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DOT1L敲除的鸡胚成纤维细胞系构建及其对ALV-J复制和细胞信号通路的影响
1
作者 余莫涵 王鑫妍 +4 位作者 蔡清清 王佳兴 高琦 常国斌 陈世豪 《中国家禽》 北大核心 2025年第8期1-10,共10页
研究旨在通过CRISPR-Cas9技术构建DOT1L基因敲除的鸡胚成纤维细胞系(DF-1),并分析DOT1L基因敲除对J亚群禽白血病病毒(ALV-J)复制及其细胞信号通路的影响,也为后续进一步研究DOT1L的生物学功能提供生物材料。研究首先利用CRISPR/Cas9基... 研究旨在通过CRISPR-Cas9技术构建DOT1L基因敲除的鸡胚成纤维细胞系(DF-1),并分析DOT1L基因敲除对J亚群禽白血病病毒(ALV-J)复制及其细胞信号通路的影响,也为后续进一步研究DOT1L的生物学功能提供生物材料。研究首先利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建DOT1L基因敲除的DF-1细胞系,分析野生型和敲除细胞对ALV-J复制的影响,再通过转录组测序技术对敲除细胞与野生型细胞的基因表达谱进行了差异分析。结果显示:设计的sgRNA均具有T7E1酶切割活性且sgRNA-1切割活性最高。DNA测序显示,筛选DOT1L敲除的阳性细胞外显子区域分别缺失2个和4个碱基,导致移码突变产生。Western blot验证DOT1L基因敲除的单克隆细胞的H3K79me2水平显著降低(P<0.05),并且DOT1L敲除显著抑制ALV-J复制。RNA-Seq结果显示,与野生细胞系相比DOT1L敲除细胞系的差异表达基因(DEGs)共有2821个,其中上调基因1384个,下调基因1437个。DEGs的GO功能注释主要与细胞成长代谢和生物过程的调节相关;KEGG通路富集分析主要集中在细胞黏附、ECM受体和Wnt途径等信号通路。综上,研究首次成功构建了DOT1L基因敲除的鸡胚成纤维细胞系,并通过转录组测序分析和筛选DOT1L基因敲除细胞系的差异基因表达谱,这有助于理解DOT1L基因在鸡胚成纤维细胞中的潜在作用,还为进一步探究鸡DOT1L的抗病毒天然免疫调控功能提供重要的生物材料。 展开更多
关键词 DOT1L基因 鸡胚成纤维细胞系 CRISPR-Cas9 ALV-J 转录组测序
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禽腺病毒4型感染原代鸡胚心脏成纤维细胞引起细胞凋亡及炎症反应的研究
2
作者 张永康 韩帅博 +7 位作者 张爱琼 朱二鹏 冯孝傲 王乃秀 杜毛 郑爽 程振涛 刘江 《贵州畜牧兽医》 2025年第2期63-67,共5页
为了解禽腺病毒4型(FAdV-4)感染与心脏细胞损伤等病理现象的关系,试验以原代鸡胚心脏成纤维细胞(CF)为研究对象,构建FAdV-4感染CF细胞模型,通过TUNEL染色检测FAdV-4感染细胞后24、48、72 h的凋亡阳性细胞比,并通过qRT-PCR分别检测Caspas... 为了解禽腺病毒4型(FAdV-4)感染与心脏细胞损伤等病理现象的关系,试验以原代鸡胚心脏成纤维细胞(CF)为研究对象,构建FAdV-4感染CF细胞模型,通过TUNEL染色检测FAdV-4感染细胞后24、48、72 h的凋亡阳性细胞比,并通过qRT-PCR分别检测Caspase-3、Bax细胞凋亡基因以及炎症细胞因子IL-1β和TNF-α在24、48、72 h的转录水平。结果:FAdV-4感染细胞的凋亡率、阳性细胞百分比,以及促炎症因子IL-1β mRNA、TNF-α mRNA转录水平均高于正常CF细胞。结论:FAdV-4感染可促进CF细胞凋亡并产生炎症反应。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 原代鸡胚心脏成纤维细胞 细胞凋亡 炎症反应
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10种中药成分对单层鸡胚成纤维细胞增殖的影响 被引量：18
3
作者 孔祥峰 胡元亮 +3 位作者 刘家国 张宝康 陈玉库 王德云 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期84-87,共4页
将安全浓度范围内的黄芪多糖、当归多糖、蜂胶多糖、淫羊藿多糖、板蓝根多糖、黄芪黄酮、蜂胶黄酮、淫羊藿黄酮、黄芪皂苷和人参皂苷等 10种中药成分分别加入已培养 2 4h、刚形成单层的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中 ,在加药后12 ,2 4 ,36 ,4 ... 将安全浓度范围内的黄芪多糖、当归多糖、蜂胶多糖、淫羊藿多糖、板蓝根多糖、黄芪黄酮、蜂胶黄酮、淫羊藿黄酮、黄芪皂苷和人参皂苷等 10种中药成分分别加入已培养 2 4h、刚形成单层的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中 ,在加药后12 ,2 4 ,36 ,4 8和 6 0h用MTT法测定它们对CEF增殖的影响。结果表明 ,黄芪皂苷、黄芪多糖、板蓝根多糖和蜂胶黄酮主要表现为促进增殖 ;淫羊藿多糖主要具抑制效应 ;其他 5种中药成分在某些浓度和时间点能促进增殖 ,而在某些浓度和时间点则抑制增殖 ,并有一定的量效和时效关系。 展开更多
关键词 鸡胚成纤维细胞 细胞增殖 中药成分 时效关系 量效关系 免疫增强剂
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Pcgf2促进鸡胚成纤维细胞重编程形成诱导多能干细胞
4
作者 姚梓淇 廖立钦 +2 位作者 宋佳蓓 张新珩 谢青梅 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期311-320,共10页
【目的】以提高诱导鸡多能干细胞的干性为目的,利用Pcgf2基因与传统诱导多能干细胞的重编程因子共同诱导鸡多能干细胞。【方法】以鸡早期胚胎为模板,对Oct4、Sox2、Nanog、Lin28、C-myc、Klf4这6种传统的重编程因子及Pcgf2进行基因扩增... 【目的】以提高诱导鸡多能干细胞的干性为目的,利用Pcgf2基因与传统诱导多能干细胞的重编程因子共同诱导鸡多能干细胞。【方法】以鸡早期胚胎为模板,对Oct4、Sox2、Nanog、Lin28、C-myc、Klf4这6种传统的重编程因子及Pcgf2进行基因扩增,并与慢病毒载体重组为慢病毒质粒,在包装慢病毒并测定相对应的病毒滴度后,分组感染鸡胚成纤维细胞,在诱导的过程中对干细胞标记物进行检测。【结果】利用传统的重编程因子组合与加入Pcgf2共同诱导后的细胞都较早地表达出磷酸酶活性。加入Pcgf2诱导多能干细胞可以使细胞更早地出现类干细胞形态,且内源性基因Oct4、Sox2、Nanog和Lin28的表达得到更稳定的提高。【结论】Pcgf2在加入诱导体系后可以有效提高细胞的重编程接近干细胞状态。该研究可为选择重编程因子诱导鸡细胞完全重编程及其机制研究提供理论参考。 展开更多
关键词 鸡 慢病毒 多能转录因子 鸡胚成纤维细胞 体细胞重编程 诱导多能干细胞
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16种四川道地药材对鸡胚成纤维细胞生长的影响 被引量：3
5
作者 封海波 刘娟 +5 位作者 曾宪垠 赵冰 唐静 王振华 杜林林 吕雪 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期6-11,共6页
该实验通过MTT法观察丹参、川木香、菊花、川郁金、川黄柏、川佛手、川牛膝、川莪术、川明参、川续断、川麦冬、川白芷、川芎、杜仲、川党参和乌梅等16种四川产道地药材对体外培养的鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全体积质量分数,并观察各种... 该实验通过MTT法观察丹参、川木香、菊花、川郁金、川黄柏、川佛手、川牛膝、川莪术、川明参、川续断、川麦冬、川白芷、川芎、杜仲、川党参和乌梅等16种四川产道地药材对体外培养的鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全体积质量分数,并观察各种中药提取液对CEF增殖的影响.结果表明以上各种药材的最大安全体积质量分数:川黄柏为3.907mg/L,丹参、川木香、川续断和川党参均为7.813mg/L,菊花为15.625mg/L,杜仲、川佛手、川麦冬、川芎和白芷均为31.25mg/L,川郁金、杜仲、川乌梅和川牛膝均为62.5mg/L,川明参为1 000mg/L.当川郁金在1.954～31.25mg/L,川牛膝在3.907～31.25mg/L,川明参在1.954～500mg/L,川续断在1.954～3.907mg/L,川麦冬在1.954～15.625mg/L,杜仲在1.954～31.25mg/L的体积质量分数范围内可显著促进细胞生长. 展开更多
关键词 四川道地药材 鸡胚成纤维细胞 细胞增殖 安全体积质量分数
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12种藏药对鸡法氏囊病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响 被引量：3
6
作者 赵晓娜 牛家强 +3 位作者 胡元亮 黄小燕 王君敏 朱广双 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第1期219-221,共3页
关键词 藏药 鸡胚成纤维细胞 鸡传染性法氏囊病毒 感染细胞能力
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鸡传染性法氏囊病毒接种鸡胚成纤维细胞工艺优化
7
作者 孙德君 《家禽科学》 2024年第7期31-34,共4页
鸡传染性法氏囊病是一种急性、高度接触性传染病,主要侵害幼龄鸡。传染性法氏囊病灭活疫苗通常采用强毒接种鸡胚成纤维细胞(CEF)进行病毒的培养。本试验采用细胞培养转瓶培养CEF方法接种病毒对转瓶内细胞接种密度、种毒接种量及收获病... 鸡传染性法氏囊病是一种急性、高度接触性传染病,主要侵害幼龄鸡。传染性法氏囊病灭活疫苗通常采用强毒接种鸡胚成纤维细胞(CEF)进行病毒的培养。本试验采用细胞培养转瓶培养CEF方法接种病毒对转瓶内细胞接种密度、种毒接种量及收获病毒时间进行了优化,筛选出传染性法氏囊病毒培养的最佳工艺参数(转瓶),为扩大生产稳定的鸡传染性法氏囊病灭活疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病毒 鸡胚成纤维细胞 工艺优化
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H5N1亚型禽流感病毒和新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞IFN-β基因的动态表达
8
作者 高艳 杨松沛 +3 位作者 雷小文 岳华 李明义 汤承 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第3期78-83,共6页
根据鸡β-干扰素（ChIFN-β）基因保守序列设计引物建立了检测鸡IFN-βmRNA表达水平的荧光定量RT-PCR（RRT-PCR）方法,并对H5N1亚型禽流感病毒（AIV）和新城疫病毒强毒株（vNDV）感染后3、6、12、24、30 h的鸡胚成纤维细胞（CEF）中IFN-... 根据鸡β-干扰素（ChIFN-β）基因保守序列设计引物建立了检测鸡IFN-βmRNA表达水平的荧光定量RT-PCR（RRT-PCR）方法,并对H5N1亚型禽流感病毒（AIV）和新城疫病毒强毒株（vNDV）感染后3、6、12、24、30 h的鸡胚成纤维细胞（CEF）中IFN-βmRNA表达水平进行了检测。结果显示,建立的RRT-PCR特异性好,对鸡IFN-βmRNA的扩增效率为94.18%,线性范围为10-8-10-3,相关系数为0.992,最低能检出48拷贝/反应。AIV在感染CEF后6、12 h显著抑制IFN-βmRNA的表达,24 h开始诱导IFN-βmRNA表达,30 h时IFN-βmRNA水平显著升高;vNDV在感染CEF后的24 h内显著抑制IFN-βmRNA的表达,30 h时则显著诱导IFN-βmRNA表达。本试验结果为进一步研究H5N1和NDV与机体的相互作用提供了有价值的信息。 展开更多
关键词 Β-干扰素 荧光定量RT-PCR 禽流感病毒 新城疫病毒 鸡胚成纤维细胞
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北京油鸡胚胎成纤维细胞系建立与生物学特性研究 被引量：23
9
作者 周向梅 马月辉 +2 位作者 关伟军 文杰 李晗 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期209-215,共7页
采取组织块直接培养法,对北京油鸡胚胎组织进行原代和继代培养,成功地建立了成纤维细胞系.并对培养细胞进行了形态学、细胞生长动力学观察,以及核型和乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶的同工酶分析.结果表明,该细胞系的群体倍增时间(PDT)为24 h... 采取组织块直接培养法,对北京油鸡胚胎组织进行原代和继代培养,成功地建立了成纤维细胞系.并对培养细胞进行了形态学、细胞生长动力学观察,以及核型和乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶的同工酶分析.结果表明,该细胞系的群体倍增时间(PDT)为24 h;细胞染色体中二倍体占主体,为76%～88%;乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶同工酶电泳图谱与本室其它细胞系有明显差别;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性.该细胞系的建立,使北京油鸡这一国家重要种质资源在细胞水平上保存下来,也为基因组文库和体细胞克隆等研究提供了理想的生物材料. 展开更多
关键词 成纤维细胞 细胞系 乳酸脱氢酶 胚胎 鸡胚 PDT 细胞染色体 北京油鸡 生物学特性研究 继代培养
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鸡胚成纤维细胞原代培养及应用 被引量：16
10
作者 朱国坡 周晓丽 +5 位作者 郭延锋 李瑞芳 高均伟 陈仕均 王丽荣 刘兴友 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第3期112-114,共3页
原代培养是指在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的组织细胞生存、生长和传代,并维持原有组织细胞的结构和功能特性。鸡胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好的耐受性、性状比较稳定等特点,使得其被广泛地应用... 原代培养是指在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的组织细胞生存、生长和传代,并维持原有组织细胞的结构和功能特性。鸡胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好的耐受性、性状比较稳定等特点,使得其被广泛地应用于分子和细胞生物学研究的许多方面。论文综述了近年来有关鸡胚成纤维细胞的培养技术,如鸡胚的取材、细胞的分离、纯化和培养,同时介绍了应用进展和未来研究方向。 展开更多
关键词 鸡胚成纤维细胞 原代培养 分离 纯化
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8种硫酸化多糖对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响 被引量：13
11
作者 王君敏 胡元亮 +6 位作者 张帆 王德云 赵晓娜 张靖 刘静 赵彪 郝丽华 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期118-122,共5页
用氯磺酸-吡啶法修饰当归多糖(CAPS)和枸杞多糖(LBPS),得到4种硫酸化当归多糖sCAPS0.6、sCAPS1.1、sCAPS1.9、sCAPS2.2和4种硫酸化枸杞多糖sLBPS0.7、sLBPS1.1、sLBPS1.5和sLBPS1.9。分别以CAPS和LBPS为对照,采用MTT法比较了这8种硫酸... 用氯磺酸-吡啶法修饰当归多糖(CAPS)和枸杞多糖(LBPS),得到4种硫酸化当归多糖sCAPS0.6、sCAPS1.1、sCAPS1.9、sCAPS2.2和4种硫酸化枸杞多糖sLBPS0.7、sLBPS1.1、sLBPS1.5和sLBPS1.9。分别以CAPS和LBPS为对照,采用MTT法比较了这8种硫酸化多糖对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响。结果表明:硫酸化修饰能显著提高当归多糖和枸杞多糖的抗病毒活性,且与硫酸基取代度有一定的相关性。sCAPS2.2、sLBPS1.5、sCAPS1.9和sLBPS1.9的活性较好,可以作为进一步研究的材料。 展开更多
关键词 硫酸化修饰 当归多糖 枸杞多糖 新城疫病毒 感染细胞能力 鸡胚成纤维细胞
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几种中药粗提物对鸡胚成纤维细胞生长的影响 被引量：12
12
作者 刘家国 胡元亮 +5 位作者 陈玉库 张宝康 钱建飞 张则斌 李银 唐余华 《江苏农业学报》 CSCD 2002年第4期228-232,共5页
　为筛选抗IBDV方剂的主药,采用组织培养方法,测试了黄芪、连翘等8种中药粗提物在体外鸡胚成纤维细胞(CEF)上的最大安全浓度及其对CEF增殖、存活时间的影响。结果显示,黄芪对CEF基本无毒性作用,最大安全浓度为25mg/ml,而连翘等其余7种... 　为筛选抗IBDV方剂的主药,采用组织培养方法,测试了黄芪、连翘等8种中药粗提物在体外鸡胚成纤维细胞(CEF)上的最大安全浓度及其对CEF增殖、存活时间的影响。结果显示,黄芪对CEF基本无毒性作用,最大安全浓度为25mg/ml,而连翘等其余7种中药粗提物则表现出较大的毒性作用,最大安全浓度极低,同时,黄芪对CEF还具有较强的促生长和延长存活时间的作用。因此,筛定黄芪作为抗IBDV方剂的主药。 展开更多
关键词 中药 粗提物 鸡胚 成纤维细胞 生长 安全浓度
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枇杷叶三萜酸对TGF-β_1刺激的人胚肺成纤维细胞转分化及ERK通路的影响 被引量：11
13
作者 杨雅茹 黄艳 +5 位作者 李俊 吕雄文 金涌 熊自忠 张磊 刘红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期341-346,共6页
目的研究枇杷叶三萜酸(Triterpene acids of loquat,TAL)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激人胚肺成纤维细胞转分化、胶原合成及ERK通路的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ),MTT比色法测定TAL对HFL-Ⅰ细胞的增殖抑制率。RT-PCR... 目的研究枇杷叶三萜酸(Triterpene acids of loquat,TAL)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激人胚肺成纤维细胞转分化、胶原合成及ERK通路的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ),MTT比色法测定TAL对HFL-Ⅰ细胞的增殖抑制率。RT-PCR检测每组中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(CⅠ)、Ⅲ型胶原(CⅢ)mRNA的水平,Western blot检测各组细胞中p-ERK1/2和ERK1/2表达水平。结果 TAL呈剂量和时间依赖性抑制HFL-Ⅰ细胞的增殖(P<0.05),并能够降低CⅠ、CⅢ、α-SMA、CTGF的过度表达(P<0.05);Western blot结果显示TAL能降低TGF-β1刺激组p-ERK1/2的表达,而对ERK1/2的表达没有差异。结论 TAL能抑制HFL-Ⅰ的增殖,同时也能使活化后HFL-Ⅰ中的α-SMA生成减少,CTGF、胶原和p-ERK1/2表达降低。 展开更多
关键词 枇杷叶三萜酸 TGF-β1 肺纤维化 人胚肺成纤维细胞 ERK CTGF
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致病性鹅源新城疫病毒对鸡胚成纤维细胞的致病变特性 被引量：6
14
作者 万洪全 卢军 +3 位作者 刘秀梵 陈平 陈素娟 冀德君 《动物医学进展》 CSCD 2004年第5期89-91,共3页
选择4株鹅源新城疫病毒(NDV)接种鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物,研究鹅源NDV对CEF的致病变特性,并与鸡源及鸽源NDV进行比较。结果显示,鹅源NDV接种次代CEF后24h开始有病变产生,表现为少数细胞变圆、皱缩,折光性增强,随后病变缓慢进展,感染... 选择4株鹅源新城疫病毒(NDV)接种鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物,研究鹅源NDV对CEF的致病变特性,并与鸡源及鸽源NDV进行比较。结果显示,鹅源NDV接种次代CEF后24h开始有病变产生,表现为少数细胞变圆、皱缩,折光性增强,随后病变缓慢进展,感染细胞形成大量合胞体,到84-144 h时,CEF单层彻底破坏;鸡源和鸽源NDV接种CEF后也在24 h左右开始有病变产生,最初病变与鹅源毒株导致的病变相似,但病变进展迅速,细胞显著裂解并导致单层的严重破坏,60-84 h时细胞单层即彻底破坏。对病毒接种后不同时间段培养物上清血凝(HA)效价的测定结果表明,鹅源NDV接种后84-120h培养物上清HA效价达到高峰,为5-8 log2,鸡源和鸽源NDV接种后60-84 h HA效价即可达到高峰,但其最高效价只有4 log2。 展开更多
关键词 鹅 新城疫病毒 鸡胚成纤维细胞 致病变特性
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紫苏叶注射液在鸡胚成纤维细胞体系中安全浓度的测定 被引量：4
15
作者 王定坤 杜智勇 +2 位作者 徐在品 赵伟 王清宇 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2010年第5期146-148,共3页
采用体外细胞培养法,将紫苏叶注射液与鸡胚成纤维细胞(Chick embryo fibroblast,CEF)共同培养,测定紫苏叶注射液在鸡胚成纤维细胞培养体系中的最大安全浓度,检测紫苏叶注射液的细胞毒性。结果表明,紫苏叶注射液对鸡胚成纤维细胞的最大... 采用体外细胞培养法,将紫苏叶注射液与鸡胚成纤维细胞(Chick embryo fibroblast,CEF)共同培养,测定紫苏叶注射液在鸡胚成纤维细胞培养体系中的最大安全浓度,检测紫苏叶注射液的细胞毒性。结果表明,紫苏叶注射液对鸡胚成纤维细胞的最大安全浓度为488.281μg/mL。 展开更多
关键词 紫苏叶注射液 鸡胚成纤维细胞 细胞毒性 安全浓度
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鸡胚成纤维细胞感染IBDV后SOD活性的变化 被引量：13
16
作者 薛春宜 毕英佐 曹永长 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 1999年第1期3-5,共3页
鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦｓ）用传染性囊病病毒（ＩＢＤＶ）感染后，采用邻苯三酚自氧化法测定细胞超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的活性。ＣＥＦｓ感染ＩＢＤＶ后８ｈ，细胞ＳＯＤ活性有所上升。之后，随着时间的延长，细胞ＳＯＤ活性逐渐下... 鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦｓ）用传染性囊病病毒（ＩＢＤＶ）感染后，采用邻苯三酚自氧化法测定细胞超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的活性。ＣＥＦｓ感染ＩＢＤＶ后８ｈ，细胞ＳＯＤ活性有所上升。之后，随着时间的延长，细胞ＳＯＤ活性逐渐下降。试验结果表明，ＳＯＤ活性降低是ＣＥＦｓ感染ＩＢＤＶ之后发生的重要生化变化，在ＩＢＤＶ诱导细胞凋亡的过程中可能起关键作用。 展开更多
关键词 传染性囊病病毒 鸡胚成纤维细胞 SOD
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鸡胚成纤维细胞cDNA真核表达文库的构建及鉴定 被引量：3
17
作者 张改平 朱礼倩 +6 位作者 杨艳艳 赵绪永 乔松林 张红 王丽 李清州 王选年 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期216-219,共4页
为构建鸡胚成纤维细胞cDNA真核表达文库并对文库质量进行鉴定,从鸡胚成纤维细胞中直接提取mRNA,用紫外分光光度计测定含量。经电泳确定mRNA的质量,反转录合成第一、二链cDNA,经苯酚氯仿抽提后与EcoRⅠ接头连接,经NotⅠ酶切后用spin col... 为构建鸡胚成纤维细胞cDNA真核表达文库并对文库质量进行鉴定,从鸡胚成纤维细胞中直接提取mRNA,用紫外分光光度计测定含量。经电泳确定mRNA的质量,反转录合成第一、二链cDNA,经苯酚氯仿抽提后与EcoRⅠ接头连接,经NotⅠ酶切后用spin column除去小于500 bp的cDNA片段,与经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切的真核表达质粒连接,连接产物电转化感受态细胞,测定文库的容量大小并通过colony PCR鉴定插入cDNA片段的大小。构建成含8.8×105个重组子的鸡胚成纤维细胞cDNA文库,重组子中平均插入外源片段长度大于1.0 kb的约占85.7%。从结果看构建的文库合格,适合用于筛选目的cDNA克隆。 展开更多
关键词 鸡胚成纤维细胞 CDNA表达文库 传染性法氏囊病毒受体
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槲皮素抑制人胚肺成纤维细胞ERK1/2的激活和PDGF的表达 被引量：3
18
作者 彭海兵 张娜 +3 位作者 刘晓光 王建行 赵霞 刘燕 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期42-44,47,共4页
目的探讨槲皮素对人胚肺成纤维细胞(HELF)表达血小板源性生长因子(PDGF)和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的调节作用。方法以支气管肺泡灌洗法收集硅肺患者肺泡巨噬细胞(AM),在体外用含有SiO2(50μg/mL)的DMEM培养基和不含SiO2的DMEM培... 目的探讨槲皮素对人胚肺成纤维细胞(HELF)表达血小板源性生长因子(PDGF)和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的调节作用。方法以支气管肺泡灌洗法收集硅肺患者肺泡巨噬细胞(AM),在体外用含有SiO2(50μg/mL)的DMEM培养基和不含SiO2的DMEM培养基培养18 h,收集AM上清液,加入不同浓度槲皮素。用组织贴块法获取培养HELF,将HELF分为5组:空白对照组、AM组、SiO2联合AM处理组、槲皮素(10、20、40)μmol/L组。WST-1法检测HELF增殖情况,Western blot法检测HELF中PDGF的表达,免疫细胞化学法检测HELF中p-ERK1/2的表达。结果与SiO2联合AM处理组、AM组相比,各浓度槲皮素组都能抑制HELF增殖,且随浓度增大抑制作用增强,差异有统计学意义(P<0.01)。各种浓度槲皮素均能降低HELF中PDGF的表达、减少HELF中p-ERK1/2的量,呈现剂量-效应关系,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论槲皮素可以抑制人胚肺成纤维细胞PDGF表达和ERK1/2的激活。 展开更多
关键词 槲皮素 SiO 血小板源性生长因子 细胞外调节蛋白激酶1 2 肺泡巨噬细胞 人胚肺成纤维细胞
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当归补血总苷抑制TGF-β_1诱导的人胚肺成纤维细胞转分化及胶原表达 被引量：5
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作者 刘干 李俊 +1 位作者 高建 贾丽莎 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第10期1018-1022,共5页
目的研究当归补血总苷(TGDGBX)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HLF-Ⅰ)转分化及胶原表达的调控作用。方法体外培养HLF-Ⅰ,根据不同的处理方法分为5组,A组:对照组;B组:加入TGF-β1(1ng/ml);C组:加入TGF-β1(1 ng/ml)+... 目的研究当归补血总苷(TGDGBX)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HLF-Ⅰ)转分化及胶原表达的调控作用。方法体外培养HLF-Ⅰ,根据不同的处理方法分为5组,A组:对照组;B组:加入TGF-β1(1ng/ml);C组:加入TGF-β1(1 ng/ml)+TGDGBX(0.03 mg/ml);D组:加入TGF-β1(1 ng/ml)+TGDGBX(0.09 mg/ml);E组:加入TGF-β1(1 ng/ml)+TGDGBX(0.27 mg/ml)。MMT法检测各组HLF-Ⅰ的增殖情况,羟脯氨酸消化法检测细胞上清液中羟脯氨酸(HYP)含量,ELISA法检测细胞上清液基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的含量。半定量RT-PCR法检测Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)mRNA、Ⅲ胶原(COL-Ⅲ)mRNA、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA以及MMP-9 mRNA的表达情况。结果与B组相比,C、D、E组明显抑制TGF-β1诱导的HLF-Ⅰ细胞增殖(P<0.05);降低细胞上清液中HYP的含量(P<0.05);减少HLF-Ⅰ的COL-ⅠmRNA、COL-ⅢmR-NA以及α-SMA mRNA的表达(P<0.05);增加细胞上清液中MMP-9的含量(P<0.05)。D和E组与B组相比,显著提高HLF-Ⅰ的MMP-9 mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论 TGDGBX可抑制TGF-β1诱导的HLF-Ⅰ转分化和胶原表达,其抑制胶原表达的作用可能是通过增加MMP-9的表达来实现的。 展开更多
关键词 当归补血总苷 胶原 人胚肺成纤维细胞 转化生长因子-Β1
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不同方法制备鸡胚成纤维细胞的比较试验 被引量：2
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作者 牛家强 支海兵 +2 位作者 徐业芬 陈国先 吴华伟 《中国家禽》 北大核心 2003年第5期11-12,共2页
采用传统法、半胚法和全胚法制备鸡胚成纤维细胞(CEF)单层。结果表明:在同等条件下,均以成纤维细胞为主,并伴有少量的上皮细胞,仅有全胚法含有极少量的肝细胞;培养时细胞贴壁和生长状况无明显差异,其产量稍有差异(全胚法>半胚法>... 采用传统法、半胚法和全胚法制备鸡胚成纤维细胞(CEF)单层。结果表明:在同等条件下,均以成纤维细胞为主,并伴有少量的上皮细胞,仅有全胚法含有极少量的肝细胞;培养时细胞贴壁和生长状况无明显差异,其产量稍有差异(全胚法>半胚法>传统法)。 展开更多
关键词 上皮细胞 肝细胞 产量 制备方法 传统法 全胚法 半胫法 鸡胚成纤维细胞
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