸭子感染了禽流感病毒。当地卫生部门已经成立了危机行动小组，负责监督家禽扑杀等工作。8月底的时候... 据2007年9月7日报道，德国南部巴伐利亚州又有两个养鸭场发现禽流感疫情？初步检验显示，巴伐利亚州小镇尼特瑙附近两家养鸭场的死亡鸭子感染了禽流感病毒。当地卫生部门已经成立了危机行动小组，负责监督家禽扑杀等工作。8月底的时候，德国巴伐利亚州埃朗根地区一家农场的农禽被证实感染H5N1型高致病性禽流感病毒。 展开更多

关键词 巴伐利亚州 禽流感疫情 德国 高致病性禽流感病毒 H5N1型 卫生部门 养鸭场 感染

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