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人工分子伴侣辅助鸡白细胞介素18重组蛋白的复性 被引量:1
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作者 王新华 胡敬东 +2 位作者 孔娜 李宏梅 赵宏坤 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期344-347,共4页
目的:研究表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和β-环糊精(β-CD)组成的人工分子伴侣系统辅助鸡IL-18重组蛋白的复性,以提高鸡IL-18重组蛋白复性率,获得更多具有良好活性的蛋白。方法:将重组原核表达质粒pGEX-mChIL-18转化宿主细胞... 目的:研究表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和β-环糊精(β-CD)组成的人工分子伴侣系统辅助鸡IL-18重组蛋白的复性,以提高鸡IL-18重组蛋白复性率,获得更多具有良好活性的蛋白。方法:将重组原核表达质粒pGEX-mChIL-18转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG于37℃诱导培养获得表达。表达产物主要以包涵体的形式存在。包涵体经超声波破碎、洗涤后以6mol/L的盐酸胍溶解,使蛋白彻底变性,然后利用人工分子伴侣系统辅助蛋白复性。复性产物经透析纯化后,利用淋巴细胞增殖试验来检测其活性。结果:经SDS-PAGE分析表明,表达产物是与ChIL-18重组蛋白相符的Mr约44000的蛋白条带。利用人工分子伴侣系统辅助复性,鸡IL-18重组蛋白获得了42·54%复性率。鸡淋巴细胞增殖试验表明,表达产物对鸡淋巴细胞具有明显诱导增殖作用。结论:人工分子伴侣系统能够较好地辅助鸡IL-18重组蛋白复性,获得较高的复性率。其产物具有良好的生物学活性,为下一步鸡IL-18重组蛋白的应用研究奠定了试验基础。 展开更多
关键词 人工分子伴侣系统 鸡白细胞介素18重组蛋白 Β-环糊精 复性 表面活性剂
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重组鸡干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体内抗传染性法氏囊病病毒作用研究 被引量:8
2
作者 程俊贞 闫若潜 +9 位作者 吴志明 赵明军 闫志玲 刘梅芬 赵雪丽 孔刚锐 陈慧娟 杨晓璐 张书阳 刘毅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期140-145,共6页
为研究原核表达的鸡干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN--Linker-ChIL-2)在SPF鸡体内的抗病毒作用,本研究将传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒株与rChIFN--Linker-ChIL-2同时接种21日龄SPF鸡,并分别通过临床观察和攻毒后(dpc)不同时间IBDV... 为研究原核表达的鸡干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN--Linker-ChIL-2)在SPF鸡体内的抗病毒作用,本研究将传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒株与rChIFN--Linker-ChIL-2同时接种21日龄SPF鸡,并分别通过临床观察和攻毒后(dpc)不同时间IBDV排毒率、带毒时间、在不同组织器官的动态分布及其体液和细胞免疫指标的检测以评价该重组融合蛋白抗IBDV的效果。结果显示:与IBDV攻毒对照组相比,融合蛋白与IBDV同时接种组鸡的发病率、死亡率和典型症状维持时间及排毒率、外周血持续带毒时间和不同组织器官带毒时间均显著低于对照组。但试验组鸡的IBDV抗体水平于7 dpc^42 dpc则极显著低于对照组(p<0.01)。然而,其血清中ChIFN-α、ChIFN-γ、ChIL-2、ChIL-6和ChIL-4表达水平(3 dpc^21 dpc)以及外周血T淋巴细胞(PBLC)增殖活性(7 dpc^21 dpc)、脾淋巴细胞增殖活性(7 dpc^14 dpc)均显著高于对照组(p<0.01)。结果表明:融合蛋白可以通过上调机体细胞因子的表达水平、增强鸡体PBLC和脾淋巴细胞增殖活性等方式增强机体的细胞免疫能力,从而发挥抗病毒作用和免疫增强作用。 展开更多
关键词 重组干扰素 白细胞介素 2融合蛋白 传染性法氏囊病病毒 抗病毒 免疫增强 作用
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海兰鸡白细胞介素18成熟蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量:4
3
作者 赵丽 崔保安 +3 位作者 陈红英 宋凌云 方忠意 郑兰兰 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期88-91,共4页
通过RT-PCR方法从用植物血凝素(PHA)活化60日龄海兰鸡的脾脏淋巴细胞中扩增出海兰鸡白细胞介素18(IL-18)成熟蛋白基因的cDNA,并将其克隆到pGEM-T Easy Vector载体上,DNA序列测定表明,克隆得到的海兰鸡ChIL-18 cDNA基因全序列包括终止密... 通过RT-PCR方法从用植物血凝素(PHA)活化60日龄海兰鸡的脾脏淋巴细胞中扩增出海兰鸡白细胞介素18(IL-18)成熟蛋白基因的cDNA,并将其克隆到pGEM-T Easy Vector载体上,DNA序列测定表明,克隆得到的海兰鸡ChIL-18 cDNA基因全序列包括终止密码子在内其编码区大小为510 bp,编码169个氨基酸多肽.将该基因片段克隆到原核表达载体pQE30构建重组质粒pQE30-ChIL-18,转化大肠杆菌M15,并用IPTG诱导.重组菌菌体裂解物SDS-PAGE可检测到相对分子质量为19 000的重组蛋白. 展开更多
关键词 白细胞介素18 成熟蛋白 克隆 原核表达
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重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体外活性评价方法研究 被引量:4
4
作者 杨晓璐 闫若潜 +4 位作者 李勤楠 赵雪丽 谢彩华 刘梅芬 张书阳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第12期3153-3159,共7页
为建立稳定、便捷的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2蛋白,重组融合蛋白)体外活性评价方法,本研究分别采用ChIFN-α和ChIL-2ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应... 为建立稳定、便捷的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2蛋白,重组融合蛋白)体外活性评价方法,本研究分别采用ChIFN-α和ChIL-2ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性;采用细胞病变抑制法检测重组融合蛋白在DF1细胞上抑制水疱性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)增殖活性;采用MTS法分别测定重组融合蛋白促鸡外周血T淋巴细胞(PBLC)和脾淋巴细胞增殖活性。结果表明,重组融合蛋白可以与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应;重组融合蛋白在DF1细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV活性高于抗IBDV活性,且均明显高于rChIFN-α蛋白对照;不同浓度的重组融合蛋白均具有明显的促鸡PBLC和脾淋巴细胞增殖活性,且其促增殖活性明显高于rChIFN-α蛋白对照。本研究成功建立了重组融合蛋白体外活性检测评价方法,为进一步探究重组融合蛋白在鸡体内协同作用奠定基础。 展开更多
关键词 α干扰素 白细胞介素-2 重组融合蛋白 体外活性
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重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白对鸡外周血T淋巴细胞亚群的影响研究 被引量:4
5
作者 杨晓璐 闫若潜 +6 位作者 吴志明 刘梅芬 张代宝 张书阳 王淑娟 赵雪丽 刘毅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期175-178,共4页
为了研究重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白)对SPF鸡外周血T淋巴细胞亚群含量影响,本研究采用流式细胞术对重组融合蛋白(第2组)和rChIFN-α蛋白(第3组)注射14日龄SPF鸡后不同时间对各试... 为了研究重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白)对SPF鸡外周血T淋巴细胞亚群含量影响,本研究采用流式细胞术对重组融合蛋白(第2组)和rChIFN-α蛋白(第3组)注射14日龄SPF鸡后不同时间对各试验组鸡外周血T淋巴细胞(PBLC)中CD3^+CD4^+、CD3^+CD8^+百分含量以及CD4^+/CD8^+比值进行检测。结果表明,与对照组相比,重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白在鸡体内接种后3~14d均可明显提高鸡外周血T淋巴细胞中CD3^+CD4^+细胞百分含量,降低CD3^+CD8^+细胞的百分含量,提高CD4^+/CD8^+比值;接种后3~7d期间,第2组鸡的CD3^+CD4^+、CD3^+CD8^+细胞含量及CD4^+/CD8^+比值与PBS对照组(第1组)相比差异均极显著(P〈0.01),第3组与第1组相比差异均显著(P〈0.05)。以上结果表明,重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白接种鸡体后均可显著影响鸡PBLC中淋巴细胞亚群百分含量,提高CD4^+/CD8^+比值,增强机体的细胞免疫功能;重组融合蛋白对鸡淋巴细胞亚群百分含量、CD4^+/CD8^+比值影响程度和细胞免疫功能的增强作用优于rChIFN-α蛋白;重组融合蛋白在体内发挥了鸡α干扰素和白细胞介素-2对细胞免疫功能的协同增强作用。 展开更多
关键词 重组α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白 重组α干扰素蛋白 T淋巴细胞亚群 CD4^+/CD8^+比值 免疫功能
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鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立
6
作者 苏倩倩 李恩扩 +2 位作者 张海滨 周霞 胡敬东 《山东农业科学》 2012年第4期5-9,共5页
将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶... 将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶标二抗稀释倍数,建立检测ChIL-18成熟蛋白抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定结果确定最佳抗原包被质量浓度为4μg/ml,阳性血清稀释比例为1∶104,羊抗鼠IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释比例为1∶12 000,抗原抗体最佳结合时间是1.5 h,血清与二抗最适反应时间为1 h。阴性、阳性血清的判定标准为:被检样本的OD值是一组阴性样本OD值的2或3倍且OD450≥0.5,即为阳性,比值以P/N表示1,.5<P/N<2.0为可疑,P/N<1.5为阴性。本试验结果证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,为下一步单抗的筛选鉴定奠定了必要的基础。 展开更多
关键词 白细胞介素 18成熟蛋白(mChIL-18) 原核表达 蛋白纯化 间接ELISA
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白细胞介素18和鸡白细胞介素18 被引量:12
7
作者 潘蔚绮 李广兴 刘胜旺 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第1期123-128,共6页
白细胞介素 18是一种新发现的细胞因子 ,主要由单核巨噬细胞系统的细胞分泌。目前在分子水平上已经证明 ,人、哺乳动物和某些鸟类中都有 IL- 18存在。IL- 18在结构上属于 IL- 1家族 ,在功能上它与 IL- 12相似 ,且二者有协同效应。 IL- 1... 白细胞介素 18是一种新发现的细胞因子 ,主要由单核巨噬细胞系统的细胞分泌。目前在分子水平上已经证明 ,人、哺乳动物和某些鸟类中都有 IL- 18存在。IL- 18在结构上属于 IL- 1家族 ,在功能上它与 IL- 12相似 ,且二者有协同效应。 IL- 18具有多种生物学功能 ,它不仅可以增强 Th1型免疫反应 ,而且在 Th2型免疫反应中也发挥一定的作用。人类医学研究证明 IL- 18在抗微生物感染、抗肿瘤免疫中具有应用潜力。在集约化畜禽养殖业中 ,包括白细胞介素 18在内的细胞因子作为天然的免疫调节剂 ,目前已被公认为是一种可以替代传统疗法的新型治疗剂。鸡 IL- 18基因是最近才被发现的 ,由于它具有与人和哺乳动物相似的生物学功能 ,因而鸡 IL- 18在比较免疫学研究和禽病治疗中具有重要意义。 展开更多
关键词 白细胞介素18 白细胞介素18 细胞因子 免疫调节剂 分布 分子结构 受体 生物学功能
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鸡α干扰素/白细胞介素18基因的融合表达及抗病毒活性研究 被引量:6
8
作者 何静 张盼盼 +6 位作者 孙敏华 康银峰 谢鹏 向斌 韩翡 谭阳通 任涛 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期18-22,共5页
【目的】构建原核表达载体p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18、大肠埃希菌Escherichia coli表达及产物纯化与活性检测,研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂,以对鸡的病毒性疾病进行防治.【方法】采用融合PCR(Fusion PCR)方法,利用具... 【目的】构建原核表达载体p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18、大肠埃希菌Escherichia coli表达及产物纯化与活性检测,研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂,以对鸡的病毒性疾病进行防治.【方法】采用融合PCR(Fusion PCR)方法,利用具有互补末端的引物,形成具有重叠链的PCR产物,通过PCR产物重叠链的延伸将鸡α干扰素(Chicken interferon alpha,Ch IFN-α)与鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,Ch IL-18)基因构建Ch IFN-α-Ch IL-18融合基因并克隆入p ET-28a原核表达载体中进行原核表达.通过镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白,并进行SDSPAGE分析、Western-blot鉴定.采用细胞病变抑制法检测r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)及新城疫病毒(NDV)增殖活性.【结果和结论】成功构建并克隆了p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18融合基因.融合基因在大肠埃希菌中表达的r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白相对分子质量约为38 000,蛋白经纯化后纯度在90%以上.r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白在鸡胚成纤维(CEF)细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV和NDV的活性明显高于单一r Ch IFN-α、r Ch IL-18蛋白的抗病毒活性. 展开更多
关键词 α干扰素 白细胞介素18 融合PCR 抗病毒活性
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抗重组人白细胞介素18单克隆抗体的制备与特性研究 被引量:5
9
作者 马颖 邹全明 +2 位作者 朱永红 罗萍 毛旭虎 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期412-414,417,共4页
目的 :获得有生物活性的小鼠抗重组人白细胞介素 18(rhIL 18)单克隆抗体。方法 :采用重组hIL 18免疫BALB C小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并经多次克隆化。结果 :建立了 2株小鼠抗hIL 18单克隆抗体杂交瘤细胞 1C7和... 目的 :获得有生物活性的小鼠抗重组人白细胞介素 18(rhIL 18)单克隆抗体。方法 :采用重组hIL 18免疫BALB C小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并经多次克隆化。结果 :建立了 2株小鼠抗hIL 18单克隆抗体杂交瘤细胞 1C7和 1F5 ,染色体数目分别为 92条和 90条 ,所分泌的抗体分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型 ,腹水IgG抗体经亲和层析法纯化后纯度达 95 %以上 ,效价为 1× 10 - 4和 1× 10 - 5,Westernblot显示 2株单抗均能特异性识别 18 3kD处的rhIL 18蛋白。 1C7单抗的亲和常数Ka=1 7× 10 5,1F5的亲和常数Ka=1 3× 10 5。 2株单抗识别不同抗原表位。结论 :制备的 2株单抗为进一步研究IL 18的分子结构、生物学功能及其与免疫相关性疾病的关系提供了实验材料。 展开更多
关键词 重组白细胞介素18 单克隆抗体 制备 特性 杂交瘤
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重组白细胞介素-2对固始鸡免疫机能的影响 被引量:7
10
作者 张怀 高春生 +2 位作者 蒋媛媛 赵峰 肖传斌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第7期48-51,共4页
本试验旨在探讨重组白细胞介素-2(IL-2)对固始鸡免疫机能的影响。应用大体解剖技术和免疫技术,对重组IL-2对固始鸡免疫机能的影响进行了研究。注射固始鸡IL-2的各免疫组的抗体水平均高于鸡志贺氏菌苗组,明显高于空白对照组;各免疫组抗... 本试验旨在探讨重组白细胞介素-2(IL-2)对固始鸡免疫机能的影响。应用大体解剖技术和免疫技术,对重组IL-2对固始鸡免疫机能的影响进行了研究。注射固始鸡IL-2的各免疫组的抗体水平均高于鸡志贺氏菌苗组,明显高于空白对照组;各免疫组抗体水平在第2~3周达到最高水平,以后在4~7周内基本保持恒定水平;注射IL-2的各免疫组的脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数基本上均高于空白对照组和鸡志贺氏菌苗组。重组IL-2可促进固始鸡免疫器官的生长发育和成熟,增强鸡的免疫机能,可抵抗各种病原微生物的感染。 展开更多
关键词 重组白细胞介素-2 固始 免疫机能 抗体
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白细胞介素18重组腺病毒对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响 被引量:6
11
作者 姚航平 张立煌 +1 位作者 冷建杭 曹雪涛 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2001年第6期248-251,共4页
目的 :研究白细胞介素 1 8重组腺病毒 ( Adms IL -1 8)对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响 ,并对其机理作一探讨。方法 :重组腺病毒腹腔注射 BAL B/ C小鼠 ,每周注射 1次 ,共 2次。 2周后制备腹腔巨噬细胞 ,经 L PS刺激 ,采用 EL ISA法... 目的 :研究白细胞介素 1 8重组腺病毒 ( Adms IL -1 8)对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响 ,并对其机理作一探讨。方法 :重组腺病毒腹腔注射 BAL B/ C小鼠 ,每周注射 1次 ,共 2次。 2周后制备腹腔巨噬细胞 ,经 L PS刺激 ,采用 EL ISA法检测培养上清 m IL-1 8、m IL-1 β、m TNFα的水平 ;酶还原法检测 NO的含量 ;L DH释放法检测巨噬细胞的杀伤活性。结果 :Adms IL -1 8注射后 ,小鼠腹腔巨噬细胞高效表达 m IL-1 8,同时巨噬细胞分泌 m IL-1 β、m TNFα、NO水平明显增加 ,并增强巨噬细胞的杀伤活性 ,与其它对照组比较均 P<0 .0 1。结论 :小鼠腹腔注射 Adms IL-1 8,能显著增加巨噬细胞表达 m IL -1 8、m IL -1β、m TNFα、NO,增强巨噬细胞的杀伤活性。 展开更多
关键词 白细胞介素18 巨噬细胞 重组腺病毒科 细胞毒作用 细胞因子 小鼠
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猪白细胞介素-18基因表达及重组蛋白的纯化 被引量:3
12
作者 裴仉福 陈瑞爱 +5 位作者 唐秀英 朱文冠 唐满华 李琳 程含波 温纳相 《中国兽药杂志》 2007年第2期5-9,共5页
以pcDNA3.1-IL18为模板进行PCR扩增获得猪白细胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5α,经双酶切、PCR鉴定及测序筛选出阳性重组质粒,... 以pcDNA3.1-IL18为模板进行PCR扩增获得猪白细胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5α,经双酶切、PCR鉴定及测序筛选出阳性重组质粒,并命名为pET41c-IL18和pET32c-IL18。将pET41c-IL18和pET32c-IL18转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG 37℃诱导表达。SDS-PAGE及W estern-blotting分析结果表明,所表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,pET32c-IL18重组蛋白分子质量约33 ku,与预期大小相符。将包涵体提取物用8 mol/L脲变性,经N i-NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白。 展开更多
关键词 白细胞介素-18 基因表达 蛋白纯化
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肺结核患者血清干扰素-γ、白细胞介素-18和骨桥蛋白水平的动态变化及临床意义 被引量:11
13
作者 郭淑湘 马冬梅 +2 位作者 刘慧芳 宋亚丽 褚艳芝 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第4期562-564,共3页
目的:通过检测肺结核患者抗结核治疗前后血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-18(IL-18)和骨桥蛋白(OPN)水平的动态变化,以探讨其临床意义。方法:选择初治的活动性肺结核患者42例,正常对照组36例。应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)... 目的:通过检测肺结核患者抗结核治疗前后血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-18(IL-18)和骨桥蛋白(OPN)水平的动态变化,以探讨其临床意义。方法:选择初治的活动性肺结核患者42例,正常对照组36例。应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定抗结核治疗前、治疗后1个月、治疗后2个月血清IFN-γ、IL-18和OPN的水平。结果:抗结核治疗前患者血清IFN-γ、IL-18和OPN水平明显高于正常对照组;治疗后1个月血清IL-18和OPN水平即开始降低,治疗后2个月血清IL-18和OPN水平均显著降低。但血清IFN-γ水平在抗结核治疗前后无显著变化。结论:动态监测肺结核患者血清IL-18和OPN水平,可作为评估肺结核病变活动性和抗结核药物治疗效果的早期检测指标。 展开更多
关键词 结核 干扰素-1 白细胞介素-18 骨桥蛋白
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小鼠白细胞介素18的基因克隆及其融合蛋白的表达 被引量:5
14
作者 何龙 章卫平 曹雪涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期239-242,共4页
白细胞介素18(Interleukin18,IL18)是一种能诱导IFNγ产生的新型细胞因子,在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。采用逆转录PCR从活化的小鼠腹腔巨噬细胞中获得了小鼠IL18(mIL18)... 白细胞介素18(Interleukin18,IL18)是一种能诱导IFNγ产生的新型细胞因子,在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。采用逆转录PCR从活化的小鼠腹腔巨噬细胞中获得了小鼠IL18(mIL18)cDNA,测序鉴定正确的片段经EcoRI酶切后克隆入GST融合表达载体pGEX2T,再转化至大肠杆菌DH5α高效表达。 展开更多
关键词 白细胞介素18 基因克隆 蛋白纯化 融合蛋白
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重组白细胞介素2对固始鸡空肠黏膜免疫增强作用的研究 被引量:3
15
作者 赵珊珊 张怀 +2 位作者 徐亚平 李超 肖传斌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第3期60-64,共5页
本试验旨在研究重组白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)对固始鸡空肠黏膜免疫的作用。以父母代固始鸡为试验动物,用添加不同剂量的重组IL-2佐剂的鸡新城疫疫苗对试验鸡进行分组免疫,应用免疫组织化学技术,通过Qwin图像处理系统对鸡空肠... 本试验旨在研究重组白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)对固始鸡空肠黏膜免疫的作用。以父母代固始鸡为试验动物,用添加不同剂量的重组IL-2佐剂的鸡新城疫疫苗对试验鸡进行分组免疫,应用免疫组织化学技术,通过Qwin图像处理系统对鸡空肠内分泌型免疫球蛋白A(sIgA)阳性细胞及其分泌物分布和阳性面积量进行系统分析。结果表明,sIgA阳性细胞及其分泌物主要分布于肠绒毛的固有层和肠腺腔中。在新城疫疫苗组中添加重组IL-2能够提高sIgA细胞的分泌,从而提高动物体的免疫能力。重组IL-2对增强免疫性有一定的作用,且IL-2的添加剂量在50μg时对增加新城疫疫苗的免疫性效果最佳。 展开更多
关键词 重组白细胞介素-2 空肠 分泌型免疫球蛋白 固始
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重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素融合蛋白的纯化及复性 被引量:6
16
作者 胡志明 林来兴妹 +2 位作者 周明乾 陈泽洪 王小宁 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期206-207,214,共3页
目的探讨该所发明的新方法对重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素(IL2-PE664Glu)融合蛋白进行纯化与复性的效果。方法采用该所发明的新方法提纯包涵体,包涵体复性后,样品经DEAE-SepharoseFF离子交换层析,获得融合蛋白纯品。结果获得的具... 目的探讨该所发明的新方法对重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素(IL2-PE664Glu)融合蛋白进行纯化与复性的效果。方法采用该所发明的新方法提纯包涵体,包涵体复性后,样品经DEAE-SepharoseFF离子交换层析,获得融合蛋白纯品。结果获得的具有生物学活性的融合蛋白纯度达到95%,复性回收率为80%。结论此包涵体分离纯化技术简便、实用,可为中试研究和规模化生产提供基础。 展开更多
关键词 重组白细胞介素-2 绿脓杆菌外毒素 融合蛋白 纯化 复性
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急性冠状动脉综合征患者冠状动脉循环中基质金属蛋白酶-9和白细胞介素-18变化及其意义 被引量:3
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作者 刘启明 周胜华 +3 位作者 祁述善 沈向前 胡信群 刘振江 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2003年第4期253-255,共3页
目的 :探讨急性冠状动脉综合征患者冠状动脉循环中基质金属蛋白酶 9(MMP 9)和白细胞介素 18(IL 18)水平变化及其意义。  方法 :酶联免疫吸附测定法测定 2 8例急性冠状动脉综合征患者 (急性冠状动脉综合征组 )、 2 4例稳定性心绞痛患... 目的 :探讨急性冠状动脉综合征患者冠状动脉循环中基质金属蛋白酶 9(MMP 9)和白细胞介素 18(IL 18)水平变化及其意义。  方法 :酶联免疫吸附测定法测定 2 8例急性冠状动脉综合征患者 (急性冠状动脉综合征组 )、 2 4例稳定性心绞痛患者 (稳定性心绞痛组 )及 2 0例胸闷、胸痛等症状予以冠状动脉造影正常患者 (对照组 )冠状动脉开口与冠状静脉窦口MMP 9和IL 18水平 ,并分析冠状动脉病变情况。  结果 :①急性冠状动脉综合征组冠状动脉开口、冠状静脉窦口血浆MMP 9水平以及冠状静脉窦口与冠状动脉开口的差值分别与对照组和稳定性心绞痛组比较 ,均有显著性差异 (P <0 0 1)。②急性冠状动脉综合征组冠状动脉开口和冠状静脉窦口血浆IL 18水平明显高于对照组和稳定性心绞痛组 ,均有显著性差异 (P <0 0 1) ,但 3组之间冠状静脉窦口与冠状动脉开口IL 18的差值无显著性差异 (P >0 0 5 )。③急性冠状动脉综合征组和稳定性心绞痛组冠状动脉狭窄程度与MMP 9和IL 18水平均无明显相关 (P >0 0 5 )。④急性冠状动脉综合征组血浆MMP 9与IL 18水平冠状动脉开口处呈显著性正相关 (r =0 5 3 7,P <0 0 1)。  结论 :急性冠状动脉综合征患者血浆MMP 9主要来源于冠状动脉循环 ,同时血浆IL 18水平亦明显升高 ,均与冠? 展开更多
关键词 急性冠状动脉综合征 冠状动脉循环 基质金属蛋白酶-9 白细胞介素-18
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重组鸡白细胞介素-2对球虫感染雏鸡细胞免疫的影响 被引量:3
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作者 李宏梅 李祥瑞 汪志楷 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期229-,共1页
本实验旨在研究重组鸡白细胞介素-2对球虫感染雏鸡细胞免疫的影响。实验采用14日龄伊莎蛋鸡210只,分为7组,其中一组为不感染对照组,三组为柔嫩艾美耳球虫感染组,卵囊感染剂量分别为1万/只、2万/只、5万/只,另外三组... 本实验旨在研究重组鸡白细胞介素-2对球虫感染雏鸡细胞免疫的影响。实验采用14日龄伊莎蛋鸡210只,分为7组,其中一组为不感染对照组,三组为柔嫩艾美耳球虫感染组,卵囊感染剂量分别为1万/只、2万/只、5万/只,另外三组在感染卵囊1万/只、2万/只、5万/只的同时,肌注真核细胞表达的重组鸡白细胞介素-2 0.4ml/只。感染后第0、4、6、9、14、18、23、28天剖杀取牌和盲肠扁桃体,分离淋巴细胞,分别用ConA和PHA刺激,采用NIT比色法进行淋巴细胞转化试验,结果表明:在球虫感染后第4天(裂殖生殖阶段)和第6天(卵囊形成阶段),感染组脾和盲肠扁桃体淋巴细胞转化率均低于对照组,加重组鸡白细胞介素-2组脾和盲肠扁桃体淋巴细胞转化率高于感染组,相当或高于对照组水平。在感染后第9天和第14天(恢复期)加重组鸡白细胞介素-2组脾淋巴细胞转化率高于对照组,加重组鸡白细胞介素-2组盲肠扁桃体淋巴细胞转化率相当于对照组。本实验结果说明:1.球虫感染可以抑制细胞免疫;2.加重组鸡白细胞介素-2可以克服球虫感染引起的免疫抑制。 展开更多
关键词 重组白细胞介素-2 柔嫩艾美耳球虫 淋巴细胞转化 细胞免疫
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鸡白细胞介素-18在鸡球虫病疫苗免疫中的作用 被引量:1
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作者 陈红英 李新生 +3 位作者 崔保安 魏战勇 夏平安 段廷云 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第4期795-798,共4页
为了探索鸡白细胞介素-18(IL-18)在鸡球虫病疫苗免疫中的免疫佐剂作用,用鸡IL-18的重组真核表达质粒pIL-l8、柔嫩艾美耳球虫早熟株疫苗及两者联合分别接种3日龄鸡,首免后第1 d、4 d、6 d、9 d、14 d、21 d、26d、28 d时随机抽取鸡外周... 为了探索鸡白细胞介素-18(IL-18)在鸡球虫病疫苗免疫中的免疫佐剂作用,用鸡IL-18的重组真核表达质粒pIL-l8、柔嫩艾美耳球虫早熟株疫苗及两者联合分别接种3日龄鸡,首免后第1 d、4 d、6 d、9 d、14 d、21 d、26d、28 d时随机抽取鸡外周血及无菌采取鸡脾脏,应用ELISA和甲基噻唑基四唑(MTT)法分别检测免疫鸡的体液免疫及细胞免疫水平。二免后第14 d用柔嫩艾美耳球虫进行攻击。结果表明,pIL-18与鸡柔嫩艾美耳球虫早熟株疫苗联合免疫具有明显提高虫苗免疫保护的作用,pIL-18单独注射鸡体也具有明显增强鸡体抗球虫感染的作用。表明鸡IL-18能够明显增强鸡球虫病疫苗的免疫原性,显著提高免疫鸡的体液免疫和细胞免疫水平,并且能强有力地抵抗柔嫩艾美耳球虫的攻击。 展开更多
关键词 白细胞介素-18 柔嫩艾美耳球虫早熟株疫苗 球虫病 免疫
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含有重组人白细胞介素18基因的工程菌的产物表达和鉴定 被引量:1
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作者 董宇清 李荣贵 +2 位作者 董春霞 赵进东 吴光耀 《北京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期271-274,共4页
The cDNA of human Interleukin\|18 was obtained by RT\|PCR from the mRNA of human peripheral blood cells.The DNA sequencing was performed and the DNA was cloned into expression vector pBV220.The overexpression was perf... The cDNA of human Interleukin\|18 was obtained by RT\|PCR from the mRNA of human peripheral blood cells.The DNA sequencing was performed and the DNA was cloned into expression vector pBV220.The overexpression was performed in E.coli HB101.The expressive product was purified through Sephadex G100 and identified by N\|terminal amino acid sequencing and Western blot. 展开更多
关键词 白细胞介素18 工程菌 表达产物鉴定 基因重组
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