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鸡白细胞介素4基因的克隆及其原核表达 被引量：8
1
作者 戴华 郑佳玉 +3 位作者 陈俊华 孙林 潘志明 焦新安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期473-477,共5页
应用RT-PCR技术,从被诱导的鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡白细胞介素-4(ChIL-4)基因cDNA,经克隆筛选和测序后,构建出重组质粒pGEX-6P-ChIL-4和pET-ChIL-4,分别转化相应的受体菌,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,结果表明ChIL-4基因在上述载体中均获... 应用RT-PCR技术,从被诱导的鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡白细胞介素-4(ChIL-4)基因cDNA,经克隆筛选和测序后,构建出重组质粒pGEX-6P-ChIL-4和pET-ChIL-4,分别转化相应的受体菌,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,结果表明ChIL-4基因在上述载体中均获得表达,融合蛋白大小分别为38ku和18ku,Westernblot结果也显示,在相对分子质量38ku和18ku位置有特异性条带。这为重组ChIL-4的规模化生产、疫苗佐剂的研制及其单克隆抗体的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素-4 CDNA 克隆 表达
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Stattic通过调控记忆性CD4^(+)T细胞介导的急性排斥反应对小鼠同种异体心脏移植物存活的影响
2
作者 李师亮 冯异 +1 位作者 方明 周彦 《器官移植》 北大核心 2025年第1期74-82,共9页
目的探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)抑制剂Stattic对小鼠同种异体心脏移植排斥反应的影响及机制。方法将BALB/c小鼠(供体)皮肤移植至C57BL/6小鼠(受体),4周后取受体小鼠脾脏分离获得记忆性CD4^(+)T细胞(CD4^(+)Tm)。将C57BL/6小鼠... 目的探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)抑制剂Stattic对小鼠同种异体心脏移植排斥反应的影响及机制。方法将BALB/c小鼠(供体)皮肤移植至C57BL/6小鼠(受体),4周后取受体小鼠脾脏分离获得记忆性CD4^(+)T细胞(CD4^(+)Tm)。将C57BL/6小鼠脾脏淋巴细胞与CD4^(+)Tm进行混合淋巴细胞反应实验,EdU法检测Stattic对CD4^(+)Tm细胞增殖的影响。构建C57BL/6小鼠心脏移植(HTx)模型,实验分为:Non-HTx组、HTx组、Tm/HTx组和Tm/HTx+Stattic组。每日观察小鼠移植心脏存活情况;苏木素-伊红染色观察移植心脏组织病理情况;实时荧光定量聚合酶链反应检测心脏移植组织中干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-2、IL-10和转化生长因子-β1(TGF-β1)信使RNA(mRNA)表达水平;酶联免疫吸附试验检测血清IFN-γ、IL-2、IL-10和TGF-β1含量;流式细胞术检测脾脏淋巴细胞中CD4^(+)Tm(CD4^(+)CD44^(+)CD62L^(+))水平;蛋白质印迹法检测移植心脏组织中STAT3和p-STAT3蛋白表达水平。结果当Stattic浓度超过2.5μmol/L时,可抑制CD4^(+)Tm细胞增殖。与HTx组比较,Tm/HTx组小鼠心脏移植物存活时间缩短,心脏移植组织病理损伤加重,血清IFN-γ和IL-2含量升高,IL-10和TGF-β1含量降低,移植心脏组织IFN-γ、IL-2 mRNA相对表达量升高,IL-10和TGF-β1 mRNA相对表达量降低,脾脏淋巴细胞中CD4^(+)Tm比例升高,移植心脏组织p-STAT3/STAT3比值升高(均为P<0.05)。与Tm/HTx组比较,Tm/HTx+Stattic组小鼠心脏移植物存活时间延长,心脏移植组织病理损伤减轻,血清中IFN-γ、IL-2含量降低,IL-10和TGF-β1含量升高,移植心脏组织中IFN-γ、IL-2 mRNA相对表达量降低,IL-10、TGF-β1 mRNA相对表达量升高,脾脏淋巴细胞中CD4^(+)Tm比例降低,移植心脏组织p-STAT3/STAT3比值降低(均为P<0.05)。结论Stattic可延长小鼠同种异体心脏移植物的存活时间,其机制可能与抑制CD4^(+)Tm介导的急性排斥反应有关。 展开更多
关键词 心脏移植 排斥反应 信号转导和转录激活因子3 Stattic 记忆性CD4^(+)T细胞 白细胞介素 干扰素 转化生长因子
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抗鸡白细胞介素4单克隆抗体的制备及其鉴定 被引量：2
3
作者 戴华 陈俊华 +3 位作者 张海霞 沈颖 陈祥 焦新安 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期986-990,共5页
目的制备抗鸡白细胞介素4(ChIL-4)单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法以重组鸡IL-4(GST-ChIL-4)作为免疫原免疫8周龄BALB/c小鼠,以重组蛋白His-ChIL-4作为检测抗原建立筛选阳性杂交瘤细胞株的间接ELISA;以有限稀释法制备稳定分泌抗ChIL-4 ... 目的制备抗鸡白细胞介素4(ChIL-4)单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法以重组鸡IL-4(GST-ChIL-4)作为免疫原免疫8周龄BALB/c小鼠,以重组蛋白His-ChIL-4作为检测抗原建立筛选阳性杂交瘤细胞株的间接ELISA;以有限稀释法制备稳定分泌抗ChIL-4 mAb细胞株;采用间接ELISA、间接免疫荧光法(IFA)以及Western blot法分析mAb的特异性。结果获得4株抗ChIL-4的mAb,分别命名为6A8、18F12、19F1、20G3,腹水mAb的ELISA效价为(1.6~6.4)×104;ELISA、IFA及Western blot结果显示该4株mAb均是特异针对重组ChIL-4的mAb,不具有识别重组牛IL-4、鸡γ干扰素(IFN-γ)等其他蛋白的能力。结论成功制备了抗ChIL-4的mAb。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素4(chil-4) 单克隆抗体
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慢性乙型肝炎病毒感染者外周血T细胞γ干扰素和白细胞介素4的水平变化 被引量：29
4
作者 李曼 孙学华 +4 位作者 周振华 张鑫 金树根 高亚婷 高月求 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期240-244,249,共6页
目的研究慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染过程中外周血T细胞表达细胞因子的调节作用。方法 60例慢性HBV感染者分为免疫耐受期组、免疫清除期组和非活动期组,20例健康人群作为对照组。另收集21例乙型肝炎病毒e抗原(HBe Ag)阳性的慢性乙型肝炎... 目的研究慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染过程中外周血T细胞表达细胞因子的调节作用。方法 60例慢性HBV感染者分为免疫耐受期组、免疫清除期组和非活动期组,20例健康人群作为对照组。另收集21例乙型肝炎病毒e抗原(HBe Ag)阳性的慢性乙型肝炎患者,进行恩替卡韦治疗6个月。全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,PCR法检测HBV DNA载量,流式细胞术检测T细胞γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平。结果慢性HBV感染者的外周血CD4^+T细胞和CD8^+T细胞的IFN-γ水平与HBV DNA载量呈反比,IFN-γ/IL-4比率与HBV DNA载量和血清ALT水平均呈反比。此外,从免疫耐受期到非活动病毒携带期,T细胞的IFN-γ水平逐渐增加、IL-4水平逐渐降低,且与对照组相比,免疫耐受期患者的T细胞表达IL-4增加且IFN-γ减少,到非活动携带期其细胞因子表达逐渐恢复。慢性乙型肝炎患者经恩替卡韦抗病毒治疗后,血清HBV DNA载量和ALT水平均明显降低,同时其外周血CD8^+T细胞的IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4比率均明显增加。结论慢性HBV感染过程中,外周血T细胞的IFN-γ和IL-4发挥双向调节作用,与恩替卡韦抗病毒疗效相关。 展开更多
关键词 慢性HBV感染 HBV DNA 丙氨酸氨基转移酶 Γ干扰素 白细胞介素4
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白细胞介素4和受体基因多态性与儿童变应性哮喘的相关分析 被引量：8
5
作者 崔天盆 胡丽华 +2 位作者 潘世秀 习东 吴键民 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期125-128,共4页
目的探讨白细胞介素4(IL-4)及受体(IL-4R)基因多态性与儿童变应性哮喘易感性及与血浆总IgE的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性酶切多态性方法检测IL-4基因启动子区-589位和IL-4Rα亚单位Q576R两位点基因多态性,并观察对血浆总IgE的影... 目的探讨白细胞介素4(IL-4)及受体(IL-4R)基因多态性与儿童变应性哮喘易感性及与血浆总IgE的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性酶切多态性方法检测IL-4基因启动子区-589位和IL-4Rα亚单位Q576R两位点基因多态性,并观察对血浆总IgE的影响。结果(1)白细胞介素-4基因-589基因多态性与儿童支气管哮喘无相关关系;(2)IL-4受体α亚单位RR基因型和R576等位基因频率在儿童支气管哮喘与对照组相比差异显著(P<001,P<001),且R576与高IgE相关。结论这些数据表明IL-4Rα亚单位R576是中国汉族变应性哮喘患儿的危险因子,且与高IgE相关。 展开更多
关键词 哮喘 白细胞介素4 受体 白细胞介素4 免疫球蛋白E
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白细胞介素4基因转移的肿瘤细胞体外生物学特性及体内致瘤性的研究 被引量：10
6
作者 于益芝 曹雪涛 +4 位作者 徐志工 郑玲莉 章卫平 陶群 叶天星 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期26-30,共5页
观察了白细胞介素４（ＩＬ－４）基因转移的肿瘤细胞体内致瘤性的变化。构建了含５００ｂｐ的小鼠ＩＬ－４ｃＤＮＡ的真核表达载体ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－４．用该表达载体将ＩＬ－４基因转移至小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞，通过Ｇ４１８抗性... 观察了白细胞介素４（ＩＬ－４）基因转移的肿瘤细胞体内致瘤性的变化。构建了含５００ｂｐ的小鼠ＩＬ－４ｃＤＮＡ的真核表达载体ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－４．用该表达载体将ＩＬ－４基因转移至小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞，通过Ｇ４１８抗性筛选、有限稀释法及ＩＬ－４活性检测，获得了高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞克隆株并经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹鉴定，将其接种于小鼠皮下后观察到肿瘤生长缓慢、小鼠存活期延长，表明高分泌ＩＬ－４的细胞克隆株体内致瘤性显著下降。该结果为进一步研究肿瘤的ＩＬ－４基因治疗打下了基础。 展开更多
关键词 白细胞介素4 基因转移 黑色素瘤 基因疗法
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猪白细胞介素4的基因克隆及其在囊尾蚴DNA疫苗中的应用 被引量：10
7
作者 吴丹 郭瀛军 +1 位作者 王庆敏 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1192-1194,共3页
目的:克隆猪白细胞介素4(IL-4)cDNA,观察其在抗囊尾蚴免疫中的疫苗佐剂作用。方法:通过RT-PCR法获得带有5'AUG侧翼翻译优化突变序列的猪IL-4 cDNA,测序后重组入真核表达载体pcDNA,在体外瞬时表达的基础上与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗... 目的:克隆猪白细胞介素4(IL-4)cDNA,观察其在抗囊尾蚴免疫中的疫苗佐剂作用。方法:通过RT-PCR法获得带有5'AUG侧翼翻译优化突变序列的猪IL-4 cDNA,测序后重组入真核表达载体pcDNA,在体外瞬时表达的基础上与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合免疫仔猪。结果:获得的猪IL-4 cDNA序列与文献报道的完全一致,在体外瞬时表达中获得了有生物学活性的猪IL-4。其与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合应用可有效提高个体体液免疫应答水平。结论:构建了一高效表达猪IL-4的真核表达质粒,初步实验证实了其在抗囊尾蚴DNA疫苗中的佐剂效应。 展开更多
关键词 猪白细胞介素4 基因克隆 囊尾蚴 DNA疫苗 佐剂作用
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重组牛白细胞介素4的原核表达及其单克隆抗体研制 被引量：9
8
作者 陈祥 张成全 +4 位作者 徐正中 孟闯 黄金林 潘志明 焦新安 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期653-656,共4页
目的:原核表达重组牛白细胞介素4(rBoIL-4)并制备针对抗rBoIL-4的单克隆抗体(mAb)。方法:通过PCR从重组质粒pSP73-BoIL-4中扩增BoIFN-γ基因,分别克隆入表达载体pGEX-6p-1和pET-30a(+)中,构建重组菌并对其进行诱导表达、纯化和鉴定。以... 目的:原核表达重组牛白细胞介素4(rBoIL-4)并制备针对抗rBoIL-4的单克隆抗体(mAb)。方法:通过PCR从重组质粒pSP73-BoIL-4中扩增BoIFN-γ基因,分别克隆入表达载体pGEX-6p-1和pET-30a(+)中,构建重组菌并对其进行诱导表达、纯化和鉴定。以纯化的融合蛋白rHis-BoIL-4为免疫原,用纯化的rGST-BoIL-4为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,研制抗rBoIL-4的mAb。结果:获得表达BoIL-4基因的重组菌BL21(pGEX-6p-1-BoIL-4)和BL21(DE3)(pET-BoIL-4),重组蛋白相对分子质量(Mr)的大小分别为39 000和19 000,且以包涵体的形式存在。获得7株可稳定分泌抗rBoIL-4 mAb的细胞株,命名为2B8、4A10、5D6、5D8、7G10、8B7和10F8,这些mAb腹水的效价依次为5 000、160 000、10 000、640 000、5 000、40 000和40 000,mAb亚类均为IgG1。Dot-ELISA的结果表明,7株mAb只与融合蛋白rHis-BoIL-4和rGST-BoIL-4起反应,而不与其他重组细胞因子和对照细菌起反应,显示出良好的特异性。Western blot试验显示,7株mAb均能与相应的融合蛋白发生反应,出现特异性条带。同时7株mAb均能与BoIL-4的标准品起反应。结论:7株抗rBoIL-4的mAb均具有高度的特异性,为进一步研究其在牛的免疫调控、牛疫病的致病机制及其诊断中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 重组牛白细胞介素4 原核表达 单克隆抗体
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γ－干扰素和白细胞介素－4在支气管哮喘发病中作用的研究 被引量：12
9
作者 徐文玉 王易 +1 位作者 周莉莉 耒茶云 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期54-56,共3页
阐明ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４在支气管哮喘发病中的作用。选择了急性发作期和缓解期病人及正常人各２０例作为研究对象。实验结果表明，急性发作期病人的ＩＬ－４分泌细胞明显高于缓解期和正常对照组，病人血清总ＩｇＥ也高于正常对照组，... 阐明ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４在支气管哮喘发病中的作用。选择了急性发作期和缓解期病人及正常人各２０例作为研究对象。实验结果表明，急性发作期病人的ＩＬ－４分泌细胞明显高于缓解期和正常对照组，病人血清总ＩｇＥ也高于正常对照组，但在两组病人之间无明显差异。ＰＨＡ－诱导的ＩＦＮ－γ活性在病人和正常对照组之间也无明显的差异。值得注意的是，在急性发作期病人，ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４之间，ＩＦＮ－γ和血清总ＩｇＥ水平之间存在着负相关。进一步表明由于病人体内ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４之间的不平衡是引起哮喘发作和血清ＩｇＥ升高的重要原因。 展开更多
关键词 白细胞介素4 γ 干扰素 免疫球蛋白E 哮喘
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癫痫清颗粒对海人藻酸致痫大鼠海马内肿瘤坏死因子及白细胞介素-4表达的影响 被引量：7
10
作者 康凯 齐越 +2 位作者 韦丹 张冰冰 贾冬 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2015年第10期1996-1998,共3页
目的:研究癫痫清颗粒对海人藻酸(KA)致痫大鼠海马内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-4(IL-4)表达的影响。方法:大鼠海马CA1区注射KA建立KA癫痫大鼠模型。观察癫痫清颗粒对KA癫痫大鼠模型行为学的影响;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各... 目的:研究癫痫清颗粒对海人藻酸(KA)致痫大鼠海马内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-4(IL-4)表达的影响。方法:大鼠海马CA1区注射KA建立KA癫痫大鼠模型。观察癫痫清颗粒对KA癫痫大鼠模型行为学的影响;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠海马内TNF-α及IL-4蛋白的表达。结果:癫痫清颗粒可延长癫痫大鼠发作潜伏期,降低其癫痫最大发作分级;可抑制由癫痫发作引起的大鼠海马内TNF-α及IL-4蛋白表达下降。结论:癫痫清颗粒可延长KA致痫大鼠的癫痫发作潜伏期,并降低发作分级,同时具有增加海马内TNF-α及IL-4蛋白表达的作用。 展开更多
关键词 癫痫 海人藻酸 肿瘤坏死因子 白细胞介素-4
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不同类型过敏性结膜炎患者眼表组织中白细胞介素-4、5和13的表达 被引量：24
11
作者 姚娟 李冰 郑晓汾 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期924-929,共6页
背景 过敏性结膜炎的发病机制尚未完全明确.研究表明,白细胞介素-4（IL-4）、IL-5和IL-13在过敏性结膜炎中发挥重要作用,但这些因子对不同类型的过敏性结膜炎患者的作用是否一致尚有待证明.目的 探讨IL-4、IL-5和IL-13在不同类型过敏性... 背景 过敏性结膜炎的发病机制尚未完全明确.研究表明,白细胞介素-4（IL-4）、IL-5和IL-13在过敏性结膜炎中发挥重要作用,但这些因子对不同类型的过敏性结膜炎患者的作用是否一致尚有待证明.目的 探讨IL-4、IL-5和IL-13在不同类型过敏性结膜炎患者眼表组织中的表达及其在不同类型过敏性结膜炎发病中的作用.方法 采用前瞻性队列研究设计.纳入2013年4月至2014年9月在山西省眼科医院就诊的春季角结膜炎（VKC）患者20例40眼、季节性过敏性结膜炎（SAC）患者20例40眼和常年性过敏性结膜炎（PAC）患者20例40眼,并纳入同期健康志愿者20人40眼作为正常对照.用消毒刮刀在上睑结膜刮取结膜上皮细胞,分别采用免疫组织化学法、实时荧光定量PCR法检测结膜上皮细胞中IL-4、IL-5和IL-13蛋白及其mRNA的表达;采用1μl毛细玻璃管于受试者下睑颞侧睑缘处吸取泪液4μl,Luminex液相芯片测定受试者泪液中IL-4、IL-5和IL-13的表达.结果 免疫组织化学法染色表明,VKC组、SAC组和PAC组患者结膜上皮细胞的细胞质中均可见到IL-4、IL-5和IL-13的阳性表达,而在正常对照组受试者结膜上皮细胞中未发现IL-4、IL-5和IL-13的表达.以正常对照组IL-4、IL-5和IL-13 mRNA的表达量为对照,VKC组、SAC组和PAC组中IL-4 mRNA的相对表达量分别为4.11±1.24、2.71±0.71和2.00±0.80,IL-5 mRNA的相对表达量分别为4.02±0.43、2.07±0.45和1.47±0.50,IL-13 mRNA的相对表达量分别为6.44±0.66、4.35±1.26和2.39±0.86,4个组间IL-4、IL-5和IL-13 mRNA相对表达量的总体比较差异均有统计学意义（F=51.32、220.18、162.49,均P＜0.01）;其中VKC组IL-4、IL-5和IL-13 mRNA的相对表达量明显高于SAC组和PAC组,SAC组IL-4、IL-5、IL-13 mRNA的相对表达量高于PAC组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.正常对照组受试者泪液中未检测到IL-4、IL-5和IL-13表达,VKC组泪液中IL-4、IL-5和IL-13蛋白质量浓度分别为（14.06±3.50）、（10.88±1.82）和（34.28±8.42） pg/ml,SAC组分别为（7.71±0.65）、（5.10±1.33）、（23.77±6.29） pg/ml,PAC组分别为（3.30±1.50）、（2.43±1.28）和（17.67±4.28） pg/ml,组间总体比较差异均有统计学意义（F=200.29、260.49、128.23,均P＜0.01）;其中VKC组IL-4、IL-5、IL-13蛋白质量浓度明显高于SAC组和PAC组,SAC组IL-4、IL-5和IL-13蛋白质量浓度明显高于PAC组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.结论 IL-4、IL-5和IL-13参与多种类型过敏性结膜炎的发病,但在不同类型过敏性结膜炎患者中眼表的表达均有差异. 展开更多
关键词 过敏性结膜炎/免疫 T淋巴细胞 眼部炎症/免疫 白细胞介素-4 白细胞介素-5 白细 胞介素-13 人 上皮细胞/眼 泪液
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金匮肾气丸对系统性红斑狼疮血清单核细胞趋化蛋白-4和白细胞介素4的影响及疗效观察 被引量：10
12
作者 吴斌 黄利 +2 位作者 毛世清 张小莲 朱宁 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第19期3245-3247,共3页
目的:探讨金匮肾气丸对系统性红斑狼疮(SLE)血清单核细胞趋化蛋白-4(MCP-4)和白细胞介素4(IL-4)的影响及其临床疗效。方法:69例SLE患者随机分为观察组及对照组,均予以泼尼松+环磷酰胺治疗,观察组加用金匮肾气丸。ELISA检测患者治疗前后... 目的:探讨金匮肾气丸对系统性红斑狼疮(SLE)血清单核细胞趋化蛋白-4(MCP-4)和白细胞介素4(IL-4)的影响及其临床疗效。方法:69例SLE患者随机分为观察组及对照组,均予以泼尼松+环磷酰胺治疗,观察组加用金匮肾气丸。ELISA检测患者治疗前后血清MCP-4及IL-4水平,以20例健康者作对照(正常组)。比较各组24 h尿蛋白、SLEDAI评分、不良反应发生情况及总有效率。结果:两组患者血清MCP-4、IL-4水平均较正常组升高(P<0.05);治疗后,患者血清MCP-4、IL-4水平均下降(P<0.05),24 h尿蛋白及SLEDAI评分均减少(P<0.05),但观察组各项指标改善更显著(P<0.05)。观察组的不良反应发生显著少于对照组(P<0.05),其总有效率高于对照组(P<0.05)。结论:金匮肾气丸可以下调SLE患者的血清MCP-4及IL-4水平,减少蛋白尿,降低SLE病情活动度,改善临床症状,减少不良反应,值得进一步深入研究。 展开更多
关键词 红斑狼疮 系统性 金匮肾气丸 血清单核细胞趋化蛋白-4 白细胞介素4
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重组白细胞介素4受体(IL-4R)噬菌体单链抗体库构建及筛选 被引量：6
13
作者 杨光勇 郭海涛 +5 位作者 刘茜明 何光志 田维毅 蔡琨 王平 王文佳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期829-833,共5页
目的应用噬菌体展示技术构建重组白细胞介素4受体（IL-4R）噬菌体单链抗体（sc Fv）库,并从抗体库中进行筛选。方法利用重组人IL-4R（rh IL-4R）蛋白免疫BALB/c小鼠,提取总RNA,反转录PCR扩增V_H和V_L基因,经重叠延伸PCR扩增出带有限制... 目的应用噬菌体展示技术构建重组白细胞介素4受体（IL-4R）噬菌体单链抗体（sc Fv）库,并从抗体库中进行筛选。方法利用重组人IL-4R（rh IL-4R）蛋白免疫BALB/c小鼠,提取总RNA,反转录PCR扩增V_H和V_L基因,经重叠延伸PCR扩增出带有限制性酶切位点的sc Fv,用限制性内切酶SfiⅠ和NotⅠ分别双酶切sc Fv和p CANTAB5E载体,利用T4连接酶进行连接,转入感受态细菌E.coli TG1中制备转化子;在培养基中培养得到噬菌体单链抗体库;通过3轮富集和筛选,选择抗原亲和力最强的克隆进行测序分析。结果经过3轮筛选,构建了库容为2×10~8的rh IL-4R单链抗体库,测序结果显示抗rh IL-4R蛋白sc Fv基因全长741 bp,编码247个氨基酸。通过VBASE2数据库分析,抗rh IL-4R蛋白的V_H和V_L基因序列都存在3个互补决定区和4个骨架区。结论成功构建了抗rh IL-4R蛋白噬菌体sc Fv库。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素4(rhIL-4R) 噬菌体展示技术 单链抗体
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猪白细胞介素-4重组蛋白的纯化及其生物学特性分析 被引量：4
14
作者 陈国华 景志忠 +3 位作者 窦永喜 蒙学莲 张巧颖 宋世斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1072-1076,共5页
用已构建好的重组表达载体pGEX-4T-IL-4转染E.coli,在最适条件下诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,表达出38 ku的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的25%,表达产物主要以包涵体的形式存在;对表达产物经变性、复性及初步纯化后再结合饱和硫酸... 用已构建好的重组表达载体pGEX-4T-IL-4转染E.coli,在最适条件下诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,表达出38 ku的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的25%,表达产物主要以包涵体的形式存在;对表达产物经变性、复性及初步纯化后再结合饱和硫酸铵沉淀和Sephadex-G100凝胶层析柱进一步纯化,所得蛋白的纯度约在90%以上。在体外利用MTT法检测其生物学特性,结果表明其具有较好的生物学活性,本试验为获得猪IL-4重组蛋白奠定了基础。 展开更多
关键词 猪白细胞介素4 重组表达 纯化 活性分析
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旋毛虫感染促进白细胞介素-4表达并抑制小鼠实验性牙周炎 被引量：5
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作者 张增方 黄世光 +2 位作者 黄绮凌 谢敏 邓国珍 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期573-576,共4页
目的:通过对实验性牙周炎小鼠接种低剂量旋毛虫(T.spiralis)介导Ⅱ型辅助性T淋巴细胞(Th2)反应,探讨白细胞介素-4(IL-4)在牙周炎进程中的作用。方法:清洁级12周龄雄性昆明小鼠27只,随机分为3组:(1)正常对照组;(2)实验性牙周炎组:参照Kim... 目的:通过对实验性牙周炎小鼠接种低剂量旋毛虫(T.spiralis)介导Ⅱ型辅助性T淋巴细胞(Th2)反应,探讨白细胞介素-4(IL-4)在牙周炎进程中的作用。方法:清洁级12周龄雄性昆明小鼠27只,随机分为3组:(1)正常对照组;(2)实验性牙周炎组:参照Kimura等的方法复制实验性牙周炎模型;(3)旋毛虫感染合并牙周炎组(periodontitis+T.spiralis-infected group,P+T.spiralis):复制小鼠牙周炎模型,同时给予低剂量旋毛虫感染。正常对照组及各实验组小鼠分别于术后第1、3和5周末分批处死,各时点每组处死小鼠数为3只。处死小鼠前测量牙周探诊深度,制作牙体牙周联合切片观察牙周的组织学改变,并采用ELISA法检测牙周炎小鼠外周血IL-4的水平。结果:(1)P+T.spiralis组IL-4的含量明显高于实验性牙周炎组(P<0.01);(2)各时点P+T.spiralis组牙周探诊深度明显低于实验性牙周炎组(P<0.01);(3)P+T.spiralis组牙周组织的炎症及破坏程度明显减轻。结论:旋毛虫感染可升高小鼠血清IL-4水平,抑制牙周炎的发生,提示在牙周炎治疗中提高血清IL-4水平可能具有治疗价值。 展开更多
关键词 牙周炎 白细胞介素-4 模型 动物
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猪白细胞介素4,6融合基因和CpG基序对猪蓝耳病疫苗免疫的强化效应 被引量：6
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作者 陈建林 杨肖 +8 位作者 章欢 李栋 程驰 赵钟钟 陈茜 章华兵 黄杰 陈文龙 高荣 《四川动物》 CSCD 北大核心 2008年第6期1012-1016,1026,共6页
为探索新型高效安全的猪蓝耳病疫苗免疫佐剂,本实验用离子交联法制备壳聚糖纳米颗粒包裹猪融合基因PIL-46和CpG基序的真核表达质粒(CNP-(VRIL-46+VR1C)),将CNP-(VRIL-46+VR1C)肌注接种过猪蓝耳病灭活苗的长白川白杂交猪,接种后1、2、4、... 为探索新型高效安全的猪蓝耳病疫苗免疫佐剂,本实验用离子交联法制备壳聚糖纳米颗粒包裹猪融合基因PIL-46和CpG基序的真核表达质粒(CNP-(VRIL-46+VR1C)),将CNP-(VRIL-46+VR1C)肌注接种过猪蓝耳病灭活苗的长白川白杂交猪,接种后1、2、4、6和8周采取实验猪静脉血,用Sandwich ELISA检测血清中白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-6和IgG、IgA、IgM及特异抗体的含量,同时检测外周血液免疫细胞数量的变化。结果发现实验猪接种CNP-(VRIL-46+VR1C)后1～8周内,其血清中IL-2、IL-4、IL-6和IgG、IgA、IgM及特异抗体的含量较对照组均显著增多(P<0.05),淋巴细胞和单核细胞数量也明显升高(P<0.05)。这些表明接种CNP-(VRIL-46+VR1C)的实验猪的特异体液和细胞免疫水平均显著多于对照组,提示PIL-46基因和CpG基序组合能显著增强猪的特异体液和细胞免疫机能,明显提高其免疫防御力,具有研制为高效安全的分子免疫增强剂的应用前景。 展开更多
关键词 猪 猪白细胞介素4 6融合基因 CPG基序 蓝耳病 免疫
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扁桃体组织中白细胞介素-4的表达和意义 被引量：5
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作者 张涛 丁勇 +2 位作者 王继群 杨占泉 董震 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期150-152,共3页
目的 :为明确扁桃体反复发炎过程中 ,扁桃体组织中变态反应发生的情况。方法 :利用免疫组织化学的方法对扁桃体组织中白细胞介素 - 4(IL - 4)的表达情况进行测定。结果 :在各个年龄段的扁桃体组织中IL - 4均有高表达 ,IL - 4阳性细胞主... 目的 :为明确扁桃体反复发炎过程中 ,扁桃体组织中变态反应发生的情况。方法 :利用免疫组织化学的方法对扁桃体组织中白细胞介素 - 4(IL - 4)的表达情况进行测定。结果 :在各个年龄段的扁桃体组织中IL - 4均有高表达 ,IL - 4阳性细胞主要分布于扁桃体组织中的网状陷窝上皮和滤泡间区中 ,该部位是扁桃体的免疫功能区。结论 :IL - 4为一种与变态反应关系十分密切的细胞因子 ,扁桃体组织中有明显的变态反应发生 ,变态反应的存在为扁桃体反复发炎的病因之一 ,变态反应发生的部位主要在网状陷窝上皮和滤泡间区。 展开更多
关键词 扁桃体 过敏反应 白细胞介素4
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生理状态下外周血白细胞干扰素、白细胞介素2、白细胞介素4和白细胞介素10基因表达的荧光定量PCR检测 被引量：6
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作者 陈佩杰 王茹 董强刚 《体育科学》 CSSCI 北大核心 2006年第1期74-76,共3页
目的:建立干扰素-γ(IFN-γ),白细胞介素-2(IL-2),白细胞介素-4(IL-4),白细胞介素-10(IL-10)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术。方法:应用实时定量PCR方法检测25名健康运动员生理状态下外周血白细胞IFNγ-、IL-2、IL-4和IL-10 mRNA的... 目的:建立干扰素-γ(IFN-γ),白细胞介素-2(IL-2),白细胞介素-4(IL-4),白细胞介素-10(IL-10)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术。方法:应用实时定量PCR方法检测25名健康运动员生理状态下外周血白细胞IFNγ-、IL-2、IL-4和IL-10 mRNA的表达。结果:应用实时定量PCR方法能够对健康受试者外周血白细胞IFNγ-、IL-2、IL-4和IL-10的mRNA表达进行定量分析,相关系数r>0.99。结论:从分子水平为检测运动过程中细胞因子的改变、评估运动员免疫机能状态提供了简易和准确的检测手段。 展开更多
关键词 干扰素-y(IFN-y) 白细胞介素2(IL-2) 白细胞介素4(IL-4) 白细胞介素10(IL-10) 信使核糖核酸 实时定量PCR
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人白细胞介素4在衣藻叶绿体中的高效转化及表达 被引量：14
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作者 赵雅坤 史贤明 张忠明 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期110-116,共7页
人白细胞介素4(hIL4)是一种重要的免疫活性调节分子,与一些自身免疫性疾病有重要关系。将hIL4基因融合到衣藻叶绿体rbcL 5-’UTR和3’-UTR之间,组成5’UTR-hIL4-3’UTR片段,将其插入到来源于衣藻叶绿体基因组5.7 kb同源片段中,构建成pXh... 人白细胞介素4(hIL4)是一种重要的免疫活性调节分子,与一些自身免疫性疾病有重要关系。将hIL4基因融合到衣藻叶绿体rbcL 5-’UTR和3’-UTR之间,组成5’UTR-hIL4-3’UTR片段,将其插入到来源于衣藻叶绿体基因组5.7 kb同源片段中,构建成pXhIL4同源重组质粒。利用电脉冲法将该质粒与含有aadA基因的壮观霉素抗性质粒p228共同转化衣藻叶绿体,从含100μg/mL的壮观霉素抗性平皿上筛选到阳性藻落,并通过PCR方法检测到hIL4基因,其共转化频率高达90%。经过western blotting印迹转移分析,证实了人白细胞介素4基因在衣藻叶绿体中获得成功表达,为进一步研究在衣藻叶绿体中高效表达外源蛋白奠定了基础。 展开更多
关键词 人白细胞介素4 莱菌哈德衣藻 叶绿体基因工程 电击脉冲转化
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精神分裂症白细胞介素2和CD4+细胞的相关研究 被引量：8
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作者 张向阳 周东丰 +1 位作者 张培琰 管振全 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期268-270,共3页
目的　探讨精神分裂症患者 Ｃ Ｄ４ ＋ 细胞与白细胞介素２（ Ｉ Ｌ２） 之间的关系。方法　对３０ 例精神分裂症和２５例正常对照分别采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标法、放射免疫法进行外周血 Ｃ Ｄ４ ＋ 细胞、 Ｉ Ｌ２ 分... 目的　探讨精神分裂症患者 Ｃ Ｄ４ ＋ 细胞与白细胞介素２（ Ｉ Ｌ２） 之间的关系。方法　对３０ 例精神分裂症和２５例正常对照分别采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标法、放射免疫法进行外周血 Ｃ Ｄ４ ＋ 细胞、 Ｉ Ｌ２ 分泌细胞数和 Ｉ Ｌ２ 含量检测。结果　精神分裂症组外周血 Ｃ Ｄ４ ＋ 细胞、 Ｉ Ｌ２ 分泌细胞和 Ｉ Ｌ２ 含量均显著低于正常组（ Ｐ＜ ００５） ；正常组血 Ｃ Ｄ４ ＋细胞数与外周 Ｉ Ｌ２ 含量显著正相关（ Ｐ＜ ００５） ，病人组无相关。结论　精神分裂症可能存在免疫激活，与其自身免疫假说相符；同时，分泌 Ｉ Ｌ２ 的 Ｔ 细胞也可能存在自身缺陷。 展开更多
关键词 精神分裂症 白细胞介素2 CD4阳性细胞
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