禽传染性喉气管炎病毒体内外感染模型中鸡Toll样受体21 mRNA转录水平的研究 被引量：2

1

作者 张焕容 陈世界 +3 位作者 皮晋魁 岳华 刘征鑫 汤承 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期965-969,共5页

为研究病毒与机体的相互作用,本研究参考GenBank中鸡Toll样受体21(ChTLR21)的基因序列设计实时定量PCR特异性引物,以鸡核糖体蛋白L4(RPL4)为内参基因,建立检测ChTLR21 mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析ChTLR21在禽传染性喉气管... 为研究病毒与机体的相互作用,本研究参考GenBank中鸡Toll样受体21(ChTLR21)的基因序列设计实时定量PCR特异性引物,以鸡核糖体蛋白L4(RPL4)为内参基因,建立检测ChTLR21 mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析ChTLR21在禽传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)中和感染SPF雏鸡免疫器官脾脏、法氏囊和胸腺组织中的转录水平。结果显示:ILTV感染CEF后2 h、4 h、8 h和18 h时间点ChTLR21 mRNA转录水平分别为未感染对照细胞的1 540.53、0.98、1.19和3.70倍。但仅在ILTV感染2 h时引起ChTLR21转录水平升高,与对照组相比差异显著(p<0.05)。ILTV感染SPF雏鸡后6 h、24 h和30 h脾脏中ChTLR21 mRNA转录水平分别为未感染对照的56.34、59.85和3.61倍;法氏囊中分别为0.03、25.98和3.08倍;胸腺中分别为2.52、50和7.32倍。在感染初期,脾脏中ChTLR21转录量显著升高,随后有所降低,但均高于未感染对照(p<0.05);法氏囊中仅在感染6 h时呈显著抑制(p<0.01);胸腺中呈波动性转录水平升高,但与对照组无统计学差异(p>0.05)。本研究证明ChTLR21参与了鸡体对ILTV感染的应答,并在体内外感染模型中呈现不同的表达规律。 展开更多

关键词 禽传染性喉气管炎病毒 鸡toll样受体21 鸡胚成纤维细胞 SPF雏鸡 实时荧光定量PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡Toll样受体及其与病原微生物感染关系研究进展 被引量：10

2

作者 周作勇 陈狄 +1 位作者 邹丽娟 聂奎 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期249-252,共4页

Toll样受体（Toll-like receptors,TLR）是一类胚系编码的模式识别受体（Pattern recognition receptors,PRR）,通过识别病原微生物保守的分子相关模式（Pathogen-associated molecular patterns,PAMP）实现对外来病原体的早期识别，

关键词 toll样受体 病原微生物感染 模式识别 早期识别 鸡 病原体

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡Toll样受体2的克隆表达及多克隆抗体的制备 被引量：5

3

作者 吴双 朱善元 +3 位作者 王永娟 王安平 左伟勇 洪伟鸣 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期586-589,共4页

试验旨在制备鼠抗鸡Toll样受体2(chTLR2)的多克隆抗体。采用RT-PCR方法从活化的鸡外周血淋巴细胞中扩增其胞外区片段chTLR2(chTLR2t1和chTLR2t2),并构建这两个片段的原核表达重组质粒,优化蛋白质的表达条件,SDS-PAGE和Western-blot法检... 试验旨在制备鼠抗鸡Toll样受体2(chTLR2)的多克隆抗体。采用RT-PCR方法从活化的鸡外周血淋巴细胞中扩增其胞外区片段chTLR2(chTLR2t1和chTLR2t2),并构建这两个片段的原核表达重组质粒,优化蛋白质的表达条件,SDS-PAGE和Western-blot法检测融合蛋白,将融合蛋白作为免疫原免疫Balb/c小鼠,利用相应的原核表达的全长蛋白检测特异性抗体滴度。结果显示,成功获得chTLR2的胞外区片段,构建的原核表达重组质粒经IPTG诱导能成功表达预期的重组蛋白,免疫小鼠可产生特异性抗体,抗体效价分别为1∶16 000和1∶10 000。表明制备的鼠抗chTLR2多抗具有良好的特异性,为进一步研究chTLR2的功能提供了重要材料。 展开更多

关键词 鸡toll样受体2 原核表达 多克隆抗体 CHICKEN toll-LIKE receptor2 (chTLR2)

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡Toll样受体研究进展 被引量：9

4

作者 甘珊珊 何秀苗 韦平 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第9期76-80,共5页

Toll样受体(TLRs)是一类典型的模式识别受体(PRR),是先天性免疫系统中的细胞跨膜受体以及病原模式识别(PAMP)受体之一。在鸡体中发现的TLRs(chTLRs)已经超过10种,其在进化中趋于保守,能识别保守的微生物成分。TLRs对病原相关分子模式的... Toll样受体(TLRs)是一类典型的模式识别受体(PRR),是先天性免疫系统中的细胞跨膜受体以及病原模式识别(PAMP)受体之一。在鸡体中发现的TLRs(chTLRs)已经超过10种,其在进化中趋于保守,能识别保守的微生物成分。TLRs对病原相关分子模式的识别不仅在先天性免疫中有重要作用,还能够有效地启动获得性免疫。论文对部分TLRs在鸡体中的分布及参与激活获得性免疫途径的研究进行综述。 展开更多

关键词 鸡 toll样受体 先天性免疫 获得性免疫

在线阅读 下载PDF 职称材料

体内注射鸡Toll样受体4和21的配体诱导脾脏免疫系统的基因表达

5

作者 Michael St.Paul 刘丹 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第3期194-194,共1页

Toll样受体(TLRs)是一组保守的蛋白质,除了在先天免疫和适应性免疫反应的启动和调控中发挥重要作用,还参与病原体识别。目前,已鉴定到若干个识别不同配体的鸡TLRs,在刺激鸡对病原体产生宿主反应中发挥重要作用。然而,通过哪个TLRs对鸡... Toll样受体(TLRs)是一组保守的蛋白质,除了在先天免疫和适应性免疫反应的启动和调控中发挥重要作用,还参与病原体识别。目前,已鉴定到若干个识别不同配体的鸡TLRs,在刺激鸡对病原体产生宿主反应中发挥重要作用。然而,通过哪个TLRs对鸡免疫系统进行调节尚未明了。本试验通过分别向试验鸡肌肉注射TLR4和TLR21相应的配体脂多糖(LPS)和CpG寡聚脱氧核苷酸(ODNs),对其刺激鸡免疫反应的动力学特性进行了研究。在注射TLR配体2、6、12和24h时,可在脾脏中检测到细胞因子的相应表达。结果表明,LPS能在试验早期强烈诱导免疫系统基因表达的上调,包括IFN-γ、IL-10和IL-1β。CpG ODNs能促进MHC-Ⅱ、IFN-γ和IL-10的上调。而对CpG ODNs的应答比对LPS的应答略迟。在对LPS的反应中,IFN-α基因的表达显著增加,而在对CpG ODNs的反应中无明显变化。进一步试验将对鸡TLR激活的分子机制或应用TLR激动剂作为疫苗佐剂进行研究。 展开更多

关键词 toll样受体 鸡 先天免疫 细胞因子 LPS CPG

在线阅读 下载PDF 职称材料

肠炎沙门氏菌诱导鸡Toll样受体2在组织中的分布 被引量：3

6

作者 吴双 左伟勇 +4 位作者 王永娟 王安平 洪伟鸣 黄文强 朱善元 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第12期237-238,262,共3页

为研究肠炎沙门氏菌诱导鸡Toll样受体2在脏器组织中的分布情况,4周龄SPF鸡口服肠炎沙门氏菌后,于感染后48 h时心脏采血分离外周血单核淋巴细胞并采集11种组织,常规方法抽提总RNA,以鸡β-actin基因为内参,采用半定量RT-PCR法检测各组织中... 为研究肠炎沙门氏菌诱导鸡Toll样受体2在脏器组织中的分布情况,4周龄SPF鸡口服肠炎沙门氏菌后,于感染后48 h时心脏采血分离外周血单核淋巴细胞并采集11种组织,常规方法抽提总RNA,以鸡β-actin基因为内参,采用半定量RT-PCR法检测各组织中鸡Toll样受体2(chTLR2)基因的表达情况。结果表明:chTLR2主要分布于免疫组织系统中,chTLR2t1没有chTLR2t2表达得广泛。说明chTLR2可能参与了肠炎沙门氏菌感染的天然免疫反应过程。 展开更多

关键词 鸡 toll样受体2 肠炎 沙门氏菌 半定量RT—PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡胚肠上皮细胞Toll样受体的表达谱研究 被引量：2

7

作者 唐梦君 高玉时 +3 位作者 张小燕 陆俊贤 蒲俊华 顾荣 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第11期46-50,共5页

为明确鸡胚肠上皮细胞中Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)的表达情况,本研究采用嗜热菌蛋白酶分离培养18日龄鸡胚的肠上皮细胞,在形态学观察及免疫细胞化学法鉴定基础上,采用RT-PCR方法检测其TLR表达谱,并对不同品种鸡胚肠上皮细胞... 为明确鸡胚肠上皮细胞中Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)的表达情况,本研究采用嗜热菌蛋白酶分离培养18日龄鸡胚的肠上皮细胞,在形态学观察及免疫细胞化学法鉴定基础上,采用RT-PCR方法检测其TLR表达谱,并对不同品种鸡胚肠上皮细胞TLR表达谱进行了比较研究。结果表明,应用嗜热菌蛋白酶消化法得到的鸡胚肠上皮细胞生长状况良好;采用低速离心和差速贴壁进行纯化,得到90%以上纯度的鸡胚肠上皮细胞;纯化后的细胞经形态学观察及细胞角蛋白单克隆抗体鉴定为阳性;10种TLR在鸡胚肠上皮细胞上均有mRNA表达,但其丰度存在明显差异;不同品种鸡胚肠上皮细胞TLR表达谱均无显著差异。 展开更多

关键词 鸡胚肠上皮细胞 toll样受体 表达谱

在线阅读 下载PDF 职称材料

沙门氏菌感染相关的鸡Toll样受体研究进展 被引量：3

8

作者 李春华 缪德年 +2 位作者 夏叶 孙莹慧 魏晓锋 《动物医学进展》 北大核心 2022年第2期103-106,共4页

沙门氏菌感染不仅危害集约化养鸡业的健康发展,还导致食源性沙门氏菌病,危害人类的公共卫生安全。Toll样受体是一类进化保守的模式识别受体,可识别特定的病原相关分子模式,快速激活天然免疫系统,使机体迅速产生防御反应,抵抗病原微生物... 沙门氏菌感染不仅危害集约化养鸡业的健康发展,还导致食源性沙门氏菌病,危害人类的公共卫生安全。Toll样受体是一类进化保守的模式识别受体,可识别特定的病原相关分子模式,快速激活天然免疫系统,使机体迅速产生防御反应,抵抗病原微生物的入侵与感染。已发现的鸡Toll样受体有10种,广泛分布于各种不同的组织中,在抵御各种病原微生物的感染中发挥了重要作用。论文综述了沙门氏菌感染相关的鸡Toll样受体研究进展、不同品种鸡Toll样受体的多态性位点、chTLR21广泛的CpGODN识别特性及其激动剂在疫苗佐剂方面的应用。 展开更多

关键词 沙门氏菌感染 鸡 toll样受体 多态位点 佐剂

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡Toll样受体在抗病毒天然免疫反应中的作用 被引量：1

9

作者 全荣 王菁 +5 位作者 韦莉 朱珊珊 侯磊 阎旭 李子璇 刘爵 《中国家禽》 北大核心 2016年第2期1-4,共4页

天然免疫反应是抵抗病原入侵的第一道防线。Toll样受体是天然免疫系统重要的模式识别受体,能够通过与病原相关分子模式相结合刺激活化信号转导途径、炎症反应以及获得性免疫反应。由于物种的差异,禽类与哺乳动物的Toll样受体在基因和功... 天然免疫反应是抵抗病原入侵的第一道防线。Toll样受体是天然免疫系统重要的模式识别受体,能够通过与病原相关分子模式相结合刺激活化信号转导途径、炎症反应以及获得性免疫反应。由于物种的差异,禽类与哺乳动物的Toll样受体在基因和功能上存在一定差异。本文主要介绍禽类中目前研究最多的鸡的Toll样受体及其功能研究进展。 展开更多

关键词 鸡toll样受体 天然免疫 抗病毒反应

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡Toll样受体在IBDV免疫中的作用研究

10

作者 卢宇 张娣 +3 位作者 张金秋 邓碧华 吕芳 侯继波 《广东畜牧兽医科技》 2013年第1期26-29,共4页

为了揭示鸡先天性免疫反应在IBDV疫苗过程中的作用,将40只14日海兰褐蛋鸡随机分成两组,实验组接种IBDV活疫苗,对照组注射生理盐水,隔离饲养。于免疫前和免疫后12h、24h、48h、72h、130h各取脾脏和法氏囊分离淋巴细胞并提取总RNA,用实时... 为了揭示鸡先天性免疫反应在IBDV疫苗过程中的作用,将40只14日海兰褐蛋鸡随机分成两组,实验组接种IBDV活疫苗,对照组注射生理盐水,隔离饲养。于免疫前和免疫后12h、24h、48h、72h、130h各取脾脏和法氏囊分离淋巴细胞并提取总RNA,用实时荧光定量检测方法检测各组中chTLR3、chTLR7、chTLR21表达的动态变化。结果显示,在免疫后36h,鸡法氏囊和脾脏中chTLR3表达变化最显著,在免疫后48h,鸡脾脏和法氏囊中chTLR21表达变化也较为明显。提示chTLR3在鸡对IBDV的免疫应答中起主要作用。 展开更多

关键词 鸡传染性法氏囊 toll样受体

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡源复合益生菌对肉仔鸡免疫球蛋白及Toll样受体通路的影响 被引量：7

11

作者 贺濛初 李思婷 +5 位作者 王志 舒迎霜 桂雪儿 朱杰 李锦春 吴金节 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期26-33,共8页

【目的】探究益生菌对肉仔鸡血清免疫球蛋白与肠道Toll样受体通路的影响。【方法】选择90只1日龄白羽肉杂鸡,随机分为3组,即对照组、益生菌低剂量组和益生菌高剂量组。其中对照组饲喂基础日粮,益生菌低剂量组在每千克基础日粮中添加复... 【目的】探究益生菌对肉仔鸡血清免疫球蛋白与肠道Toll样受体通路的影响。【方法】选择90只1日龄白羽肉杂鸡,随机分为3组,即对照组、益生菌低剂量组和益生菌高剂量组。其中对照组饲喂基础日粮,益生菌低剂量组在每千克基础日粮中添加复合益生菌10^9 cfu,益生菌高剂量组在每千克基础日粮中添加复合益生菌2×10^9 cfu。第21天,每组随机选取10只鸡放血致死,并立即采集样本,进行ELISA、免疫组化、qPCR及Western blot检测。【结果】在第21天,益生菌低剂量组和益生菌高剂量组鸡的料肉比分别比对照组降低9%和12%(P<0.05),血清IgG含量分别升高28%和40%(P<0.01),血清IgM含量分别升高44%和58%(P<0.01)。益生菌低剂量组TLR4蛋白表达和mRNA相对表达量比对照组分别升高33%和28%,AP-1蛋白表达和mRNA相对表达量分别比对照组升高106%和67%(P<0.01);益生菌高剂量组TLR4蛋白表达及mRNA相对表达量比对照组分别升高106%和69%,AP-1蛋白表达及mRNA相对表达量比对照组分别升高163%和98%(P<0.01)。【结论】饲喂益生菌可降低肉仔鸡料肉比,提高血清中IgG、IgM的含量,并且通过调节Toll样受体通路蛋白表达可以提高机体免疫力。 展开更多

关键词 白羽肉杂鸡 益生菌 免疫球蛋白 肠道 toll样受体通路

在线阅读 下载PDF 职称材料

雏鸡感染鸡白痢沙门菌后禽β-防御素6和鸡Toll样受体15在肠道转录与定位研究 被引量：4

12

作者 王燕 周秀红 +3 位作者 祁克宗 涂健 刘红梅 潘孝成 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1711-1717,共7页

旨在分析雏鸡感染鸡白痢沙门菌后,禽β-防御素6(AvBD6)和鸡Toll样受体15(ChTLR15)在小肠内的分布及表达规律。本研究用鸡白痢沙门菌感染14日龄的雏鸡,感染后不同时间点采取雏鸡的小肠组织(十二指肠、空肠和回肠),利用实时荧光定量RT-PC... 旨在分析雏鸡感染鸡白痢沙门菌后,禽β-防御素6(AvBD6)和鸡Toll样受体15(ChTLR15)在小肠内的分布及表达规律。本研究用鸡白痢沙门菌感染14日龄的雏鸡,感染后不同时间点采取雏鸡的小肠组织(十二指肠、空肠和回肠),利用实时荧光定量RT-PCR和原位杂交方法,检测AvBD6和ChTLR15在小肠组织内的定位和mRNA的转录水平变化。结果显示,雏鸡感染鸡白痢沙门菌后,AvBD6和ChTLR15在各肠段组织中均有转录,其中在十二指肠相对转录量最高,在0~24h内呈上升趋势,24~48h相对转录量呈下降趋势,在24h的转录量极显著高于0和6h(P<0.01),且AvBD6在24h的转录量显著高于12h(P<0.05)。AvBD6和ChTLR15mRNA在小肠内均有不同程度的分布,其主要分布在肠绒毛的中央乳糜管中,在十二指肠中荧光信号最强。结果表明,雏鸡感染鸡白痢沙门菌后,AvBD6和ChTLR15mRNA在鸡小肠中的分布和表达具有一定的规律性,并参与肠道免疫调节功能。 展开更多

关键词 鸡白痢沙门菌 荧光定量RT-PCR 原位杂交 禽β-防御素6 鸡toll样受体15

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡Toll样受体及其抗病原微生物感染研究进展 被引量：6

13

作者 李隆 邹敏妮 +3 位作者 袁巧玲 杨磊 宁玲忠 雷红宇 《动物医学进展》 北大核心 2019年第10期100-103,共4页

Toll样受体(TLRs)是一种Ⅰ型跨膜糖蛋白模式识别受体,通过识别各类配体,诱导细胞因子大量产生,参与宿主的先天免疫,以抵抗病原微生物入侵。论文介绍了鸡TLRs的基本结构和信号传导,并对TLRs在大肠杆菌病、沙门菌病和空肠弯曲菌感染等细... Toll样受体(TLRs)是一种Ⅰ型跨膜糖蛋白模式识别受体,通过识别各类配体,诱导细胞因子大量产生,参与宿主的先天免疫,以抵抗病原微生物入侵。论文介绍了鸡TLRs的基本结构和信号传导,并对TLRs在大肠杆菌病、沙门菌病和空肠弯曲菌感染等细菌性禽类疾病以及马立克病、新城疫、禽流感等病毒性禽类疾病中的研究进展进行总结,为TLRs与其配体在禽类传染性疾病预防中的应用提供参考。 展开更多

关键词 鸡 toll样受体 抗微生物感染

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡源复合益生菌对青年白羽肉杂鸡免疫球蛋白和Toll样受体通路的影响 被引量：7

14

作者 桂雪儿 王志 +4 位作者 李思婷 贺濛初 朱杰 冯士彬 吴金节 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第9期1609-1614,共6页

为研究鸡源复合益生菌对青年白羽肉杂鸡血清免疫球蛋白和肠道Toll样受体通路的影响,将180只健康的28日龄白羽肉杂鸡随机分为A(基础饲粮)、B(基础饲粮中添加10^11 CFU·kg^-1益生菌)、C(基础饲粮中添加2×10^11 CFU·kg^-1... 为研究鸡源复合益生菌对青年白羽肉杂鸡血清免疫球蛋白和肠道Toll样受体通路的影响,将180只健康的28日龄白羽肉杂鸡随机分为A(基础饲粮)、B(基础饲粮中添加10^11 CFU·kg^-1益生菌)、C(基础饲粮中添加2×10^11 CFU·kg^-1益生菌)3个处理,每个处理3个重复,每个重复20只鸡。试验期21 d。结果表明:与A组相比,B组和C组鸡血清中IgG、IgM水平显著(P<0.05)升高,B组和C组鸡肠道TLR2、TLR4、Myd88、TRAF-6、AP-1蛋白表达及mRNA相对表达量显著(P<0.05)升高。与B组相比,C组鸡血清IgG、IgM、IgA水平均无明显差异(P>0.05),鸡肠道TLR4、Myd88蛋白表达显著(P<0.05)升高,Myd88基因mRNA相对表达量显著(P<0.05)升高。综上,添加不同浓度的鸡源复合益生菌能够提高白羽肉杂鸡血清中IgG、IgM水平,通过Toll样受体通路增强肉鸡的免疫功能。 展开更多

关键词 乳酸菌 枯草芽孢杆菌 白羽肉杂鸡 免疫球蛋白 toll样受体通路

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡Toll样受体的研究进展 被引量：1

15

作者 韩小凤 张辉华 +2 位作者 谢青梅 马静云 毕英佐 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第11期50-52,共3页

关键词 toll样受体 免疫分子 防御作用 免疫系统 鸡 子模式 有机体 天然

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽呼肠病毒感染鸡胚成纤维细胞后Toll样受体mRNA转录水平的动态变化 被引量：4

16

作者 蓝元喜 谢芝勋 +9 位作者 黄莉 谢丽基 邓显文 范晴 罗思思 谢志勤 黄娇玲 张艳芳 王盛 曾婷婷 《动物医学进展》 北大核心 2016年第9期1-5,共5页

为分析禽呼肠病毒(ARV)标准毒株S1133株感染鸡胚成纤维细胞(CEF)后对相关鸡Toll样受体(ChTLRs)mRNA转录水平的影响作用,利用实时荧光定量PCR,测定和分析ARV-S1133感染CEF后ARV结构蛋白σC和ChTLRs的mRNA转录水平变化情况。结果表明,ARV-... 为分析禽呼肠病毒(ARV)标准毒株S1133株感染鸡胚成纤维细胞(CEF)后对相关鸡Toll样受体(ChTLRs)mRNA转录水平的影响作用,利用实时荧光定量PCR,测定和分析ARV-S1133感染CEF后ARV结构蛋白σC和ChTLRs的mRNA转录水平变化情况。结果表明,ARV-S1133感染CEF 10h后,ARVσC蛋白的mRNA相对表达量开始迅速上升,在48h达到峰值;同时,感染CEF中的ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15和ChTLR21mRNA表达量发生显著变化,在感染72h内各个受体的mRNA表达量呈波浪式变化。5个不同滴度的ARV感染CEF 24 h后,ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15、ChTLR21mRNA转录水平与病毒滴度均呈正线性相关。上述结果表明,ARV感染后可诱导CEF ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15、ChTLR21的mRNA转录水平发生变化,可能与禽呼肠病毒的复制和致病机制相关。 展开更多

关键词 禽呼肠病毒 鸡toll样受体 实时荧光定量PCR 转录水平

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡toll样受体7的克隆表达及多克隆抗体的制备

17

作者 孟巍 郑世民 +1 位作者 杨桂君 张瑞莉 《山东畜牧兽医》 2023年第7期16-18,共3页

本试验旨在制备兔抗鸡toll样受体7(chicken toll-like receptor 7, chTLR7)多克隆抗体,根据GenBank已发表的chTLR7序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增chTLR7胞外区基因片段,并构建原核表达重组质粒,通过优化蛋白表达条件,用获得的融合蛋... 本试验旨在制备兔抗鸡toll样受体7(chicken toll-like receptor 7, chTLR7)多克隆抗体,根据GenBank已发表的chTLR7序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增chTLR7胞外区基因片段,并构建原核表达重组质粒,通过优化蛋白表达条件,用获得的融合蛋白免疫兔制备多克隆抗体,通过免疫印迹及间接免疫荧光试验鉴定制备的兔抗chTLR7多克隆抗体的特异性。结果显示,该片段长度为1 122 bp,与预测的片段大小、碱基序列一致。构建的原核表达重组质粒pGEX-6P-1-chTLR7经IPTG诱导后,表达出预期63 kDa的重组蛋白,免疫兔可产生特异性抗体。制备的兔抗chTLR7多克隆抗体具有良好的特异性,为后续实验研究chTLR7传导通路、免疫机制等相关研究提供有利工具。 展开更多

关键词 鸡toll样受体7 胞外区 原核表达 多克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡传染性支气管炎病毒感染对雏鸡黏膜固有免疫相关受体和细胞因子转录水平的影响 被引量：5

18

作者 何怡宁 郑衍生 +4 位作者 谢智文 侯金莲 韦天超 磨美兰 韦平 《中国家禽》 北大核心 2014年第5期14-19,共6页

为探讨鸡传染性支气管炎病毒（IBV）感染与宿主固有免疫系统的相互作用及其致病与免疫机制,本研究采用实时荧光定量RT-PCR方法检测IBV变异株GX-YL5感染鸡后不同时间点气管黏膜和哈德氏腺中固有免疫相关受体和细胞因子的mRNA水平以及IBV... 为探讨鸡传染性支气管炎病毒（IBV）感染与宿主固有免疫系统的相互作用及其致病与免疫机制,本研究采用实时荧光定量RT-PCR方法检测IBV变异株GX-YL5感染鸡后不同时间点气管黏膜和哈德氏腺中固有免疫相关受体和细胞因子的mRNA水平以及IBV载量的动态变化.结果显示,气管黏膜和哈德氏腺中Toll样受体TLR2、TLR3、TLR6、TLR7、趋化因子MIP-1β和趋化因子受体CXCR4、CCR4在IBV感染后1～8天以及细胞因子IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-10在IBV感染后1～5天,mRNA转录水平至少有一个时间点显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）上调;感染后14～28天,一些受体和细胞因子的mRNA则出现下调;气管黏膜和哈德氏腺的IBV病毒载量在感染后立即上升,第3天达到峰值,随后下降.结果表明,IBV感染早期气管黏膜和哈德氏腺中固有免疫相关受体和细胞因子的mRNA转录水平显著上调,说明IBV感染对宿主固有免疫应答产生明显的影响. 展开更多

关键词 鸡传染性支气管炎病毒 气管黏膜 哈德氏腺 toll样受体 趋化因子受体 细胞因子

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡TLR3、TLR4和TLR21单核苷酸多态性的生物信息分析 被引量：2

19

作者 张健 郝文文 +5 位作者 刘路 张传生 王亚琪 张欢欢 耿立英 李祥龙 《中国家禽》 北大核心 2018年第8期9-12,共4页

试验旨在筛选鸡TLR3、TLR4和TLR21基因中的功能性nsSNPs。利用SIFT、PolyPhen-2、PANTHER、PMut和PROVEAN五种软件方法分析引起的氨基酸替换nsSNPs是否可能影响基因的功能。进一步对三个基因氨基酸序列进行翻译后修饰位点及进化位点保... 试验旨在筛选鸡TLR3、TLR4和TLR21基因中的功能性nsSNPs。利用SIFT、PolyPhen-2、PANTHER、PMut和PROVEAN五种软件方法分析引起的氨基酸替换nsSNPs是否可能影响基因的功能。进一步对三个基因氨基酸序列进行翻译后修饰位点及进化位点保守性的预测,使用easymodeller和SWISS-MODEL构建了其野生型及突变型蛋白质的空间结构,并计算突变前后的RMSD。结果表明:TLR3的K240T、T767S、D849N,TLR4的F427V、K714R和TLR21的T455A、Y553H、L602P、W926S可能严重影响蛋白质的结构功能。 展开更多

关键词 鸡 toll样受体基因 非同义SNP 同源建模

在线阅读 下载PDF 职称材料

黄芪糖蛋白干扰lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴抑制细胞焦亡改善佐剂性关节炎大鼠心肌损伤 被引量：2

20

作者 付皖兰 曹云祥 +1 位作者 束开艳 朱南飞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期872-879,共8页

目的基于长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5/微小RNA 21/Toll样受体4(lncRNA GAS5/miR-21/TLR4)信号轴探究黄芪糖蛋白(HQGP)对佐剂性关节炎(AA)大鼠心肌损伤的作用及机制。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、甲氨蝶呤(MTX)组、... 目的基于长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5/微小RNA 21/Toll样受体4(lncRNA GAS5/miR-21/TLR4)信号轴探究黄芪糖蛋白(HQGP)对佐剂性关节炎(AA)大鼠心肌损伤的作用及机制。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、甲氨蝶呤(MTX)组、HQGP组,每组6只。复制AA模型,第19天开始给药,连续4周。检测各组AA大鼠足趾肿胀度、关节炎指数(AI),HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌组织超微结构的变化及焦亡小体情况,ELISA检测血清白细胞介素6(IL-6)、IL-18、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测心肌组织LDH释放量,实时荧光定量PCR检测心肌组织核因子κB p65(NF-κB p65)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)的mRNA以及lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴分子的表达,Western blot法检测心肌组织TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3和GSDMD蛋白水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠足趾肿胀度、AI显著升高;大鼠心肌纤维溶解、断裂,肌节结构模糊,心肌纤维排列紊乱,组织间有炎性细胞浸润,线粒体嵴明显断裂稀疏,焦亡小体数量增加;血清促炎细胞因子IL-6、IL-18、IL-1β和TNF-α表达显著升高;心肌组织中GAS5表达显著降低,miR-21表达显著升高,LDH释放量、TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3、GSDMD的mRNA和蛋白表达水平显著升高。与模型组比较,HQGP组大鼠足趾肿胀度、AI和心肌组织病理状态明显改善;血清IL-6、IL-18、IL-1β和TNF-α表达显著降低;心肌组织中GAS5表达显著升高,miR-21表达显著降低,LDH释放量、TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3的mRNA和蛋白表达水平显著降低,GSDMD的mRNA表达降低且蛋白水平显著降低。结论HQGP通过上调lncRNA GAS5抑制miR-21/TLR4信号传导,抑制细胞焦亡,减少促炎细胞因子表达,改善AA大鼠心肌损伤。 展开更多

关键词 佐剂性关节炎 心肌损伤 长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncRNA GAS5) MIR-21 toll样受体4(TLR4) 细胞焦亡 黄芪糖蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料