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新城疫病毒HN基因与鸡贫血病毒VP3基因对裸鼠荷HCT肿瘤的治疗 被引量：11
1
作者 连海 金宁一 +5 位作者 米志强 薛丽娟 李华 解丽华 金洪涛 李萍 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2003年第2期88-92,共5页
目的 :寻求有效的肿瘤基因治疗方法 ,研究新城疫病毒HN基因与鸡贫血病毒VP3基因在无胸腺裸鼠体内的抗肿瘤作用。方法 :建立BALB/c裸小鼠荷人结肠癌模型 ,瘤内注射脂质体包裹的真核重组子 pVHN和pVVP3。观测 pVHN和pVVP3治疗荷HCT裸鼠的... 目的 :寻求有效的肿瘤基因治疗方法 ,研究新城疫病毒HN基因与鸡贫血病毒VP3基因在无胸腺裸鼠体内的抗肿瘤作用。方法 :建立BALB/c裸小鼠荷人结肠癌模型 ,瘤内注射脂质体包裹的真核重组子 pVHN和pVVP3。观测 pVHN和pVVP3治疗荷HCT裸鼠的效果 ,免疫组化法检测肿瘤细胞Bcl 2和PCNA的表达。结果 :经HN基因和VP3基因联合治疗组的小鼠与荷瘤对照组小鼠相比 ,肿瘤体积明显缩小 ,抑瘤率可达 70 %。病理组织切片表明 ,治疗组裸鼠体内肿瘤细胞大量凋亡 ,局部地方可见细胞消失。免疫组化表明 ,Bcl 2和PCNA蛋白在荷HCT裸鼠对照组与各治疗组均有表达 ,其中Bcl 2表达在荷瘤对照组与pVHN治疗组差异有显著意义 (P <0 .0 5 ) ,PCNA表达在荷瘤对照组与 pVHN +pVVP3治疗组差异极其显著 (P <0 .0 1)。结论 :NDVHN基因与凋亡素VP3基因对裸鼠荷HCT肿瘤细胞的增殖有一定抑制作用 ,可诱导其凋亡 ,其凋亡可能与下调Bcl 2表达有关。 展开更多
关键词 新城疫病毒HN基因 鸡贫血病毒 vp3基因 裸鼠 荷HCT肿瘤 治疗
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鸡传染性贫血病毒实时荧光RPA快速检测方法的建立 被引量：1
2
作者 王冷眉 万培伟 +3 位作者 韩旭 易松强 闫莹莹 林翠 《中国家禽》 北大核心 2025年第3期78-84,共7页
为建立一种简便、快速的鸡传染性贫血病毒(CIAV)检测方法,试验针对CIAV VP2基因序列设计了多组引物和探针,经过引物筛选及反应温度和时间的优化,建立了CIAV的实时荧光重组酶聚合酶扩增方法(RPA),并对该方法的特异性、敏感性及重复性进... 为建立一种简便、快速的鸡传染性贫血病毒(CIAV)检测方法,试验针对CIAV VP2基因序列设计了多组引物和探针,经过引物筛选及反应温度和时间的优化,建立了CIAV的实时荧光重组酶聚合酶扩增方法(RPA),并对该方法的特异性、敏感性及重复性进行评估,应用该方法与荧光定量PCR(q PCR)同时对50份临床样品进行检测,比较两种方法的符合率。结果显示:该方法可在39℃恒温条件下20 min内快速、准确地检出CIAV,与其他6种常见的禽类病原体如传染性法氏囊病病毒(IBDV)、马立克病病毒(MDV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)、新城疫病毒(NDV)、禽传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)不存在交叉反应;该方法对质粒DNA的检测限为1×10~2 copies/μL;该方法检测50份临床样品中有9份阳性,与q PCR的检测结果一致。研究表明:建立的检测CIAV的RPA操作简单、反应灵敏、特异性高、检测结果可靠,可用于鸡传染性贫血的快速检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 vp2基因 重组酶聚合酶等温扩增技术 快速检测
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鸡贫血病毒vp3基因体内抑瘤效应的实验研究 被引量：7
3
作者 田俊 王宇哲 +2 位作者 申志发 宗义强 屈伸 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期7-9,共3页
目的　观察鸡贫血病毒 ( chicken anem ia virus,CAV) vp3基因的体内抑瘤效应。方法　分别将 pc DNA- vp3(含 vp3基因的真核表达载体 )、pc DNA3 (空载体 )和小鼠腹水型肝癌细胞株 H2 2混合后 ,接种于 BAL B/ c小鼠皮下。几天后 ,处死动... 目的　观察鸡贫血病毒 ( chicken anem ia virus,CAV) vp3基因的体内抑瘤效应。方法　分别将 pc DNA- vp3(含 vp3基因的真核表达载体 )、pc DNA3 (空载体 )和小鼠腹水型肝癌细胞株 H2 2混合后 ,接种于 BAL B/ c小鼠皮下。几天后 ,处死动物 ,取肿瘤组织称重 ,比较试验组和对照组瘤重差异 ,确定 vp3基因的抑瘤效应。TU NEL 法鉴定 vp3在体内诱导肿瘤细胞死亡的方式。结果　注射 vp3基因的试验组肿瘤生长率明显低于注射空载体的对照组。TUNEL 试验的结果也表明 ,鸡贫血病毒 VP3蛋白在体内以凋亡方式诱导肿瘤细胞死亡。结论　预示 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 vp3基因 细胞凋亡
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鸡贫血病毒vp3基因的克隆及其体外凋亡诱导效应的研究 被引量：4
4
作者 王宇哲 申志发 +2 位作者 田俊 宗义强 屈伸 《同济医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期300-303,共4页
用 PCR方法扩增了鸡贫血病毒标准株的 vp3基因 ,并将其克隆于真核表达载体 pc DNA3上 ,构建了重组体pc DNA- vp3。经酶切鉴定及测序分析表明 ,该片段和预期相符。在体外利用 L ipofect AMINETM介导的基因转染 ,将 pc D-NA- vp3、 pc DNA... 用 PCR方法扩增了鸡贫血病毒标准株的 vp3基因 ,并将其克隆于真核表达载体 pc DNA3上 ,构建了重组体pc DNA- vp3。经酶切鉴定及测序分析表明 ,该片段和预期相符。在体外利用 L ipofect AMINETM介导的基因转染 ,将 pc D-NA- vp3、 pc DNA3分别转入肝癌细胞系 Hep G2和二倍体肝细胞系 L- 0 2中 ,转染后的 RT- PCR结果证实 vp3基因在细胞中得到了表达。同时利用筛选稳定表达细胞株的技术和原位细胞凋亡检测法 ,证明了鸡贫血病毒是以凋亡的方式诱导细胞死亡 ,并且只诱导癌细胞的凋亡 ,而不诱导正常或二倍体细胞死亡。表明鸡贫血病毒 展开更多
关键词 鸡盆血病毒 基因克隆 细胞凋亡 vp3基因 体外凋亡 诱导效应
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鸡贫血病毒VP3基因对荷C6胶质瘤Weister大鼠的治疗 被引量：1
5
作者 邱吉庆 金宁一 +5 位作者 连海 罗毅男 郭云宝 米志强 李宵 孙迎春 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第2期25-27,共3页
构建荷C6胶质瘤Weister大鼠的肿瘤模型，随机分组给予不同的处理给药，观察治疗期间及治疗后的肿瘤生长情况，通过病理组织学、超微结构分析，检测鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗在Weister大鼠体内的抗肿瘤作用。结果表明，pVVP3治疗组肿瘤... 构建荷C6胶质瘤Weister大鼠的肿瘤模型，随机分组给予不同的处理给药，观察治疗期间及治疗后的肿瘤生长情况，通过病理组织学、超微结构分析，检测鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗在Weister大鼠体内的抗肿瘤作用。结果表明，pVVP3治疗组肿瘤生长速度明显受到抑制，其抑瘤率达85．57％。病理组织学观察可见化疗对照组肝组织有点状坏死，而pVVP3治疗组肝组织未见明显病变。肿瘤组织超微结构观察在pVVP3治疗组可见典型的凋亡特征。说明鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗对Weister大鼠C6胶质瘤生长有抑制作用，可诱导肿瘤细胞凋亡，且对肝组织无明显损伤。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 凋亡素基因 治疗 vp3基因 凋亡素 神经胶质瘤
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鸡传染性贫血病毒vp3基因的原核表达及其免疫学活性分析 被引量：1
6
作者 陆桂丽 王笑梅 +3 位作者 高玉龙 高宏雷 祁小乐 王晓燕 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期650-652,共3页
将鸡传染性贫血病毒(CIAV)Vp3基因克隆入表达载体pET-28a中,然后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,vp3基因以融合蛋白的形式高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白分子量约为18Ku。Westernblot分析表明,该蛋白可与CIAV阳性血清特异性... 将鸡传染性贫血病毒(CIAV)Vp3基因克隆入表达载体pET-28a中,然后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,vp3基因以融合蛋白的形式高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白分子量约为18Ku。Westernblot分析表明,该蛋白可与CIAV阳性血清特异性反应。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 vp3基因 原核表达
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鸡贫血病毒VP3基因诱导人肺癌细胞SPC-A1凋亡的作用机制
7
作者 连海 金宁一 +6 位作者 李霄 陈立刚 管国芳 孙丽丽 李雪梅 郑洪玲 崔英姬 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1063-1066,共4页
探索了重组质粒pVVP3对人肺癌细胞SPC-A1的作用及机制.将pVVP3经脂质体介导转染人肺癌细胞SPC-A1,通过MTT方法检测了细胞活力;采用吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色分析了肿瘤细胞凋亡;采用罗丹明123和DCFA染色测定了线粒体跨膜电位（△Ψ... 探索了重组质粒pVVP3对人肺癌细胞SPC-A1的作用及机制.将pVVP3经脂质体介导转染人肺癌细胞SPC-A1,通过MTT方法检测了细胞活力;采用吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色分析了肿瘤细胞凋亡;采用罗丹明123和DCFA染色测定了线粒体跨膜电位（△Ψm）和活性氧水平变化;通过底物染色反应检测了Caspase-3活性.检测分析结果表明：重组质粒pVVP3转染人肺癌细胞SPC-A1后,细胞活力明显降低; AO/EB染色可见明显的细胞凋亡形态学变化;与空质粒对照相比,线粒体△Ψm下降（P＜0.01）,活性氧水平升高（P＜0.05）,Caspase-3活性增强（P＜0.01）.以上结果提示,重组质粒pVVP3能够通过上调ROS水平,下调线粒体△Ψm,进而激活Caspase-3,最终诱导人肺癌细胞凋亡. 展开更多
关键词 鸡贫血病毒vp3 人肺癌细胞 凋亡
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VP3基因突变鸡传染性贫血病毒的构建
8
作者 杨兵 苏霞 +6 位作者 孙丹丹 周宏专 夏永恒 陈小玲 徐福洲 王金洛 杨汉春 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期77-82,共6页
以含CAV标准毒CuX-1株VP3突变体的pTCAVM阳性质粒为基础,通过重叠PCR在基因组位点nt682、nt808、nt829处进行定点突变,构建pTCAVM1、pTCAVM2、pTCAVM3突变体;在此基础上,对上述3个位点进行组合定点突变,构建成功pTCAVMa、pTCAVMb、pTCA... 以含CAV标准毒CuX-1株VP3突变体的pTCAVM阳性质粒为基础,通过重叠PCR在基因组位点nt682、nt808、nt829处进行定点突变,构建pTCAVM1、pTCAVM2、pTCAVM3突变体;在此基础上,对上述3个位点进行组合定点突变,构建成功pTCAVMa、pTCAVMb、pTCAVMc突变体;此外,成功构建克隆出3个位点均发生突变的pTCAVMd突变体。所有的突变体都保证VP3定点突变位点的碱基变化,同时不引起VP2蛋白的氨基酸残基序列发生变化,保证了突变体和原始病毒抗原性的一致;将得到的突变体转染易感细胞MSB1,获得具有复制特性的病毒,将病毒接种1日龄的SPF雏鸡,发现病毒可以在鸡体内复制,并引起CAV感染的病理学变化。本研究成功获得了多株感染性克隆毒株,为研究CAV病毒致病性以及开发鸡贫血弱毒活疫苗奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒(CAV) vp3突变体库 感染性克隆 动物实验
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鸡贫血病毒VP3基因的原核克隆表达
9
作者 齐欣 杨兵 赵玉军 《饲料工业》 2006年第9期51-53,共3页
关键词 鸡贫血病毒 vp3基因 克隆表达 原核 鸡传染性贫血 virus 澳大利亚 黑龙江省 CAV 分离
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鸡群中鸡传染性贫血病原与抗体检测及分离株VP1基因序列分析 被引量：2
10
作者 冯笑艳 胡明雪 +10 位作者 林雨萌 刘长军 李凯 祁小乐 崔红玉 高立 王素艳 陈运通 王笑梅 张艳萍 高玉龙 《中国家禽》 北大核心 2024年第2期52-58,共7页
为了解鸡群中鸡传染性贫血病毒(CAV)感染及抗体产生情况,从黑龙江省两个无临床症状鸡群(B群和S群)中,分别采集血清通过ELISA方法进行抗体检测,采集抗凝血并分离淋巴细胞,针对基因组保守序列设计引物,通过PCR方法进行病原检测,并对从B群... 为了解鸡群中鸡传染性贫血病毒(CAV)感染及抗体产生情况,从黑龙江省两个无临床症状鸡群(B群和S群)中,分别采集血清通过ELISA方法进行抗体检测,采集抗凝血并分离淋巴细胞,针对基因组保守序列设计引物,通过PCR方法进行病原检测,并对从B群病原阳性鸡分离到的分离株进行VP1基因序列分析。结果显示,B群和S群CAV抗体阳性率分别为62.7%(79/126)和68.2%(88/129),病原阳性率分别为43.0%(49/114)和62.3%(48/77),其中,B群和S群中抗体和病原双阴性的鸡分别为23.7%(27/114)和15.6%(12/77),而抗体和病原双阳性的鸡分别高达28.1%(32/114)和46.8%(36/77);在双阳性鸡中,B群和S群分别有62.5%(20/32)和58.3%(21/36)抗体滴度在1.0×10^(4)及以上,从B群病原阳性鸡全血中分离到一株CAV(HLJ/2022株),分离株HLJ/2022第394位氨基酸为谷氨酰胺,具有强毒的分子特征;两个鸡群的环境拭子CAV阳性率为10.0%(3/30),存在于消毒前的鸡蛋表面、更衣处和鞋底。研究表明,检测鸡群的CAV抗体阳性率在62.7%以上,病原阳性率在43.0%以上,抗体滴度在1.0×104及以上CAV仍可存在,CAV流行株(HLJ/2022)具有强毒分子特征,鸡群环境中存在CAV污染,结果为CIA防控提供重要的参考意见。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 血清学检测 病原学检测 病毒分离鉴定 vp1基因序列分析
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鸡传染性贫血病毒vp3基因在真核细胞中的表达与功能分析 被引量：1
11
作者 黄超华 张全红 +4 位作者 陈坤 王永强 曹红 李晓齐 郑世军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第7期7-10,共4页
为研究鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP3蛋白在宿主细胞中的作用,本研究采用PCR技术从CIAV DNA中扩增出vp3基因,并将该基因克隆到p MD18-T simple vector中。经测序证实所克隆的vp3基因与CIAV CUX-1标准株相同。并将vp3基因亚克隆到真核表达载... 为研究鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP3蛋白在宿主细胞中的作用,本研究采用PCR技术从CIAV DNA中扩增出vp3基因,并将该基因克隆到p MD18-T simple vector中。经测序证实所克隆的vp3基因与CIAV CUX-1标准株相同。并将vp3基因亚克隆到真核表达载体p EGFP-N1中,构建了重组真核表达质粒p EGFP-vp3与p CMV-Myc vp3,转染BHK-21和293 T细胞,经RT-PCR、荧光显微镜以及Western Blot证实转染的真核细胞能够表达VP3蛋白。以台盼蓝染色法检测细胞死亡,结果表明,VP3蛋白具有较强诱导细胞死亡的作用。该结果为深入研究CIAV的致病机理奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 vp3基因 凋亡素 真核表达
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含鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因重组火鸡疱疹病毒的构建 被引量：4
12
作者 刘长军 王端 +5 位作者 秦运安 鄢明华 王笑梅 代春铭 李刚 赵晓岩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期412-415,共4页
采用PCR方法 ,以传染性贫血病毒 (CIAV)DNA为模板 ,扩增并克隆了CIAV的VP1、VP2基因 ,并进行了序列分析。经基因修饰 ,将这两个基因分别加上表达元件后连接作为目的基因。通过同源重组技术 ,将目的基因插入到火鸡疱疹病毒 (HVT)gC基因... 采用PCR方法 ,以传染性贫血病毒 (CIAV)DNA为模板 ,扩增并克隆了CIAV的VP1、VP2基因 ,并进行了序列分析。经基因修饰 ,将这两个基因分别加上表达元件后连接作为目的基因。通过同源重组技术 ,将目的基因插入到火鸡疱疹病毒 (HVT)gC基因区 ,构建了一株含CIAVVP1、VP2基因表达单元的重组HVT(VP1VP2_rHVT)。体内、体外传代结果表明该重组病毒性状稳定。采用PCR扩增及Southernblot杂交检测 ,证实了CIAVVP1、VP2基因的插入。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 重组火鸡疱疹病毒 vp1、vp2基因
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鸡贫血病毒VP1基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：2
13
作者 黄冬艳 杨兵 +2 位作者 齐欣 陈小玲 徐福洲 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2006年第5期50-53,共4页
根据鸡贫血病毒Cux_1株基因组序列设计了一对引物,通过PCR扩增出VP1基因。将扩增出的片段克隆到pGM_T载体上,通过测序分析证实该片段与鸡贫血病毒Cux_1株的VP1基因序列一致。然后将克隆化VP1基因亚克隆到PET_32a(+)载体上并进行原核表达... 根据鸡贫血病毒Cux_1株基因组序列设计了一对引物,通过PCR扩增出VP1基因。将扩增出的片段克隆到pGM_T载体上,通过测序分析证实该片段与鸡贫血病毒Cux_1株的VP1基因序列一致。然后将克隆化VP1基因亚克隆到PET_32a(+)载体上并进行原核表达。SDS_PAGE和Western Blot分析表明,一个分子质量为70.4 kDa的重组蛋白获得了成功表达,并且鸡贫血病毒阳性血清能和重组蛋白发生反应。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 vp1基因 克隆 表达
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鸡贫血病毒vp1和vp2基因在毕赤酵母中的表达及产物免疫学特性的初步研究 被引量：1
14
作者 林欢 高宏雷 +4 位作者 王晓艳 高玉龙 宋修庆 李术强 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期495-499,共5页
利用特异性引物从pBluemCAV中PCR扩增得到鸡贫血病病毒(CAV)vp1、vp2基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理,纯化后,克隆至EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理的表达载体pPIC9K中,构建了真核表达质粒pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2。将pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2... 利用特异性引物从pBluemCAV中PCR扩增得到鸡贫血病病毒(CAV)vp1、vp2基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理,纯化后,克隆至EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理的表达载体pPIC9K中,构建了真核表达质粒pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2。将pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2转化至毕赤酵母SMD1168中,在0.5%甲醇诱导下表达CAV-VP1、CAV-VP2蛋白,运用Westernblot和Dot-ELISA鉴定表达蛋白。结果表明,重组酵母菌株表达出约54ku和24ku的目的蛋白,与针对鸡贫血病毒的单克隆抗体发生特异性反应。将表达产物乳化后免疫6周龄BALB/c小鼠,用ELISA、IFA检测免疫小鼠血清,均检测到抗体。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 vp1基因 vp2基因 真核表达 毕赤酵母
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鸡贫血病毒vp2基因的表达、纯化及重组蛋白的鉴定 被引量：1
15
作者 黄冬艳 杨兵 +2 位作者 齐欣 陈小玲 徐福洲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期113-117,共5页
根据GenBank上已发表的鸡贫血病毒Cux-1株基因组序列设计并合成了1对特异性引物,通过PCR扩增出vp2基因,将扩增出的片段克隆到pGM-T载体上,通过测序分析证实该片段与鸡贫血病毒Cux-1株的vp2基因序列一致。将克隆的vp2基因亚克隆到原核表... 根据GenBank上已发表的鸡贫血病毒Cux-1株基因组序列设计并合成了1对特异性引物,通过PCR扩增出vp2基因,将扩增出的片段克隆到pGM-T载体上,通过测序分析证实该片段与鸡贫血病毒Cux-1株的vp2基因序列一致。将克隆的vp2基因亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)上并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,表达的融合蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析,并用镍柱在天然状态下进行了纯化。结果表明,表达的融合蛋白分子量约为45ku,能与鸡贫血病毒阳性血清发生反应。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 vp2基因 表达 纯化
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鸡贫血病毒哈尔滨分离株VP2基因克隆 测序和比较 被引量：2
16
作者 何成强 丁乃峥 +1 位作者 李景鹏 李云龙 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2002年第11期8-11,共4页
通过 PCR方法克隆了从我国哈尔滨分离的一株鸡贫血病毒 (CAV)的 VP2基因 ,并对之进行了测序 ,该基因的开放读码框由 6 5 1bp组成 ,编码 2 16个氨基酸。通过将本次克隆的基因与 Gen Bank收录的 CAV的 VP2基因比较 ,同源性至少为99% ,未... 通过 PCR方法克隆了从我国哈尔滨分离的一株鸡贫血病毒 (CAV)的 VP2基因 ,并对之进行了测序 ,该基因的开放读码框由 6 5 1bp组成 ,编码 2 16个氨基酸。通过将本次克隆的基因与 Gen Bank收录的 CAV的 VP2基因比较 ,同源性至少为99% ,未发现与本次克隆的 VP2蛋白完全一致的 CAV分离株 ,与之同源性最好的是 CIA - 1的 VP2蛋白 ,相差 1个氨基酸 ,与Cux- 1也仅相差 2个氨基酸 ,因此从该蛋白看 CAV哈尔滨分离株的变异程度不很高。比较这 2 7株病毒的 VP2及其基因序列 ,发现共有 31处核苷酸发生变异 ,这些变异将导致 VP2的 12个氨基酸变化 ,尽管他们散布于整个 VP2 ,但在 186到 191号氨基酸区域存在一个没有报道过的变异程度相对较高的区域 ,CAV的 展开更多
关键词 哈尔滨分离株 基因克隆 鸡贫血病毒 vp2基因 序列分析 亚单位疫苗
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鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因在杆状病毒表达系统中的表达 被引量：1
17
作者 鄢明华 赵晓岩 +5 位作者 刘长军 王笑梅 王端 李刚 秦运安 邓国华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期426-429,共4页
将鸡传染性贫血病毒M990 5株VP1、VP2基因分别或同时克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDUAL中 ,然后转化到DH10BAC感受态细胞中与Bacmid杆状病毒穿梭载体进行转座重组 ,最后将重组子转染Sf9昆虫细胞 ,得到分别或同时含VP1、VP2基因的重组... 将鸡传染性贫血病毒M990 5株VP1、VP2基因分别或同时克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDUAL中 ,然后转化到DH10BAC感受态细胞中与Bacmid杆状病毒穿梭载体进行转座重组 ,最后将重组子转染Sf9昆虫细胞 ,得到分别或同时含VP1、VP2基因的重组杆状病毒rBacVP1、rBacVP2及rBacVP1_2。PCR扩增结果证实VP1、VP2基因重组到杆状病毒基因组中 ;SDS_PAGE电泳分析和间接免疫荧光试验结果表明VP1、VP2基因在重组病毒中得到了表达。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 vp1、vp2基因 重组杆状病毒
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鸡传染性贫血病毒VP1和VP2基因共表达载体的构建 被引量：3
18
作者 陈降华 周庆丰 +1 位作者 刘忠华 李文平 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第11期68-71,共4页
根据GenBank中收录的鸡传染性贫血病毒(CIAV)基因组序列,设计了扩增CIAV VP1和VP2基因的特异性引物,运用PCR技术从发病鸡肝组织DNA中扩增得到VP1、VP2基因,并将其克隆至pMD18-T载体。核苷酸测序结果显示,其序列与发表的序列同源性达到99... 根据GenBank中收录的鸡传染性贫血病毒(CIAV)基因组序列,设计了扩增CIAV VP1和VP2基因的特异性引物,运用PCR技术从发病鸡肝组织DNA中扩增得到VP1、VP2基因,并将其克隆至pMD18-T载体。核苷酸测序结果显示,其序列与发表的序列同源性达到99.8%。将VP2基因克隆到pMD18-T载体,并对Vp3基因起始密码子进行定点突变,得到突变基因mVP2。将mVP2、VP1先后克隆至pIRES载体,并转化大肠埃希菌JM109,提取质粒通过酶切鉴定显示,成功获得了共表达质粒pIRES-VP1/mVP2。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 vp1基因 vp2基因 共表达载体
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鸡贫血病毒VP2基因的克隆、序列分析及表达 被引量：1
19
作者 杨雨辉 陈奖励 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期224-226,共3页
目的 :为探讨鸡贫血病毒的分子生物学特征。方法 :采用PCR方法获得鸡贫血病毒的VP2基因 ,采用平端连接将其克隆到PUC119载体上进行测序 ,采用粘端连接将其亚克隆到PET载体上并进行原核表达。结果 :发现CAV SJ1株的VP2基因共有 6 5 1个碱... 目的 :为探讨鸡贫血病毒的分子生物学特征。方法 :采用PCR方法获得鸡贫血病毒的VP2基因 ,采用平端连接将其克隆到PUC119载体上进行测序 ,采用粘端连接将其亚克隆到PET载体上并进行原核表达。结果 :发现CAV SJ1株的VP2基因共有 6 5 1个碱基 ,同国外TK5 80 3、2 6P4、Cux 1、82 2毒株的VP2基因相比分别有 6、7、8、7个碱基的差别 ,其中 3个是SJ1株特有的碱基变化。由基因序列推导出的CAV SJ1株VP2蛋白的氨基酸序列同这些毒株相比都有 4个氨基酸的差别 ,同国外这些毒株共有 7个氨基酸的差别。原核表达的融合蛋白分子量为 34kD ,占菌体蛋白含量的 10 .5 %。结论 :CAV的分子生物学的特性较稳定 。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 vp2基因 克隆 序列分析
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3株鸡传染性贫血病毒的分离鉴定、VP1基因遗传进化分析及致病性评价
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作者 张亚 胡小飞 +6 位作者 段佳蕾 田辉 孙哲 霍环艳 薛景景 张盼涛 田克恭 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第9期42-48,共7页
为了解国内鸡场鸡传染性贫血(CIA)的流行状况和鸡传染性贫血病毒(CIAV)的遗传变异规律,以期对CIA的传播流行和预警防控提供技术支持。本试验对2020年在3个省份疑似发生CIA的3个规模鸡场采集10份组织脏器样品,应用鸡胚进行病毒的分离培养... 为了解国内鸡场鸡传染性贫血(CIA)的流行状况和鸡传染性贫血病毒(CIAV)的遗传变异规律,以期对CIA的传播流行和预警防控提供技术支持。本试验对2020年在3个省份疑似发生CIA的3个规模鸡场采集10份组织脏器样品,应用鸡胚进行病毒的分离培养,并对培养物进行CIAV PCR检测,进而对CIAV阳性样本进行VP 1基因扩增和测序,应用Lasergene和MEGA 6.0软件,对获得的所有分离毒株结构蛋白VP 1基因序列与GenBank中CIAV参考毒株进行比对,构建系统发育进化树,同时对分离的CIAV毒株进行动物回归试验,评价其对鸡的致病性。结果显示,10份样品中3份为CIAV阳性,共分离到3株CIAV,分别命名为202006-NX-4-2、202006-SD-2-1和202006-JX-016。VP 1基因相似性分析显示,3株CIAV分离株核苷酸相似性介于97.7%~99.6%,且均与国内分离株具有较高同源性;氨基酸序列分析显示,3株CIAV分离株毒力相关位点均与国内强毒株GD-101株一致。遗传进化分析结果显示,3株分离株属于同一进化分支(Ⅱ分支),202006-SD-2-1株和202006-JX-016株与JL15120株进化关系最近,202006-NX-4-2株则与以国内强毒株GD-101株为代表的其他Ⅱ分支参考株进化关系最近。动物回归试验结果显示,3株CIAV均能够引起1日龄鸡发生严重的淋巴器官萎缩、骨髓黄化,为典型的高致病性病毒株特征。本试验结果为当前国内CIAV的流行、毒株的遗传变异分析及相关疫苗研发提供了参考依据。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 分离培养 vp 1基因 进化分析 致病性
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