鸡新城疫病毒、鸡细小病毒和禽流感病毒三重PCR检测方法的建立及应用 被引量：8

1

作者 奉彬 谢芝勋 +7 位作者 邓显文 张艳芳 谢丽基 谢志勤 范晴 曾婷婷 罗思思 黄娇玲 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2576-2582,共7页

【目的】建立能同时检测鸡新城疫病毒(NDV)、鸡细小病毒(ChPV)和禽流感病毒(AIV)的三重PCR检测方法,为临床上快速诊断及有效防控NDV、ChPV和AIV的单一或混合感染提供技术支持。【方法】参考NCBI中已公布NDV的F基因(登录号DQ195265.1)、C... 【目的】建立能同时检测鸡新城疫病毒(NDV)、鸡细小病毒(ChPV)和禽流感病毒(AIV)的三重PCR检测方法,为临床上快速诊断及有效防控NDV、ChPV和AIV的单一或混合感染提供技术支持。【方法】参考NCBI中已公布NDV的F基因(登录号DQ195265.1)、ChPV的NS1基因(登录号GU214704.1)和AIV的M基因保守区(登录号DQ485211.1),设计合成针对NDV、ChPV和AIV的特异性引物,应用这3对引物建立三重PCR检测方法,对反应体系及扩增程序进行优化,并通过特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测等评估其实用性。【结果】优化后的三重PCR反应体系为ChPV和AIV的上、下游引物各0.5μL,NDV的上、下游引物各1.0μL,NDV、ChPV和AIV的核酸模板各1.0μL,Premix TaqTM 12.5μL,无RNase水补足至25.0μL。最佳扩增程序:95.0℃预变性5 min;94.0℃1 min,58.5℃1 min,72.0℃1 min,进行35个循环;72.0℃延伸10 min,12.0℃结束反应。建立的三重PCR能同时扩增出NDV(453 bp)、ChPV(687 bp)和AIV(239 bp)的特异性条带,对应的最低检测下限分别为2.5 pg NDV、6.4 pg ChPV和2.0 pg AIV,但扩增传染性支气管炎病毒(IBV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、马立克病毒(MDV)、传染性喉气管炎病毒(AILTV)和禽肺炎病毒(APV)等病原体均呈阴性。应用建立的三重PCR对50份鸡喉头或泄殖腔棉拭子样品进行检测,结果显示有1份NDV阳性、9份ChPV阳性和2份AIV阳性样品,其中包含2份ChPV和AIV均呈阳性的样品,1份ChPV和NDV均呈阳性的样品,与常规PCR的检测结果一致。【结论】建立的三重PCR能同时对NDV、ChPV和AIV 3种病原进行特异性诊断,在混合感染病例鉴别诊断方面具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 鸡新城疫病毒 鸡细小病毒 禽流感病毒 三重PCR 特异性 敏感性

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禽流感病毒与鸡细小病毒二重PCR检测方法的建立 被引量：8

2

作者 何莹 谢芝勋 +7 位作者 罗思思 李孟 谢丽基 邓显文 谢志勤 奉彬 黄娇玲 张艳芳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第7期2126-2131,共6页

为建立一种能同时鉴别诊断禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV)的检测方法,本研究根据GenBank中AIV的M基因和ChPV的NS基因保守序列,分别设计并筛选出两对特异性引物,用于AIV和ChPV的检测。通... 为建立一种能同时鉴别诊断禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV)的检测方法,本研究根据GenBank中AIV的M基因和ChPV的NS基因保守序列,分别设计并筛选出两对特异性引物,用于AIV和ChPV的检测。通过优化反应条件,建立了AIV和ChPV二重PCR检测方法。试验结果表明,该方法特异好,能同时检测AIV和ChPV,对其他常见的禽病病原体均未反应;该法对AIV和ChPV的检测下限均为100fg;对159份临床样品检测结果与PCR阳性产物测序结果一致。本研究建立的AIV和ChPV二重PCR检测方法具有特异性好、灵敏度高的特点,对AIV和ChPV的防制具有重要意义。 展开更多

关键词 禽流感病毒(AIV) 鸡细小病毒(chpv) 二重PCR 检测

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2019—2020年河北省鸡细小病毒分子流行病学调查及NS基因序列分析 被引量：1

3

作者 陈立保 陈立功 +6 位作者 丁芳 高磊 徐凤苍 段淇凡 王学静 刘聚祥 李玉荣 《中国家禽》 北大核心 2021年第11期28-33,共6页

为了解河北省鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)在小肠有出血斑病变的鸡群中的流行及遗传变异情况,研究针对ChPV的非结构(NS)蛋白基因设计特异性检测引物,采用PCR方法对送检的151份样品进行检测,并对部分阳性病料中ChPV NS基因进行... 为了解河北省鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)在小肠有出血斑病变的鸡群中的流行及遗传变异情况,研究针对ChPV的非结构(NS)蛋白基因设计特异性检测引物,采用PCR方法对送检的151份样品进行检测,并对部分阳性病料中ChPV NS基因进行测序和遗传进化分析。流行病学调查结果显示:ChPV阳性率为48.3%;肉鸡和蛋鸡的阳性率分别为64.3%和44.7%,且幼龄鸡群的阳性率较高;4~5月份和7~8月份样品中ChPV的阳性率较高。序列分析显示测序病料中ChPV/CK/CH/HBSJZ/61株、ChPV/CK/CH/HBBD/62株和ChPV/CK/CH/HBSJZ/68株均与参考毒株ChPV/Poland/G090/2011核苷酸序列同源性最高(98.8%~99.1%),属于火鸡细小病毒(Turkey parvovirus,TuPV)亚群;ChPV/CK/CH/HBZJK/17株与参考毒株GX-CH-PV-17和GX-CH-PV-14的核苷酸序列同源性最高(均为99.7%),属于ChPV亚群。结果表明:河北省有出血斑病变的鸡小肠中ChPV检出率较高,测序样品中ChPV分别属于ChPV亚群和TuPV亚群。 展开更多

关键词 鸡 小肠 细小病毒 流行病学 序列分析

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2株鸡细小病毒全基因组序列测定与分析 被引量：2

4

作者 高倩文 王君娜 +2 位作者 张宇名 尹燕博 徐守振 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第9期15-19,I0002,共6页

为了解近年来鸡细小病毒(ChPV)流行毒株的全基因组基因特征和分子进化规律,本研究对2018年从山东潍坊和河南濮阳肠炎综合征病例中检测到的2株ChPV-SDWF和ChPV-HNPY进行了基因组克隆和序列测定。应用MEGA 5.02、SimPlot 3.5.1、Phyre 2... 为了解近年来鸡细小病毒(ChPV)流行毒株的全基因组基因特征和分子进化规律,本研究对2018年从山东潍坊和河南濮阳肠炎综合征病例中检测到的2株ChPV-SDWF和ChPV-HNPY进行了基因组克隆和序列测定。应用MEGA 5.02、SimPlot 3.5.1、Phyre 2等生物信息学软件对基因结构、遗传变异、重组情况及VP2蛋白3D结构进行了分析。结果显示,2株分离株基因组序列长度均为4615 bp,核苷酸同源性为96.9%;ChPV-SDWF株和ChPV-HNPY株与不同参考株的核苷酸同源性分别为80.6%~95.7%、80.1%~95.4%。2株分离株与美国火鸡细小病毒参考株TuPV-260株和匈牙利ChPV参考株ChPV-ABU-P1亲缘关系较近,属于同一个分支。分离株没有出现重组现象,核苷酸同源性由高到低依次为NS1基因、VP1基因、VP2基因。VP2蛋白3D结构含有8条反向平行的β折叠围成的桶,表面存在4个Loop,其中Loop3和Loop4变异最大。本研究可进一步了解我国ChPV的基因特征和遗传变异情况,为ChPV的监测及防控提供理论依据。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 基因组 遗传进化

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一例鸡细小病毒、鸡传染性贫血病毒及鸡传染性支气管炎病毒共感染病例的检测 被引量：1

5

作者 张龙 林裕胜 +3 位作者 江锦秀 张靖鹏 黄潇航 胡奇林 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1033-1041,共9页

【目的】对福建省南平市某肉鸡场不明病因造成肉鸡死亡的病原进行确诊。【方法】通过对鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)、腺病毒(Fowl adenovirus, FadV)、鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)、新城疫病毒(Ne... 【目的】对福建省南平市某肉鸡场不明病因造成肉鸡死亡的病原进行确诊。【方法】通过对鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)、腺病毒(Fowl adenovirus, FadV)、鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)、新城疫病毒(Newcastlediseasevirus, NDV)、鸡传染性贫血病毒(Chickeninfectiousanemiavirus,CIAV)、传染性法氏囊病毒(InfectiousbursalDiseasevirus, IBDV)、喉气管炎病毒(Laryngotracheitisvirus,LTV)、禽肾炎病毒(Avian nephritis virus,ANV)等病原进行PCR检测,并对扩增片段进行克隆测序,利用生物信息学软件对测序结果进行分析。【结果】PCR检测结果及测序结果显示:鸡细小病毒ChPV、鸡传染性支气管炎病毒IBV、鸡传染性贫血病病毒CIAV为阳性,其余病原检测结果均为阴性。同源性分析结果显示分离株与ChPV的同源性为92.17%~100%,与IBV的同源性为76.9%~84.3%,与CIAV的同源性为91.19%~92.14%;遗传进化树分析结果显示分离到的IBV毒株及CIAV毒株均独处于一个单独的分支,分离到的ChPV毒株与广西参考株亲缘关系较近。【结论】从南平市某鸡场检测到ChPV、IBV、CIAV等3种病原的共感染病例,分离到的IBV毒株的S1基因及CIAV毒株的VP1基因可能已经发生变异。 展开更多

关键词 鸡传染性贫血病毒 传染性支气管炎病毒 鸡细小病毒 共感染

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鸡细小病毒半巢式PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：12

6

作者 奉彬 谢芝勋 +12 位作者 张艳芳 黄娇玲 王盛 范晴 黄莉 谢丽基 曾婷婷 罗思思 邓显文 谢志勤 刘加波 宋中宝 林二克 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第5期1295-1301,共7页

为建立一种快速、特异、灵敏的检测鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV)的方法,根据ChPV的保守基因NS1设计了3条特异性引物,建立并优化了能快速检测ChPV的半巢式PCR方法,对其进行特异性和敏感性试验,并用所建立的方法对48份临床样品进... 为建立一种快速、特异、灵敏的检测鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV)的方法,根据ChPV的保守基因NS1设计了3条特异性引物,建立并优化了能快速检测ChPV的半巢式PCR方法,对其进行特异性和敏感性试验,并用所建立的方法对48份临床样品进行了检测。特异性和敏感性试验结果显示,建立的半巢式PCR只对ChPV敏感,扩增产物为186bp的特异性条带;其最低能检测到5.62fg/μL的ChPV DNA;而对鸡新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒、马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸡传染性支气管炎病毒不敏感。临床检测结果显示,同时对48份临床样品进行检测,检出率为16.67%(8/48),提示广西区内鸡群存在ChPV感染。本研究建立的ChPV半巢式PCR方法适用于ChPV的临床检测。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 半巢式PCR 检测

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鸡细小病毒与禽呼肠病毒二重PCR检测方法的建立 被引量：9

7

作者 奉彬 谢芝勋 +10 位作者 邓显文 张艳芳 黄娇玲 王盛 范晴 谢志勤 黄莉 谢丽基 曾婷婷 罗思思 刘加波 《动物医学进展》 北大核心 2016年第11期14-18,共5页

建立可同时检测鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)与禽呼肠病毒(Avian reovirus,ARV)的二重PCR方法,为防控ChPV与ARV提供技术支撑。根据鸡细小病毒NS1基因和禽呼肠病毒σC基因的保守序列,设计合成两对引物用于检测ChPV和ARV,通过优... 建立可同时检测鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)与禽呼肠病毒(Avian reovirus,ARV)的二重PCR方法,为防控ChPV与ARV提供技术支撑。根据鸡细小病毒NS1基因和禽呼肠病毒σC基因的保守序列,设计合成两对引物用于检测ChPV和ARV,通过优化二重PCR的反应体系,特异性、敏感性试验评价建立的ChPV与ARV二重PCR。优化后的二重PCR反应体系为:2×PCR Mix 12.5μL,其中ChPV与ARV的上、下游引物各1.0μL,混合模板2.0μL,ddH2O补足25μL;最佳的反应程序为:95℃5min;95℃1min,56.1℃1min,72℃1min,35个循环;最后72℃延伸10min。结果显示,建立的二重PCR能够同时扩增出204bp ChPV和405bp ARV片段;该方法对ChPV与ARV的检测敏感性分别达到58fg和53fg,但对鸡新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒、马立克病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸡传染性支气管炎病毒等病原体均无特异性扩增,对ChPV与ARV混合感染的临床阳性病料的检测结果与各病毒单项PCR检测结果符合率为94%以上。建立的二重PCR可用于ChPV与ARV感染的快速鉴别诊断。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 禽呼肠病毒 二重PCR 特异性 敏感性

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鸡传染性贫血病毒与鸡细小病毒双重PCR检测方法的建立 被引量：3

8

作者 张艳芳 谢芝勋 +9 位作者 邓显文 谢志勤 张民秀 罗思思 谢丽基 范晴 曾婷婷 黄娇玲 王盛 刘加波 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第4期21-24,共4页

为研究一种可同时检测鸡传染性贫血病毒(CIAV)和鸡细小病毒(ChPV)的双重PCR方法,本试验根据GenBank中CIAV的VP基因和ChPV的NS1基因的保守序列,设计筛选了扩增片段大小分别为219 bp和384 bp的特异性引物,通过对反应条件的优化,特异性和... 为研究一种可同时检测鸡传染性贫血病毒(CIAV)和鸡细小病毒(ChPV)的双重PCR方法,本试验根据GenBank中CIAV的VP基因和ChPV的NS1基因的保守序列,设计筛选了扩增片段大小分别为219 bp和384 bp的特异性引物,通过对反应条件的优化,特异性和敏感性试验,建立和评价双重PCR检测方法。结果显示,该方法最佳引物比例为CIAV上下游引物各0.4μL(20μmol/L),ChPV上下游引物各0.6μL(20μmol/L);最佳退火温度为56.1℃;灵敏度可达到66 fg(CIAV)和78 fg(ChPV);对常见鸡病病原体进行检测,结果全为阴性。结果表明,本试验所建立的双重PCR方法具有特异、敏感、快速、稳定等优点和优势,可用于同时快速鉴别诊断CIAV和ChPV的混合感染。 展开更多

关键词 鸡传染性贫血病毒 鸡细小病毒 多重PCR

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鸡细小病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及应用 被引量：2

9

作者 张艳芳 谢芝勋 +7 位作者 谢志勤 张民秀 曾婷婷 邓显文 谢丽基 罗思思 黄娇玲 李孟 《动物医学进展》 北大核心 2023年第4期25-30,共6页

旨在建立一种可定量检测鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)新型检测方法。引物设计参考了GenBank中ChPV的NS基因保守序列,筛选了特异性探针引物组,采用不同探针引物浓度组合和退火温度... 旨在建立一种可定量检测鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)新型检测方法。引物设计参考了GenBank中ChPV的NS基因保守序列,筛选了特异性探针引物组,采用不同探针引物浓度组合和退火温度梯度对反应条件进行优化,并通过使用该方法与荧光定量PCR(qPCR)和普通PCR方法进行灵敏度比较,同时对其他常见禽病病原体进行检测,以及对40份临床样品进行检测,评估了该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示,该方法最佳引物浓度均为900 nmol/L,最佳探针浓度为600 nmol/L;最佳退火温度为54.0℃;灵敏度比qPCR和普通PCR分别高10倍和1000倍,最低检测限为4.5 copies/μL;对其他常见禽病病原体进行ChPV微滴式数字PCR检测,结果均为阴性;批内和批间重复性较好,变异系数小。结果表明,所建立的ddPCR方法具有更高的敏感性和准确性,可成功用于快速定量检测ChPV感染。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 微滴式数字PCR 敏感性 特异性

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禽肾炎病毒与鸡细小病毒双重PCR检测方法的建立 被引量：2

10

作者 张艳芳 谢芝勋 +8 位作者 邓显文 谢志勤 张民秀 罗思思 谢丽基 范晴 曾婷婷 黄娇玲 刘加波 《中国动物检疫》 CAS 2019年第12期58-62,共5页

为了同时检测禽肾炎病毒(avian nephritis virus,ANV)和鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV),根据GenBank中ANV的ORF基因和ChPV的NS1基因的保守序列,设计筛选了扩增片段大小分别为511 bp和242 bp的特异性引物,通过反应条件优化、特异... 为了同时检测禽肾炎病毒(avian nephritis virus,ANV)和鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV),根据GenBank中ANV的ORF基因和ChPV的NS1基因的保守序列,设计筛选了扩增片段大小分别为511 bp和242 bp的特异性引物,通过反应条件优化、特异性和敏感性试验,建立了一种双重PCR检测方法。该方法最佳引物比例为ANV上下引物各0.4μL(20 mol/L),ChPV上下引物各0.6μL(20 mol/L);最佳退火温度为53.8℃;灵敏度可达到55 fg(ANV)和58 fg(ChPV);对常见鸡病病原体进行检测,结果全为阴性。本研究建立的PCR方法具有特异、敏感、快速、稳定的优点,可用于同时鉴别诊断ANV和ChPV的混合感染。 展开更多

关键词 禽肾炎病毒 鸡细小病毒 多重PCR 特异性 敏感性

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表达番鸭细小病毒VP3基因重组鸡痘病毒转移载体的构建 被引量：1

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作者 李林林 孙敏华 +5 位作者 董嘉文 向蓉 袁建丰 邝瑞欢 胡奇林 张建峰 《广东农业科学》 CAS 2015年第3期134-139,F0003,共7页

根据Genbank上痘病毒TK基因序列分别设计左右同源臂引物TKL-F/R和TKR-F/R,以FPV基因组为模板,扩增左右同源重组臂(TKL、TKR);PCR连接左右同源臂,使中间带有多酶切位点MCS,然后连入pBluescriptIISK(+)骨架质粒,获得的阳性质粒命名为pTK;... 根据Genbank上痘病毒TK基因序列分别设计左右同源臂引物TKL-F/R和TKR-F/R,以FPV基因组为模板,扩增左右同源重组臂(TKL、TKR);PCR连接左右同源臂,使中间带有多酶切位点MCS,然后连入pBluescriptIISK(+)骨架质粒,获得的阳性质粒命名为pTK;合成反向串联表达盒:p7.5-MCS1-SV40-MCS2-P11,将表达盒插入质粒pTK的MCS位点,筛选获得阳性质粒pTKS;在鸡痘病毒早期启动子P7.5后的MCS1处插入MDPVVP3基因,晚期启动子P11后的MCS2处插入EGFPBGHpA,从而构建MDPVVP3基因重组鸡痘病毒转移载体pTKS-VP3-EGFP,对构建好的转移载体进行酶切和测序鉴定。将转移载体pTKS-VP3-EGFP转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)后,经RT-PCR和绿色荧光蛋白基因表达鉴定了MDPVVP3基因的表达,为进一步研制安全、高效的MDPV重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 番鸭细小病毒 VP3基因 重组鸡痘病毒

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鸡细小病毒和鸡新城疫病毒双重PCR检测方法的建立 被引量：1

12

作者 奉彬 谢芝勋 +9 位作者 邓显文 张艳芳 谢丽基 谢志勤 范晴 曾婷婷 罗思思 黄娇玲 王盛 刘加波 《动物医学进展》 北大核心 2019年第10期1-5,共5页

旨在建立鸡细小病毒(ChPV)与鸡新城疫病毒(NDV)双重PCR检测方法,参考ChPV NS1基因和NDV F基因的保守区域,设计筛选、合成验证两对ChPV和NDV特异性引物,通过优化其反应体系,以及双重PCR的特异性、敏感性试验来评估建立的ChPV与NDV双重PC... 旨在建立鸡细小病毒(ChPV)与鸡新城疫病毒(NDV)双重PCR检测方法,参考ChPV NS1基因和NDV F基因的保守区域,设计筛选、合成验证两对ChPV和NDV特异性引物,通过优化其反应体系,以及双重PCR的特异性、敏感性试验来评估建立的ChPV与NDV双重PCR检测方法。结果表明,建立的双重PCR同时扩增出687 bp ChPV和453 bp NDV片段,对ChPV与NDV的敏感性分别达到64 fg和25 fg,但对其他对照组病原体均无扩增,对ChPV与NDV混合感染的临床病料的检测结果与各病毒单项PCR检测结果相符。说明建立的ChPV与NDV双重PCR检测方法可用于临床上两种病毒混合感染的快速诊断。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 鸡新城疫病毒 双重PCR 特异性 敏感性

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鸡细小病毒NS1和VP2蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：1

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作者 廖健淇 谢芝勋 +10 位作者 张民秀 张艳芳 罗思思 李孟 谢志勤 谢丽基 邓显文 范晴 曾婷婷 黄娇玲 王盛 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期419-426,共8页

【目的】原核表达鸡细小病毒(ChPV)的NS1和VP2蛋白,制备其多克隆抗体,为深入探究ChPV蛋白结构功能及建立血清学诊断方法提供物质基础。【方法】通过合成ChPV GX-Ch-PV-21毒株的NS1和VP2蛋白基因序列,构建原核重组表达载体pET-32a-NS1和p... 【目的】原核表达鸡细小病毒(ChPV)的NS1和VP2蛋白,制备其多克隆抗体,为深入探究ChPV蛋白结构功能及建立血清学诊断方法提供物质基础。【方法】通过合成ChPV GX-Ch-PV-21毒株的NS1和VP2蛋白基因序列,构建原核重组表达载体pET-32a-NS1和pET-32a-VP2,将测序正确的重组质粒转化至大肠杆菌transsetta感受态细胞进行原核表达,优化表达条件,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳和免疫印迹(Western-blotting)方法鉴定NS1和VP2蛋白的表达情况。将表达产物免疫无特定病原体(SPF)鸡获得多克隆抗体,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法测定其效价,以Western-blotting和间接免疫荧光试验(IFA)对多克隆抗体进行鉴定。【结果】SDS-PAGE分析显示,NS1和VP2蛋白条带大小分别约为104和87 kD,与预期条带大小相符。对重组质粒pET-32a-VP2和pET-32a-NS1进行最佳诱导条件筛选,结果显示NS1蛋白表达的最佳诱导条件为异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)终浓度1.0 mmol/mL,16℃诱导表达过夜;VP2蛋白表达的最佳诱导条件为IPTG终浓度0.8 mmol/mL,20℃诱导表达过夜。可溶性分析显示,NS1和VP2蛋白主要以包涵体形式存在;间接ELISA检测NS1和VP2蛋白的多克隆抗体效价均为1∶10 240 000;Western-blotting鉴定表明,His标签蛋白和相对应的鸡多克隆抗体均能与NS1和VP2蛋白特异性结合;IFA分析显示,VP2和NS1蛋白多克隆抗体均能与ChPV特异性结合。【结论】本研究成功表达ChPV的NS1和VP2蛋白和制备的鸡多克隆抗体,可作为深入探究ChPV蛋白结构功能及建立ChPV血清学诊断方法的基础材料。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 原核表达 NS1蛋白 VP2蛋白 多克隆抗体

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鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒二重PCR检测方法的建立 被引量：1

14

作者 李丹 谢芝勋 +10 位作者 李孟 罗思思 谢丽基 张民秀 黄娇玲 范晴 王盛 谢志勤 邓显文 曾婷婷 张艳芳 《安徽农业科学》 CAS 2020年第9期113-116,共4页

[目的]建立一种能够同时诊断鸡细小病毒(chincken parvovirus,ChPV)和H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的检测方法。[方法]根据GenBank中已发表的ChPV NS基因、H9亚型AIV HA基因的保守序列,分别设计多对引物,并通过一系列... [目的]建立一种能够同时诊断鸡细小病毒(chincken parvovirus,ChPV)和H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的检测方法。[方法]根据GenBank中已发表的ChPV NS基因、H9亚型AIV HA基因的保守序列,分别设计多对引物,并通过一系列不同组合对温度和反应体系的调整试验,最终筛选出2对最佳特异性引物组合,建立了ChPV和AIV二重PCR检测方法用于ChPV和H9亚型AIV的检测。[结果]特异性和敏感性的试验结果表明,建立的二重PCR方法特异性良好,可以在一管PCR反应同时检测ChPV和H9亚型AIV。针对ChPV NS基因和H9亚型AIV HA基因的扩增片段大小分别为558和367 bp,其他常见的禽病病原体均未见阳性反应;该法对ChPV和H9亚型AIV的检测下限均为5×10^4拷贝/μL质粒;临床样品检测结果表明,对140份临床样品检测结果与AIV分离测序及ChPV PCR阳性产物测序结果完全一致。[结论]建立的ChPV和H9亚型AIV二重PCR检测方法不仅特异性良好,而且检测的灵敏度高,对ChPV和H9亚型AIV的监测及有效防控具有重要意义。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 H9亚型禽流感病毒 二重PCR

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鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒三重PCR检测方法的建立 被引量：2

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作者 李丹 谢芝勋 +10 位作者 李孟 谢丽基 罗思思 张艳芳 张民秀 黄娇玲 范晴 王盛 谢志勤 邓显文 曾婷婷 《家禽科学》 2020年第1期14-19,22,共7页

为建立一种能够同时鉴别诊断鸡细小病毒、禽流感病毒且同时区分H9亚型禽流感病毒的检测方法,本研究根据GenBank中已发表的ChPV的NS基因、AIV最保守的M基因和H9亚型AIV的HA基因的保守序列,分别设计引物,并通过对温度和反应体系的优化,筛... 为建立一种能够同时鉴别诊断鸡细小病毒、禽流感病毒且同时区分H9亚型禽流感病毒的检测方法,本研究根据GenBank中已发表的ChPV的NS基因、AIV最保守的M基因和H9亚型AIV的HA基因的保守序列,分别设计引物,并通过对温度和反应体系的优化,筛选出最佳的三对特异性引物组合,建立了一种能同时检测ChPV、AIV和H9亚型AIV的三重PCR检测方法。特异性试验结果表明,建立的三重PCR方法可以在一PCR反应中同时检测ChPV、AIV和H9亚型AIV,其它常见的禽病病原体均未见阳性反应,该三重PCR方法特异性良好;敏感性试验表明,该三重PCR检测方法对ChPV、AIV和H9亚型AIV的检测下限均为5×10^4拷贝/μL质粒;运用该法对130份临床样品进行检测,结果与ChPV PCR阳性产物测序及AIV分离测序结果完全一致。因此,本研究建立的ChPV和H9亚型AIV三重PCR检测方法是一种特异性良好、灵敏度高、简便有效的检测方法。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 H9亚型禽流感病毒 M基因 三重PCR

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捕获ELISA可用于鉴定鸡细小病毒特异性抗体

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《中国家禽》 北大核心 2010年第4期70-70,共1页

最近，美国农业部农业研究服务处的科研人员开发了一种酶联免疫吸附试验（ELISA）用来检测鸡血清中的特异性细小病毒抗体。他们采用重组杆状病毒载体对鸡细小病毒的结构性蛋白2（VP2）在昆虫细胞中进行了表达。

关键词 特异性抗体 细小病毒 鸡血清 ELISA 酶联免疫吸附试验 鉴定 捕获 杆状病毒载体

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雏鸡贫血因子和细小病毒

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作者 卢建国 J.B.McFerran S.McNulty 《国外畜牧学（猪与禽）》 1991年第2期62-63,共2页

关于细小病毒细小病毒(Parvovirus)被发现已有好多年了。侵害人和家畜、家禽的细小病毒都各不相同。这类病毒的大小约为22～25毫微米,含有一条单链直线状的 DNA,其在氯化铯中的密度为每立方厘米1.4克。有些细小病毒可独立生活,称为“自... 关于细小病毒细小病毒(Parvovirus)被发现已有好多年了。侵害人和家畜、家禽的细小病毒都各不相同。这类病毒的大小约为22～25毫微米,含有一条单链直线状的 DNA,其在氯化铯中的密度为每立方厘米1.4克。有些细小病毒可独立生活,称为“自由生活细小病毒”;其他细小病毒则只是在存在腺病毒的情况下才有活力,这些就被称为腺病毒依赖性细小病毒。尚未发现腺病毒依赖性细小病毒可引起疾病,但“自由生活细小病毒”则可引起多种重要疾病,如猪的繁殖障碍、幼犬的心脏病和成年犬的腹泻,以及鹅的 Derzsy's 病。 展开更多

关键词 鸡 雏鸡 贫血 细小病毒

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2021年福建省龙岩市病死鸡群中4种病毒感染情况调查 被引量：5

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作者 陈长福 《中国动物检疫》 CAS 2022年第2期15-20,共6页

为探明2021年龙岩市规模化鸡场鸡传染性贫血病病毒(CIAV)、圆圈病毒3型(GyV3)、鸡细小病毒(ChPV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)等4种病毒的感染情况,对龙岩市32个规模化鸡场采集的297份病死鸡组织样品进行PCR或RT-PCR检测,并对检测结果进... 为探明2021年龙岩市规模化鸡场鸡传染性贫血病病毒(CIAV)、圆圈病毒3型(GyV3)、鸡细小病毒(ChPV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)等4种病毒的感染情况,对龙岩市32个规模化鸡场采集的297份病死鸡组织样品进行PCR或RT-PCR检测,并对检测结果进行统计分析。结果显示:CIAV、GyV3、ChPV和ALV-J均有检出,阳性检出率分别为34.34%、28.62%、18.86%、13.13%;从病原分布看,CIAV分布最广,除漳平市外其余6个区县均有检出,各区县检出率介于12.00%~98.00%;其他3种病原呈局限性分布,均只在4个区县有检出。共检出单一感染阳性样品79份,总单一感染阳性检出率为26.60%(79/297),单一感染阳性检出率从高到低依次为Ch PV(14.81%)、CIAV(5.05%)、ALV-J(4.71%)、Gy V3(2.02%)。CIAV+Ch PV双重感染阳性检出率为2.69%(8/297),CIAV+GyV3为18.18%(54/297);CIAV+ALV-J+GyV3三重感染阳性检出率为7.07%(21/297),CIAV+ChPV+ALV-J+GyV3四重感染为1.34%(4/297)。结果表明:龙岩市鸡群中存在CIAV、ALV-J、ChPV和GyV34种病原的感染,且部分地区感染较为严重,混合感染现象普遍,提示龙岩市应积极开展疫病监测,加强鸡场的生物安全综合防控。 展开更多

关键词 感染情况调查 鸡传染性贫血病病毒 鸡细小病毒 圆圈病毒3型 J亚群禽白血病病毒 规模化鸡场 龙岩市

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猪细小病毒感染的防治 被引量：1

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作者 庞海龙 《中兽医学杂志》 2019年第1期19-19,共1页

猪细小病毒(PPV)可引起以胚胎和胎儿感染及死亡为特征的猪繁殖失能,通常母猪本身并无明显症状。近年来我国某些地区发现有本病存在。猪细小病毒属细小病毒科细小病毒属。病毒能凝集人(0型)、猴、豚鼠、猫、鸡、大鼠和小鼠等动物的红细胞。

关键词 细小病毒感染 猪细小病毒 防治 红细胞 母猪 猫 鸡

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伪狂犬病病毒血凝及血凝抑制试验 被引量：4

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作者 刘贺生 崔保安 何宝祥 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第12期20-21,共2页

关键词 伪狂犬病病毒 血凝抑制试验 鸡传染性喉气管炎病毒 牛疱疹病毒 猪细小病毒 鼻气管炎病毒 乙型脑炎病毒 伪狂犬病毒 virus 红细胞

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