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B19和B21单倍型鸡NK细胞受体B-NK19和B-NK21的多克隆抗体制备及鉴定
被引量:
2
1
作者
杨超
张晓娜
+4 位作者
许峰铭
文辉强
廉传江
陈洪岩
韩凌霞
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第12期1274-1277,共4页
目的利用大肠杆菌系统表达对多种禽病存在敏感性差异的B19和B21单倍型鸡NK细胞抑制性受体B-NK基因,并制备其多克隆抗体。方法分别提取B19和B21鸡外周血淋巴细胞总RNA,采用反转录PCR法扩增B-NK基因(分别命名为B-NK19和B-NK21),克隆至pET-...
目的利用大肠杆菌系统表达对多种禽病存在敏感性差异的B19和B21单倍型鸡NK细胞抑制性受体B-NK基因,并制备其多克隆抗体。方法分别提取B19和B21鸡外周血淋巴细胞总RNA,采用反转录PCR法扩增B-NK基因(分别命名为B-NK19和B-NK21),克隆至pET-30a原核表达载体中,经酶切和PCR鉴定构建重组质粒。转入到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE分析外源蛋白的表达。将含有与组氨酸(His)标签融合表达的外源蛋白胶条切下,多点皮下免疫新西兰兔,分别制备B-NK19和B-NK21特异性多克隆抗体。利用Western blot法鉴定其组织相容性复合体(MHC)单倍型特异性。结果成功构建了原核表达重组质粒pET-B-NK19和pET-B-NK21,利用IPTG在37℃诱导4 h后目的蛋白获得表达,免疫5次后收获兔多克隆抗体,Western blot表明B-NK19和B-NK21蛋白存在免疫学交叉反应和部分特异性。结论对多种禽病具有敏感性差异的MHC单倍体型B19和B21鸡的NK细胞抑制性受体B-NK蛋白存在抗原反应交叉性,其多克隆抗体具有部分特异性。
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关键词
鸡nk细胞受体
B-
nk
B19单倍型
B21单倍型
多克隆抗体
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职称材料
题名
B19和B21单倍型鸡NK细胞受体B-NK19和B-NK21的多克隆抗体制备及鉴定
被引量:
2
1
作者
杨超
张晓娜
许峰铭
文辉强
廉传江
陈洪岩
韩凌霞
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第12期1274-1277,共4页
基金
国家高技术研究发展技划(863)(2011AA100305)
国家自然科学基金(31101800)
国家科技支撑项目(2013BAK11B02)
文摘
目的利用大肠杆菌系统表达对多种禽病存在敏感性差异的B19和B21单倍型鸡NK细胞抑制性受体B-NK基因,并制备其多克隆抗体。方法分别提取B19和B21鸡外周血淋巴细胞总RNA,采用反转录PCR法扩增B-NK基因(分别命名为B-NK19和B-NK21),克隆至pET-30a原核表达载体中,经酶切和PCR鉴定构建重组质粒。转入到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE分析外源蛋白的表达。将含有与组氨酸(His)标签融合表达的外源蛋白胶条切下,多点皮下免疫新西兰兔,分别制备B-NK19和B-NK21特异性多克隆抗体。利用Western blot法鉴定其组织相容性复合体(MHC)单倍型特异性。结果成功构建了原核表达重组质粒pET-B-NK19和pET-B-NK21,利用IPTG在37℃诱导4 h后目的蛋白获得表达,免疫5次后收获兔多克隆抗体,Western blot表明B-NK19和B-NK21蛋白存在免疫学交叉反应和部分特异性。结论对多种禽病具有敏感性差异的MHC单倍体型B19和B21鸡的NK细胞抑制性受体B-NK蛋白存在抗原反应交叉性,其多克隆抗体具有部分特异性。
关键词
鸡nk细胞受体
B-
nk
B19单倍型
B21单倍型
多克隆抗体
Keywords
chicken natural killer cell receptor
B-
nk
B21 haplotype
B19 haplotype
polyclonal antibody
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
B19和B21单倍型鸡NK细胞受体B-NK19和B-NK21的多克隆抗体制备及鉴定
杨超
张晓娜
许峰铭
文辉强
廉传江
陈洪岩
韩凌霞
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
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