鸡新城疫病毒、鸡细小病毒和禽流感病毒三重PCR检测方法的建立及应用 被引量：8

1

作者 奉彬 谢芝勋 +7 位作者 邓显文 张艳芳 谢丽基 谢志勤 范晴 曾婷婷 罗思思 黄娇玲 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2576-2582,共7页

【目的】建立能同时检测鸡新城疫病毒(NDV)、鸡细小病毒(ChPV)和禽流感病毒(AIV)的三重PCR检测方法,为临床上快速诊断及有效防控NDV、ChPV和AIV的单一或混合感染提供技术支持。【方法】参考NCBI中已公布NDV的F基因(登录号DQ195265.1)、C... 【目的】建立能同时检测鸡新城疫病毒(NDV)、鸡细小病毒(ChPV)和禽流感病毒(AIV)的三重PCR检测方法,为临床上快速诊断及有效防控NDV、ChPV和AIV的单一或混合感染提供技术支持。【方法】参考NCBI中已公布NDV的F基因(登录号DQ195265.1)、ChPV的NS1基因(登录号GU214704.1)和AIV的M基因保守区(登录号DQ485211.1),设计合成针对NDV、ChPV和AIV的特异性引物,应用这3对引物建立三重PCR检测方法,对反应体系及扩增程序进行优化,并通过特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测等评估其实用性。【结果】优化后的三重PCR反应体系为ChPV和AIV的上、下游引物各0.5μL,NDV的上、下游引物各1.0μL,NDV、ChPV和AIV的核酸模板各1.0μL,Premix TaqTM 12.5μL,无RNase水补足至25.0μL。最佳扩增程序:95.0℃预变性5 min;94.0℃1 min,58.5℃1 min,72.0℃1 min,进行35个循环;72.0℃延伸10 min,12.0℃结束反应。建立的三重PCR能同时扩增出NDV(453 bp)、ChPV(687 bp)和AIV(239 bp)的特异性条带,对应的最低检测下限分别为2.5 pg NDV、6.4 pg ChPV和2.0 pg AIV,但扩增传染性支气管炎病毒(IBV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、马立克病毒(MDV)、传染性喉气管炎病毒(AILTV)和禽肺炎病毒(APV)等病原体均呈阴性。应用建立的三重PCR对50份鸡喉头或泄殖腔棉拭子样品进行检测,结果显示有1份NDV阳性、9份ChPV阳性和2份AIV阳性样品,其中包含2份ChPV和AIV均呈阳性的样品,1份ChPV和NDV均呈阳性的样品,与常规PCR的检测结果一致。【结论】建立的三重PCR能同时对NDV、ChPV和AIV 3种病原进行特异性诊断,在混合感染病例鉴别诊断方面具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 鸡新城疫病毒 鸡细小病毒 禽流感病毒 三重PCR 特异性 敏感性

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禽流感病毒与鸡细小病毒二重PCR检测方法的建立 被引量：8

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作者 何莹 谢芝勋 +7 位作者 罗思思 李孟 谢丽基 邓显文 谢志勤 奉彬 黄娇玲 张艳芳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第7期2126-2131,共6页

为建立一种能同时鉴别诊断禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV)的检测方法,本研究根据GenBank中AIV的M基因和ChPV的NS基因保守序列,分别设计并筛选出两对特异性引物,用于AIV和ChPV的检测。通... 为建立一种能同时鉴别诊断禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV)的检测方法,本研究根据GenBank中AIV的M基因和ChPV的NS基因保守序列,分别设计并筛选出两对特异性引物,用于AIV和ChPV的检测。通过优化反应条件,建立了AIV和ChPV二重PCR检测方法。试验结果表明,该方法特异好,能同时检测AIV和ChPV,对其他常见的禽病病原体均未反应;该法对AIV和ChPV的检测下限均为100fg;对159份临床样品检测结果与PCR阳性产物测序结果一致。本研究建立的AIV和ChPV二重PCR检测方法具有特异性好、灵敏度高的特点,对AIV和ChPV的防制具有重要意义。 展开更多

关键词 禽流感病毒(AIV) 鸡细小病毒(ChPV) 二重PCR 检测

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2株鸡细小病毒全基因组序列测定与分析 被引量：2

3

作者 高倩文 王君娜 +2 位作者 张宇名 尹燕博 徐守振 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第9期15-19,I0002,共6页

为了解近年来鸡细小病毒(ChPV)流行毒株的全基因组基因特征和分子进化规律,本研究对2018年从山东潍坊和河南濮阳肠炎综合征病例中检测到的2株ChPV-SDWF和ChPV-HNPY进行了基因组克隆和序列测定。应用MEGA 5.02、SimPlot 3.5.1、Phyre 2... 为了解近年来鸡细小病毒(ChPV)流行毒株的全基因组基因特征和分子进化规律,本研究对2018年从山东潍坊和河南濮阳肠炎综合征病例中检测到的2株ChPV-SDWF和ChPV-HNPY进行了基因组克隆和序列测定。应用MEGA 5.02、SimPlot 3.5.1、Phyre 2等生物信息学软件对基因结构、遗传变异、重组情况及VP2蛋白3D结构进行了分析。结果显示,2株分离株基因组序列长度均为4615 bp,核苷酸同源性为96.9%;ChPV-SDWF株和ChPV-HNPY株与不同参考株的核苷酸同源性分别为80.6%~95.7%、80.1%~95.4%。2株分离株与美国火鸡细小病毒参考株TuPV-260株和匈牙利ChPV参考株ChPV-ABU-P1亲缘关系较近,属于同一个分支。分离株没有出现重组现象,核苷酸同源性由高到低依次为NS1基因、VP1基因、VP2基因。VP2蛋白3D结构含有8条反向平行的β折叠围成的桶,表面存在4个Loop,其中Loop3和Loop4变异最大。本研究可进一步了解我国ChPV的基因特征和遗传变异情况,为ChPV的监测及防控提供理论依据。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 基因组 遗传进化

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一例鸡细小病毒、鸡传染性贫血病毒及鸡传染性支气管炎病毒共感染病例的检测 被引量：1

4

作者 张龙 林裕胜 +3 位作者 江锦秀 张靖鹏 黄潇航 胡奇林 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1033-1041,共9页

【目的】对福建省南平市某肉鸡场不明病因造成肉鸡死亡的病原进行确诊。【方法】通过对鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)、腺病毒(Fowl adenovirus, FadV)、鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)、新城疫病毒(Ne... 【目的】对福建省南平市某肉鸡场不明病因造成肉鸡死亡的病原进行确诊。【方法】通过对鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)、腺病毒(Fowl adenovirus, FadV)、鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)、新城疫病毒(Newcastlediseasevirus, NDV)、鸡传染性贫血病毒(Chickeninfectiousanemiavirus,CIAV)、传染性法氏囊病毒(InfectiousbursalDiseasevirus, IBDV)、喉气管炎病毒(Laryngotracheitisvirus,LTV)、禽肾炎病毒(Avian nephritis virus,ANV)等病原进行PCR检测,并对扩增片段进行克隆测序,利用生物信息学软件对测序结果进行分析。【结果】PCR检测结果及测序结果显示:鸡细小病毒ChPV、鸡传染性支气管炎病毒IBV、鸡传染性贫血病病毒CIAV为阳性,其余病原检测结果均为阴性。同源性分析结果显示分离株与ChPV的同源性为92.17%~100%,与IBV的同源性为76.9%~84.3%,与CIAV的同源性为91.19%~92.14%;遗传进化树分析结果显示分离到的IBV毒株及CIAV毒株均独处于一个单独的分支,分离到的ChPV毒株与广西参考株亲缘关系较近。【结论】从南平市某鸡场检测到ChPV、IBV、CIAV等3种病原的共感染病例,分离到的IBV毒株的S1基因及CIAV毒株的VP1基因可能已经发生变异。 展开更多

关键词 鸡传染性贫血病毒 传染性支气管炎病毒 鸡细小病毒 共感染

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鸡细小病毒半巢式PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：12

5

作者 奉彬 谢芝勋 +12 位作者 张艳芳 黄娇玲 王盛 范晴 黄莉 谢丽基 曾婷婷 罗思思 邓显文 谢志勤 刘加波 宋中宝 林二克 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第5期1295-1301,共7页

为建立一种快速、特异、灵敏的检测鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV)的方法,根据ChPV的保守基因NS1设计了3条特异性引物,建立并优化了能快速检测ChPV的半巢式PCR方法,对其进行特异性和敏感性试验,并用所建立的方法对48份临床样品进... 为建立一种快速、特异、灵敏的检测鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV)的方法,根据ChPV的保守基因NS1设计了3条特异性引物,建立并优化了能快速检测ChPV的半巢式PCR方法,对其进行特异性和敏感性试验,并用所建立的方法对48份临床样品进行了检测。特异性和敏感性试验结果显示,建立的半巢式PCR只对ChPV敏感,扩增产物为186bp的特异性条带;其最低能检测到5.62fg/μL的ChPV DNA;而对鸡新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒、马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸡传染性支气管炎病毒不敏感。临床检测结果显示,同时对48份临床样品进行检测,检出率为16.67%(8/48),提示广西区内鸡群存在ChPV感染。本研究建立的ChPV半巢式PCR方法适用于ChPV的临床检测。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 半巢式PCR 检测

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鸡细小病毒与禽呼肠病毒二重PCR检测方法的建立 被引量：9

6

作者 奉彬 谢芝勋 +10 位作者 邓显文 张艳芳 黄娇玲 王盛 范晴 谢志勤 黄莉 谢丽基 曾婷婷 罗思思 刘加波 《动物医学进展》 北大核心 2016年第11期14-18,共5页

建立可同时检测鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)与禽呼肠病毒(Avian reovirus,ARV)的二重PCR方法,为防控ChPV与ARV提供技术支撑。根据鸡细小病毒NS1基因和禽呼肠病毒σC基因的保守序列,设计合成两对引物用于检测ChPV和ARV,通过优... 建立可同时检测鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)与禽呼肠病毒(Avian reovirus,ARV)的二重PCR方法,为防控ChPV与ARV提供技术支撑。根据鸡细小病毒NS1基因和禽呼肠病毒σC基因的保守序列,设计合成两对引物用于检测ChPV和ARV,通过优化二重PCR的反应体系,特异性、敏感性试验评价建立的ChPV与ARV二重PCR。优化后的二重PCR反应体系为:2×PCR Mix 12.5μL,其中ChPV与ARV的上、下游引物各1.0μL,混合模板2.0μL,ddH2O补足25μL;最佳的反应程序为:95℃5min;95℃1min,56.1℃1min,72℃1min,35个循环;最后72℃延伸10min。结果显示,建立的二重PCR能够同时扩增出204bp ChPV和405bp ARV片段;该方法对ChPV与ARV的检测敏感性分别达到58fg和53fg,但对鸡新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒、马立克病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸡传染性支气管炎病毒等病原体均无特异性扩增,对ChPV与ARV混合感染的临床阳性病料的检测结果与各病毒单项PCR检测结果符合率为94%以上。建立的二重PCR可用于ChPV与ARV感染的快速鉴别诊断。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 禽呼肠病毒 二重PCR 特异性 敏感性

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鸡传染性贫血病毒与鸡细小病毒双重PCR检测方法的建立 被引量：3

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作者 张艳芳 谢芝勋 +9 位作者 邓显文 谢志勤 张民秀 罗思思 谢丽基 范晴 曾婷婷 黄娇玲 王盛 刘加波 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第4期21-24,共4页

为研究一种可同时检测鸡传染性贫血病毒(CIAV)和鸡细小病毒(ChPV)的双重PCR方法,本试验根据GenBank中CIAV的VP基因和ChPV的NS1基因的保守序列,设计筛选了扩增片段大小分别为219 bp和384 bp的特异性引物,通过对反应条件的优化,特异性和... 为研究一种可同时检测鸡传染性贫血病毒(CIAV)和鸡细小病毒(ChPV)的双重PCR方法,本试验根据GenBank中CIAV的VP基因和ChPV的NS1基因的保守序列,设计筛选了扩增片段大小分别为219 bp和384 bp的特异性引物,通过对反应条件的优化,特异性和敏感性试验,建立和评价双重PCR检测方法。结果显示,该方法最佳引物比例为CIAV上下游引物各0.4μL(20μmol/L),ChPV上下游引物各0.6μL(20μmol/L);最佳退火温度为56.1℃;灵敏度可达到66 fg(CIAV)和78 fg(ChPV);对常见鸡病病原体进行检测,结果全为阴性。结果表明,本试验所建立的双重PCR方法具有特异、敏感、快速、稳定等优点和优势,可用于同时快速鉴别诊断CIAV和ChPV的混合感染。 展开更多

关键词 鸡传染性贫血病毒 鸡细小病毒 多重PCR

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鸡细小病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及应用 被引量：2

8

作者 张艳芳 谢芝勋 +7 位作者 谢志勤 张民秀 曾婷婷 邓显文 谢丽基 罗思思 黄娇玲 李孟 《动物医学进展》 北大核心 2023年第4期25-30,共6页

旨在建立一种可定量检测鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)新型检测方法。引物设计参考了GenBank中ChPV的NS基因保守序列,筛选了特异性探针引物组,采用不同探针引物浓度组合和退火温度... 旨在建立一种可定量检测鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)新型检测方法。引物设计参考了GenBank中ChPV的NS基因保守序列,筛选了特异性探针引物组,采用不同探针引物浓度组合和退火温度梯度对反应条件进行优化,并通过使用该方法与荧光定量PCR(qPCR)和普通PCR方法进行灵敏度比较,同时对其他常见禽病病原体进行检测,以及对40份临床样品进行检测,评估了该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示,该方法最佳引物浓度均为900 nmol/L,最佳探针浓度为600 nmol/L;最佳退火温度为54.0℃;灵敏度比qPCR和普通PCR分别高10倍和1000倍,最低检测限为4.5 copies/μL;对其他常见禽病病原体进行ChPV微滴式数字PCR检测,结果均为阴性;批内和批间重复性较好,变异系数小。结果表明,所建立的ddPCR方法具有更高的敏感性和准确性,可成功用于快速定量检测ChPV感染。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 微滴式数字PCR 敏感性 特异性

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禽肾炎病毒与鸡细小病毒双重PCR检测方法的建立 被引量：2

9

作者 张艳芳 谢芝勋 +8 位作者 邓显文 谢志勤 张民秀 罗思思 谢丽基 范晴 曾婷婷 黄娇玲 刘加波 《中国动物检疫》 CAS 2019年第12期58-62,共5页

为了同时检测禽肾炎病毒(avian nephritis virus,ANV)和鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV),根据GenBank中ANV的ORF基因和ChPV的NS1基因的保守序列,设计筛选了扩增片段大小分别为511 bp和242 bp的特异性引物,通过反应条件优化、特异... 为了同时检测禽肾炎病毒(avian nephritis virus,ANV)和鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV),根据GenBank中ANV的ORF基因和ChPV的NS1基因的保守序列,设计筛选了扩增片段大小分别为511 bp和242 bp的特异性引物,通过反应条件优化、特异性和敏感性试验,建立了一种双重PCR检测方法。该方法最佳引物比例为ANV上下引物各0.4μL(20 mol/L),ChPV上下引物各0.6μL(20 mol/L);最佳退火温度为53.8℃;灵敏度可达到55 fg(ANV)和58 fg(ChPV);对常见鸡病病原体进行检测,结果全为阴性。本研究建立的PCR方法具有特异、敏感、快速、稳定的优点,可用于同时鉴别诊断ANV和ChPV的混合感染。 展开更多

关键词 禽肾炎病毒 鸡细小病毒 多重PCR 特异性 敏感性

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鸡细小病毒NS1和VP2蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：1

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作者 廖健淇 谢芝勋 +10 位作者 张民秀 张艳芳 罗思思 李孟 谢志勤 谢丽基 邓显文 范晴 曾婷婷 黄娇玲 王盛 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期419-426,共8页

【目的】原核表达鸡细小病毒(ChPV)的NS1和VP2蛋白,制备其多克隆抗体,为深入探究ChPV蛋白结构功能及建立血清学诊断方法提供物质基础。【方法】通过合成ChPV GX-Ch-PV-21毒株的NS1和VP2蛋白基因序列,构建原核重组表达载体pET-32a-NS1和p... 【目的】原核表达鸡细小病毒(ChPV)的NS1和VP2蛋白,制备其多克隆抗体,为深入探究ChPV蛋白结构功能及建立血清学诊断方法提供物质基础。【方法】通过合成ChPV GX-Ch-PV-21毒株的NS1和VP2蛋白基因序列,构建原核重组表达载体pET-32a-NS1和pET-32a-VP2,将测序正确的重组质粒转化至大肠杆菌transsetta感受态细胞进行原核表达,优化表达条件,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳和免疫印迹(Western-blotting)方法鉴定NS1和VP2蛋白的表达情况。将表达产物免疫无特定病原体(SPF)鸡获得多克隆抗体,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法测定其效价,以Western-blotting和间接免疫荧光试验(IFA)对多克隆抗体进行鉴定。【结果】SDS-PAGE分析显示,NS1和VP2蛋白条带大小分别约为104和87 kD,与预期条带大小相符。对重组质粒pET-32a-VP2和pET-32a-NS1进行最佳诱导条件筛选,结果显示NS1蛋白表达的最佳诱导条件为异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)终浓度1.0 mmol/mL,16℃诱导表达过夜;VP2蛋白表达的最佳诱导条件为IPTG终浓度0.8 mmol/mL,20℃诱导表达过夜。可溶性分析显示,NS1和VP2蛋白主要以包涵体形式存在;间接ELISA检测NS1和VP2蛋白的多克隆抗体效价均为1∶10 240 000;Western-blotting鉴定表明,His标签蛋白和相对应的鸡多克隆抗体均能与NS1和VP2蛋白特异性结合;IFA分析显示,VP2和NS1蛋白多克隆抗体均能与ChPV特异性结合。【结论】本研究成功表达ChPV的NS1和VP2蛋白和制备的鸡多克隆抗体,可作为深入探究ChPV蛋白结构功能及建立ChPV血清学诊断方法的基础材料。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 原核表达 NS1蛋白 VP2蛋白 多克隆抗体

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鸡细小病毒和鸡新城疫病毒双重PCR检测方法的建立 被引量：1

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作者 奉彬 谢芝勋 +9 位作者 邓显文 张艳芳 谢丽基 谢志勤 范晴 曾婷婷 罗思思 黄娇玲 王盛 刘加波 《动物医学进展》 北大核心 2019年第10期1-5,共5页

旨在建立鸡细小病毒(ChPV)与鸡新城疫病毒(NDV)双重PCR检测方法,参考ChPV NS1基因和NDV F基因的保守区域,设计筛选、合成验证两对ChPV和NDV特异性引物,通过优化其反应体系,以及双重PCR的特异性、敏感性试验来评估建立的ChPV与NDV双重PC... 旨在建立鸡细小病毒(ChPV)与鸡新城疫病毒(NDV)双重PCR检测方法,参考ChPV NS1基因和NDV F基因的保守区域,设计筛选、合成验证两对ChPV和NDV特异性引物,通过优化其反应体系,以及双重PCR的特异性、敏感性试验来评估建立的ChPV与NDV双重PCR检测方法。结果表明,建立的双重PCR同时扩增出687 bp ChPV和453 bp NDV片段,对ChPV与NDV的敏感性分别达到64 fg和25 fg,但对其他对照组病原体均无扩增,对ChPV与NDV混合感染的临床病料的检测结果与各病毒单项PCR检测结果相符。说明建立的ChPV与NDV双重PCR检测方法可用于临床上两种病毒混合感染的快速诊断。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 鸡新城疫病毒 双重PCR 特异性 敏感性

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鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒二重PCR检测方法的建立 被引量：1

12

作者 李丹 谢芝勋 +10 位作者 李孟 罗思思 谢丽基 张民秀 黄娇玲 范晴 王盛 谢志勤 邓显文 曾婷婷 张艳芳 《安徽农业科学》 CAS 2020年第9期113-116,共4页

[目的]建立一种能够同时诊断鸡细小病毒(chincken parvovirus,ChPV)和H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的检测方法。[方法]根据GenBank中已发表的ChPV NS基因、H9亚型AIV HA基因的保守序列,分别设计多对引物,并通过一系列... [目的]建立一种能够同时诊断鸡细小病毒(chincken parvovirus,ChPV)和H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的检测方法。[方法]根据GenBank中已发表的ChPV NS基因、H9亚型AIV HA基因的保守序列,分别设计多对引物,并通过一系列不同组合对温度和反应体系的调整试验,最终筛选出2对最佳特异性引物组合,建立了ChPV和AIV二重PCR检测方法用于ChPV和H9亚型AIV的检测。[结果]特异性和敏感性的试验结果表明,建立的二重PCR方法特异性良好,可以在一管PCR反应同时检测ChPV和H9亚型AIV。针对ChPV NS基因和H9亚型AIV HA基因的扩增片段大小分别为558和367 bp,其他常见的禽病病原体均未见阳性反应;该法对ChPV和H9亚型AIV的检测下限均为5×10^4拷贝/μL质粒;临床样品检测结果表明,对140份临床样品检测结果与AIV分离测序及ChPV PCR阳性产物测序结果完全一致。[结论]建立的ChPV和H9亚型AIV二重PCR检测方法不仅特异性良好,而且检测的灵敏度高,对ChPV和H9亚型AIV的监测及有效防控具有重要意义。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 H9亚型禽流感病毒 二重PCR

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鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒三重PCR检测方法的建立 被引量：2

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作者 李丹 谢芝勋 +10 位作者 李孟 谢丽基 罗思思 张艳芳 张民秀 黄娇玲 范晴 王盛 谢志勤 邓显文 曾婷婷 《家禽科学》 2020年第1期14-19,22,共7页

为建立一种能够同时鉴别诊断鸡细小病毒、禽流感病毒且同时区分H9亚型禽流感病毒的检测方法,本研究根据GenBank中已发表的ChPV的NS基因、AIV最保守的M基因和H9亚型AIV的HA基因的保守序列,分别设计引物,并通过对温度和反应体系的优化,筛... 为建立一种能够同时鉴别诊断鸡细小病毒、禽流感病毒且同时区分H9亚型禽流感病毒的检测方法,本研究根据GenBank中已发表的ChPV的NS基因、AIV最保守的M基因和H9亚型AIV的HA基因的保守序列,分别设计引物,并通过对温度和反应体系的优化,筛选出最佳的三对特异性引物组合,建立了一种能同时检测ChPV、AIV和H9亚型AIV的三重PCR检测方法。特异性试验结果表明,建立的三重PCR方法可以在一PCR反应中同时检测ChPV、AIV和H9亚型AIV,其它常见的禽病病原体均未见阳性反应,该三重PCR方法特异性良好;敏感性试验表明,该三重PCR检测方法对ChPV、AIV和H9亚型AIV的检测下限均为5×10^4拷贝/μL质粒;运用该法对130份临床样品进行检测,结果与ChPV PCR阳性产物测序及AIV分离测序结果完全一致。因此,本研究建立的ChPV和H9亚型AIV三重PCR检测方法是一种特异性良好、灵敏度高、简便有效的检测方法。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 H9亚型禽流感病毒 M基因 三重PCR

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2021年福建省龙岩市病死鸡群中4种病毒感染情况调查 被引量：5

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作者 陈长福 《中国动物检疫》 CAS 2022年第2期15-20,共6页

为探明2021年龙岩市规模化鸡场鸡传染性贫血病病毒(CIAV)、圆圈病毒3型(GyV3)、鸡细小病毒(ChPV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)等4种病毒的感染情况,对龙岩市32个规模化鸡场采集的297份病死鸡组织样品进行PCR或RT-PCR检测,并对检测结果进... 为探明2021年龙岩市规模化鸡场鸡传染性贫血病病毒(CIAV)、圆圈病毒3型(GyV3)、鸡细小病毒(ChPV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)等4种病毒的感染情况,对龙岩市32个规模化鸡场采集的297份病死鸡组织样品进行PCR或RT-PCR检测,并对检测结果进行统计分析。结果显示:CIAV、GyV3、ChPV和ALV-J均有检出,阳性检出率分别为34.34%、28.62%、18.86%、13.13%;从病原分布看,CIAV分布最广,除漳平市外其余6个区县均有检出,各区县检出率介于12.00%~98.00%;其他3种病原呈局限性分布,均只在4个区县有检出。共检出单一感染阳性样品79份,总单一感染阳性检出率为26.60%(79/297),单一感染阳性检出率从高到低依次为Ch PV(14.81%)、CIAV(5.05%)、ALV-J(4.71%)、Gy V3(2.02%)。CIAV+Ch PV双重感染阳性检出率为2.69%(8/297),CIAV+GyV3为18.18%(54/297);CIAV+ALV-J+GyV3三重感染阳性检出率为7.07%(21/297),CIAV+ChPV+ALV-J+GyV3四重感染为1.34%(4/297)。结果表明:龙岩市鸡群中存在CIAV、ALV-J、ChPV和GyV34种病原的感染,且部分地区感染较为严重,混合感染现象普遍,提示龙岩市应积极开展疫病监测,加强鸡场的生物安全综合防控。 展开更多

关键词 感染情况调查 鸡传染性贫血病病毒 鸡细小病毒 圆圈病毒3型 J亚群禽白血病病毒 规模化鸡场 龙岩市

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