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题名鸡补体受体Ⅱ蛋白兔多克隆抗体制备及鉴定
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作者
孟昭英
靳换
涂敏
胡格
章振华
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机构
北京农学院动物科学技术学院
北京市农林科学院畜牧兽医研究所
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出处
《中国畜牧兽医》
北大核心
2025年第6期2772-2780,共9页
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基金
国家自然科学基金青年基金(32202793)
北京市农林科学院创新能力建设(KJCX20230424、KJCX20240338)。
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文摘
【目的】补体受体Ⅱ(complement receptor 2,CR2)与其生理学配体C3d相互作用能桥连先天性免疫反应和适应性免疫反应,放大下游信号的转导现象,显著降低抗原刺激B细胞活化的阈值,可将B细胞对抗原的敏感性提高1 000~10 000倍,对于激活B细胞及启动免疫反应至关重要。本研究旨在制备兔源鸡CR2(chCR2)多克隆抗体,为检测chCR2蛋白的表达情况提供工具,也为深入探究chCR2蛋白的功能和作用奠定基础。【方法】将pTT5-His-chCR2-ΔTM重组质粒转染至HEK293F细胞中,在真核表达系统HEK293F细胞中表达重组chCR2蛋白(His-chCR2-ΔTM),经Western blotting对蛋白表达进行分析,利用镍柱亲和层析纯化系统纯化chCR2蛋白并进行SDS-PAGE鉴定。用纯化出的chCR2蛋白免疫新西兰大白兔制备抗chCR2血清多克隆抗体;利用ELISA方法检测chCR2兔血清的效价;利用Western blotting和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测chCR2血清多克隆抗体的特异性和灵敏度。【结果】重组His-chCR2-ΔTM蛋白可在HEK293F细胞系表达,利用镍柱亲和层析法纯化得到的重组His-chCR2-ΔTM蛋白浓度为4.439 mg/mL,分子质量为45 ku。ELISA检测结果显示,chCR2血清多克隆抗体效价最高为1∶32 768 000;Western blotting和IFA结果表明,chCR2蛋白可被chCR2血清多抗体特异性识别;Western blotting检测时,chCR2血清多克隆抗体的稀释度为1∶5 000时特异性最好;IFA检测时,chCR2血清多克隆抗体最大稀释度为1∶1 600。【结论】本研究成功制备了chCR2蛋白兔多克隆抗体,该抗体效价较高且特异性较好,为后续检测chCR2蛋白及研究chCR2蛋白的功能提供了试验基础。
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关键词
鸡补体受体ⅱ
表达纯化
多克隆抗体
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Keywords
chicken complement receptor 2
expression and purification
polyclonal antibody
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分类号
S852.43
[农业科学—基础兽医学]
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