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鸡Toll样受体2的克隆表达及多克隆抗体的制备 被引量:5
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作者 吴双 朱善元 +3 位作者 王永娟 王安平 左伟勇 洪伟鸣 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期586-589,共4页
试验旨在制备鼠抗鸡Toll样受体2(chTLR2)的多克隆抗体。采用RT-PCR方法从活化的鸡外周血淋巴细胞中扩增其胞外区片段chTLR2(chTLR2t1和chTLR2t2),并构建这两个片段的原核表达重组质粒,优化蛋白质的表达条件,SDS-PAGE和Western-blot法检... 试验旨在制备鼠抗鸡Toll样受体2(chTLR2)的多克隆抗体。采用RT-PCR方法从活化的鸡外周血淋巴细胞中扩增其胞外区片段chTLR2(chTLR2t1和chTLR2t2),并构建这两个片段的原核表达重组质粒,优化蛋白质的表达条件,SDS-PAGE和Western-blot法检测融合蛋白,将融合蛋白作为免疫原免疫Balb/c小鼠,利用相应的原核表达的全长蛋白检测特异性抗体滴度。结果显示,成功获得chTLR2的胞外区片段,构建的原核表达重组质粒经IPTG诱导能成功表达预期的重组蛋白,免疫小鼠可产生特异性抗体,抗体效价分别为1∶16 000和1∶10 000。表明制备的鼠抗chTLR2多抗具有良好的特异性,为进一步研究chTLR2的功能提供了重要材料。 展开更多
关键词 鸡toll样受体2 原核表达 多克隆抗体 CHICKEN toll-LIKE receptor2 (chTLR2)
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禽传染性喉气管炎病毒体内外感染模型中鸡Toll样受体21 mRNA转录水平的研究 被引量:2
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作者 张焕容 陈世界 +3 位作者 皮晋魁 岳华 刘征鑫 汤承 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期965-969,共5页
为研究病毒与机体的相互作用,本研究参考GenBank中鸡Toll样受体21(ChTLR21)的基因序列设计实时定量PCR特异性引物,以鸡核糖体蛋白L4(RPL4)为内参基因,建立检测ChTLR21 mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析ChTLR21在禽传染性喉气管... 为研究病毒与机体的相互作用,本研究参考GenBank中鸡Toll样受体21(ChTLR21)的基因序列设计实时定量PCR特异性引物,以鸡核糖体蛋白L4(RPL4)为内参基因,建立检测ChTLR21 mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析ChTLR21在禽传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)中和感染SPF雏鸡免疫器官脾脏、法氏囊和胸腺组织中的转录水平。结果显示:ILTV感染CEF后2 h、4 h、8 h和18 h时间点ChTLR21 mRNA转录水平分别为未感染对照细胞的1 540.53、0.98、1.19和3.70倍。但仅在ILTV感染2 h时引起ChTLR21转录水平升高,与对照组相比差异显著(p<0.05)。ILTV感染SPF雏鸡后6 h、24 h和30 h脾脏中ChTLR21 mRNA转录水平分别为未感染对照的56.34、59.85和3.61倍;法氏囊中分别为0.03、25.98和3.08倍;胸腺中分别为2.52、50和7.32倍。在感染初期,脾脏中ChTLR21转录量显著升高,随后有所降低,但均高于未感染对照(p<0.05);法氏囊中仅在感染6 h时呈显著抑制(p<0.01);胸腺中呈波动性转录水平升高,但与对照组无统计学差异(p>0.05)。本研究证明ChTLR21参与了鸡体对ILTV感染的应答,并在体内外感染模型中呈现不同的表达规律。 展开更多
关键词 禽传染性喉气管炎病毒 鸡toll样受体21 胚成纤维细胞 SPF雏 实时荧光定量PCR
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鸡Toll样受体在抗病毒天然免疫反应中的作用 被引量:1
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作者 全荣 王菁 +5 位作者 韦莉 朱珊珊 侯磊 阎旭 李子璇 刘爵 《中国家禽》 北大核心 2016年第2期1-4,共4页
天然免疫反应是抵抗病原入侵的第一道防线。Toll样受体是天然免疫系统重要的模式识别受体,能够通过与病原相关分子模式相结合刺激活化信号转导途径、炎症反应以及获得性免疫反应。由于物种的差异,禽类与哺乳动物的Toll样受体在基因和功... 天然免疫反应是抵抗病原入侵的第一道防线。Toll样受体是天然免疫系统重要的模式识别受体,能够通过与病原相关分子模式相结合刺激活化信号转导途径、炎症反应以及获得性免疫反应。由于物种的差异,禽类与哺乳动物的Toll样受体在基因和功能上存在一定差异。本文主要介绍禽类中目前研究最多的鸡的Toll样受体及其功能研究进展。 展开更多
关键词 鸡toll样受体 天然免疫 抗病毒反应
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雏鸡感染鸡白痢沙门菌后禽β-防御素6和鸡Toll样受体15在肠道转录与定位研究 被引量:4
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作者 王燕 周秀红 +3 位作者 祁克宗 涂健 刘红梅 潘孝成 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1711-1717,共7页
旨在分析雏鸡感染鸡白痢沙门菌后,禽β-防御素6(AvBD6)和鸡Toll样受体15(ChTLR15)在小肠内的分布及表达规律。本研究用鸡白痢沙门菌感染14日龄的雏鸡,感染后不同时间点采取雏鸡的小肠组织(十二指肠、空肠和回肠),利用实时荧光定量RT-PC... 旨在分析雏鸡感染鸡白痢沙门菌后,禽β-防御素6(AvBD6)和鸡Toll样受体15(ChTLR15)在小肠内的分布及表达规律。本研究用鸡白痢沙门菌感染14日龄的雏鸡,感染后不同时间点采取雏鸡的小肠组织(十二指肠、空肠和回肠),利用实时荧光定量RT-PCR和原位杂交方法,检测AvBD6和ChTLR15在小肠组织内的定位和mRNA的转录水平变化。结果显示,雏鸡感染鸡白痢沙门菌后,AvBD6和ChTLR15在各肠段组织中均有转录,其中在十二指肠相对转录量最高,在0~24h内呈上升趋势,24~48h相对转录量呈下降趋势,在24h的转录量极显著高于0和6h(P<0.01),且AvBD6在24h的转录量显著高于12h(P<0.05)。AvBD6和ChTLR15mRNA在小肠内均有不同程度的分布,其主要分布在肠绒毛的中央乳糜管中,在十二指肠中荧光信号最强。结果表明,雏鸡感染鸡白痢沙门菌后,AvBD6和ChTLR15mRNA在鸡小肠中的分布和表达具有一定的规律性,并参与肠道免疫调节功能。 展开更多
关键词 白痢沙门菌 荧光定量RT-PCR 原位杂交 禽β-防御素6 鸡toll样受体15
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鸡toll样受体7的克隆表达及多克隆抗体的制备
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作者 孟巍 郑世民 +1 位作者 杨桂君 张瑞莉 《山东畜牧兽医》 2023年第7期16-18,共3页
本试验旨在制备兔抗鸡toll样受体7(chicken toll-like receptor 7, chTLR7)多克隆抗体,根据GenBank已发表的chTLR7序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增chTLR7胞外区基因片段,并构建原核表达重组质粒,通过优化蛋白表达条件,用获得的融合蛋... 本试验旨在制备兔抗鸡toll样受体7(chicken toll-like receptor 7, chTLR7)多克隆抗体,根据GenBank已发表的chTLR7序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增chTLR7胞外区基因片段,并构建原核表达重组质粒,通过优化蛋白表达条件,用获得的融合蛋白免疫兔制备多克隆抗体,通过免疫印迹及间接免疫荧光试验鉴定制备的兔抗chTLR7多克隆抗体的特异性。结果显示,该片段长度为1 122 bp,与预测的片段大小、碱基序列一致。构建的原核表达重组质粒pGEX-6P-1-chTLR7经IPTG诱导后,表达出预期63 kDa的重组蛋白,免疫兔可产生特异性抗体。制备的兔抗chTLR7多克隆抗体具有良好的特异性,为后续实验研究chTLR7传导通路、免疫机制等相关研究提供有利工具。 展开更多
关键词 鸡toll样受体7 胞外区 原核表达 多克隆抗体
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禽呼肠病毒感染鸡胚成纤维细胞后Toll样受体mRNA转录水平的动态变化 被引量:4
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作者 蓝元喜 谢芝勋 +9 位作者 黄莉 谢丽基 邓显文 范晴 罗思思 谢志勤 黄娇玲 张艳芳 王盛 曾婷婷 《动物医学进展》 北大核心 2016年第9期1-5,共5页
为分析禽呼肠病毒(ARV)标准毒株S1133株感染鸡胚成纤维细胞(CEF)后对相关鸡Toll样受体(ChTLRs)mRNA转录水平的影响作用,利用实时荧光定量PCR,测定和分析ARV-S1133感染CEF后ARV结构蛋白σC和ChTLRs的mRNA转录水平变化情况。结果表明,ARV-... 为分析禽呼肠病毒(ARV)标准毒株S1133株感染鸡胚成纤维细胞(CEF)后对相关鸡Toll样受体(ChTLRs)mRNA转录水平的影响作用,利用实时荧光定量PCR,测定和分析ARV-S1133感染CEF后ARV结构蛋白σC和ChTLRs的mRNA转录水平变化情况。结果表明,ARV-S1133感染CEF 10h后,ARVσC蛋白的mRNA相对表达量开始迅速上升,在48h达到峰值;同时,感染CEF中的ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15和ChTLR21mRNA表达量发生显著变化,在感染72h内各个受体的mRNA表达量呈波浪式变化。5个不同滴度的ARV感染CEF 24 h后,ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15、ChTLR21mRNA转录水平与病毒滴度均呈正线性相关。上述结果表明,ARV感染后可诱导CEF ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15、ChTLR21的mRNA转录水平发生变化,可能与禽呼肠病毒的复制和致病机制相关。 展开更多
关键词 禽呼肠病毒 鸡toll样受体 实时荧光定量PCR 转录水平
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