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鸡MHCⅠα和β2m链基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达
被引量：
4
1
作者
戴银
胡晓苗
+5 位作者
赵瑞宏
侯宏艳
沈学怀
潘孝成
周学利
张丹俊
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016年第8期1938-1943,共6页
为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类(major histocompatibility complex,MHCⅠ)分子在免疫应答中的作用机制,试验经PCR克隆获得MHCⅠα和β_2m链基因,随后插入带有荧光标签蛋白的真核表达载体,成功构建了重组质粒pEGFP-MHCⅠα和pmCh...
为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类(major histocompatibility complex,MHCⅠ)分子在免疫应答中的作用机制,试验经PCR克隆获得MHCⅠα和β_2m链基因,随后插入带有荧光标签蛋白的真核表达载体,成功构建了重组质粒pEGFP-MHCⅠα和pmCherry-MHCⅠβ_2m,并通过脂质体法转染293T真核表达细胞。荧光显微镜观察可见,MHCⅠα和β_2m分子主要分布于真核细胞的内膜系统,改变了与之融合的荧光蛋白在细胞内的定位。此外,Western blotting检测可见大小约68.3和41.3ku的目的蛋白反应带,表明重组质粒能够在293T细胞中顺利表达,且表达蛋白与鸡MHCⅠ类分子的相应抗体可发生特异性结合反应,具有良好的免疫学活性。
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关键词
鸡
mhc
ⅰ
α基因
鸡mhcⅰβ2m链
基因
真核表达载体
2
93T细胞
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职称材料
鸡MHCⅠ类分子克隆及其二聚体融合基因的构建与表达
2
作者
戴银
程宝艳
+3 位作者
胡晓苗
王骏俊
陈芳芳
余为一
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2011年第3期61-64,共4页
为进一步研究MHCⅠ类分子作用机制,以及为制备MHCⅠ基因工程疫苗奠定基础,克隆鸡MHCⅠ基因,并构建MHCⅠβ2m-α融合基因进行原核表达。运用RT-PCR方法,克隆鸡MHCⅠα和β2m链基因,并通过编码连接肽(Gly4Ser)4的基因序列将两者头尾相连,...
为进一步研究MHCⅠ类分子作用机制,以及为制备MHCⅠ基因工程疫苗奠定基础,克隆鸡MHCⅠ基因,并构建MHCⅠβ2m-α融合基因进行原核表达。运用RT-PCR方法,克隆鸡MHCⅠα和β2m链基因,并通过编码连接肽(Gly4Ser)4的基因序列将两者头尾相连,构建了pET-32a-MHCⅠβ2m-α重组质粒,经PCR扩增、双酶切和测序鉴定后,重组质粒在E.coliBL21细胞进行IPTG诱导表达融合蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting方法分别检测表达产物。结果表明,成功克隆了MHCⅠα和β2m链基因,长度分别为1014和300 bp;构建的融合基因MHCⅠβ2m-α长度为1194 bp,经原核表达,融合蛋白分子质量约为62.0 ku,能与相应的抗体结合,具有一定的免疫学活性。
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关键词
鸡
mhc
ⅰ
α
链
鸡mhcⅰβ2m链
融合蛋白
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职称材料
题名
鸡MHCⅠα和β2m链基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达
被引量：
4
1
作者
戴银
胡晓苗
赵瑞宏
侯宏艳
沈学怀
潘孝成
周学利
张丹俊
机构
安徽省农业科学院畜牧兽医研究所
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016年第8期1938-1943,共6页
基金
国家自然科学基金项目(31302044)
国家蛋鸡产业技术体系项目(CARS-41)
安徽省科技攻关项目(11010302119)
文摘
为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类(major histocompatibility complex,MHCⅠ)分子在免疫应答中的作用机制,试验经PCR克隆获得MHCⅠα和β_2m链基因,随后插入带有荧光标签蛋白的真核表达载体,成功构建了重组质粒pEGFP-MHCⅠα和pmCherry-MHCⅠβ_2m,并通过脂质体法转染293T真核表达细胞。荧光显微镜观察可见,MHCⅠα和β_2m分子主要分布于真核细胞的内膜系统,改变了与之融合的荧光蛋白在细胞内的定位。此外,Western blotting检测可见大小约68.3和41.3ku的目的蛋白反应带,表明重组质粒能够在293T细胞中顺利表达,且表达蛋白与鸡MHCⅠ类分子的相应抗体可发生特异性结合反应,具有良好的免疫学活性。
关键词
鸡
mhc
ⅰ
α基因
鸡mhcⅰβ2m链
基因
真核表达载体
2
93T细胞
Keywords
chicken
mhc
ⅰ
αgene
chicken
mhc
ⅰβ
2
m
gene
eukaryotic expression vector
2
93T cell
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
鸡MHCⅠ类分子克隆及其二聚体融合基因的构建与表达
2
作者
戴银
程宝艳
胡晓苗
王骏俊
陈芳芳
余为一
机构
安徽省农业科学院畜牧兽医研究所
安徽农业大学动物科技学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2011年第3期61-64,共4页
基金
安徽省科技攻关项目(04013042)
文摘
为进一步研究MHCⅠ类分子作用机制,以及为制备MHCⅠ基因工程疫苗奠定基础,克隆鸡MHCⅠ基因,并构建MHCⅠβ2m-α融合基因进行原核表达。运用RT-PCR方法,克隆鸡MHCⅠα和β2m链基因,并通过编码连接肽(Gly4Ser)4的基因序列将两者头尾相连,构建了pET-32a-MHCⅠβ2m-α重组质粒,经PCR扩增、双酶切和测序鉴定后,重组质粒在E.coliBL21细胞进行IPTG诱导表达融合蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting方法分别检测表达产物。结果表明,成功克隆了MHCⅠα和β2m链基因,长度分别为1014和300 bp;构建的融合基因MHCⅠβ2m-α长度为1194 bp,经原核表达,融合蛋白分子质量约为62.0 ku,能与相应的抗体结合,具有一定的免疫学活性。
关键词
鸡
mhc
ⅰ
α
链
鸡mhcⅰβ2m链
融合蛋白
Keywords
chicken
mhc
ⅰ
α chain
chicken
mhc
ⅰ
β2
m
chain
fusion protein
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸡MHCⅠα和β2m链基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达
戴银
胡晓苗
赵瑞宏
侯宏艳
沈学怀
潘孝成
周学利
张丹俊
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016
4
在线阅读
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职称材料
2
鸡MHCⅠ类分子克隆及其二聚体融合基因的构建与表达
戴银
程宝艳
胡晓苗
王骏俊
陈芳芳
余为一
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2011
0
在线阅读
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职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
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