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题名鸡胚组织膜蛋白与鸡毒霉形体黏附蛋白的结合分析
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作者
彭秀丽
高俊伟
胡思顺
胡福利
毕丁仁
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机构
华中农业大学动物医学院
华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室
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出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第12期1748-1752,共5页
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基金
湖北省十一五科技攻关重大专项(2006AA202A05)
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文摘
利用pGEX融合蛋白表达系统,将鸡毒霉形体黏附蛋白(pMGA)与GST的编码序列在大肠杆菌BL21中进行融合表达,经GST.Bind Resin纯化,GST-pMGA的纯度达96%。用蛋白酶Thrombin切掉GST标签,获得纯度为96%的pMGA,经Western-blot鉴定具有良好的免疫学活性。通过差速离心法提取SPF鸡胚的气管、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、腺胃、十二指肠、法氏囊、胸腺和脾脏等组织膜蛋白,采用斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测各组织膜蛋白与pMGA的结合。结果表明:除脾脏外,其余组织的膜蛋白与pMGA之间存在特异性结合,说明这些组织膜蛋白中存在pMGA的受体蛋白。经SDS-PAGE分析发现,除脾脏外,其余9种组织的膜蛋白中均含有一条相对分子质量约为30 ku的主带,受体的相对分子质量可能为30 ku,可为深入研究pMGA的受体蛋白提供资料。
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关键词
鸡胚
组织膜蛋白
鸡毒霉形体黏附蛋白
Dot—ELISA
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Keywords
chick embryo
the tissues membrane protein
pMGA
Dot-ELISA
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分类号
S852.62
[农业科学—基础兽医学]
S858.31
[农业科学—临床兽医学]
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题名鸡毒霉形体黏附素截短蛋白表达条件的优化
被引量：2
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作者
高俊伟
毕丁仁
胡思顺
彭秀丽
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机构
华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室
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出处
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期514-518,共5页
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基金
湖北省自然科学基金项目(99J0104)资助
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文摘
研究了培养温度、培养时间、培养基pH值以及异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galacto-side,IPTG)浓度等不同条件对鸡毒霉形体黏附素截短蛋白在大肠杆菌中表达量的影响。经SDS-PAGE分析表明:诱导温度为28℃、诱导时间为9 h、培养基pH值为7.0、IPTG浓度为0.010 mmol/L时目的蛋白在细菌裂解沉淀和上清液中均最大量表达,分别达到30%和17%左右。上清液经GST.Bind Resin亲和层析分离纯化后,洗脱产物中pMGAⅣ融合蛋白纯度高达95%。Western-blot分析表明,该蛋白可被鸡毒霉形体阳性血清识别,具有较好的免疫学活性。
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关键词
鸡毒霉形体
鸡毒霉形体黏附素截短蛋白
原核表达
最佳条件
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Keywords
mycoplasma gallisepticum
fusion protein mycoplasma gallisepticum adheain
prokaryotic expression
optimum condition
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分类号
S852.62
[农业科学—基础兽医学]
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